ISTE TRUJILLO Laboratorio Clnico IV

Micologa, Virologa e Inmunologa

MTODOS DE ESTUDIO DE LOS HONGOS I. INTRODUCCIN: Los hongos constituyen un grupo diverso de organismos unicelulares o pluricelulares que se alimentan mediante la absorcin directa de nutrientes. Los alimentos se disuelven mediante enzimas que secretan los hongos; despus se absorben a travs de la fina pared de la clula y se distribuyen por difusin simple en el protoplasma. Junto con las bacterias, los hongos son los causantes de la putrefaccin y descomposicin de toda la materia orgnica. Hay hongos en cualquier parte en que existan otras formas de vida. Algunos son parsitos de organismos vivos y producen graves enfermedades en plantas y animales. La disciplina cientfica que estudia los hongos se llama Micologa. Los hongos figuraban en las antiguas clasificaciones como una divisin del reino Plantas (Plantae). Se pensaba que eran plantas carentes de tallos y de hojas que, en el trascurso de su transformacin en organismos capaces de absorber su alimento, haban perdido la clorofila, y con ello, su capacidad para realizar la fotosntesis. Sin embargo, en la actualidad los cientficos los consideran un grupo completamente separado, que evolucion a partir de flagelados sin pigmentos. Ambos grupos se incluyen dentro del reino Protistas, o bien se coloca a los hongos como un reino aparte, debido a la complejidad de su organizacin. Hay unas cien mil especies conocidas de hongos. Se cree que los grupos ms complejos derivan de los tipos ms primitivos, los cuales tienen clulas flageladas en alguna etapa de su ciclo vital. Las micosis son enfermedades producidas por el crecimiento de un hongo en el organismo o sobre la superficie corporal. En la mayora de la gente sana las infecciones por hongos son leves, afectan slo a la piel, el cabello, las uas, u otras zonas superficiales, y se resuelven espontneamente. Comprenden la tia y el pie de atleta. Sin embargo, en las personas con un sistema inmunolgico deteriorado, este tipo de infecciones, denominadas dermatofitosis, pueden persistir durante largo tiempo. Los organismos responsables de las dermatofitosis pertenecen al gnero Microsporum, Epidermophyton y Trichophyton.

Los hongos tambin pueden invadir los rganos internos del organismo, en especial los pulmones, donde las infecciones se parecen a la neumona o a la tuberculosis pulmonar. Son tpicas de enfermos cuyo sistema inmune ha quedado deprimido por procesos como el sndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), frmacos antitumorales, o radiacin. Tambin aparecen en pacientes tratados con hormonas esteroideas, como el cortisol, en sujetos con diabetes y en quienes han seguido tratamiento antibitico durante mucho tiempo. Los dos hongos que se suelen aislar en estos casos son Cryptococcus y Aspergillus, los cuales reciben el nombre de patgenos oportunistas. Los hongos que pertenecen al gnero Candida, en especial Candida albicans (el cual produce candidiasis), pueden infectar los rganos internos y las membranas mucosas de la boca, garganta y tracto genital. En las personas con inmunidad deteriorada, este organismo puede originar una infeccin crnica. Hay muchos frmacos para tratar las infecciones por hongos, entre los que se incluyen medicamentos orales e intravenosos, as como muchos agentes de aplicacin tpica (local). Los individuos con una infeccin crnica por Candida, Histoplasma o Cryptococcus pueden necesitar tratamiento a largo plazo con un frmaco oral o intravenoso. Entre los principales mtodos de estudio de los hongos tenemos los mtodos directos como la observacin macroscpica de la muestra y la observacin microscpica que son el examen en fresco (con hidrxido de potasio, lactofenol, tinta china o cinta de celulosa), la coloracin diferencial (Gram, Ziehl Neelsen o Giemsa). Tambin se emplean los cultivos (en medios comunes como el agar Sabouraud o en medios mejorados como agar sangre o BHI), inoculaciones en animales (ratones, cobayos, conejos, ratas) y el estudio anatomopatolgico (con coloraciones para tejidos como hematoxilina eosina, cido para amino saliclico). Entre los mtodos indirectos se emplean las intrademoreacciones, reacciones sexolgicas (aglutinacin, precipitacin, fijacin de complemento) e inmunofluorescencia. Los objetivos de la presente prctica son:

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1. 2. 3. 4. 5. II. A)

Demostrar la existencia de hongos ambientales. Aislar e identificar algunos hongos ambientales. Familiarizar al estudiante con las principales estructuras fngicas. Aislar e identificar algunos hongos causantes de micosis. Adiestrarse en el diagnstico de laboratorio de algunas micosis. MATERIAL Y MTODOS: Materiales: 1. Material Biolgico: Muestras de secreciones, raspados de piel, pelo o cualquier otro fluido biolgico. Muestras de frutas, pan u otro alimento hongueados. 2. Material de Laboratorio: Placas de Petri. Asa de bacteriolgica. Hisopos estriles. Mechero. Alcohol. Agar Sabouraud. Hidrxido de Potasio al 10%. Solucin salina fisiolgica. Azul de metileno al 1%.

Realizar observaciones microscpicas de las colonias para identificar el gnero al que pertenecen. 2. Aislamiento de hongos causantes de micosis: Realizar una observacin microscpica de la muestra. Si es secrecin vaginal u otro fludo biolgico se pueden realizar coloraciones Gram o exmenes en fresco, en el caso de raspados de piel o pelo se observan con KOH al 10% (dejar que acte por 20 o calentarlo a la llama del mechero). Hay que tener presente que las levaduras son Gram positivas y que en los dermatofitos se observan hifas artrosporadas. Si alguna observacin es positiva realizar el aislamiento en agar Sabouraud. Los raspados de pelo son colocados en el agar y se incuban a temperatura ambiente observando el crecimiento a los 5 a 7 das y si es una levadura proceder al aislamiento en siembra como en el caso de bacterias incubando a 37C por 1 a 2 das o a temperatura ambiente por 2 a 3 das. Realizar observaciones macroscpicas y microscpicas de las colonias para identificar el gnero al que pertenecen. III. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS: INGRAHAM, J. y cols. 1998. Introduccin a la Microbiologa. Tomo I. Edit. Revert, S.A. Barcelona. Espaa. Pgs. 63-73. JAWETZ, E. y cols. 1996. Microbiologa Mdica. 15 edicin. Edit. El Ateneo. Buenos Aires. Argentina. Pgs. 63-71. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA.1982. Gua de prcticas. UNT. Trujillo. Per. Pgs.26-29. UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS. FACULTAD DE MEDICINA. 1986. Microbiologa. UNMSM. Lima. Per. Pgs. 8-10. TORTORA, G. y cols. 1993. Introduccin a la Microbioloa. 3 edicin. Edit. Acribia. Zaragoza. Espaa.

B)

Procedimiento: 1. Aislamiento de Hongos ambientales: En placas de agar Sabouraud, exponerlas a diferentes ambientes (bao, jardn, laboratorio, etc). Incubar dichas placas a temperatura ambiente por 5 a 7 das. Observar el crecimiento de las colonias anotando sus caractersticas.