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PRACTICA N 6.

PERMEABILIDAD DE MEMBRANA Y ACTIVIDAD ENZIMATICA INTRODUCCION MEMBRANA CELULAR Toda clula posee un sistema complejo de membranas cuya funcin es el intercambio de materiales, entre la clula y el medio acuoso externo o fluido extracelular y entre los organelos y la clula, sirve como medio de comparticin entre el interior celular y sus metabolitos. Las membranas celulares son selectivamente permeables. Algunos solutos cruzan la membrana libremente, algunos cruzan con asistencia y otros no pueden cruzar. Unas pocas sustancias lipoflicas se mueven libremente a travs de la membrana celular por difusin pasiva. La mayora de pequeas molculas u iones, requieren la asistencia de acarreadores protecos especficos, para transportarlos a travs de la membrana. Las molculas grandes no cruzan intactas las membranas celulares, excepto en casos especiales. La difusin es el movimiento neto de sustancia de un rea de alta concentracin a una de baja concentracin. Dado que las molculas de cualquier sustancia se encuentran en movimiento cuando su temperatura est por encima de cero absoluto (0 grados Kelvin o -273 grados C), existe una disponibilidad de energa para que las mismas se muevan desde un estado de potencial alto a uno de potencial bajo. La mayora de las molculas se mueven desde una concentracin alta a una baja, es decir el movimiento neto es desde altas concentraciones a bajas concentraciones. Eventualmente, si no se agrega energa al sistema las molculas llegan a un estado de equilibrio en el cual se encuentran distribuidas homogneamente en el sistema.

Factores que aumentan la fluidez de las membranas: - cidos grasos insaturados - Baja concentracin de colesterol - Altas temperaturas - Colas hidrocarbonadas cortas (dificultan el empaquetamiento)

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Factores que favorecen la viscosidad Alto grado de saturacin y mayor longitud de las colas hidrocarbonadas. Menor temperatura del medio

Factores que favorecen la fluidez Alto de grado de insaturacin y menor longitud de las colas hidrocarbonadas. Mayor temperatura del medio

Efecto de la temperatura sobre la fluidez: El ascenso de la temperatura aumenta la energa cintica entre las molculas y, por lo tanto, el movimiento de las colas hidrocarbonadas. Esto lleva a una disminucin de las interacciones atractivas entre las mismas y a un aumento de los movimientos de rotacin y de difusin lateral. Por el contrario, una disminucin de la temperatura vuelve ms rgida a la membrana y a empaquetar las colas hidrofbicas de los fosfolpidos e impedir sus movimientos. Si la temperatura desciende significativamente, la membrana puede llegar a cristalizarse, con la prdida consiguiente de muchas funciones vitales de la membrana. Los organismos que habitan regiones donde hay grandes amplitudes trmicas estacionales varan la composicin de los fosfolpidosde en sus membranas en forma peridica, asegurando as una fluidez ms o menos constante durante todo el ao. Por otra parte, organismos que habitan ambientes extremos poseen composiciones fosfolipdicas muy particulares en sus membranas, por ejemplo, los que viven a temperaturas inferiores a los 0C tienen membranas muy ricas en lpidos poliinsaturados. Estos fenmenos son de gran importancia biolgica, porque mediante ellos se logra en parte llevar a cabo procesos de trasporte e intercambio de sustancias. Explique por qu las heladas afectan los cultivos.

ENZIMAS En las reacciones qumicas ordinarias se requieren o producen cantidades altas de energa, el proceso se lleva a cabo con alta utilizacin de temperatura y calor, a veces con la participacin de catalizadores de carcter inorgnico que faciliten la reaccin. Dentro de las clulas se llevan a cabo reacciones similares, pero en este
GERMAN MENDEZ DOCENTE UNIVERSIDAD ANTONIO NARIO

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caso la produccin de temperatura y energa se realiza en forma controlada por gran variedad de entidades qumicas que actan cada una en diferentes pasos o reacciones intermedias, permitiendo as una mxima utilizacin energtica. Tales substancias reciben el nombre de enzimas (catalizadores bioqumicas) y son de naturaleza proteica. Las enzimas se caracterizan por ejercer su accin sobre sustratos especficos, dentro de un rango de temperatura y pH caractersticos , fuera de los cuales pierde su capacidad de accin y en este caso se dice que la enzima esta desnaturalizada, lo cual implica un cambio en su estructura. Es posible extraer algunas enzimas de tejidos vivos con mtodos sencillos, como es el caso del grupo de enzimas hidrosolubles extrados de semillas, las cuales durante el proceso de germinacin desdoblan polisacridos como los almidones, para proveer la energa en forma de molculas ms sencillas como las hexosas (ejemplo glucosa) utilizada para actividades metablicas.

OBJETIVOS

Estudiar el efecto de la temperatura sobre el transporte a travs de la membrana celular. Extraer enzimas de vegetales y estudiar algunos factores que afectan la actividad enzimtica.

MATERIALES Y REACTIVOS (*deben ser trados por el estudiante) *Raz de remolacha, *semillas germinadas de cebada, tubos de ensayo, mortero, gasa, mecheros Bunsen, pinzas para tubo, termmetro, placa trmica, vasos de precitados de 400 cc, capsulas de porcelana, centrifuga con sus respectivos tubos, agua destilada, solucin de almidn al 0,5% y 1%, lugol, *lpiz de cera, *cuchillo de cocina, *tabla de cocina para picar, *rollo de papel absorbente.

PROCEDIMIENTO PERMEABILIDAD DE LA MEMBRANA CELULAR. Ante todo debe pelar la remolacha, y sobre la tabla para picar cortela en bloques de aproximadamente 1cc y lvelos todos al tiempo con agua de grifo para remover el pigmento de las clulas daadas en el corte. Realice varios lavados, sin presionar, hasta que deje de salir el pigmento. Distribuya los bloques de remolacha en dos porciones equitativas y deposite cada una en un vaso de precipitados de 400cc. Adicione agua (segn criterio del docente) a volmenes iguales en cada vaso. Caliente luego uno de los vasos de precipitados, controlando la temperatura del agua
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con un termmetro (no mayor a 80 C). Realice el mismo montaje pero sin someterlo a calentamiento con el otro vaso, este le servir de control. Registre los cambios observados en cada vaso en cuanto a textura, color, olor, sabor, apariencia y otras caractersticas que usted pueda identificar. Explique dichos resultados.

ENZIMAS 1. Tome 150 gramos de cebada entera (4 o 5 puados), colquela a germinar en cmara hmeda por 36 horas (la germinacin debe llevarse a cabo en un recipiente NO hermtico (plato hondo) con agua que cubra las semillas y tapado con un plstico oscuro durante 36 horas a temperatura ambiente). 2. Para transportar la cebada germinada, hgalo en un frasco hermetico en un lapso de tiempo no mayor a 2 horas, despus de dicho tiempo destape el frasco con el fin de que las semillas se aireen. 3. Ya en el laboratorio, lleve la cebada germinada a un mortero (aproximadamente un puado), cbrala con 5 ml de agua destilada (o segn criterio del docente) y macere hasta obtener un extracto lechoso. 4. Filtre a travs de un pedazo de gasa y colecte el liquido filtrado en un tubo de ensayo y proceda a centrifugarlo (2500rpm aproximadamente durante 5 minutos). 5. Utilice un tubo de ensayo (tubo madre) para recoger todo el sobrenadante (parte liquida) producto de la centrifugacin 6. Posteriormente tome dos tubos de ensayo marcados uno como A y otro como B, a cada uno agregue dos mililitros de sobrenadante producto de la centrifugacin (contiene diastasa y otras enzimas). Caliente el tubo B en el mechero por un lapso de 5 minutos hasta ligera ebullicin (tenga cuidado de calentar el tubo por las paredes cercanas al extracto y no desde el fondo, evite que haya burbujeo inmediato) y djelo enfriar. A continuacin a cada tubo (A y B) agregue medio mililitro de solucin de almidn al 0,5% o al 1% (unos grupos de trabajo usarn una concentracin y otros grupos la otra concentracin, el docente realizara dicha distribucion). 7. Deje en reposo durante 10 minutos y transcurrido este tiempo coloque 3-4 gotas de la mezcla de cada tubo (A y B) en dos porcelanas o vidrios de reloj y adicione a cada uno, una o dos gotas de lugol. 8. Observe las diferencias, los resultados de coloracin, compare dichos resultados con otros grupos de estudiantes (0,5% o 1% de solucin de almidn, segn el caso), analice los resultados y resuma los datos en una tabla. Explique el efecto de cambio de temperatura sobre las enzimas.

CUESTIONARIO 1.- Explique cules son los principales factores que afectan a la actividad enzimtica. 2.- Diferencie entre cofactor y coenzima. 3.- Cmo se define la velocidad de un proceso enzimtico? Qu efecto tiene sobre ella la cantidad de sustrato presente en el medio de reaccin?
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4.- Dnde actan las enzimas alostricas? 5.- Defina centro activo y complejo enzima-sustrato. 6.- En las enzimas alostricas, es lo mismo el centro activo que el centro alostrico? 7.- Cite tres propiedades por las que podamos considerar a las enzimas como catalizadores. 8.- Qu diferencias hay entre inhibicin competitiva y no competitiva. 9.- Cules son los principales tipos de coenzimas. 10.- Explique qu es un catalizador y por qu es necesaria su existencia para que las clulas desarrollen su actividad. 11.- Qu caractersticas poseen las enzimas alostricas?

RESOLUCION AL CUESTIONARIO http://www.iesdionisioaguado.org/joomla/index.php?option=com_content&view=article&id= 1141:preguntas-resueltas-los-enzimas&catid=146:2o-bachillerato&Itemid=125

MAS PREGUNTAS SOBRE ENZIMAS http://www.genomasur.com/ani%203/introduccionalmetabolismoact.htm http://www.ehu.es/biomoleculas/enzimas/mt/mt6.htm

BIBLIOGRAFA HUMPHRY, D. G, DYKE, H. Van & WILLIS, D. 1969. Life in the laboratory. Hercourt, Brace & World. N.Y. JAMES, O.W. 1967. Introduccin a la fisiologa vegetal. Ediciones Omega. Barcelona KIMBALL, J.W. 1982. Biologa 4a edicin. Fondo Educativo Interamericano S.A. Mxico. MOORE, T. 1974. Research experiences in plant Phisiology. A laboratory manual. Springer Verlag. Heidelberg. SALOM, F. & CANTARINO, M.H. 1979. Curso de prcticas de biologa general. H. Blume. Ediciones Madrid.

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