ANALISIS DE LAS CELULAS SANGUINEAS DE AVES Y REPTILES POR MICROSCOPIA DE LUZ

Omar Maya Garca1, Marco Antonio Alfonso Mendez1, Rosa A. Prez Gutirrez, Rosa Maria C. Ortiz Najera1 y Claudia Sierra Castillo1,2. Laboratorio de Biologa Celular de la Facultad de Ciencias Biologicas1, Laboratorio de Bioingeniera Acucola del Centro de Investigaciones Biolgicas de la UAEM. Av. Universidad 1001 Col. Chamilpa Cuernavaca Morelos.
Correo electrnico: clan_sierra@yahoo.com Introduccin: La sangre es un tejido conjuntivo cuya matriz es liquida, esta compuesto por eritrocitos, leucocitos y plaquetas. Los eritrocitos representan alrededor del 43 al 45 % del volumen sanguneo, son los transportadores primarios del oxgeno de las clulas y de los tejidos corporales [1]. En el humano los leucocitos son las clulas con ncleo, segn su forma y la presencia o ausencia de grnulos citoplasmticos pueden ser agranulares, que incluyen a los linfocitos y monocitos y los granulares que comprenden a los neutrofilos, eosinofilos y basofilos. Los leucocitos desempean un papel importante en el mecanismo de inmunidad innata y adaptativa en la que participan los componentes celulares y humorales, que se activan ante la presencia de un antgeno en el organismo. Las plaquetas son fragmentos no nucleares del citoplasma, en forma de discos pequeos, de distribucin variable que en respuesta al dao endotelial se agregan y liberan su contenido [2]. La identificacin y conteo de las clulas sanguneas puede llevarse a cabo con diferentes tcnicas de laboratorio, un frotis de sangre perifrica es un mtodo ideal para la identificacin de los diferentes tipos de clulas sanguneas, se tie y se observa en el microscopio de luz. Algunos colorantes tien los componentes de las clulas en respuesta a la reaccin de tincin lo que nos permite realizar los conteos diferenciales para estimar los valores relativos de cada uno de los leucocitos en sangre. Algunos componentes citoplasmticos de los leucocitos se tien con el azul de metileno; las enzimas hidroliticas pueden captar los azures (tintes producidos por la oxidacin del azul de metileno) y muestran un color prpura claro; otros pueden captar la eosina y otros mas pueden captar otros compuestos de los colorantes produciendo un color rosa plido o violeta. La tincin con los colorantes de Wright y Leishman son dos de las tcnicas asas frecuentemente por sus caractersticas de tincin que son similares [3]. Estudios realizados en algunas especies de aves, han revelado diferencias en la morfologa de los eritrocitos en base a caractersticas descritas para mamferos. Poseen glbulos rojos maduros enucleados, permitiendo un espacio adicional para el transporte de hemoglobina, a diferencia de las aves donde este grupo celular es de forma elptica y poseen ncleo. Por otra parte, una caracterstica particular de los leucocitos en aves es la presencia de heterofilos en lugar de neutrofilos, estas clulas son de tamao variable con presencia de corpsculos acidofilos en forma de bastn y poseen actividad igual a la de los neutrofilos que fagocitan y destruyen bacterias [4]. Justificacin: En reptiles los estudios hematolgicos que se han realizado son pocos; sin embargo, poseen similitudes con los grupos celulares presentes en las aves, lo que indica probablemente que los heterofilos se han conservado evolutivamente entre estos organismos. En humanos el conteo diferencial de leucocitos y los cambios morfolgicos de los eritrocitos proporcionan marcadores que favorecen diagnsticos especficos para determinar su estado de salud, aspectos de su metabolismo y fisiologa. Tomando en cuenta la importancia de la determinacin de los componentes celulares de la sangre, en el presente trabajo pretendemos estudiar la aplicacin de estos mtodos en reptiles, que nos permitirn conocer mas acerca de su biologa general, ya que los reptiles son un recurso potencial y econmicamente importante que se debe proteger y utilizar adecuadamente debido a que juegan un papel fundamental en el ecosistema. Objetivo general: Aplicar tcnicas de tincin que permitan la identificacin y comparacin de las diferentes clulas sanguneas en aves: Gallus gallus y de tres especies de reptiles representativos: Boa constrictor, Iguana iguana y Scelopurus horridus.

Metodologa: La obtencin de muestras de sangre perifrica en reptiles se obtiene de la vena caudal y del ave de la vena yugular, se realizan frotis sanguneos de cada una de las muestras. Posteriormente se tien con la tcnica de Wright y Leishman y se realiza el conteo diferencial de leucocitos. Se toma como referencia los estudios realizados en el humano. Resultados: Los eritrocitos de los reptiles a diferencia de los mamferos que no poseen ncleo y son en general esfricos, presentan forma ovalada con ncleos pleomrficos similares a los de las aves. Los heterfilos son numerosos y con grnulos de forma alargada. El resto de los leucocitos observados conservan sus caractersticas de tincin similares a las de los mamferos, los trombocitos son pocos y estn distribuidos en pequeos grupos. El conteo diferencial de leucocitos revelo variaciones en los valores. La identificacin de los grupos celulares de las especies muestreadas se detallan en la figura 1, las cuales fueron teidas con los colorantes de Wright y Leishman. Conclusiones: El patrn de tincin se conserva en mamferos, aves y reptiles; sin embargo, existen diferencias significativas entre las tres clases de vertebrados. Los eritrocitos en mamferos son de forma circular, bicncava y con ausencia de ncleo, en las aves y reptiles los eritrocitos son alargados y nucleados. Al igual que en las aves los reptiles presentan heterofilos, a diferencia de los mamferos donde estos son sustituidos por neutrofilos. Los resultados obtenidos aportan informacin importante de las caractersticas de cada grupo celular de los reptiles que servirn como base para estudios posteriores.

Fig. 1. Grupos celulares en la sangre de: a) pollo, Gallus gallus, b) Iguana verde, Iguana iguana, c) lagartija Sceloporus horridus y d) serpiente Boa constrictor. Leucocitos: (H) heterfilo, (E) eosinfilo, (B) basfilo, (M) monocito, (L) linfocito y (T) trombocito. Los eritrocitos en todos los casos son ovalados, sus ncleos son cntricos, con marcado pleomorfismo nuclear. Se observaron basfilos degranulando en las muestras sanguneas de la boa y la lagartija.
Referencias: [1] Hall, G. Tratado de Fisiologa Mdica, McGraw-Hill Interamericana.2000. [2] Estarda, F. E. y Uribe, A. M. Atlas de Histologa de los Vertebrados. Editorial UNAM, (2002) 48. [3] Aguilar, M. M. y Bello B. C. Manual General de Tcnicas Histolgicas e Histoqumicas. Editorial las Prensas de la Ciencia, (1996) 130. [4] Ma. De la Luz y Charles Noriega, Manual de Hematologa Aviar. Fac de Medicina Veterinaria y Zootecnia. UNAM, (2004) 5, 35-36. Dra. Claudia Sierra Castillo, Profesor Investigador Asociado C Laboratorio de Biologa Celular de la Facultad de Ciencias Biolgicas; LAB. De Bioingeniera Acucola, Centro de investigaciones Biolgicas de la UAEM. Fax y Tel. 017773297047 Ext. 3532 Av. Universidad 1001 Col. Chamilpa clan_sierra@yahoo.com Omar Maya Garca. Estudiante de la Facultad de Ciencias Biolgicas de la UAEM. Fax y Tel 017773297047 Ext. 3532 Av. Universidad 1001 Col. Chamilpa

Marco Antonio Alfonso Mndez. Laboratorio de Biologa Celular de la Facultad de Ciencias Biolgicas; de la UAEM. Fax y Tel. 017773297047 Ext. 3532 Av. Universidad 1001 Col. Chamilpa malfme@gmail.com Rosa Amrica Prez Gutirrez Laboratorio de Biologa Celular de la Facultad de Ciencias Biolgicas; de la UAEM. Fax y Tel. 017773297047 Ext. 3532 Av. Universidad 1001 Col. Chamilpa Rosa Maria Ortiz Najera Tcnico Acadmico del Laboratorio de Biologa Celular de la Facultad de Ciencias Biolgicas; de la UAEM. Fax y Tel. 017773297047 Ext. 3532 Av. Universidad 1001 Col. Chamilpa.