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GERMINAO IN VITRO DE GROS DE PLEN EM Passiflora suberosa L. PARA SUA UTILIZAO EM HIBRIDAO INTERESPECFICA1
THYANE VIANA CRUZ2, MARGARETE MAGALHES SOUZA3, FRANCISVALDO AMARAL ROZA2, AMRICO JOS CARVALHO VIANA2, GABRIELA DE OLIVEIRA BELO2, JOSEFA WILMA DOS SANTOS FONSECA2 RESUMO-Com o objetivo de avaliar a performance polnica de Passiflora suberosa, realizou-se a anlise de germinao in vitro em gros de plen de plantas mantidas em casa de vegetao nas condies de Ilhus, sul da Bahia, coletados em diferentes horrios aps a antese. A anlise estatstica foi realizada no delineamento inteiramente ao acaso, com seis tratamentos que consistiram de horrios de coleta, de 7 s 17 h. O meio de germinao foi o recomendado para o maracujazeiro-amarelo, e as lminas foram incubadas a 28C (+ 1C). Houve diferena significativa (P<0.01) entre os seis horrios testados. O percentual mdio de germinao do plen foi negativamente influenciado pelo nmero de horas aps a antese. Os maiores ndices de germinao foram obtidos no perodo entre 7 e 9 h. Termos para indexao: Passifloraceae, maracujazinho-cortia-preto, plen, performance polnica, planta ornamental.

IN VITRO GERMINATION OF POLLEN GRAINS IN Passiflora suberosa L. FOR ITS USE IN INTERSPECIFIC HYBRIDIZATION
ABSTRACT- In order to evaluate the pollen performance of Passiflora suberosa, in vitro germination of pollen in plants grown on greenhouse at Ilhus, South of Bahia, was studied. Statistical analysis was performed considering a randomized experimental design, with six treatments that consisted of collection times, from 7:00 to 5:00. The germination element was the same used for yellow passion fruit, and the slides were incubated at 28C (+ 1C). There was a significant difference (P<0.01) among the six collect times tested, and among plants at 7:00 and 8:00, showing heterogeneity among the genotypes. The average percentage of pollen germination was negatively influenced by the later testing times. The greatest germination index was at 7:00 and 9:00. Index terms: Passifloraceae, passion flower, pollen, pollen performance, ornamental plant.

INTRODUO
Os maracujazeiros pertencem ao gnero Passiflora L., havendo no Brasil mais de 150 espcies nativas (Hoehne, 1946), algumas inclusive endmicas e ameaadas de extino (Guedes, 2002). Muitas espcies so utilizadas in natura por suas propriedades medicinais e por seus frutos comestveis (Sousa & Meletti, 1997). Porm, muitas delas so apreciadas no mundo inteiro por seu valor ornamental, sendo suas sementes amplamente comercializadas, principalmente na Amrica do Norte e Europa (Ulmer & MacDougal, 2004). As flores de Passiflora so consideradas exticas e complexas, algumas de colorao forte e brilhante, e outras de colorao suave e marcante devido, principalmente, presena da corona, que caracteriza a famlia Passifloraceae. Igualmente fascinante a ampla variedade de formatos de folhas dentro do gnero, e muitas espcies possuem valor ornamental somente em funo da folhagem (Souza et al., 2003). Plantas hbridas, no entanto, tm maior valor no mercado de ornamentais (Ulmer & MacDougal, 2004). Passiflora suberosa L. ou maracujazinho-cortiapreto uma espcie tropical, pan-americana (Sousa & Meletti, 1997), ocorrendo no oeste da ndia, em muitas partes do Mxico e nas Amricas Central e do Sul (Ulmer & MacDougal, 2004),

alm do Hawaii, New Guinea, Fiji e Samoa e Ilhas Galpagos (Vanderplank, 2000). Caracteriza-se como trepadeira de pequeno porte, que apresenta pequenas flores amarelo-esverdeadas ou verdes-claras que surgem solitrias ou em pares nas axilas das folhas, podendo apresentar um oprculo vermelho, medindo 1,3 a 2,5 cm de dimetro, com cinco spalas e destitudas de ptalas (o que caracteriza a seco Cieca (Medic.) Mast. do subgnero Plectostemma Mast.), com 1 - 2 brcteas ou podem ser ausentes, com duas sries de corona; frutos pequenos, ovides ou globosos, com 0,6 a 1,5 cm de dimetro e de cor roxa; folhas de forma extremamente variada, usualmente polimrficas no mesmo indivduo, podendo variar de inteiras a profundamente trilobadas, com duas glndulas no pecolo; caule estriado e, quando adulto, revestido de grossa casca suberosa, ou seja, corticosa (Sousa & Meletti, 1997; Ulmer & MacDougal, 2004), que faz a planta tolerar temperaturas bem mais baixas, at leves congelamentos (Vanderplank, 2000). A extrema variabilidade da espcie resulta em vasta sinonmia com mais de sessenta denominaes (Sousa & Meletti, 1997). P. suberosa floresce praticamente o ano inteiro (Ulmer & MacDougal, 2004), com a abertura das flores ocorrendo antes das 7 h da manh (Souza et al., 2005a). Devido s suas caractersticas, pode ser utilizada em hibridaes para obteno

1 (Trabalho 020-08). Recebido em: 08-01-2008. Aceito para publicao em: 19-09-2008. A pesquisa parte integrante da Iniciao Cientfica da primeira autora, na Universidade Estadual de Santa Cruz (UESC). 2 Agrnomos, UESC. 3 Biloga, Professora, Dra. do Departamento de Cincias Biolgicas/UESC Rod. Ilhus-Itabuna, Km 16, CEP-45662-000, Ilhus-BA. souzamagg@yahoo.com.br.

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GERMINAO IN VITRO DE GROS DE PLEN EM Passiflora suberosa ... em cmara mida. O material foi mantido em estufa com temperatura de 28 + 1 C, por at 24h de incubao. Considerouse como GP germinados aqueles cujo tubo polnico apresentou comprimento mnimo duas vezes maior que o dimetro mdio do GP. Os dados foram submetidos ANOVA e de regresso, com auxlio do programa computacional GENES (Cruz, 2001).

de plantas de pequeno porte e com flores e frutos coloridos para decorao de interiores, e sua utilizao para ornamentao e para produo de hbridos (P. Curiosa [P. suberosa x P. coriacea] S. Kamstra; P. Ivy Waves [P. suberosa x P. coriacea = 4n] R. Knight) reconhecida (Ulmer & MacDougal, 2004; Vanderplank, 2000). Nessa espcie, h variao no nvel de ploidia (nmero bsico x = 6; Melo et al., 2001), com espcimes diplides 2n = 12 (Stebbins, 1950) e poliplides com 2n = 24 e 2n = 36 (Storey, 1950). Estudos recentes indicaram ser esta espcie autocompatvel (Ulmer & MacDougal, 2004; Souza et al., 2005b), ao contrrio de algumas espcies desse gnero (Bruckner et al., 1995). Apesar de autocompatvel, provavelmente P. suberosa necessita de um polinizador devido morfologia floral e caractersticas dos gros de plen das passifloras, pesados e pegajosos, o que no permite a polinizao pelo vento (Amela Garcia & Hoc, 1997). Quanto ao relacionamento evolutivo de Passiflora com as borboletas Heliconiinae, P. suberosa considerada hospedeira de Heliconius charitonia, a qual se utiliza de seu plen e nctar como fonte de amino cidos e suprimentos, e de suas folhas para a postura de ovos (Ulmer & MacDougal, 2004). Porm, o polimorfismo foliar que a planta apresenta no seu incio de desenvolvimento considerado uma defesa contra ataques, uma vez que as mudanas nos formatos das folhas no seriam reconhecidas pelo predador (Vanderplank, 2000). Visando utilizao dessa espcie como genitora em hibridaes interespecficas e, conseqentemente, a maximizao da taxa de pegamento resultante desses cruzamentos, iniciou-se com este trabalho a anlise da performance polnica via germinao in vitro. Espera-se conhecer o melhor horrio para realizao de polinizaes cruzadas envolvendo P. suberosa como doadora de plen.

RESULTADOS E DISCUSSO
Foram obtidos ndices muito baixos de germinao in vitro (GIV) para P. suberosa (Fig. 1A), enquanto para o maracujazeiro-amarelo, P. edulis f. flavicarpa, utilizado como controle, o resultado foi de quase 100% de germinao (Fig. 1B). Embora Bruckner et al. (2000) tenham utilizado com sucesso placas de petri para incubar os gros de plen (GP), em P. suberosa foi necessrio adaptar a metodologia, uma vez que os tubos polnicos se soltavam dos GP facilmente. Assim, o melhor mtodo para incubao foi alcanado utilizando-se de uma gota do meio com os GP entre lmina sem escavao e lamnula, para diminuir o impacto do movimento de transporte da estufa ao microscpio, e em cmara mida, para evitar a evaporao do meio, sendo este o nico mtodo utilizado para a contagem dos GPs germinados. Utilizando este procedimento, foi observado que 90% dos GP se mantiveram associados aos seus tubos polnicos durante o procedimento de contagem, enquanto utilizando os demais procedimentos, mais de 50% dos tubos polnicos encontravamse soltos no meio de germinao, no sendo utilizados para anlise. Os resultados de GIV em P. suberosa so apresentados nas Tabelas I e II, e foram, em mdia: a) 7h 21,8%; b) 9h 7,8%; c) 11h 7,8%; d) 13h 3,6%; e) 15h 2,8%; f) 17h 2,7%. Pela anlise de varincia, houve diferena significativa (P<0.01) entre os seis horrios testados. O percentual de germinao dos gros de plen foi negativamente influenciado pelo nmero de horas aps a antese (Y = 15,913 - 1,639x; R2 = 0,7063; Fig. 2). Houve relao linear entre o percentual de germinao in vitro (Y) e o nmero de horas aps a antese (X), com a maior mdia de germinao obtida s 7h, e a mais baixa s 17h, ou seja, com tendncia de queda de percentual durante o tempo de abertura da flor. A perda da viabilidade polnica em funo do tempo de abertura da flor foi observada no maracujazeiro-amarelo (Souza et al., 2002), utilizando-se de anlise histoqumica, porm o ndice ainda manteve-se alto, superior a 75%, mesmo 24 h aps a antese. Analisando a viabilidade polnica em espcies silvestres de Passiflora com testes histoqumicos (soluo de Alexander e lugol) e com polinizaes in vivo , foram detectados altos percentuais de viabilidade em plen obtido de flores recmabertas, entre 78,22 a 99,55% (Souza et al., 2004), dentre eles o de P. suberosa, com 97,07% de viabilidade polnica verificada com teste histoqumico e 100% de pegamento nos testes de polinizao in vivo, mesmo quando realizados s 17 h. Esses resultados so bastante contrastantes quando comparados com o obtido da germinao in vitro, 21,82%, logo nos primeiros momentos de abertura da flor. Em muitas espcies, a esterilidade do plen pode estar

MATERIAL E MTODOS
O experimento foi realizado em plantas de Passiflora suberosa, 2n = 24 (Souza, 2002), propagadas por sementes, que fazem parte do Banco Ativo de Germoplasma (BAG-Passifloras) mantido no Cmpus da UESC. O delineamento experimental utilizado foi o inteiramente ao acaso, com quatro repeties (plantas) e seis tratamentos. Os tratamentos consistiram de seis horrios de coleta, a partir do horrio de abertura da flor at o seu fechamento (de 7 s 17 h), em intervalos de duas horas. Os botes florais foram protegidos com sacos de papel colocados um dia antes da abertura da flor. O teste de germinao foi realizado conforme descrito para a espcie cultivada P. edulis f. flavicarpa (Bruckner et al., 2000), que foi utilizada como controle. Uma antera/ flor/planta/horrio foi coletada, e os gros de plen (GP) foram depositados em uma gota de meio de germinao composto de 0,10 g/L de H3BO3; 50 g/L de sacarose; 0,3 g/L de Ca(NO3)2.4H2O; 0,2 g/L de MgSO 4.7H 2O e 0,1 g/L de KNO 3, previamente autoclavado a 121C, por 15 minutos. Para evitar que o tubo polnico se soltasse do GP durante as anlises, foram testados os seguintes procedimentos de incubao: a) lmina escavada com lamnula; b) lmina escavada com lamnula em cmara mida; c) lmina comum com lamnula; d) lmina comum com lamnula
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T. V. CRUZ et al. associada com irregularidades meiticas, tais como citomixia (Caetano-Pereira & Pagliarini, 1997) e mixoploidia (Caetano-Pereira et al., 1998) em milho, anormalidades na formao do fuso em Centella asiatica (Consolaro et al., 1996), baixa freqncia de quiasmas em espcies de Lycopersicon (Haroun, 1996), segregao irregular de univalentes em espcies de Pennisetum (Dujardin & Hanna, 1984) e em Aptenia cordifolia (Pagliarini, 1990). Em variedades de soja, a inviabilidade polnica tem sido relacionada a anormalidades meiticas (Bione et al., 2000). Fatores ambientais tambm podem interferir na viabilidade polnica. Quando a abertura da antera coincide com elevada umidade do ar, a alta presso osmtica do contedo celular do

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GP, aliada baixa resistncia de sua parede diminuem a viabilidade polnica (Sousa, 1994). Estudos em outras espcies tm demonstrado que botes florais so particularmente sensveis a estresse por aquecimento num estgio de 3 a 5 dias antes da abertura da antese, causando reduo na produo e viabilidade dos GP (Vara Prasad et al., 1999). Os estudos de razo plen:vulo em P. suberosa indicaram que essa espcie produz um nmero de gros de plen 83 vezes maior que o nmero de vulos (Souza et al., 2005b). Essa caracterstica, aliada ao fato de que essa espcie autocompatvel so as responsveis pela baixa performance de o plen no prejudicar a frutificao em P. suberosa.

TABELA 1- Germinao in vitro em Passiflora suberosa, de gros de plen (GP) coletados em diferentes horrios aps a antese (7h).
Horrio de coleta N de horas aps antese N GP Germ. 304 98 117 38 31 22 Planta 1 Total Contado 1.091 1.280 1.368 1.235 1.210 1.096 % GP Germ. 21,8 7,6 8,5 3,0 2,5 2,0 N GP Germ. 402 102 122 57 43 42 Planta 2 Total Contado 1.630 1.389 1.427 1.376 1.553 1.149 % GP Germ. 24,6 7,3 8,5 4,1 2,7 3,6 N GP Germ. 305 87 81 53 55 28 Planta 3 Total Contado 1.525 1.395 1.294 1.492 1.384 1.036 % GP Germ. 20,0 6,2 6,2 3,5 3,9 2,7 N GP Germ. 304 113 118 51 19 38 Planta 4 Total Contado 1.451 1.141 1.499 1.344 1.203 1.328 % GP Germ. 20,9 9,9 7,8 3,7 1,5 2,8

7 horas 9 horas 11 horas 13 horas 15 horas 17 horas

0 02 04 06 08 10

Germ. = Germinado.

TABELA 2 - Mdia, desvio-padro (DP), coeficiente de variao (CV) e varincia da percentagem de germinao in vitro de plen em quatro plantas de Passiflora suberosa, coletado em diferentes horrios aps a antese (7h).
Horrio de coleta 7 horas 9 horas 11 horas 13 horas 15 horas 17 horas N de horas aps antese 0 02 04 06 08 10 Horrio de coleta 7 horas 9 horas 11 horas 13 horas 15 horas 17 horas Mdia 21,82 7,75 7,75 3,57 2,65 2,77 Desvio-padro CV Varincia

1,9906 1,5546 1,0847 0,4573 0,9849 0,6551

9,1207 20,0589 13,9967 12,7929 37,1655 23,6075

3,9625 2,4167 1,1767 0,2092 0,97 0,4292

FIGURA 1- Germinao in vitro de gros de plen. A - Passiflora suberosa; B - Passiflora edulis f. flavicarpa.
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GERMINAO IN VITRO DE GROS DE PLEN EM Passiflora suberosa ...

FIGURA 2- Germinao in vitro de gros de plen em Passiflora suberosa, coletados em diferentes horrios aps a antese (7h).

CONCLUSO
De acordo com o teste de germinao in vitro , o percentual mdio de germinao do plen em P. suberosa foi negativamente influenciado pelo nmero de horas aps a antese. Os maiores ndices de germinao foram obtidos logo aps a antese, no perodo entre 7 e 9 h.

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AGRADECIMENTOS
Agradecemos FAPESB, pelo apoio financeiro.

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