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VI.

CONCLUSIN
Se logr aislar el ADN de la bacteria Eschericha coli. Se logr comprobar la presencia de ADN bacteriano mediante la tcnica de electroforesis en gel de agarosa.

VII. CUESTIONARIO
1. Cul es la diferencia entre ADN plsmido y cromosomal bacteriano? ADN plasmidico ADN cromosomal bacteriano

El ADN plasmidico contiene menor El ADN cromasomal contiene cantidad de nucletidos mayor cantidad de nucletidos Incapacidad de transmitir informacin gentica. Son molculas de extracromosmico circular la Capacidad de almacenar y transmitir la informacin gentica hacia la descendencia ADN El ADN cormasomal bacteriano es lineal.

Son molculas de ADN extra- El ADN cromosomal se cromosmico situado dentro del encuentra compactado, plegado citoplasma bacteriano y combinado con los componentes citoplasmticos en una regin nuclear primitiva.

Los plsmidos no tienen protenas Si tienen protenas asociadas. asociadas. Tiene menor peso molecular Tiene mayor peso molecular
El ADN plasmidico tiene una El ADN cromosomal se replicacin y transcripcin replicacin en forma independiente del ADN cromosmico, bidireccional donde se inicia y que posee un nico origen de termina dentro de la molcula de replicacin. ADN.

2. Qu cuidados se debe tener en cuenta en el proceso de extraccin el ADN de bacteria?


Los cuidados que se deben tener en cuenta durante el proceso de extraccin de ADN de bacteria.

En

primer lugar todo el personal debe seguir las precauciones

estandarizadas de manera rutinaria para prevenir la exposicin de la piel, en todas las situaciones que puedan dar origen a accidentes.

La manipulacin del material biolgico se debe realizar bajo las


oportunas condiciones de esterilidad, a fin de evitar contaminaciones y degradacin de las muestras.

El Las

material biolgico de desechos deber ser eliminado por

ejemplo mediante inmersin en un agente oxidante fuerte como leja al 10% o agua oxigenada al 3%. bacterias se deben coger con un asa esterilizada, no es

recomendable coger las clulas con mondadientes, por que absorbe agua, dejando las clulas secas.

Las bacterias deben inocularse a partir de colonias frescas, para


evitar perdida de plsmidos.

evitar

la exposicin directa a agentes biolgicos infecciosos o potencialmente contaminantes, mediante la

sustancias

utilizacin de materiales adecuados que se interpongan para evitar el contacto con estos agentes y sustancias.

Tener

mucho

cuidado

con

la

eliminacin

de

material

contaminado.

3. Explicar el fundamento de cada uno delos reactivos utilizados en el proceso de extraccin del ADN? Buffer TE 1X: es una solucin tampn (amortiguadora), es un
componente comnmente utilizado en biologa molecular,

especialmente en los procedimientos que implica ADN. ADNc o ARN.

Buffer TE 1X: se utiliza para volver a suspender el sedimento


final de plsmido purificado y contiene EDTA muy bajo, por lo que es compatible con la secuencia y otras aplicaciones

enzimticas.

Lisozima: tambin llamada murimidasa, es una enzima de 14.4


kilo Dalton, daa a las clulas bacterias catalizando la hidrolisis de las uniones beta 1,4 entre los residuos de cido N acetilmuramico y N-acetil D-glucosamina en un peptidoglicano. La lisozima es abundante en numerosas secreciones saliva, las lgrimas y el moco. como la

NaCl (Cloruro de sodio). Las sales aumentan el poder inico de


la solucin y ocasionan la precipitacin del ADN.

SDS (Dodecil sulfato de sodio) Es un detergente aninico que


acta rompiendo enlaces no covalentes en las protenas,

desnaturalizndolas, provocando que estas molculas pierdan su conformacin negativa, esto se debe porque el SDS se une a las zonas apolares del polipptido.

Proteinasa k: es una enzima que degrada las protenas de las


membranas celulares (nucleasas), por ello se le utiliza en los mtodos de extraccin de cido nucleico de bacterias o clulas hormonas, porque rompe las membranas y degrada las protenas libres al medio, adems es capaz de digerir la queratina (pelo). CTAB: es detergente catinico que tiene la propiedad de

precipitar cidos nucleicos y polisacridos, cidos en soluciones de baja concentracin inica. El CTAB se adhiere fuertemente

al ADN, desplaza las protenas y previene la degradacin. Sus usos incluyen la utilizacin como solucin tamponante para la extraccin de ADN.

Cloroformo: utilizado en biologa molecular para varios procesos


como la extraccin de ADN, que acta estabilizando el ADN .As mismo es usado en el proceso de fijacin de muestras bilgicas post morten.

Alcohol isoamilico: es un agente antioxidante que disminuye la


formacin de espumas, facilita la separacin de las fases acuosas y precipita los restos orgnicos.

Isopropanol helado L 100%: sirve para precipitar

el ADN

solubilizando con el NaCl ya que el ADN o ARN son insolubles en alcoholes. El ADN interacciona con el solvente acuoso (isopropanol helado) a travs de uniones polares.

Etanol: sirve para lavar precipitados de ADN que se obtien con el isopropanol frio. Adems precipita el ADN o ARN, la concentracin del ADN se logra mediante precipitacin con el etanol en presencia de cationes monocovalentes a el etanol en presencia de

concentraciones de 0.1 a 0.5 M.

estos cationes induce un cambio estructural en el ADN que causan la agregacin y precipitacin del mismo.

BIBLIOGRAFIA
1. CONCEPCION J. PUERTA B. Prctica de Biologa Molecular. Editorial Pontificia Universidad Javeriana. 2. CORNIDE M.T., 2000 DIVERSIDAD GENETICA Y

MARCADORES MOLECULARES. CNIC, La Habana. 3. ZARATE, P y JIMENEZ C. Manual del Laboratorio de Biotecnologa Molecular. Extrado de PDF.

VI. CONCLUSIN
Se logr aislar el ADN plasmidico de la bacteria Eschericha coli. se lleg a comprender los fundamentos fsicos y qumicos que permiten el aislamiento del ADN plasmidico.

VII. CUESTIONARIO
1. Cules son la diferencias en los fundamentos fsicos qumicos de los protocolos de extraccin de ADN genmico y ADN plasmidico?

ADN GENOMICO

ADN PLASMIDICO

El ADN genmico tiene un tratamiento La extraccin de ADN generalmente con NaOH, sta hidrolisis plasmidico tiene un tratamiento fragmenta a todo el ADN genmico generalmente con NaCl, esta hidrolisis bsica fragmenta a como tambin el ADN plasmidico todo el ADN (genmico plasmidico) El tamao del ADN cromosmico es grande respecto al ADN plasmidico y por ello, no se puede volver reorganizar las hebras complementarios. El tamao del ADN plasmidico es pequeo que el ADN genmico y se puede volver reorganizar las hebras complementarios

El ADN genmico no puede formar las El ADN plasmidico vuelve a uniones correctas para solubilizarse adoptar su estructura de doble cadena y se solubiliza. El ADN cromosmico y las protenas precipitan con un complejo formando por potasio (K) y SDS que se elimina por centrifugacin La neutralizacin con acetato de potsico permite que el ADN plasmidico vuela a su configuracin CCC y por tanto permanezca soluble

ADN GENOMICO:

son de 3mil millones cromosomas.

de bases que estn organizados en 46

El ADN genmico de la bacteria E. Coli tiene solo 4.6 millones de pares de bases. Solo se transmite de una clula madre a las clulas hijas durante la divisin celular Tiene una forma que es lineal.

ADN PLASMIDICO Los plsmidos oscilan por lo general de unos pocos miles a cientos de miles de pares de bases. tiene una estructura lineal No implica la divisin celular Pueden llevar plsmidos con genes que permitan a las bacterias sobrevivir en la presencia de metales pesados txicos.

1. BRAVO, A. GONZALES, C y BORGENE, S. 2012. Manual de prcticas de laboratorio de Biologa Molecular. Universidad Autnoma Metropolitana. Mxico. 2. CONCEPCION J. PUERTA B. Prctica de Biologa Molecular. Editorial Pontificia Universidad Javeriana.

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