Mdulo - Bacteriologia

Condies essenciais para o crescimento e a identificao Bacteriana

Estruturas Celulares
Essenciais x Facultativas

Crescimento bacteriano
O crescimento um somatrio dos processos metablicos progressivos, que normalmente conduz diviso com concomitante produo de clulas-filhas a partir de uma bactria

U.F.C. ("unidades formadoras de colnias) C.F.U. ("colony forming units)

U.F.C. ("unidades formadoras de colnias)

C.F.U. ("colony forming units)

Tempo para 1 ciclo completo

E. coli => 20 min

Micobactrias => 13 15 hs

Crescimento
Tenso de Oxignio atmosfrico

Aerbias estritas

Mycobacterium sp
Clostridium sp Streptococcus sp

Anaerbias estritas

Anaerbias facultativos

Microaerfilas

Neisseria sp Lactobacillus sp

Anaerbias no estritas

Tenso de Oxignio atmosfrico

Cultivo em Anaerobiose

Tenso de Oxignio atmosfrico

Cultivo em Anaerobiose

Crescimento

Temperatura

Crescimento
PH

Crescimento
Salinidade

Crescimento bacteriano Meios de cultivo

Curva de crescimento bacteriano

Meios de Cultura Aspectos gerais

Cultivar

e laboratrio

manter

microrganismos

viveis

no

Substncias

essenciais

para

crescimento

das

bactrias
Crescimento seletivo Demonstrao de propriedades biolgicas (hemlise

produo de pigmentos e enzimas, fermentao etc...

Isolamento

Meio de Cultura
Principais produtos e compostos utilizados

Hidrolizados de protenas
peptonas, infuso de carne, triptona, casena

Carboidratos
Dissacardeos (lactose, sacarose e maltose)

Hexoses (glicose)
Pentoses (xilose)

Tampes
Fosfatos monossdicos e dissdicos ou potssicos

Enriquecimento
Sangue, soro, vitaminas, extratos de levedura

Inibidores
Corantes de anilina (eosina, verde brilhante etc...)

Metais pesados (bismuto)

Produtos qumicos (azida de sdio, citrato, desoxicolato, lcool feniletlico)

Agentes antimicrobianos (oxacilina, vancomicina, novobiocina....)

Meio de Cultura
Principais produtos e compostos utilizados

Indicadores de pH
Vermelho de fenol

Vermelho neutro
Prpura de bromocrezol Azul de bromotimol etc...

Outros indicadores
ons frrico e ferroso H2S (sulfeto ferroso)

gar
Extrato gelatinoso extrado de algas vermelhas

Substratos para a ao de enzimas

Uria, tiossulfato de sdio, triptofano, lisina etc....

Meios de Cultura Principais caractersticas-continuar

Composio

Nutrientes indispensveis ao crescimento do organismo

Concentrao no inibitria
Meio deve ser submetido a esterilizao, eliminando contaminantes

Classificao:

Formulao
Finalidade Funcional

Classificao Formulao

Slidos (gar)
1 a 2,0 %

Caldos
Ativao das culturas, repiques de microrganismos, provas bioqumicas

Semi-slidos (gar)
0,05 a 0,3 %

Classificao Funo

Meios de Transporte e Conservao Meios para Crescimento e isolamento

Meios comerciais para provas de identificao Meios para teste de sensibilidade aos antimicrobianos

Meios de Transporte e Conservao

Meio Stuart

Caldo Lactosado
Cary Blair Salina Tamponada

gar Nutriente

Meios de Transporte e Conservao Meio Stuart

Impede a multiplicao do microrganismos e garante apenas sua sobrevivncia. Haemophilus sp., Pneumococcus,Salmonella sp., Shigella sp.
Cor original do meio: Branco opalescente.
No h evidncia de crescimento bacteriano.

Meios de Transporte e Conservao Caldo Lactosado

Microrganismos (MO) injuriados

Ex: gua peptonada, Caldo lactosado -Salmonella sp

Meios de Transporte e Conservao gar Nutriente

Anlise de gua, alimentos e leite, cultivo e isolamento preliminar das amostras

Cor original do meio: branco opalescente. Positivo: Crescimento na superfcie do gar.

Negativo: Ausncia de crescimento.

Meios para Crescimento e Isolamento

gar Chocolate gar Thayer-Martin - Chocolate gar Salmonella-Shigella (ss) Caldo Selenito Caldo Tetrationato Caldo Tioglicolato com indicador Caldo Tioglicolato sem indicador gar MacConkey gar Sangue gar CLED cystine lactose electrolyte deficient Caldo BHI infuso de crebro e corao Lwenstein Jensen

Meios para Crescimento e Isolamento gar Chocolate

Microrganismos exigentes Base - sangue de cavalo, carneiro ou coelho em temperatura alta (hemina e hematina) Haemophilus sp., Neisseria sp.,
Cor original do meio: castanho escuro (chocolate). Colnias de tamanho pequeno a mdio, com pigmento amarelo: sugestivo de Haemophilusa sp. Colnias pequenas e delicadas, com pigmento creme claro: sugestivo de Neisseria sp.

Meios para Crescimento e Isolamento gar Chocolate

Haemophilus sp.

Neisseria sp.

Meios para Crescimento e Isolamento Thayer Martin

gar Chocolate Vancomicina (G+), Colistina (G-), Nistatina (f) e Trimethoprim (PM)

Meios para Crescimento e Isolamento gar Sangue

Gram negativo e Gram positivo, fungos filamentosos (bolores) e leveduras Eritrcitos ntegros (padres de hemlise ntidos) Verificao de hemlise dos Streptococcus e Staphylococcus Prova de satelitismo (para identificao presuntiva de Haemophilus spp.).
Cor original do meio: vermelho. Beta hemlise Alfa hemlise Gama hemlise

Meios para Crescimento e Isolamento gar Sangue

S. aureus - colnias -hemolticas

Meios para Crescimento e Isolamento gar MacConkey

Isolamento de bacilos Gram negativo (seletivo) Inibe Gram positiva (cristal violeta) Utilizao de lactose (diferencial)

Lactose positiva colorao avermelhada Lactose negativa colorao inalterada Eventualmente, podem crescer Enterococcus, Candida e Bacillus

Meios para Crescimento e Isolamento gar MacConkey

Salmonella.

E.coli

Meios para Crescimento e Isolamento gar MacConkey

Klebsiella sp

Meios para Crescimento e Isolamento gar Salmonella-Shigella (SS)

Inibem microrganismos Gram positivos (sais de bile, verde brilhante e citrato de sdio) Tiossulfato de sdio e o citrato frrico
Colnias com centro negro (H2S) ou colnias incolores: suspeita de Salmonella.
Colnias incolores: suspeita de Shigella spp.

Colnias cor de rosa ou vermelho: suspeita de Escherichia coli ou Klebsiella spp.

As bactrias no fermentadoras de lactose cor inalterada.

As bactrias fermentadoras de lactose aparecem na cor rosa.

Meios para Crescimento e Isolamento gar Salmonella-Shigella (SS)

Salmonella e Shigella

Salmonella

Escherichia coli
Klebsiella sp

Meios para Crescimento e Isolamento gar CLED cystine lactose electrolyte deficient

Amostras de Urina.
Deficincia de eletrlitos inibem o crescimento de Proteus.

Isolar e quantificar microrganismos Gram positivos, Gram negativos e leveduras.

Cor original do meio: azul claro. Colnias lactose positiva: cor amarela. Colnias lactose negativa: cor azul.

Meios para Crescimento e Isolamento gar CLED cystine lactose electrolyte deficient

Meios para Crescimento e Isolamento Lwenstein Jensen

Base ovos integrais

Teste de niacina (positivo para Mycobacterium tuberculosis). Isolamento primrio de micobactrias.

Cor original do meio: verde claro Positivo: Crescimento de colnias amarelas/vermelhas

Negativo: ausncia de crescimento.

Meios para Crescimento e Isolamento Lwenstein Jensen

Brometo cianognio + benzidina

Meios Comerciais para Provas de Identificao e Classificao

gar Citrato Simmons gar Bile-Esculina gar Sangue Caldo base de Moeller gar DNAse gar Esculina gar Fenilalanina CTA Cystine Tryticase gar Caldo Triptona Caldo Malonato Caldo Nitrato gar Meller - Hinton gar TSI Triplo Acar Ferro gar base Uria (Christensen) Vermelho de Metila, Voges-Proskauer

Identificao e classificao gar Sangue

Gram negativo e Gram positivo, fungos filamentosos (bolores) e leveduras Eritrcitos ntegros (padres de hemlise ntidos) Verificao de hemlise dos Streptococcus e Staphylococcus Prova de satelitismo (para identificao presuntiva de Haemophilus spp.).
Cor original do meio: vermelho. Beta hemlise Alfa hemlise Gama hemlise

Identificao e Classificao gar Sangue

esverdeado

Identificao e Classificao gar Sangue

S. aureus - colnias -hemolticas

Alpha-hemlise (Streptococcus pneumoniae)

Beta-hemlise (Streptococcus pyogenes)

Gama-hemlise (Enterococcus faecalis)

Identificao e Classificao gar Sangue Teste de Camp

Staphylococcus aureus

Streptococcus a ser identificado

Streptococcus agalactiae

Identificao e Classificao gar Sangue

H.parainfluenzae, H.parahaemolyticus...

Provas de Identificao gar DNAse

Hidrlise de cido desoxirribonuclico (DNA) DNase positivos: Staphylococcus aureus , Serratia sp. e Proteus sp.... DNase negativos: Staphylococcus coagulase negativa, enterobactrias.... Revelao com HCl 1 N: Cor original do meio: amarelo claro Positivo: Presena de halo claro na parte inferior e em volta da colnia. Negativo: Ausncia de halo claro em volta da colnia. Revelao com azul de toluidina : Cor original do meio: azul claro Positivo: Colorao rosa na parte inferior e em volta da colnia. Negativo: Ausncia de cor rosa. O meio permanece com a cor original, azul.

Provas de Identificao gar DNAse

Provas de Identificao Caldo Malonato

Malonato de sdio como nica fonte de carbono, resultando em alcalinizao do meio. Diferenciar gneros e espcies de enterobactrias e no fermentadores.
Cor original do meio: verde. Positivo: azul. Negativo: inalterado (verde).

Provas de Identificao gar Bile Esculina

Hidrolise da esculina. Identificao de Streptococcus x Enterococcus

Esculina > glicose + esculetina

esculetina + ons frricos

Identificao gar base Uria (Christensen)

Ao da enzima urease - resultando na alcalinizao do meio. Bacilos Gram negativos fermentadores e no fermentadores, Staphylococcus e Haemophilus.
Cor original do meio: amarelo palha. Positivo: alterao do meio para cor de rosa, pink. Negativo: sem alterao de cor do meio.

Identificao CTA (Cystine-tryptic-agar )

Semi-slido fermentao de carboidratos

Usado para diferenciar espcies de Haemophilus sp., Branhamella catarrhalis

e Corynebacterium spp. Neisseria sp.

Identificao gar Manitol

Crescimento e fermentao do Manitol em meio hipertnico S. aureus +, S. saprophyticus +/-, S. epidermidis -

Identificao gar Meller - Hinton

Fastidiosas

Requerem hemina (Fator X)

Nicotinamida adenina dinucleotdeo (NAD ou Fator V)

H.influenzae

Identificao TSI (Trplice aucar e ferro)

Teste bioqumico para identificao Famlia Enterobacteriaceae
Fermentao de glicose, lactose e sacarose; produa de gs e H2S

Identificao Vermelho de Metila, Voges-Proskauer

Famlia Enterobacteriaceae VM : Fermenta glicose - via de cida-mista ( c. Actico;

lctico; frmico)
Ex E. coli +; Klebsiella sp

VP : Fermenta glicose via

butilenogliclica ( acetona,

butilenoglicol e poucos cidos ) + KOH e O2 a acetona

convertida em diacetila + alfa-naftol - vermelho ( indicador

Vermelho de metila)
Ex Klebsiella sp +; E. coli

Famlia Enterobacteriaceae

Meios para Teste de Sensibilidade aos Antimicrobianos

gar Mueller Hinton

gar Sangue

Sensibilidade aos Antimicrobianos gar Mueller Hinton

Kirby e Bauer e pelo NCCLS (National Committee for Clinical Laboratory Standards ) - condies de crescimento das principais bactrias.
Avaliao da resistncia aos antimicrobianos - mtodos de difuso em disco e E-test para enterobactrias, no fermentadores, Staphylococcus, Enterococcus sp.

A zona do dimetro particular para cada droga e organismo, sendo comparado com dimetros padronizados pelo NCCLS, que determina cada microrganismo sendo sensvel, intermedirio ou resistente.

Teste de Sensibilidade aos Antimicrobianos gar Mueller Hinton

Sensvel - S. epidermidis
Zona de inibio > 16mm

Teste de Sensibilidade aos Antimicrobianos gar Mueller Hinton

Deteco da resistncia oxaclina ( meticilina) E-test

Susceptibilidade oxacilina

Teste de Sensibilidade aos Antimicrobianos Caldo Mueller Hinton

Teste de Sensibilidade aos Antimicrobianos gar Sangue

Teste de Bacitracina

Streptococcus pneumoniae optoquina (s)