Profesorado de Educacin Secundaria en Biologa Optativa Tcnicas de laboratorio Prof.

Priscilla De Gregorio

Trabajo Prctico N7 OSMSIS EN CLULAS ANIMALES OBJETIVO: Demostrar el fenmeno de osmosis en clulas animales. FUNDAMENTO: Existen varios mtodos para medir la presin osmtica celular; la mayor parte son fsicos (ejemplo: usando membrana de celofn), por lo que es conveniente comparar los anteriores modelos utilizando clulas vivas, como en este caso sern glbulos rojos. Como la membrana eritrocitaria es semipermeable, cuando los eritrocitos se encuentran en un ambiente hipotnico, el agua entra por difusin y sucede hemlisis (rotura del eritrocito). Cuando el eritrocito est en un ambiente hipertnico pierde agua, se encoge y sucede crenacin. En este experimento se observar el comportamiento de los glbulos rojos en soluciones isotnicas, hipotnicas e hipertnicas (Figura 1).

a b c Figura 1. Eritrocitos en: a) Medio hipertnico; b) Medio isotnico y c) Medio hipotnico

GENERALIDADES: Cuando los eritrocitos se incuban en solucin hipotnica de NaCl, los eritrocitos absorben agua en un esfuerzo para conservar o para lograr el equilibrio osmtico, y las clulas se hinchan hasta que se forma un esferocito. La captacin adicional del agua produce una membrana porosa que permite la liberacin de hemoglobina (hemlisis). Las clulas normales comienzan a hemolizar a concentraciones de NaCl cercanas a 0.50% y la hemlisis es completa a una concentracin aproximadamente de 0.30 % de NaCl. En soluciones hipertnicas de NaCl mayores a 1% el eritrocito pierde agua, se encoge y sucede crenacin.

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MATERIAL: Frascos con soluciones de NaCl (0, 0.9 y 1.5 %p/v) Porta y cubreobjetos Microscopio ptico compuesto Gotas de sangre Agua destilada Pipeta Pasteur

MATERIAL BIOLGICO: Sangre con anticoagulante

TECNICA: Ud. recibir tres frascos conteniendo lo siguiente: Frasco 1: Agua destilada (solucin de NaCl 0.0 %p/v) Frasco 2: Solucin de NaCl 0.9 %p/v Frasco 3: Solucin de NaCl 1.5 %p/v Coloque en cuatro portaobjeto con pipeta Pasteur o gotero lo siguiente: Portaobjetos 1: Gota de sangre, coloque el cubreobjeto y observe los eritrocitos microscopio. Portaobjetos 2: Gota de sangre ms gota del frasco 1 (0.0 %), coloque el cubreobjeto, bajo el microscopio y compare con portaobjetos 1. Portaobjetos 3: Gota de sangre ms gota del frasco 2 (0.9 %), coloque el cubreobjeto, bajo el microscopio y compare con portaobjetos 1. Portaobjetos 4: Gota de sangre ms gota del frasco 3 (1.5 %), coloque el cubreobjeto, bajo el microscopio y compare con portaobjetos 1. a) Qu observ en la primera muestra (portaobjetos 1)?

bajo el observe observe observe

b) Qu le pas a las clulas al entrar en contacto con cada una de las soluciones? Por qu?

c) Cules de las soluciones usadas fueron hipotnicas, hipertnicas e isotnicas para los eritrocitos?.

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d) En qu solucin sucedi hemlisis de los eritrocitos y por qu?

e) Por qu ocurri la crenacin?

f) Qu indican los resultados acerca de la concentracin de solutos en el plasma sanguneo?.