RESUMEN PRUEBA BIOLOGIA

RETICULO ENDOPLASMICO APUNTES DE SINTESIS BICAPAS LIPIDICAS GOLGI LISOSOMAS Y PEROXISOMAS CICLO CELULAR MITOSIS Y MEIOSIS MUERTE CELULAR. APOPTOSIS SEALIZACION CELULAR

El Retculo Endoplsmico El RE es un organelo tpico de las clulas eucariticas y en clulas animales est organizado en un red de tubos ramificados y sacos aplanados e interconectados que se extiende a travs de citoplasma. Constituye ms de la mitad de la membrana total y representa alrededor del 10% de volumen celular. La membrana del RE separa su lumen del citosol y media el transporte selectivo de una serie de compuestos entre ambos compartimentos. Existe una continuidad entre en la membrana del retculo endoplsmico y la membrana externa nuclear El RE tiene un rol importante en una serie de funciones celulares, particularmente en la sntesis de numerosos lpidos y protenas secretadas y de membrana. Tambin es un reservorio de Ca2+. Se distinguen dos zonas en el organelo : el RE liso y el RE rugoso Retculo endoplsmico liso En esta regin ocurre la sntesis de triglicridos y fosfolpidos. Es particularmente abundante en hepatocitos: enzimas del RE liso modifican o detoxifican compuestos hidrofbicos como pesticidas, drogas y carcingenos, convirtindolos en productos conjugados mas hidrosolubles que pueden ser excretados. De ciertas regiones del RE liso yeman vesculas de transporte destinadas al aparato de Golgi. Retculo endoplsmico rugoso Denominado as por su aspecto debido a que presenta regiones tapizadas de ribosomas. En los ribosomas unidos al RE se sintetizan protenas de membrana (de organelos y de la MP) y protenas solubles a ser secretadas por la clula y las destinadas al lumen del RE, del A. de Golgi y de lisosomas.

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El RE rugoso es particularmente abundante en clulas secretoras de protenas como linfocitos que secretan anticuerpos o clulas de los acinos pancreticos que secretan enzimas digestivas. Sntesis de protenas en el RE El RE internaliza selectivamente las protenas a medida que stas son sintetizadas (transporte cotraduccional) en los ribosomas asociados al RE rugoso mediante la cadena polipeptdica naciente. Una vez en el RE las protenas son transportadas sin reentrar al citosol Protenas solubles Son totalmente transportadas y almacenadas en el lumen del RE antes de ser destinadas al lumen del organelo de destinacin (RE, A. de Golgi o lisosomas) o para secrecin. Protenas de transmembrana Son parcialmente translocadas y quedan embebidas en su membrana. Algunas de estas protenas tienen funciones en el RE y otras en la membrana de otros organelos o en la MP.

Sntesis de protenas en el RE A medida que las protenas solubles o de membrana son sintetizadas en el ribosoma, una secuencia seal hidrofbica especfica ubicada en el extremo N-terminal (16-30 AA's) de la cadena naciente lo dirige a la membrana del RE. Mientras el polipptido creciente emerge del ribosoma, atraviesa la membrana del RE va protenas especficas. Las secuencias seal al RE fueron descubiertas a comienzo de los 1970's en protenas secretadas que son internalizadas en el RE antes de ser descargadas fuera de la clula. Experimentos con microsomas de RE que demuestran la presencia de las secuencias seal en el polipptido sintetizado. a) La sntesis se hace en un medio que contiene ribosomas, tRNA, ATP, GTP y enzimas citoslicas y al cual se le agrega posteriormente microsomas. No se demuestra internalizacin del pptido en las vesculas. b) La sntesis del polipptido se hace en presencia de ribosomas adheridos a los microsomas, se demuestra la presencias de un pptido, y la secuencia seal en las vesculas de RE.

Las secuencias seal contienen uno o ms AAs(+) (Arg, Lys) seguidos de 6 a 12 residuos hidrofbicos.

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Sntesis de protenas solubles en el RE La secuencia seal del RE (1) es guiada a la membrana del organelo mediante la partcula de reconocimiento de seal (PRS o SRP), que se liga a ella en el complejo cadena naciente/ ribosoma. La PRS est compuesta de 6 diferentes cadenas polipeptdicas, unidas a una pequea molcula de RNA. Tan pronto como la secuencia seal del RE comienza a emerger del ribosoma se une a la PRS, producindose una pausa en la sntesis (2). La PRS dirige al complejo cadena naciente/ribosoma un receptor de PRS (RPRS) ubicado en la membrana del RE. Esta interaccin es inducida por la unin de GTP a la subunidad P54 de PRS y a la subunidad alfa del receptor de PRS (3). El complejo se transferiere a una protena-canal, el translocador (o translocn), asociado al RPRS, que se abre producindose la insercin de la secuencia seal y del segmento adyacente del polipptido en el poro. El receptor de PRS y la PRS se separan del translocador, hidrolizan sus GTPs y quedan listos para iniciar otro ciclo de insercin (4). A medida que la cadena polipeptdica se elonga, pasa al lumen del RE donde la secuencia seal es cortada por una peptidasa y degradada (5). El pptido termina de sintetizarse mientras el ribosoma permanece unido al poro (6). Al terminar la sntesis se libera el ribosoma y el translocador se cierra (7). La protena pasa al lumen donde asume su conformacin plegada (8).

Translocador o translocn La cadena polipeptdica cruza la membrana del RE a travs del translocador o translocn, una protena de membrana, que forma un poro acuoso. El translocador o complejo Sec61 est formado por cuatro complejos, c/u formado de tres protenas de transmembrana que se ensamblan formando una estructura de picarn. Se postula que la secuencia seal en la cadena polipeptdica creciente gatilla la apertura del este poro.

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Sntesis e insercin de protenas de membrana en el RE Las protenas de membrana presentes en la MP, Golgi, o lisosomas tienen una particular orientacin o topologa respecto de la bicapa lipdica. Estas protenas son sintetizadas en el RE y permanecen embebidas en la membrana a medida que se mueven a sus destinaciones finales a lo largo de la ruta secretora. Sntesis e insercin en la membrana del RE de protenas con un segmento hlice de transmembrana. Las protenas Tipo I poseen una secuencia seal y una secuencia hidrofbica interna que constituir el segmento hlice de transmembrana. Al igual que en las protenas solubles la translocacin co-traduccional se inicia a travs de la actividad de la PRS y del receptor de PRS. Una vez que el extremo N-terminal entra al lumen la secuencia seal es cortada por una peptidasa (1), mientras la cadena sigue creciendo (2). Cuando se sintetiza una secuencia de aprox. ~22 AA's hidrofbicos (secuencia de detencin de transferencia y anclaje) se detiene la translocacin (3). La secuencia hidrofbica se mueve lateralmente entre las subunidades del translocador y se ancla en la membrana (4). La traduccin contina hasta el que el extremo C terminal se desliza fuera del ribosoma todava anclado al translocador cerrado (5). Al terminar la sntesis se libera el ribosoma (6).

Sntesis e insercin en la membrana del RE de protenas con mltiples segmentos hlices de transmembrana
En las protenas de transmembrana de mltiples hlices el segmento N-terminal funciona como secuencia seal de anclaje que dirige la unin de la cadena polipeptdica naciente a travs del poro del translocador. El plegamiento en hlice aparentemente se realiza en el poro. A medida que la cadena naciente que sigue al primer hlice se elonga, se transporta a travs del translocador hasta que se forma el segundo hlice . Esta hlice acta como una secuencia de detencin de transferencia, previniendo mayor extrusin de la cadena a travs del poro al lumen del RE. Al sintetizarse el segundo hlice cesa la extrusin de la cadena a travs del translocon al lumen del RE. Las dos cadenas salen del translocon lateralmente hacia la membrana anclndose como una horquilla hlice . El C-terminal de la cadena naciente contina creciendo en el citosol. Las horquillas hlice posteriores (3 y 4) de insertan de manera similar, sin la participacin de SRP ni del receptor SRP.

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Modificacin covalente de protenas en el RE

Muchas de las protenas que entran al RE son modificadas qumicamente: glicosilacin y formacin de enlaces disulfuro. Glicosilacin de protenas en el RE Una de la principales funciones biosintticas del RE es la glicosilacin o adicin covalente de azcares a las protenas solubles y de membrana sintetizadas en el organelo. Primero, se agrega en bloque un oligosacrido precursor preformado (de 14 azcares: 2 Nacetilglucosaminas, 9 manosas y 3 glucosas) a un sitio de glicosilacin en residuos asparragina (unin-N) de la protena en la membrana del RE rugoso. Los cinco azcares en la caja gris forman la regin nuclear del oligosacrido, y que en muchos casos es lo que sobrevive al extenso procesamiento en el aparato de Golgi. El oligoscarido precursor que est originalmente unido al lpido dolicol (dolicol pirofosforil oligosacrido) y es transferido como una unidad al residuo asparragina tan pronto ste emerge al lumen del RE en una reaccin catalizada por la enzima unida a membrana, oligosacaril transferasa. Slo son glicosiladas las asparraginas en las secuencias Asn-X-Ser y Asn-X-Thr (X es cualquier AA excepto prolina). Una copia de la enzima oligosacaril transferasa se asocia a cada translocador en la membrana del RE.

La adicin de este oligosacrido es el primer paso en una serie de modificaciones antes de que la protena madura emerja en la va de salida. La gran diversidad de las estructuras con unin a asparragina (unin-N) en las glicoprotenas maduras resulta de modificaciones posteriores del oligosacrido precursor original. Mientras la glicoprotena todava est en el lumen del RE, -glucosidasas y - manosidasas remueven tres glucosas y una manosa de los oligosacridos. Papel de la glicosilacin en las protenas Los oligosacridos pueden jugar variadas funciones segn la protena. 1.- Pueden hacer a la protena ms resistente a la digestin por proteasas 2.- Ayudar en el proceso de plegamiento en el ER. 3.- Guiar la protena al organelo de destinacin, sirviendo de seal para el empacamiento de la protena en la vescula apropiada.

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4.- Muchos oligosacridos se exponen en la superficie celular formando la capa de carbohidratos y pueden funcionar en el reconocimiento entre las clulas.

Plegamiento de las protenas en el lumen del RE En la clula, in vivo, el correcto plegamiento de las protenas en su conformacin tridimensional es asistido por la actividad de otras protenas que lo facilitan. El RE contiene en el lumen varias protenas que catalizan el plegamiento de las protenas recin sintetizadas: las llamadas protenas chaperonas y la protena disulfuro isomerasa (PDI). Durante la traduccin de protenas citoslicas, las chaperonas se unen al amino (N) terminal del polipptido creciente, estabilizndolo en una configuracin no plegada hasta que la sntesis se ha completado. Completada la sntesis, la protena se libera del ribosoma y adquiere su correcta conformacin tridimensional. Una de las ms importantes protenas chaperonas del RE de la familia de las Hsp 70 (heat shock proteins) es BiP. BiP se une a la protena no plegada apenas sta cruza la membrana y luego media el plegamiento y ensamblaje de las protenas formadas por mltiples subunidades dentro del RE. BiP presenta afinidad por regiones hidrofbicas expuestas e hidroliza ATP uniendo y liberando la protena en cada ciclo de hidrlisis. Las protenas plegadas correctamente se disocian de BiP y quedan disponibles para su transporte al aparato de Golgi. La unin se mantiene hasta que se pliega normalmente o si no son degradadas: hay un control de calidad. Las protenas no plegadas, incorrectamente plegadas o ensambladas permanecen unidas BiP y selectivamente retenidas en el RE o recuperadas desde la red cis-Golgi y vueltas al RE. Otras dos protenas chaperonas, calnexina (de membrana) y calreticulina (luminal) se unen a protenas incompletamente plegadas previniendo una agregacin irreversible. Requieren Ca2+ para su actividad y reconocen a oligosacridos con unin-N con una sola glucosa terminal. Una glicosidasa remueve la glucosa terminal y libera a la protena de la chaperona. Si la protena est todava incompletamente plegada, una glicosiltransferasa transfiere una nueva glucosa al oligosacrido y la protena recupera la afinidad por la chaperona. El ciclo se repite hasta que la protena se ha plegado completamente.

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Las protenas correctamente plegadas y ensambladas son transportadas desde el RE rugoso al complejo de Golgi y finalmente a la superficie u otra destinacin. Muchas protenas translocadas al RE no logran plegarse apropiadamente y son devueltas al citosol y degradadas.

Plegamiento de las protenas en el lumen del RE Formacin de enlaces disulfuro. La formacin de los enlaces disulfuro, S-S, entre las cadenas laterales de los residuos cistena es un importante aspecto del plegamiento de protenas en el RE. Estos enlaces no se forman en el citosol que posee un ambiente reductor que mantiene los residuos cistena en su estado reducido (R-SH). En el RE el ambiente es ms oxidante lo que facilita la formacin de estos enlaces. La formacin de enlaces disulfuro es catalizada por la enzima protena disulfuro isomerasa (PDI) localizada en el lumen del RE.

El ensamblaje de subunidades en protenas multimricas ocurre en el RE.

Muchas protenas de membrana y secretadas estn constituidas de dos o ms cadenas polipeptdicas (o subunidades). En todos los casos son ensambladas en el RE. Ejemplos: inmunoglobulinas, que contienen dos cadenas pesadas y dos livianas todas unidas por puentes S - S.

Destino de las protenas sintetizadas en RE Algunas protenas de transmembrana retenidas en el RE poseen secuencias cortas en el Cterminal contieniendo dos lisinas (KKXX). Las protenas solubles residentes en el lumen del RE (i.e. BiP) poseen una secuencia de retencin en el C-terminal: Lis-Asp-Glu-Leu (KDEL). Las protenas solubles con la secuencia KDEL son exportadas al aparato de Golgi en vesculas (COP-II), reconocidas por un receptor de membrana en el compartimiento intermedio RE- Golgi (ERGIC) o en el Golgi cis y devueltas selectivamente al RE en vesculas (COP-I) por la llamada va de recuperacin. La mayora de las protenas son destinadas a otros lugares y son empacadas en vesculas que se fusionan con la membrana del Golgi. Las protenas que se mueven a travs de la ruta secretora, son empacadas en pequeas vesculas de transporte cubiertas de protenas: COPII. Estas vesculas yeman desde regiones especializadas

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del RE: llamados sitios de salida, cuyas membranas carecen ribosomas adheridos. En la mayora de las clulas animales estos sitios estn dispersos al azar en la red del RE.

Las vesculas yemadas del RE se funden formando estructuras llamadas agrupaciones tbulo vesiculares. Estas estructuras se movilizan hacia el Golgi cis a travs de microtbulos y en su camino van yemando vesculas cubiertas de protenas : COPI. Estas vesculas regresan al RE protenas residentes en el RE (i.e. BiP) que han escapado y otras que participan en la yemacin del organelo. La sntesis de lpidos se realiza en el RE liso Adems de sus actividades en el procesamiento de las protenas, secretadas de membrana el RE es el principal sitio de sntesis de lpidos en las clulas eucariticas. Debido a que son muy hidrofbicos, los lpidos son sintetizados en asociacin con membranas celulares preexistentes, y no en el ambiente hidroflico del citosol. Aunque algunos lpidos son sintetizados en asociacin con otras membranas, la mayor parte son sintetizados en el RE. Son entonces transportados desde el RE a su destinos finales en vesculas o por protenas transportadoras, Sntesis de fosfolpidos La mayora de los fosfolpidos son sintetizados en la monocapa citoslica de la membrana del RE a partir de precursores citoslicos solubles. Dos molculas de acil-CoA se unen al glicerol-3-fosfato, dando cido fosfatdico, que es insertado en la membrana. Despus una fosfatasa convierte el cido fosfatdico a diacilglicerol Enzimas de la cara citoslica de la membrana del RE catalizan la adicin de diferentes grupos polares, resultando en la formacin de fosfatidil-colina, fosfatidil- serina, fosfatidil-etanolamina, o fosfatidil- inositol. En el citoplasma existen molculas que le es muy fcil capturar a otras molculas como por ejemplo: la colina, es capturada por el citidn-bifosfocolina, el cual le facilita a la tercera enzima (colina fosfatotransferasa) la colina para formar el fosfatidilcolina. Los otros fosfolpidos son sintetizados de la misma forma, el cambio se produce en la tercera enzima la que puede ser serina, etanolamina e inositol fosfotransferasa segn el caso.

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Los fosfolpidos se distribuyen asimtricamente en las dos monocapas, de las membranas plasmticas. En eritrocitos: los fosfolpidos que poseen un grupo colina (SM y PC) se encuentran predominantemente en la monocapa externa y los lpidos con grupos amino (PS y PE) se encuentran en la cara citoslica. Los FLs sintetizados en la monocapa citoslica de la membrana del ER son transferidos a la otra monocapa mediante enzimas denominadas flipasas o scramblasas. Debido a que la flipasa de la membrana del RE preferentemente reconoce y transfiere grupos de cabeza que contengan colina, se genera una membrana asimtrica con la monocapa luminal (la cual produce la mitad exterior de la bicapa de la membrana plasmtica) altamente enriquecida en fosfatidilcolina. Las mitocondrias y los peroxisomas no forman parte del sistema membranoso, por lo que requieren mecanismos diferentes. Las protenas de intercambio de fosfolpidos, tienen la capacidad de transferir molculas individuales de fosfolpidos entre membranas. Cada protena de intercambio reconoce solo determinados tipos especficos de fosfolpidos. La protena extrae una molcula de fosfolpido de una membrana y luego difunde por la clula para incorporarlo en su lugar de unin (ej: mitocondria). Estas protenas actan distribuyendo fosfolpidos al azar. El RE liso tambin es el principal sitio de sntesis del colesterol, otro lpido de membrana. Las hormonas esteroidales son sintetizadas a partir del colesterol en el RE en clulas productoras de esteroides, presentes en testculo y ovario, tejidos que presentan abundante RE liso.

SINTESIS DE BICAPAS LIPIDICAS OCURREN EN EL RE ( APUNTES) LEER GUIA 2

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Aparato de Golgi
Este organelo fue descubierto por el mdico e histlogo Camillo Golgi en 1898. Dibujos realizados por Camillo Golgi del aparato reticular interno (aparato de Golgi) observado en neuronas de ganglios espinales. Los diferentes dibujos ilustran la variedad de caractersticas que Golgi observ con su impregnacin metlica con nitrato de plata. Consiste en una serie de sacos aplanados o cisternas formando pilas. Cada pila consta de 3 a 6 cisternas y su nmero depende del tipo de clula. Est compartimentalizado en tres regiones: cis, medial y trans. En clulas animales muchas pilas estn unidas por conexiones tubulares entre ellas formando un solo complejo. El aparato de Golgi se ubica cerca del ncleo y en clulas animales vecino al centrosoma. En las clulas vegetales pueden existir hasta cientos de estos apilamientos normalmente dispersos en el citoplasma. Cada pila de Golgi tiene dos caras: una de entrada o cis, adyacente al RE y una de salida o trans, dirigida hacia la MP. La cisterna ms externa de cada cara esta comunicada a una red de tbulos y vesculas interconectados: la red Golgi cis (CGN), y la red Golgi trans (TGN). El aparato de Golgi es especialmente prominente en clulas especializadas en secrecin como las clulas en copa del epitelio intestinal que secretan grandes cantidades mucus rico en polisacridos o en clulas de los acinos pancreticos que secretan jugo pancretico. Compartimentalizacin funcional del Aparato de Golgi . Las cisternas del Golgi estn organizadas en una serie de compartimentos de procesamiento: red Golgi cis , cisternas cis , cisternas mediales , cisternas trans , red Golgi trans . Durante su paso a travs del Golgi las protenas sufren posteriores modificaciones covalentes de las cadenas de oligosacridos en estos compartimentos. En las clulas vegetales el aparato de Golgi adems est involucrado en la sntesis del los polisacridos complejos de la pared celular.

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Organizacin y transporte de protenas en las cisternas del Golgi: Modelos para explicar la mantencin de la estructura polarizada del Golgi y la movilizacin de las protenas de un compartimento a otro. Modelo de transporte vesicular: las cisternas son estructuras estticas y las protenas en trnsito se transportan en vesculas COP-II que yeman de un compartimento y se funden con el siguiente. El flujo retrogado se hara tambin a travs de vesculas COP-I. Modelo de maduracin de las cisternas : Las cistenas son estructuras dinmicas que maduran a medida que se movilizan al travs de la pila. La compartimentalizacin de las enzimas del Golgi se hara por flujo retrgrado en vesculas COP-I. Las protenas son modificadas y en el aparato de Golgi Muchos de los grupos oligosacridos adicionados a las protenas en el RE sufren modificaciones en el aparato de Golgi. Las protenas solubles y de membrana entran al Golgi cis en vesculas de transporte, en vesculas (COP-II), desde el RE. Segn cual modelo se acepte las protenas viajan a lo largo del aparato transportadas en vesculas a travs de las cisternas que yeman de una y se fusionan con la siguiente o en las cisternas en maduracin. Si poseen la seal de retencin KDEL vuelven al RE. Lis-Asp-Glu-Leu (KDEL) en vesculas (COP-I) por la de va de recuperacin. Algunas protenas de transmembrana retenidas en el RE poseen secuencias cortas en el Cterminal conteniendo dos lisinas (KKXX) Transporte desde el aparato de Golgi La protenas que salen por la red Golgi trans en vesculas de transporte son destinadas a la superficie celular u a otro compartimiento. En ausencia de seales especficas de destinacin, las protenas son llevadas a la MP por secrecin constitutiva (incorporacin de protenas y fosfolpidos a las membranas). Alternativamente, las protenas pueden desviarse de la va de secrecin constitutiva y ser destinadas a otros organelos (lisosomas) y en ciertas clulas a una secrecin regulada (i.e. hormonas, enzimas, etc.). Glicosilacin de protenas en el aparato de Golgi En el RE, primero se adiciona a la protenas un oligosacrido precursor de 14 residuos de azcares en un residuo Asp. Luego son removidos del oligosacrido tres residuos de glucosa y uno de manosa (Lumen de RE).

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En el Golgi, el procesamiento involucra modificaciones adicionales de las cadenas de oligosacridos de las glicoprotenas. Una de las ms importantes es la modificacin de los oligosacridos unidos por unin-N adicionados a las protenas en el RE. Glicosilacin de protenas secretadas o destinadas a la membrana plasmtica Los oligosacridos de unin-N son procesados en una secuencia ordenada de reacciones. La primera modificacin de las protenas destinadas a la membrana plasmtica, o a ser secretadas es la remocin de tres residuos manosa (Golgi cis ). Esto es seguido por la adicin secuencial de una N -acetilglucosamina , la remocin de otras dos manosas y la adicin de dos N acetilglucosaminas ms. En esta etapa las protenas se hacen resistentes a endoglicosidasas especficas (Endo H-resistant) Finalmente se adicionan al oligosacrido tres residuos galactosa y tres cido silico . Las protenas destinadas a lisosomas son reconocidas y modificadas por la adicin al oligosacrido de grupos fosfato en la posicin C6 de residuos manosa. Primero se adiciona N -acetilglucosamina fosfato a residuos manosa en el Golgi cis . La enzima reconoce determinantes estructurales presentes en esas protenas (i.e. hidrolasas lisosomales) no presentes en las protenas secretadas o en las destinadas a membrana. Los grupos N -acetilglucosamina son luego removidos, dejando grupos manosa-6-fosfato (M6P) en el oligosacrido. Esta modificacin impide la remocin de estos residuos durante el procesamiento posterior.

Destinacin de protenas a lisosomas Las protenas con el marcador manosa 6-fosfato (M6P) son reconocidas por protenas receptoras presentes en las membranas de la red trans Golgi y transportadas a lisosomas va endosomas tardos, en vesculas de transporte recubiertas de la protena clatrina. Las protenas receptor M6P se unen a las protenas (hidrolasas) lisosomales en el lado luminal de la membrana y a adaptinas de cubiertas de clatrina en formacin por el lado citoslico. Esto ayuda a almacenar las hidrolasas en vesculas de clatrina que yeman de la red trans Golgi. Protenas del aparato de Golgi Las protenas que funcionan dentro del aparato de Golgi son retenidas como protenas de membrana ms que como protenas solubles en el lumen. Las seales de retencin de varias protenas del Golgi estn localizadas en sus dominios de transmembrana, lo que previene que sean empacadas en vesculas que abandonan la red Golgi

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trans . Sin embargo, no hay una secuencia comn y es posible que la seal sea la estructura secundaria o la terciaria. Varias enzimas localizadas en la membrana del Golgi como galactosiltransferasa y sialiltransferasa, tienen una estructura similar: un solo dominio de transmembrana con un corto N-terminal hacia el citosol y un largo dominio C-terminal, que contiene el sitio cataltico hacia el lumen.

Glicosilacin de unin-O Las protenas tambin pueden ser modificadas por adicin de azcares a las cadenas laterales de residuos serina o treonina dentro de secuencias especficas de AAs . A esto se le llama glicosilacin de unin-O. Generalmente serina y treonina unen directamente N acetilgalactosamina a la que se pueden agregar otros azcares, de uno a la vez, y son catalizada por diferentes glicosiltransferasas. El proceso comienza en el Golgi cis y finaliza en el trans . Los oligosacridos de unin-O son generalmente cortos (1 a 4 residuos de azcares).

Lisosomas y Peroxisomas Qu son los Lisosomas?

Son organelos limitados por una membrana, que contienen un conjunto de enzimas hidrolticas (glucisidasas, lipasas, DNAasas etc). Su funcin es la degradacin de macromolculas para la obtencin de monmeros, la procedencia del material a degradar es fundamentalmente extracelular aunque no exclusivamente (autofagia) Lisosomas Sus caractersticas son: Presentan una gran diversidad de formas y tamaos (0.25 a 0.5 m) Dotado de una membrana en la que se localizan numerosos sistemas de transportes de los monmeros Son considerados como una coleccin de diferentes hidrolasas cidas (nucleasas, proteasas, glicosidasas, lipasas, etc), La membrana del lisosoma normalmente mantiene estas enzimas digestivas fuera del citosol, aunque stas no funcionaran all pues ste tiene un pH de aprox. 7,2.

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Lisosomas

" Se diferencian dos clases:

" a) Lisosomas primarios: estn recin formados y no han encontrado todava sustrato para la digestin. Slo contienen enzimas hidrolticas, son muy pequeos (0,05-0,5 mm de dimetro). y se corresponden a vesculas

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emanadas de la cara trans del complejo de Golgi. Son de contenido denso y homogneo.

" b) Lisosomas secundarios: contienen materiales en digestin en su interior, muestran contenido heterogneo y mayor tamao.

Destinacin de protenas a lisosomas: Las protenas lisosomales se sintetizan en el RER y posteriormente son empaquetadas en el Complejo de Golgi. Las protenas con el marcador manosa 6-fosfato (M6P) son reconocidas por protenas receptoras presentes en las membranas de la red trans Golgi y transportadas a lisosomas va endosomas

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tardos, en vesculas de transporte recubiertas de la protena clatrina. Las protenas receptor M6P se unen a las protenas (hidrolasas) lisosomales en el lado luminal de la membrana y a adaptinas de cubiertas de clatrina en formacin por el lado citoslico. Esto ayuda a almacenar las hidrolasas en vesculas de clatrina que yeman de la red trans Golgi. Los lisosomas estn en equilibrio dinmico con los endosomas tardos a travs de mecanismos que involucran transporte vesicular, y fusin directa. Los endosomas tardos contienen el 20% del pool de hidrolasa total y son el principal sitio de protelisis. En contraste, los lisosomas contienen la mayor parte del pool de hidrolasa lisosomal pero solo el 20% de la protelisis total se realiza en ellos. Esto ha llevado a postular que los lisosomas principalmente seran organelos de almacenamiento de estas hidrolasas

DE DONDE PROVIENEN LOS SUTRATOS QUE DEGRADAN EN LOS LISOSOMAS? FAGOCITOSIS ENDOCITOSIS AUTOFAGIA

Va endoctica, para la internalizacin de lipoprotenas de baja densidad (LDL)

Sistemas de transporte en lisosomas En la membrana de los lisosomas existen protenas de transporte lo que permite que los productos finales de la digestin de las macromolculas tales como amino cidos, azcares, nucletidos, etc., sean transportados al citosol donde pueden ser reutilizados o exportados fuera de la clula. Ej.: El cotransportador LYAAT1/PAT1 que exporta aminocidos neutros e H+ al citosol. Enfermedades lisosomales Exceso de actividad ltica debido al aumento y a la falta de control de la autofagia. Dao y cambios en la permeabilidad de la membrana del lisosoma. Excesiva liberacin de hidrolasas hacia el exterior de la clula. Actividad ltica inadecuada. Enfermedades por actividad ltica inadecuada: SILICOSIS y ASBETOSIS GOTA Enfermedades por actividad ltica inadecuada: Silicosis, Asbestosis Enfermedades por actividad ltica inadecuada: Gota Definicin:

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La gota es un ataque recurrente de inflamacin en las coyunturas ocasionada por un acumulamiento de cristales de cido rico. Si los cristales se acumulan en los riones, pueden producirse piedras. MUCOPOLISACARADOSIS Enfermedad de Tay Sachs: falta hexosaminidasa Sindrome de Hurler (gargolismo): (Falta -fucosidasa, -galactosidasa) Enfermedad de Gaucher: ausencia de glucosidasa Sindrome de Hunter: falta sulfatasa del iduronato Enfermedad de Fabry: galactosidasa Niemann-Pick: falta de Esfingomielinasa. acumulacin anormal de ciertos compuestos complejos que contienen colesterol y esfingomielina SINDROME DE HURLER: Los sntomas son progresivos y abarcan: Crecimiento interrumpido Retardo mental progresivo rasgos faciales gruesos y toscos con presencia de puente nasal bajo corneas opacas sordera enfermedad articular, incluyendo rigidez problemas de valor cardiaco huesos anormales de la columna mano en garra peroxisomas reciben su nombre por contener enzimas oxidantes de numerosos compuestos organicos como alcohol, fenol y otras sustancias toxicas que pueden entrar en la sangre. Son organelos parecidos a los lisosomas pero de menor tamao. Este tipo de oxidacin es muy importante en el hgado donde los peroxisomas detoxifican sustancias potencialmente toxicas.

Funciones del peroxisomas: -Catabolismo de cidos grasos de cadena larga -Metabolismo de radicales libres de oxigeno -Sntesis de lpido de colesterol y ter Formacin de acidos biliares Catabolismo de purinas, prostglandinas, leucotrienos Detoxificacion de alcohol en el hgado Metabolismo de estradiol

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los lisosomas contienen enzimas hidroliticas Los peroxisomas contienen enzimas oxidantes

Los peroxisomas son pequeas vesculas de membranas que contienen enzimas que oxidan diversos sustratos y generan perxido de hidrogeno H2O2 EL H2O2 que es toxico, es eliminado por la enzima catalaza que lo usa para oxidar sustancias tambin toxicas, como el alcohol, neutralizando asi la toxicidad de ambas Alternativamente la catalasa puede tambin transformar el h2o2 en dos moelculas de agua y oxigeno.

Urato de oxidasa, d-aminocido-oxidasa y oxidasade acido a-hidrolixico oxidan los sutratos y reducen el oxigeno a perxido de hidrogeno y la CATALASA lo descompone en agua y oxigeno.

Biognesis de los peroxisomas Los genes PEX codifican para una serie de protenas conocidas como peroxisomas que participan y son dispensables en la biognesis de los perosisomas. Una vez formada la membrana perosisomal, comienza la importacin de protenas de matriz.

Hoy en dia se reconocen 4 etapas independientes para la bignesis de los peroxisomas que consisten en: 1.- reconocimiento de la cargay/o protenas a transportar 2.- anclaje del complejo carga-receptor a la membrana peroximal 3.- translocacin 4.- reciclaje de receptor las protenas de membrana

GLIOXISOMAS

RESUMEN PRUEBA BIOLOGIA

Son un tipo de peroxisomas que se encuentra presente en semillas en germinacin y en los que los lpidos de las semillas son transformados en azcares mediante una serie de reacciones conocidos como ciclo del glioxidato. ENFERMADADES DE PEROXISOMAS: - ADRENOLEUCODISTROFIA : falla en la b- oxidacin de los acidos grasos, almacenamiento anormal de los lpidos en cerebro, medula, glndulas adrenales. - Esta enfermedad se caracteriza por la presencia de una degeneracin progresiva de la cortesa suprarrenal, lo que da lugar a una insuficiencia suprarrenal o enfermedad de Addison, asociada a la desmielinizacin de la sustancia blanca del sistema nervioso central,con perdida de la cubierta de mielina de un tipo de floras nerviosas del cerebro. - SINDROME DE ZELLWEGER - Tambin llamado sndrome cerebrohepatorenal, es un desorden congnito ( enfermedad gentica) poco frecuante que se caracteriza por la baja produccin o ausencia de peroxisomas, especialmente en tejidos encargados de la depuracin o detoxificacin del cuerpo, tales como el hgado y los riones. - Es el mas serio de los casos causados por desordenes en los peroxisomas. - Signos_ presenta hipotona, epilepsia, ausencia de reflejos, retardo psicomotor

Ciclo celular

Sincrona conjuntamente a la vez,

asincronia ; discordancia, mitosis

Existe un inductor de mitosis Heterodimero protena: ciclina + CDK MPF: maduration- promoting factor, es un inductor de mitosis -> formacionde huso mittico

RESUMEN PRUEBA BIOLOGIA

Ciclina D -> G1 Ciclina A Y E -> S Ciclina A Y B -> M

Los vertebrados tienen muchos genes de ciclina y muchos genes de CDK distintos. Sus productos actan en varias combinaciones de ciclinas/CDK en diferentes estadios del ciclo. El diagrama que es especulativo

SPF es el inductor de la fase S del ciclo celular LOS cdks son ciclinas kinasas que participan unindose a las ciclinas. Los cdks deben unirse a las ciclinas de modo de activar su accin enzimtica Activacin via MPF APC ciclosoma, es una protena que gatilla divisin celular REGULAN CICLO CELULAR: Positivamente: protocongenes. Ciclinas. Kinasas dependientes de ciclinas Negativamente Genes supresores genRb , gen p53 -> P15, P16 P18 P19 P21 P27 P57

PROTEOLISIS CICLICA: Las ciclinas son sintetizadas y degradadas en cada ciclo celular Ubiquitina ligasa -> proteosoma Complejo SFC: etapas G1/ s Complejo promotor de anafase APC: etapa M ( segurina- separasa/ APCcdc20)

RESUMEN PRUEBA BIOLOGIA

LOS FACTORES DE CRECIMIENTO DESENCADENAN CASCADAS DE SEALES INTRACELULARES Actuacin de protena retinoblastoma RB la protena rb desfosforilada se una a protenas reguladoras de genes que estimulan la transcripcin de determinados genes(tales como myc) necesarios para la proliferacion celula, y los mantiene inactivos. Cuando esta fosforilada, RB se separa de dichas protenas estimuladoras, permitiendo que activen la proliferacin.

CONTROL DE CALIDAD: Checkpoints Checkpoint G1 -> antes de S (rol de p53). Checkpoint G2 -> antes de M (rol de cdc25, fosfatasa) Activacin de MPF. Checkpoint Metafase -> en fase M, permite que ocurra la citocinesis (cdh1 gatilla destruccin de ciclinas mitticas).

EN LA MITOSIS OCURREN MULTIPLES PROCESOS: Formacin de huso mittico Desorganizacin de la envoltura nuclear Condensacin de la cromatina ESTOS 3 PASOS, PREPARAN A LA CELULA PARA METAFASE

TRANSMISION DEL ADN EN LA DIVISION CELULAR CICLO CELULAR MITOSIS Y MEIOSIS: Control de ciclo celular por el complejo ciclina/cdk MITOSIS Y MEIOSIS: La MITOSIS es la solucin de la divisin celular y la constancia en el numero de cromosomas de las clulas hijas.

RESUMEN PRUEBA BIOLOGIA

La Meiosis resuelve el problema de l presencia de 2 padres( progenitores) en los organismos sexuales y la constancia del nmero de cromosomas entre generaciones

MITOSIS: divisin nulear 4 etapas: profase: cromosomas se condensan y se unen al huso via cinetocoro El nuclolo y la envoltura nuclear se desorganizan Metafase: cromosomas alineados en el plano ecuatorial de la celula Anafase: separacin de cromatidas hermanas y su migracin hacia los polos opuestos Telofase: divisin celular reorganizacin del nucleo y nuclolo

Meiosis

originan conjuntos de cuatro clulas haploides Divisiones Meiticas

ocurrir entrecruzamiento

opuestos

RESUMEN PRUEBA BIOLOGIA

Consecuencias de la Meiosis

organismos que se reproducen sexualmente.

Mitosis Conservativa (2n) -> (2n) Una divisin (2 clulas hijas) No suele haber apareamiento cromosomas homolgos (y no quiasma) Clulas no gamticas Meiosis Reductiva (2n) -> (n) Dos divisiones (4 clulas hijas) Apareamiento cromosomas homolgos (y quiasma -> entrecruzamiento) Clulas gamticas

MUERTE CELULAR Cantidad de clulas de los organismos El nmero de clulas de los organismos esta regulado con precisin. - Proliferacin Muerte celular Muerte celular programada (Apoptosis) - Clulas que ya no son necesarias se autoeliminan activando un programa intracelular de muerte

RESUMEN PRUEBA BIOLOGIA

1. La cantidad de apoptosis que se desarrolla en embriones en desarrollo y en tejidos adultos es sorprendente Mas de la mitad de las neuronas que se crean durante la formacin de la medula espinal mueren. En el humano adulto, cada hora mueren miles de millones de clulas de la medula sea y del intestino. 2. Destruccin de clulas con dao en su integridad genmica 3. Destruccin de clulas infectadas con patgenos 4. Proteccin de clulas vecinas 5. Regulacin del sistema inmune

Caractersticas de la apoptosis Reacciones de destruccin nuclear predominan sobre las citoplasmticas. Formacin de cuerpos apoptticos. Fagocitosis de cuerpos apoptticos por clulas vecinas.

La sealizacin ocurre por medio de mltiples vas. Dos vas principales: mediada por la mitocondria (intrnseca) y mediada por los receptores de muerte (extrnseca).

Caractersticas generales de la Apoptosis Condensacin de la cromatina y encogimiento celular Activacin de receptores de Muerte Dimerizacin de miembros de la familia de Bcl-2 Se hincha la membrana externa de la mitocondria, produciendo la liberacin de citocromo c Activacin de caspasas Activacin de DNAsas Translocacin de Fosfatidilserina Dependencia de ATP Fragmentacin del ADN (Ladder)

Dnde encontramos procesos apoptticos? Desarrollo embrionario Homeostasis Celular Inmunologa Enfermedades Virales Enfermedades neurodegenerativas

APOPTOSIS PROVOCA Provoca: Escultura de distintas estructuras. Eliminacin de estructuras Control de la sobrepoblacin de clulas Control de clulas defectuosas.

RESUMEN PRUEBA BIOLOGIA

APOPTOSIS PARA HOMEOCINESIS Homeostasis o equilibrio de renovacin celular APOPTOSIS PARA REGULAR SISTEMA INMUNE Muerte de linfocitos producidos por proliferacin durante respuesta inmune.

Diferencias entre Apoptosis y Necrosis

Apoptosis Encogimiento de la clula Efecto de burbujas en la membrana

Aparicin de cuerpos apoptticos Requiere ATP Fragmentacin del ADN (Ladder) Puede morir una nica clula No inflamacin

Necrosis La clula se hincha Prdida de la integridad de la membrana No hay

formacin de vesculas No se requiere energa Digestin al azar del ADN Mueren grupos de clulas Procesos inflamatorios presentes

.Los primeros trabajos fueron hechos en un nemtodo: Caenorhabditis elegans. 1989 Gusano de piel lisa, no posee segmentacin. Periodo de vida de 2-3 semanas. Posee 1090 cl. Somticas de las cuales 131 mueren en forma normal, quedando 959 en el estado adulto. Estas clulas somticas son transparentes. IDENTIFICACIN DE GENES: - La muerte de esas 131 clulas, est dirigida por tres genes. ced-3, ced-4 y ced-9 (cell death abnormal) Ced-9 regulador de la apoptosis Ced-4 activadores de apoptosis Ced-3 protena efectora de apoptosis ORGANISMO Protena reguladora Protena activadora Protena efectora C ELEGANS Ced-9 Ced-4 Ced-3 CELULAS MAMIFEROS Familia Blc2(inhiben pero tambin activan Apaf-1 Caspasas

que ocurre? Cadena de activacin de enzimas proteolticas que se encuentran inactivas

RESUMEN PRUEBA BIOLOGIA PROCASPASAS CASPASAS (ACTIVAS) Se activan unindose a protenas adaptadoras (apaf-1) *existen varios tipos de procaspasas, incluyendo las iniciadoras( cascada de activacin)

CASPASAS Las caspasas son cisten-proteasas y clivan sustratos despus de un Asp. Existen muchas y la especificidad esta dada por los 4 residuos anteriores al sitio de corte. Son sintetizadas en forma de procaspasas inactivas, pudindose autoactivar clivndose ellas mismas. Clivan e inactivan las enzimas de los sistemas reparadores del ADN. cysteine-dependent aspartate-specific proteases Proteasas especficas de aspartato dependientes de cistena (1) Caspasas Iniciadoras Caspasa-8, 9, 2, 10 y 12. (2) Caspasas Efectoras Caspasa 3 (una de las mas importantes), 6 y 7. (3) Otras Caspasas no relacionadas a los mecanismos apoptticos. Caspasas Inflamatorias 1, 4, 5 y 11.

Miembros de la familia de Bcl-2 : Los niveles relativos de los miembros anti/pro-apoptticos determinan el destino celular. Los miembros antiapoptticos se localizan en membranas. Los proapoptticos principalmente en citoplasma y se translocan a la mitocondria ante un estmulo de muerte. Regulan la liberacin de protenas desde la mitocondria que inducen la apoptosis.

Proceso Apopttico
Induccin Derivacin de factores de crecimiento Hipoxia Prdida de adhesin Activacin de receptores de muerte Radiacin Induccin qumica Moduladores FADD TRADD FLIP Bcl-2 Citochromo c p53 Mdm2 Efectores CASPASAS Sustratos

RESUMEN PRUEBA BIOLOGIA

Varias protenas celulares ADN MUERTE

Apoptosis inducida por seales intracelulares liberacin del citocromo C.

Rol de : Bcl-2 Bax Apaf-1 Formacin de apoptosomas (ATP) Caspasas Digestin de protenas estructurales y degradacin de DNA, fagocitosis celular.

*LA AUSENCIA DE UN FACTOR TROFICO OCURRE APOPTOSIS

APOPTOSIS PARA CLULAS AMENAZANTES Clulas que lleven el material gentico daado: Rol de p53 Induce transcripcin de genes de protenas Bcl-2 Poseen variantes: Bcl-2 y Bcl-X (inhiben la apoptosis (evita salida del citocromo C)) Bad (activa la apoptosis) Bax y Bak (inducen la liberacin de citocromo C)

IAP
Junto con las Bcl-2, son las principales protenas reguladoras de la apoptosis. Protenas inhibidotas de apoptosis (IAP) Se unen a procaspasas (impiden activacin) Se unen a caspasas (impiden accin)

Seales moleculares que inducen Apoptosis TNF- (tumor necrosis factor-alfa) TNF R Fas-L (Fas ligand) (linfocitos citotxicos)

RESUMEN PRUEBA BIOLOGIA

Linfotoxinas (TNF-

Seales de proliferacin errneas Causan detencin del ciclo celular o la muerte celular Genes inductores cncer u oncogenes (mutaciones inducen cncer) Protenas RAS y MYC, intervienen en la entrada de la clula en el ciclo celular. Hiperactivacin causa - Detencin del ciclo - Apoptosis Seal p19 inhibe la degradacion de p53 Factores de supervivencia La clulas necesitan de seales de proliferacin y crecimiento desde otras clulas. Las clulas que no reciben estas seales entran en apoptosis. Activan la actividad de los IAP Ej: Cordn nervioso Clula diana (libera FS) Enfermedades en que est bloqueada la apoptosis celular produce Bcl-2 propia e imita BclApaf-

-L.

ENFERMEDADES ASOCIADAS A INHIBICION DE APOPTOSIS (aumento de la proliferacin). 1. Cncer Carcinoma (p53 +) tumores hormono-dependientes carcinoma de mama carcinoma de prstata carcinoma de ovario 2. Enfermedades Autoinmunitarias Lupus eritematoso sistmico Glomerulonefritis autoinmunitaria 3. Infecciones Virales virus herpes Poxvirus adenovirus (E1B)

Enfermedades en que est aumentada la apoptosis celular V.I.H. muerte de CD4+ linfocitos Apoptosis por transplanteS Alzheimer producira neurotoxicidad va caspasa-12 Parkinson

ENFERMEDADES ASOCIADAS A AUMENTO DE APOPTOSIS (disminucin de proliferacin = aumento de muerte celular)

RESUMEN PRUEBA BIOLOGIA

1. Sida 2. Enfermedades Neurodegenerativas Enf. de Alzheimer Enf. de Parkinson Esclerosis lateral amiotrfica Retinitis pigmentosa Degeneracin cerebelosa 3. Sndrome Mielosdisplsticos Anemia Aplstica 4. Dao Isquemico Infarto del miocardio 5. Dao Heptico por Alcohol