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BIOTECNOLOGA
Gentica Molecular
Trabajo documental -Mtodos para dar
Ingeniera en
27/Julio/2012
Tabla de contenido
Trabajo documental
27/Julio/2012 UPQROO
OBJETIVO
Estudiar los mtodos para dar mantenimiento y variacin al material gentico.
CAPTULOS
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27/Julio/2012 UPQROO Aunque las clulas eucariontes poseen sistemas de reparacin de los apareamientos incorrectos, carecen de MutH (enzima que produce una incisin o corte en una cadena cerca del sitio del mal apareamiento) y del mecanismo de hemimetilacin para marcar la cadena progenitora. En este caso el sistema de reparacin de los apareamientos incorrectos sabe cual cadena es la que hay que corregir porque se diferencia una cadena por la discontinuidad de la sntesis (cadena), o sea los fragmentos de Okasaki.
La maquinaria de duplicacin consigue un altsimo grado de precisin mediante el mecanismo de la revisin o la lectura de prueba (realizado por el componente de exonucleasa 35 del replisoma), que elimina los nucletidos incorporados de modo incorrecto. La lectura de prueba mejora la fidelidad de la duplicacin del ADN. Sin embargo la exonucleasa revisora no es infalible. Algunos nucletidos incorporados de modo incorrecto evaden la deteccin.
1.1.2.- La reparacin de los apareamientos incorrectos elimina los errores que eluden la lectura de prueba.
Hay un mecanismo para detectar y reparar los apareamientos incorrectos. La responsabilidad final de la fidelidad en la duplicacin del ADN recae en este sistema de reparacin de apareamientos incorrectos. Este sistema tiene dos trabajos. Primero busca los apareamientos incorrectos en todo el genoma. Y dado que estos son temporales (porque se les elimina despus de una segunda ronda de duplicacin, momento en el que se convierten en mutaciones) el sistema de reparacin tiene que encontrarlos y repararlos con rapidez. Segundo, el sistema tiene que corregir los apareamientos equivocados con precisin; o se que tiene que reemplazar el nucletido mal Figura 1.- Metilacin DAM en la horquilla de replicacin. incorporado en la cadena que se sintetiza La duplicacin genera ADN hemimetilado en E. Coli. (neosintetizada) y no en el correcto en la cadena progenitora. Ejemplo de reparacin en E. Coli: En el 1.2.- Lesin del ADN sistema de reparacin de los apareamientos incorrectos de E. Coli, en la duplicacin del 1.2.1.- Lesin por hidrlisis y desaminacin ADN se da la hemimetilacin para que este Las mutaciones no solo se originan por sistema pueda reconocer cual es el nucletido errores de la duplicacin del ADN. Algunas mal apareado. Solo las hebras progenitoras mutaciones son consecuencia de factores sern hemimetiladas antes de que la Dam ambientales, como la radiacin y los metilasa metile la cadena neosintetizada. En mutgenos, que son agentes qumicos que consecuencia, esta cadena estar marcada aumentan la tasa de mutacin. Pero el ADN (carecer de grupos metilo), y por ende puede tambin sufre dao espontanea por la accin ser reconocida para su reparacin. Por del agua. consiguiente, la metilacin es un dispositivo El tipo de dao hidroltico ms frecuente e de memoria que permite que el sistema de importante es la desaminacin de la base reparacin de E. Coli recupere la secuencia citosina (en condiciones normales la citosina correcta de la cadena progenitora si se sufre desaminacin espontnea), con lo que cometi un error durante la duplicacin. genera la base no natural (en el ADN) uracilo. Este ltimo se aparea preferentemente con la
Trabajo documental adenina y as introduce esa base en la cadena opuesta durante la duplicacin, en lugar de la G que hubiese sido dirigida por la C. La adenina y la guanina tambin estn sometidas a la desaminacin espontnea. sta de convierte la adenina en hipoxantina, que establece enlaces de hidrgeno con la citosina en lugar de hacerlo con la timina; la guanina se convierte en xantina, que sigue aparendose con la citosina, aunque solo mediante don enlaces de hidrgeno. El ADN tambin sufre despurinacin por hidrlisis espontnea del enlace N-glucosdico y esto produce un sitio absico (o sea desoxirribosa sin una base) en el ADN. A diferencia de los errores de la duplicacin, todas estas reacciones hidrolticas producen alteraciones del ADN que son antinaturales
27/Julio/2012 UPQROO consecuencias de esto es la fusinfotoqumica de dos pirimidinas que ocupan posiciones contiguas en a cadena de polinucletidos. En el caso de dos timinas, el producto de la fusin se conoce como dmero de timina.
Las mutaciones tambin se producen por accin de compuestos que sustituyen las bases normales (anlogos de bases) o que se deslizan entre las bases (agentes intercalantes) y producen errores en la duplicacin. Los anlogos de bases son de estructura similar a la de las bases normales pero difieren en forma que son perjudiciales para la clula. A causa de las diferencias estructurales entre estos anlogos y las bases normales, los anlogos se aparean de manera imprecisa, lo que conduce a errores frecuentes durante el proceso de duplicacin. 1.2.2.- Dao por alquilacin, oxidacin y Uno de los anlogos de bases ms mutagnico radiacin al ADN es el 5-bromuuracilo, un anlogo de la timina. En la alquilacin de transfieren grupos metilo Los agentes intercalantes son molculas o etilo a sitios reactivos en las bases y a planas que contienen varios anillos fosfatos en las columnas de nucletidos del policclicos que se unen a las bases pricas o ADN. Ejemplos de sustancia qumicas son: las pirimidcas del ADN, tambin planas, de modo nitrosaminas y el mutgeno de laboratorio N- que se unen o apilan unas sobre otras en la metil-N1nitro-Nnitrosoguanidina, que es muy doble hlice. Los agentes intercalantes, como potente. la proflavina, la acridina y el etidio, causan la El oxgeno del tomo del carbono 6 de la eliminacin o la adicin de un par de bases o guanina es uno de los sitios ms vulnerables a incluso de unos cuantos pares de bases. la alquilacin. El producto de esta metilacin Cuando esto sucede en un gen, puede haber (O6-metilguanina) con frecuencia se aparea consecuencias profundas en la traduccin de de modo incorrecto con la timina, siendo su ARNm porque desvan la secuencia consecuencia el cambio de par de bases G:C codificadora de su marco de lectura adecuado. por uno A:T cuando se duplica el ADN daado. La oxidacin de la guanina (que puede ser por 1.3.- Reparacin de las lesiones del agentes oxidantes como: O2-, H2O2 ) por ADN ejemplo, genera oxoG que es muy mutgeno Las mutaciones que se pueden dar por porque puede aparearse con la adenina al situaciones como las que hemos visto igual que con la citosina. Si se aparea con la anteriormente, explica porque las clulas adenina durante la duplicacin del ADN, da desarrollaron mecanismos complejos para origen a una transversin de G:C a T:A que es identificar y reparar el dao antes de que una de las mutaciones ms comunes halladas bloquee la duplicacin o cause una mutacin. de los cnceres humanos. Las clulas no soportaran mucho tiempo sin Otro tipo mas de lesiones de las bases lo estos mecanismos. genera la luz ultravioleta. Las bases absorben en gran medida la radiacin y una de las
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Un ejemplo de reparacin por reversin simple del dao del ADN es la fotorreactivacin. sta revierte de modo directo la formacin de dmeros pirimidnicos que son consecuencia de la irradiacin ultravioleta. La enzima ADN-fotoliasa captura energa de la luz y la utiliza para romper os enlaces covalentes que unen la pirimidinas contiguas, las bases daadas se reparan de manera directa.
Esta reparacin acta sobre una amplia variedad de lesiones, normalmente de gran entidad, tales como la modificacin con grandes grupos o distorsiones de la estructura en doble hlice. La lesin es
Figura 2.- Reparacin por escisin de base. a) el sitio daado (nube) es reconocido por una ADN glucosilasa. b) La base es eliminada mediante el corte del enlace glucosdico. La cadena azcar- fosfato no se rompe. c) La cadena azcar-fosfato es cortada en el lado 5, y tambin hay un corte en el lado 3 para eliminar el residuo de azcar. d) El hueco de un nico nucletido de rellenado por una ADN polimerasa, e) la mella que queda es sellada por una ADN ligasa.
Trabajo documental reparada por un complejo enzimtico que corta a varios nucletidos de distancia a ambos lados de la base o bases daadas, de forma que la lesin se elimina como parte de un oligonucletido. En E. coli , un complejo de escisin de la lesin, que contiene UvrA, UvrB y UvrC, reconoce el dao y practica dos cortes endonucleolticos, uno 3-5 nucletidos ms debajo de la lesin y el otro 8 nucletidos ms arriba de la lesin. La lesin se elimina como parte de un oligonucletido de 12-13 nucletidos de la longitud. El proceso comienza con el reconocimiento de la lesin por UvrA. La apertura de las hebras por UvrB (una helicasa) requiere energa. A continuacin se une UvrC, que cataliza el corte a ambos lados de la lesin. Una ADN polimerasa llena el hueco y una ligasa sella la fisura o mella. El principio de la reparacin por escisin de nucletidos en las clulas eucariontes es muy semejante al del mecanismo de E. Coli pero la maquinaria para detectar, escindir y reparar el dao es ms complicada y comprende 25 protenas.
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La recombinacin del ADN tambin contribuye a reparar errores en su duplicacin. Aunque la cadena de plantilla no pueden obtenerse de la otra molcula hija de la horquilla replicativa por recombinacin. El mecanismo de reparacin de roturas bicatenarias slo puede operar cuando en la clula est el hermano del cromosoma roto. En circunstancias donde el cromosoma se rompe al inicio del ciclo celular, antes de que se genere un hermano por duplicacin del ADN, entra en juego un sistema de seguridad conocido como unin de extremos no homlogos. (NHE) = nonhomologous end joining.
2.1.1.- Recombinacin homloga con el modelo de Holliday El modelo de Holliday ilustra muy bien los procesos de la invasin de las cadenas, la migracin de las ramas y la resolucin de las uniones de Holliday, todas de importancia capital en la recombinacin homloga.
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2.2.2.- Transposicin La transposicin es el movimiento de trozos especficos de ADN en el genoma. La transposicin est catalizada por enzimas especficas al igual que en el caso de la recombinacin especfica de sitio. Algunos trozos de ADN, denominados transposones, tienen dos propiedades clave que les permiten moverse libremente dentro de un cromosoma. Codifican transposasas y tienen secuencias de insercin que son reconocidas por las transposasas. stas reconocen las repeticiones invertidas de los extremos, as como el sitio de insercin, corta ambos y los liga. 2.3.- Recombinacin V(D)J El sistema inmunolgico de los vertebrado tiene la funcin de reconocer y defender de organismos invasores, tales como bacterias, virus, clulas eucariontes patgenas, etc. Las clulas que se encargan del reconocimiento son las clulas B y las clulas T. Las primeras producen anticuerpos que circulan por el torrente sanguneo, mientras que las otras producen protenas receptoras (TCR T cell receptor-) que se unen al antgeno. Para que este mecanismo se lleve de manera exitosa estas protenas deben de reconocer una amplia gama de molculas. El mecanismo principal por el que esto es posible es la recombinacin V(D)J La letra V es de variable, D, de diversidad y J, de unin-. Cabe mencionar que la recombinacin son reacciones de rearreglos del secuencias especficas de ADN. A continuacin se muestra un ejemplo de recombinacin V(D)J.
Figura 4.- Modelo de Holliday a travs de los pasos de la migracin de las ramas. Obsrvese que Ay a, B y b y C y c especifican alelos diferentes y poseen secuencias de ADN algo distintas. Por consiguiente el ADN heterodplex con estos genes exhibir algunos apareamientos incorrectos (d), por ejemplo no se unir la C con A.
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CONCLUSIN
Las
mutaciones
se
dan
de
manera
comn
(como
las
transiciones)
y
continuas
en
el
ADN,
habiendo
diferentes
tipos
de
daos
que
le
pueden
ocurrir
como
las
transversiones,
las
deleciones
y
eliminaciones,
al
igual
que
las
lesiones
por
factores
ambientales
como
la
radiacin,
agentes
mutagnicos,
etc.
Sin
embargo
para
contrarrestarlos
la clula
cuenta
con
mecanismos
que
se
encargan
de
reparar
esos
daos,
con
el
fin
de
mantener
intacta
la
informacin
gentica
tales
como
la
escisin
de
bases
y
nucletidos,
los
cuales
remueven
las
bases
y
nucletidos
respectivamente,
y
los
cambien
por
los
adecuados.
Por
lo
cual
se
puede
puntualizar
que
la
vida
depende
grandemente
del
equilibrio
entre
mutaciones
y
reparaciones,
aunado
a
que
favorece
la
diversidad
tambin.
BIBLIOGRAFA
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Libro
de
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