Notas Tcnicas de Prevencin

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Riesgo biolgico en la industria biotecnolgica

Biological risk in the biotechnology industry Le risque biologique dans lindustrie de la biotechnologie

Redactora: Ana Hernndez Calleja

Licenciada en Ciencias Biolgicas CENTRO NACIONAL DE CONDICIONES DE TRABAJO

Por industria biotecnolgica se entiende un conjunto de procesos cuya esencia es el uso deliberado de microorganismos para la obtencin de productos y servicios de inters para el hombre. Algunos de los microorganismos utilizados pueden ser perjudiciales para la salud. En esta nota tcnica de prevencin se pretende revisar los aspectos generales de los procesos ms comunes, as como las principales exigencias de bioseguridad relativas a los equipos y a los locales de trabajo.
Observaciones

Vigencia VLIDA

Actualizada

1. INTRODUCCIN
La microbiologa industrial trata del uso de microorganismos y de la aplicacin de las tcnicas biotecnolgicas en procesos industriales para la obtencin de productos a travs de la fermentacin y de servicios bene ciosos para la humanidad. Las tcnicas biotecnolgicas consisten en la manipulacin de los organismos, fundamentalmente a escala gentica, para usos espec cos. En esos conceptos est comprendida la biotecnologa tradicional y la denominada biotecnologa moderna en la que la tecnologa del ADN recombinante (tambin llamada ingeniera gentica) se ha convertido en parte central de la misma. La biotecnologa tradicional hace referencia a las formas en las que, desde la antigedad, se han venido usando los seres vivos. Se podra decir que la biotecnologa se inicia cuando los humanos, cazadores y recolectores, se convierten en granjeros. Como tales, recolectan plantas salvajes, las cultivan y seleccionan las variedades con un mejor rendimiento para utilizarlas en la siguiente estacin. Lo mismo ocurre con la ganadera. Ms adelante y sin conocer su fundamento se descubre como usar determinados procesos biolgicos, que ocurren en las clulas habitualmente. Se descubrieron formas de maduracin de diversos alimentos que provocaban cambios de sabor, se trataba del proceso que posteriormente se denomin fermentacin, que permita la transformacin de la leche en queso o el jugo de las uvas en vino. Fueron los estudios de Pasteur (1857) sobre la accin de los microorganismos en el proceso de fermentacin alcohlica y las tcnicas de cultivo puro desarrolladas por Hansen (1883), los avances que dieron lugar a la microbiologa industrial. Durante la primera mitad del siglo XX se continuaron produciendo avances en este campo, pero no fue hasta el descubrimiento por parte de Watson y Crick (1953) de la estructura del cido desoxirribonucleico (ADN) y la forma en la que se transmite la informacin gentica a travs de las generaciones, que se inici la biotecnologa moderna con el desarrollo de las tcnicas del ADN recombinante. Esta tecnologa permite la transferencia de genes de una especie a otra y se basa en la insercin de una secuencia espec ca de

genes de un donante en un husped adecuado, a travs de un vector de expresin. De la progresin en el desarrollo de la biotecnologa se puede inferir su utilidad en diversos campos. El principal es el propio avance de la Biologa. En el terreno industrial es necesario destacar sus aplicaciones teraputicas (medicamentos, vacunas, hormonas, terapias gnicas); su aplicacin en pruebas diagnsticas; las mejoras en el campo de la alimentacin (obtencin de alimentos, aditivos alimentarios, alimentos con per les nutricionales determinados, etc.); produccin de enzimas y otras protenas, bioinsecticidas, biopolmeros, etc.; su aprovechamiento en la obtencin de energa (biomasa) o su utilidad en la mejora del medio ambiente a travs de la biorremediacin entre otros. En la tabla 1 se recogen algunos ejemplos de microorganismos y sus usos en la industria.

2. FERMENTACIN
En el proceso de obtencin del producto deseado, los sistemas biolgicos actan como catalizadores de la reaccin propiciando que sta se lleve a cabo en condiciones ptimas y con el mayor rendimiento. Los sistemas biolgicos usados son: microorganismos, cultivos celulares, enzimas o esporas. De todos ellos destacan los microorganismos debido a dos razones fundamentales: su elevada diversidad y plasticidad metablica y la sencillez y economa de su cultivo. La operacin tiene dos fases: la de preparacin, incluyendo la fermentacin, y la de obtencin del producto. En la gura 1 se muestra un esquema de un proceso de fermentacin y la curva de desarrollo microbiano en condiciones de cultivo discontinuo. La fase de preparacin se puede dividir en tres etapas principales: la produccin del inculo, la preparacin del medio de cultivo y la propia fermentacin. La fase de obtencin del producto, con las variaciones propias del tipo de producto elaborado, incluye todos los procesos que siguen a la fermentacin. A continuacin se describen brevemente las diferentes etapas.

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Microorganismos Saccharomyces Lactobacillus y bacterias lcticas Acetobacter Aspergillus Corynebacterium Pseudomonas Alcaligenes Streptomyces Penicillium Bacillus Salmonella Escherichia Thiobacillus Bacterias aerobias Bacterias anaerobias

Aplicacin Bebidas alcohlicas (vino, cerveza), biomasa (levadura pani cacin). cido lctico, queso, yogur, embutidos, col fermentada, etc. cido actico. cido ctrico, enzima amilasa, biosensores (anlisis de glucosa). Aminocidos (L-Glutmico, L-Lisina). Vitamina B12, biodegradacin de hidrocarburos. Bioplsticos. Tetraciclinas, transformacin de esteroides. Antibiticos. Antibiticos, bioinsecticidas, enzimas (proteasas). Test mutagnicos (test de Ames). Hormonas, interfern humano. Biolixiviacin. Depuracin de aguas residuales. Biodigestin anaerobia (metano).

Preparacin del inculo Los aspectos clave de esta etapa consisten en: La localizacin de un microorganismo de inters industrial. Normalmente ese microorganismo provendr de colecciones o bien de las cepas salvajes existentes en la naturaleza. Pero adems, el microorganismo debe cumplir con una serie de condiciones que idealmente seran las siguientes: Ser genticamente estable. Tener una ruta biosinttica bien caracterizada y una e ciente produccin del producto de inters. Sin otros productos que di culten los procesos de recuperacin. Presentar escasa o nula necesidad de vitaminas u otros factores de crecimiento. Ser capaz de utilizar una amplia gama de sustratos (fuentes de carbono) asequibles y econmicos. Tener requisitos de crecimiento que di culten posibles contaminaciones (por ejemplo: pH determinados, temperaturas elevadas, etc.). Ser susceptible de manipulacin gentica. Ser seguro, no patgeno y no producir agentes txicos (excepto cuando son el producto buscado). Elaborar productos fcilmente recuperables. La mejora de los microorganismos para incrementar la productividad y el rendimiento. Este aspecto se puede lograr mejorando las condiciones de cultivo (medio, parmetros, etc.) o modi cando su genoma. Las tcnicas para lograr este punto son las siguientes: mutagnesis, fusin de protoplastos o ADN recombinante. Las dos primeras tienen un componente aleatorio importante y requieren de procesos de seleccin posteriores. En cambio, con la tcnica del ADN recombinante, se elabora el microorganismo espec co que producir el producto deseado.

Tabla 1. Microorganismos y sus aplicaciones industriales ms frecuentes

Sustrato Preparacin medio de cultivo

Microorganismo

Desarrollo del inculo Fermentador intermedio Fermentador de produccin

Estacionaria Exponencial Muerte

Latencia Log n clulas

TROFOFASE Tiempo

IDIOFASE

Tratamiento de efluentes

Purificacin

Producto

Figura 1. Esquema del proceso de fermentacin y crecimiento microbiano

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El mantenimiento de la pureza de la cepa que implica toda una serie de procesos de conservacin de las mismas. Las ms utilizadas son: subcultivos sucesivos, con el inconveniente de su posible contaminacin, cambio por mutacin o muerte del cultivo; conservacin de esporas, nicamente vlido para los microorganismos que las producen; la congelacin y la lio lizacin siendo stas las que mejores resultados ofrecen. La comprobacin de que sus capacidades se mantienen en las condiciones que regirn el proceso industrial. La facilidad de recuperacin del producto nal. Preparacin del medio de cultivo Los aspectos principales en este apartado son: la seleccin de los sustratos (fuentes de carbono y energa) y de otros nutrientes esenciales, as como la optimizacin de las condiciones del medio de cultivo para conseguir el mximo rendimiento y produccin. Los sustratos ms comnmente utilizados en las fermentaciones son: melazas; extracto de malta; almidn y dextrinas; lquidos sulfticos de las papeleras; celulosa, aceites vegetales, etanol, alcanos (C12 - C18); extracto de levaduras, peptonas o lquido de maceracin del maz como fuente de nitrgeno y de aminocidos. Fermentacin Es el proceso en que los microorganismos son cultivados en condiciones rigurosamente controladas que han sido desarrolladas para optimizar el crecimiento del microorganismo (biomasa) o el producto deseado. El microorganismo aumenta su concentracin mientras que el medio se va modi cando por la formacin de nuevos productos. El comportamiento de un microorganismo es sensible a las condiciones de operacin del proceso como por ejemplo: la temperatura, la aireacin, la agitacin, tipo de alimentacin del proceso, etc., que pueden condicionar la produccin de algn metabolito. El fermentador, las conducciones, los elementos de sellado y los equipos asociados deben ser construidos con materiales, usualmente acero inoxidable, que permitan sucesivas esterilizaciones, que no reaccione de forma adversa con el microorganismo o con el producto y que aseguren la estanqueidad del proceso con el objeto de evitar contaminaciones tanto hacia el interior del fermentador como hacia el ambiente de trabajo. En la gura 2 se muestra un esquema de un fermentador aireado con agitacin y los elementos de control del proceso. Los principales elementos asociados al fermentador son: el aporte de aire (estril) cuando as se requiera, el mecanismo de agitacin que homogenice el medio y las sustancias que se aporten, las sondas de control de los diferentes parmetros (temperatura, pH, oxgeno disuelto, etc.), los mecanismos o productos antiespumantes, etc. Tipos de proceso Se pueden distinguir tres tipos de procesos en funcin de la cintica del mismo y de la incorporacin del medio de cultivo: discontinuos, discontinuos con alimentacin y continuo. La eleccin del proceso depende del sistema biolgico escogido y del producto que se pretenda obtener, segn sea ste un metabolito primario o secundario o la formacin de biomasa. En los cultivos discontinuos los nutrientes estn presentes desde el inicio y a lo largo del proceso slo se

Gases Motor Cultivo o aporte de nutrientes Toma de muestras Vlvula Sondas pH O2 disuelto

Agua de refrigeracin Agitadores

Sensor de temperatura Biosensor Agua de refrigeracin Vlvula Aire Vlvula Filtro del aire

Lnea de producto

Figura 2. Esquema de un fermentador

incorporan los elementos destinados al control y mantenimiento de las condiciones preestablecidas del proceso (cidos o bases para el mantenimiento del pH, aire, etc.). El modelo de crecimiento discontinuo permite explicar el desarrollo microbiano y es uno de los tipos ms utilizado en la industria. En la gura 3 se muestra la curva que describe las diferentes fases de crecimiento, tambin recogida en la gura 1 a menor tamao. Dependiendo del origen, edad, concentracin o viabilidad del inculo, se puede producir una fase de latencia en la que no hay crecimiento, pero s actividad metablica de adaptacin a los nutrientes disponibles. Una vez se ha producido la adaptacin, la divisin celular se acelera aumentando su frecuencia hasta su valor mximo dando comienzo la fase exponencial. Durante esta fase o trofofase, se produce el crecimiento celular y se producen los metabolitos primarios. A medida que disminuyen los nutrientes se produce una desaceleracin del crecimiento. Cuando todo el nutriente crtico se ha metabolizado el cultivo entra en la fase estacionaria

Estacionaria Exponencial Muerte

Latencia Log n clulas

TROFOFASE Tiempo

IDIOFASE

Figura 3.

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(la tasa de divisin celular es igual a la tasa de muerte celular). En esta fase, o idiofase, los microorganismos siguen activos metabolizando los compuestos almacenados intracelularmente y, en algunos casos, produciendo metabolitos secundarios. Tambin durante esta fase se producen las esporas. A continuacin se inicia la fase de muerte en la que se produce de forma exponencial la muerte celular y, en ocasiones, la lisis o rotura celular. En los cultivos discontinuos con alimentacin, los nutrientes crticos se van incorporando a lo largo de todo el proceso en dosis pequeas. Este es el tipo de cultivo que se utiliza para la sntesis de metabolitos secundarios. Los cultivos continuos se utilizan cuando el producto de inters se produce en la fase exponencial. El mantenimiento de esta fase se consigue equilibrando la entrada de nutriente con la extraccin de cultivo. Obtencin del producto Finalmente, tras la fermentacin se ha de recuperar el producto. Las tcnicas disponibles son mltiples, pero en su eleccin hay que tener en cuenta diversos factores: si presenta actividad biolgica o es un producto inerte, dnde se ubica (dentro o fuera de la clula), sus caractersticas sicoqumicas, su concentracin, el grado de pureza necesario, etc. Entre las tcnicas de recuperacin ms frecuentemente utilizadas se pueden destacar las siguientes: sedimentacin, centrifugacin, oculacin, ltracin, cromatografa (de adsorcin, de intercambio inico, de exclusin molecular, de a nidad), electroforesis, dilisis, osmosis inversa, cristalizacin, lio lizacin, lisis fsica, qumica o enzimtica, etc.

3. RIESGO BIOLGICO
Buena parte de los microorganismos utilizados en los procesos biotecnolgicos no suponen ningn peligro para las personas, de hecho, uno de los requisitos ideales del microorganismo es que ste sea seguro, no patgeno y sin efectos txicos. Sin embargo existen determinados procesos en los que necesariamente intervienen microorganismos peligrosos, por ejemplo, la fabricacin de vacunas o la obtencin de determinados productos con efectos txicos. La propia de nicin de los procesos industriales biotecnolgicos revela uno de los principales factores de riesgo existente: la utilizacin de microorganismos en la produccin de productos o servicios. Ningn ejemplo mejor de lo que signi ca actividad con intencin deliberada de utilizar agentes biolgicos, en la que es obligada la

presencia del agente biolgico, y que de ne uno de los mbitos de aplicacin del Real Decreto 664/1997, sobre la proteccin de los trabajadores contra los riesgos relacionados con la exposicin a agentes biolgicos durante el trabajo. Sin embargo, la mera utilizacin de un agente biolgico no signi ca que exista un riesgo para los trabajadores que lo manejan, ser condicin indispensable que, adems, la exposicin al agente tenga efectos adversos para la salud. El artculo 2 del Real Decreto contiene la de nicin de lo que se entiende legalmente como agente biolgico y los principales efectos asociados a la exposicin a los mismos. Son agentes biolgicos: microorganismos, con inclusin de los genticamente modi cados, cultivos celulares y endoparsitos humanos, susceptibles de originar cualquier tipo de infeccin, alergia o toxicidad. En la de nicin quedan incluidos: los virus, las bacterias, los hongos (naturales y los modi cados genticamente), los cultivos celulares (fundamentalmente por su posible contaminacin por virus) y los organismos que colonizan el interior del cuerpo humano (protozoos y gusanos parsitos), que causen cualquiera de los efectos mencionados. Se excluyen de la de nicin legal: los organismos que parasitan el exterior del cuerpo humano (caros, piojos, etc.), las toxinas y venenos producidos por seres vivos (artrpodos, plantas, animales) y las sustancias derivadas de los agentes biolgicos con efectos txicos o alrgicos cuando stas se manejen de forma aislada, es decir, sin la presencia del agente productor. Por ejemplo, los enzimas puri cados utilizados en la fabricacin de detergentes no tendran consideracin de agente biolgico, sin embargo, esos mismos enzimas durante su produccin por un microorganismo s seran considerados agentes biolgicos. En el artculo 3 del Real Decreto Clasi cacin de los agentes biolgicos, se proporcionan los criterios por los que los agentes biolgicos se clasi can en cuatro grupos atendiendo al riesgo de infeccin que suponen y que se resumen en la tabla 2. El Anexo II del Real Decreto contiene la lista de los agentes biolgicos clasi cados por el momento en los distintos grupos y, la informacin sobre sus efectos alrgicos (A) o txicos (T). En el caso de los organismos modi cados genticamente (OMG), a la hora de analizar su potencial peligrosidad, se ha de tener en cuenta, adems de la peligrosidad del organismo receptor, otros aspectos como son: el organismo donante, el vector utilizado, el inserto y el OMG resultante. La peligrosidad intrnseca del organismo receptor vendr re ejada por el grupo en el que est clasi cado. La del inserto tiene que ver con la actividad biolgica potencialmente peligrosa de los productos que

Agente biolgico del grupo de riesgo 1 2 3 4

Riesgo infeccioso Poco probable que cause enfermedad Pueden causar una enfermedad y constituir un peligro para los trabajadores Puede causar una enfermedad grave y presenta un serio peligro para los trabajadores Causan una enfermedad grave y suponen un serio peligro para los trabajadores

Riesgo de propagacin a la colectividad No Poco Probable Probable Elevado

Pro laxis o tratamiento e caz Innecesario Disponible Disponible No conocido

Tabla 2. Grupos de riesgo de los agentes biolgicos

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codi can (toxinas, oncogenes, etc.). La del OMG deber valorarse atendiendo a su viabilidad (capacidad de desarrollo y diseminacin) y la probabilidad de que ocurran sucesos infrecuentes (mutaciones, reversiones, etc.). Sin ser de aplicacin directa, la clasi cacin de agentes biolgicos del Real Decreto 664/1997 puede servir de orientacin a la hora de estimar la peligrosidad del OMG y de las actividades donde se utilicen.

4. EVALUACIN DE RIESGOS
El procedimiento de evaluacin de riesgos por exposicin a agentes biolgicos queda recogido en el artculo 4 del Real Decreto 664/1997 y en el artculo 12 y el anexo I del Real Decreto 178/2004, por el que se aprueba el Reglamento general para el desarrollo y ejecucin de la Ley 9/2003, por la que se establece el rgimen jurdico de la utilizacin con nada, liberacin voluntaria y comercializacin de organismos modi cados genticamente. El primero se aplica a los agentes biolgicos naturales mientras que el segundo es de aplicacin a los OMG. Los principios de evaluacin de riesgos no di eren, en cualquier caso, de los establecidos en la normativa general de Prevencin: determinar la naturaleza, el grado y la duracin de la exposicin. Es decir, estimar el nivel de riesgo en trminos de probabilidad de materializacin de daos y la gravedad de sus consecuencias, y eliminar o minimizar el riesgo mediante la aplicacin de las medidas de control pertinentes. La evaluacin de riesgos debe hacerse teniendo en cuenta toda la informacin disponible y en particular: La naturaleza de los agentes biolgicos y el grupo en el que estn clasi cados. La informacin sobre las enfermedades susceptibles de ser contradas por los trabajadores por su actividad profesional. Los efectos potenciales, tanto alrgicos como txicos, que puedan derivarse de la actividad laboral de los trabajadores. Las recomendaciones de las autoridades sanitarias sobre la conveniencia de controlar el agente biolgico con el objeto de proteger la salud de los trabajadores que estn o puedan estar expuestos a dicho agente por razn de su trabajo. El riesgo adicional para aquellos trabajadores especialmente sensibles en funcin de sus caractersticas o estado biolgico conocido (patologas previas, medicacin, trastornos inmunitarios, embarazo o lactancia. Cuando se trata de OMG, adems, se deben considerar los efectos deletreos debidos a su establecimiento o a la diseminacin en el medio ambiente y los efectos deletreos debidos a la transferencia natural de material gentico insertado a otros organismos, aunque estos ltimos no son considerados en esta nota tcnica de prevencin.

5. MEDIDAS PREVENTIVAS Y DE CONTENCIN

El resultado de la evaluacin de riesgos ha de permitir determinar las actuaciones preventivas y la extensin de las mismas, en funcin del tipo de actividad desarrollada. Los procesos industriales biotecnolgicos, como se

ha indicado anteriormente, son actividades con intencin deliberada de manipular agentes biolgicos, por lo que, adems de las medidas preventivas y de control establecidas en el articulado del Real Decreto 664/1997, se deben aplicar las medidas especiales establecidas en el artculo 15 y en los anexos IV y V del mismo. En concreto para procedimientos industriales, el punto 2 del citado artculo requiere el establecimiento de un nivel de contencin, as como de las medidas de contencin que guran en el anexo V, de forma que las actividades que supongan manipulacin del agente biolgico se ejecuten nicamente en zonas de trabajo que correspondan por lo menos a un nivel de contencin 2 para un agente biolgico del grupo 2, a un nivel de contencin 3 para un agente biolgico del grupo 3 y a un nivel 4 para un agente biolgico del grupo 4. Cuando no haya sido posible proceder a una evaluacin concluyente de un agente biolgico, pero de cuya utilizacin prevista parezca que puede derivarse un riesgo grave para la salud de los trabajadores, nicamente podrn realizarse en locales de trabajo cuyo nivel de contencin corresponda, al menos, al nivel 3. En el caso de los OMG, en el artculo 12 del Real Decreto 178/2004, las actividades de utilizacin con nada de OMG se clasi can, en funcin de la evaluacin previa de los riesgos para la salud humana y el medio ambiente, en cuatro tipos: Tipo 1. Actividades con riesgo nulo o insigni cante: aquellas en las que el grado 1 de con namiento es su ciente para proteger la salud humana y el medio ambiente. Tipo 2. Actividades de bajo riesgo: las que requieren el grado 2 de con namiento. Tipo 3. Actividades de riesgo moderado: las que requieren el grado 3 de con namiento. Tipo 4. Actividades de alto riesgo: las que requieren el grado 4 de con namiento. Un caso particular lo constituyen aquellos procesos industriales realizados a cielo abierto como son los denominados de biorremediacin a los cuales no es posible aplicar los principios de contencin/con namiento, pero s todas aquellas medidas preventivas oportunas que se deriven de la evaluacin de riesgos para el control del riesgo. Las tablas 3 y 4 contienen las medidas y la exigencia en su cumplimiento para los procedimientos industriales biotecnolgicos, tanto los contemplados en el anexo V (RD 664/1997) como en el anexo II (RD 178/2004). En ambos casos, las medidas son equivalentes, aunque su nmero total, su formulacin y la exigencia en su cumplimiento puedan diferir ligeramente, en cualquier caso, es conveniente recordar que contienen requisitos mnimos. La tabla 4 incorpora el grado de con namiento 1 establecido para el trabajo con OMG clasi cado como actividad con riesgo nulo o insigni cante o Tipo I. Su equivalencia en el anexo V quedara re ejada en la nota introductoria que dice: Cuando se trabaje con agentes biolgicos del grupo 1, comprendidas las vacunas de grmenes vivos atenuados, se observarn los principios de correcta seguridad e higiene profesional. En cada tabla se indica la correspondencia entre las medidas de contencin y las de con namiento. Asimismo se sealan (en sombreado) las discrepancias en cuanto a la exigencia en el cumplimiento de la medida que existen entre ambas.

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B. Niveles de contencin A. Medidas de contencin 2 1. Los microorganismos viables debern ser manipulados en un sistema que separe fsicamente el proceso del medio ambiente. (Medida 1, tabla 4) 2. Debern tratarse los gases de escape del sistema cerrado para: (Medida 2, tabla 4) 3. La toma de muestras, la adicin de materiales a un sistema cerrado y la transferencia de organismos viables a otro sistema cerrado debern realizarse de un modo que permita: (Medida 3, tabla 4) 4. Los uidos de grandes cultivos no debern retirarse del sistema cerrado a menos que los microorganismos viables hayan sido: (Medida 4, tabla 4) 5. Los precintos debern disearse con el n de: (Medida 5, tabla 4) 6. Los sistemas cerrados debern ubicarse en una zona controlada: (Medida 13, tabla 4) a) Debern colocarse seales de peligro biolgico. (Medida 15, tabla 4) b) Slo deber permitirse el acceso al personal designado. (Medida 14, tabla 4) c) El personal deber vestir indumentaria de proteccin. (Medida 18, tabla 4) d) Deber dotarse al personal de instalaciones de descontaminacin y lavado. e) Los trabajadores debern ducharse antes de abandonar la zona controlada. (Medida 17, tabla 4) f) Los e uentes de fregaderos y duchas debern recogerse e inactivarse antes de su liberacin. (Medida 22, tabla 4) g) La zona controlada deber ventilarse adecuadamente para reducir al mnimo la contaminacin atmosfrica. (Medida 10, tabla 4) h) En la zona controlada deber mantenerse una presin del aire negativa respecto a la atmsfera. (Medida 11, tabla 4) i) Se deber tratar con ltros HEPA el aire de entrada y salida de la zona controlada. (Medida 12, tabla 4) j) Deber disearse la zona controlada para impedir la fuga del contenido del sistema cerrado. (Medida 6, tabla 4) k) Se deber poder precintar la zona controlada para su fumigacin. (Medida 7, tabla 4) S 3 S 4 S

Minimizar la liberacin

Impedir la liberacin

Impedir la liberacin

Minimizar la liberacin

Impedir la liberacin

Impedir la liberacin

Inactivados mediante medios de e cacia probada

Inactivados mediante medios fsicos o qumicos de e cacia probada Impedir la liberacin

Inactivados mediante medios fsicos o qumicos de e cacia probada Impedir la liberacin S, expresamente construida S S, mediante esclusa de aire. (Medida 8, tabla 4) Cambiarse completamente S

Minimizar la liberacin

Facultativo

Facultativo

Facultativo

Facultativo

S, ropa de trabajo

No

Facultativo

No

Facultativo

Facultativo

Facultativo

No No

Facultativo Facultativo

S S

No

Facultativo

No

Facultativo Inactivados mediante medios fsicos o qumicos de e cacia probada

S Inactivados mediante medios fsicos o qumicos de e cacia probada

l) Tratamiento de e uentes antes de su vertido nal. (Medida 23, tabla 4)

Inactivados mediante medios de e cacia probada

Tabla 3. Anexo V del Real Decreto 664/1997, Indicaciones relativas a las medidas de contencin y a los niveles de contencin para procesos industriales

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Especi caciones Disposiciones generales 1. Los organismos viables deben mantenerse en un sistema que separe el proceso del entorno (sistema cerrado). (Medida 1, tabla 3) 2. Control de los gases de escape del sistema cerrado. (Medida 2, tabla 3) 3. Control de aerosoles durante la toma de muestras, la introduccin del material en un sistema cerrado o la transferencia de material a otro sistema cerrado. (Medida 3, tabla 3) 4. Inactivacin del lquido de cultivo en masa antes de extraerlo del sistema cerrado. (Medida 4, tabla 3) 5. Sistemas de cierre diseados para minimizar o evitar la liberacin. (Medida 5, tabla 3) 6. Zona controlada con capacidad para contener el vertido de todo el contenido del sistema cerrado. (Medida 6 j, tabla 3) 7. Zona controlada hermtica para fumigacin. (Medida 6 k, tabla 3) Equipo 8. Entrada a travs de esclusa. 9. Super cies resistentes a cidos, lcalis, disolventes, desinfectantes y agentes de descontaminacin y de fcil limpieza. 10. Medidas espec cas para ventilar adecuadamente la zona controlada y de ese modo minimizar la contaminacin atmosfrica. (Medida 6 g, tabla 3) 11. Zona controlada con presin negativa respecto a la presin circundante. (Medida 6 h, tabla 3) 12. Tratamiento del aire de salida y entrada de la zona, ltrado con ltros HEPA. (Medida 6 i, tabla 3) Normas de trabajo 13. Sistemas cerrados situados en una zona controlada. (Medida 6, tabla 3) 14. Acceso restringido exclusivamente al personal autorizado. (Medida 6 b, tabla 3) 15. Obligacin de indicar el peligro biolgico. (Medida 6 a, tabla 3) 17. El personal deber ducharse antes de abandonar la zona controlada. (Medida 6 e, tabla 3) 18. Indumentaria de proteccin para el personal. (Medida 6 c, tabla 3) Residuos 22. Inactivacin de los OMG en los e uentes de lavabos, desages y duchas o e uentes similares. (Medida 6 f, tabla 3) 23. Inactivacin de los OMG en el material contaminado y en los residuos, incluidos los OMG presentes en el e uente de trabajo antes del vertido nal. (Medida 6 l, tabla 3)

Grado de con namiento 1 2 3 4

Opcional

Exigida Exigida, minimizando la liberacin Exigida, minimizando la liberacin Exigida con medios validados Minimizar la liberacin Opcional

Exigida Exigida, evitando la liberacin Exigida, evitando la liberacin Exigida con medios validados Evitar la liberacin Exigida

Exigida Exigida, evitando la liberacin Exigida, evitando la liberacin Exigida con medios validados Evitar la liberacin Exigida

No exigida

Opcional

Opcional Ningn requisito espec co Opcional

No exigida

Opcional

Opcional

Exigida

No exigida Exigida (mesa, si la hay)

No exigida Exigida (mesa, si la hay)

Opcional Exigida (mesa, si la hay, y suelo) Opcional

Exigida Exigida mesa, suelo, techo y paredes) Exigida

Opcional

Opcional

No exigida

No exigida

Opcional Exigida (aire de salida, facultativa para el aire de entrada)

Exigida Exigida (aire de entrada y de salida)

No exigida

No exigida

No exigida No exigida No exigida No exigida Exigida (indumentaria de trabajo)

Opcional Exigida Exigida No exigida Exigida (indumentaria de trabajo)

Exigida Exigida Exigida Opcional

Exigida Exigida Exigida Exigida Cambio completo de indumentaria antes de entrar y de salir

Exigida

No exigida

No exigida

Opcional

Exigida

Opcional

Exigida, con medios validados

Exigida, con medios validados

Exigida, con medios validados

Tabla 4. Organismos Modi cados Genticamente. Cuadro II Medidas de con namiento y otras medidas de proteccin para otras actividades. Del Anexo II del Real Decreto 178/2004

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BIBLIOGRAFA CONSULTADA
MINISTERIO DE TRABAJO Y ASUNTOS SOCIALES. Real Decreto 664/1997, de 12 de mayo, sobre la proteccin de los trabajadores contra los riesgos relacionados con la exposicin a agentes biolgicos durante el trabajo. INSTITUTO NACIONAL DE SEGURIDAD E HIGIENE EN EL TRABAJO Gua tcnica para la evaluacin y prevencin de los riesgos relacionados con la exposicin a agentes biolgicos. MINISTERIO DE LA PRESIDENCIA Real Decreto 178/2004, por el que se aprueba el Reglamento general para el desarrollo y ejecucin de la Ley 9/2003, de 25 de abril, por la que se establece el rgimen jurdico de la utilizacin con nada, liberacin voluntaria y comercializacin de organismos modi cados genticamente. HEALTH AND SAFETY EXECUTIVE The large-scale contained use of biological agents. HSE books http://books.hse.gov.uk/hse/public/saleproduct.jsf?catalogueCode=9780717615445 WAITES, M. J., MORGAN, N. L., ROCKEY, J. S. and HIGTON, G. Industrial Microbiology: An Introduction. London. Wiley-Blackwell 1 edition 2001.

Prohibida la reproduccin total o parcial. Reservados todos los derechos

FD-2938