Diseo de procesos qumicos y bioqumicos

Mara Eugenia Caldern

BIOPROCESOS ELEMENTOS PARA EL DISEO CONCEPTUAL DE PROCESOS

Camino de reaccin vs bioproceso

Calor
Sustratos

Clula (Metabolismo)

Productos qumicos

Biomasa (clulas)

Adaptado de Biochemical Engineering. Blanch. H. p. 164

DISEO DE PROCESOS
Sistema de control.

Intercambio energtico, red Subsistemas de separacin Esterilizacin

Definicin de flujos, reciclos.

Definicin de reactores
Entrada y salida proceso

CAMINO DE REACCIN

Bioproceso - Aspectos generales

Procesos generalmente lentos

Autocatalticos.
Actividad de biocatalizadores baja en comparacin con procesos qumicos

Alta dependencia de condiciones ambientales.

Pueden presentar problemas de inhibicin por producto o sustrato.
La naturaleza y actividad del biocatalizador tiempo. puede modificarse a travs del

Produccin est en estrecha relacin con las condiciones.

Entalpas de reaccin relativamente bajas.

Temperatura y presin de operacin moderadas.

Bioprocesos - Aspectos generales

Objetivos durante la fermentacin:

Mximo rendimiento

Mxima productividad Producto en concentracin elevada

Operacin discontinua (en muchos casos). Inhibicin (producto o sustrato): estrategias de alimentacin o retiro. Concentracin celular: recirculacin, inmovilizacin. Transferencia de masa: agitacin, dispersin de gas.

Limitaciones:

Procesos vs bioprocesos Consideraciones preliminares

Manejo de un ser vivo Bacterias, hongos, levaduras, algas, virus

Manejo de un ser vivo Agitacin, aireacin

Condiciones de ESTERILIDAD
Separacin y purificacin (cantidades) Control de proceso

Etapas generales del diseo de bioproceso

Seleccin (modificacin ) del microorganismo Cultivo en pequea escala Erlenmeyer

Cultivo en biorreactor a escala de prueba

Cultivo a escala piloto Condiciones operacin escala industrial Recuperacin y purificacin de productos

Elementos del diseo de bioprocesos

Seleccin (modificacin) del microorganismo Definicin de condiciones de cultivo

Nivel de expresin del producto deseado Estabilidad de la cepa Sustrato (nutrientes, oxgeno concentraciones) Temperatura, pH, agitacin Manejo de variables en cambio escala Efectos de la agitacin Continuo vs discontinuo Variables escalado y viabilidad

Escala pequea (erlenmeyer) Cintica (velocidad crecimiento y produccin)

Evaluacin en cambio de escala Biorreactor a escala piloto Recuperacin de producto

1 a 2 litros Control variables

Efectos del cambio de escala en productividad

100-1000 litros

Recuperacin a escala laboratorio vs nivel industrial

Etapas generales del bioproceso

PREPARACIN DEL INCULO PREPARACIN DEL MEDIO DE CULTIVO ESTERILIZACIN

INOCULACIN PRODUCCIN EN BIORREACTOR

Intracelular?

SEPARACIN (SLIDO- LQUIDO)

RUPTURA CELULAR

SEPARACIN DE CLULA (RESTOS)

RECUPERACIN Y PURIFICACIN

Elementos de estudio de bioproceso

REACCIN CONTROL, AIREACIN, AGITACIN BIOPROCESO

SEPARACIN -PURIFICACIN

ESTERILIDAD

Reaccin Consideraciones sobre variables en procesos de crecimiento celular

Poblacin de clulas Heterogeneidad entre clulas Reacciones mltiples, complejas. Variedad y pluralidad de componentes Mecanismos de control interno propios. Variabilidad gentica Adaptabilidad. Condiciones del medio Multicomponente Reacciones en solucin pH y T variables Cambio en las propiedades reolgicas Varias fases Distribucin no uniforme en el espacio.

Sustrato

Productos

Calor

Adaptado de Ingeniera Bioqumica. Casasblancas, G. p. 84

Camino de reaccin vs bioproceso

Implica el consumo de sustratos (suministro de la energa y nutrientes necesarios para la sntesis del material celular y productos del metabolismo).

En un medio de crecimiento, se produce (y se genera calor y biomasa)

variedad de productos
o

En algunos casos es de inters la produccin de biomasa Los productos de inters pueden ser los metabolitos primarios secundarios (no asociados directamente con el crecimiento) .

Los productos pueden excretarse (de la clula) y liberados al medio acumularse intracelularmente.

Biomasa - sustrato
Masa
Oxgeno consumido

Microorganismo

Sutrato

Tiempo

Aspectos generales en procesos de crecimiento celular

Una forma de evaluar los sistemas es a travs del rendimiento de biomasa

Yx
s

X S

X es el incremento en la masa celular S el consumo de sustrato las unidades se derivan de la forma de medicin de la biomasa y del sustrato.

Aspectos generales en procesos de crecimiento celular - productos

Otra forma de evaluar los sistemas es a travs del rendimiento de productos.

YP
P es el producto S el consumo de sustrato
s

P S

las unidades se derivan de la forma de medicin del producto y del sustrato

Camino de reaccin, cintica y bioproceso Biomasa, fases de crecimiento celular (cultivo discontinuo)
Fase estac ionaria Fase dec rec iente Fase de muerte

Log X

Fase exponenc ial

Fase de latenc ia

Tiempo

Durante la fase de crecimiento exponencial y decreciente: =

rx es la velocidad de produccin de biomasa (kg/m3s)

Cintica del crecimiento celular

x es la concentracin de clulas viables (kg/m3)

es la velocidad de crecimiento.

ln = ln +
lnx

Fase Adaptacin Aceleracin Crecimiento Desaceleracin

Cintica del crecimiento celular Descripcin Velocidad

especfica

Adaptacin celular al nuevo ambiente Poco crecimiento Comienza el crecimiento El crecimiento alcanza velocidad mxima El crecimiento se hace ms lento por agotamiento del sustrato o por formacin de productos inhibidores
Cesa el crecimiento Las clulas pierden viabilidad

0 max max max

Estacionaria Muerte

0 0

es la velocidad de crecimiento.

Efecto de la concentracin de sustrato Sustrato limitante del crecimiento Cintica de Monod

Cintica del crecimiento celular

max: velocidad especfica mxima de crecimiento Ks: constante del sustrato S concentracin del sustrato limitante

= +

max

max/2

Ks

Biomasa - productos
(cultivo discontinuo,)

Fase estac ionaria Fase dec rec iente Fase de muerte

Log X

Fase exponenc ial

Fase de latenc ia

Tiempo

Producto asociado al metabolismo energtico:

Siendo:

Cintica de formacin de product

= ( + )

rp velocidad volumtrica de formacin de producto,

velocidad especfica de formacin biomasa (=rx / x , rx es la velocidad volumtrica de formacin de biomasa, x concentracin biomasa)

YPX rendimiento de producto a partir de biomasa

mp (kg prod/kg biomasa s) velocidad especfica de formacin de producto debido al mantenimiento celular x la concentracin de biomasa

Producto no asociado al metabolismo energtico: en algunos casos es directamente proporcional a la biomasa, en otros es compleja y deben establecerse las ecuaciones empricas.

Camino de reaccin vs bioproceso

Requerimientos nutricionales H2O, fuente de energa (fottrofos, quimitrofos), carbono (auttrofos, CO2, hetertrofos), nitrgeno, vitaminas, sales (P, K, Fe, Mn, Ca..)..

Medio de cultivo (incluye sustrato)

La composicin del medio de cultivo influye en el crecimiento, la morfologa, fisiologa.

Para el diseo se emplean tcnicas de diseo experimental: crecimiento mximo o produccin mxima del metabolito de inters.

Condiciones del medio pH: ajuste y mantenimiento a condiciones del microorganismo que favorecen produccin de T: segn sean psicrfilos, mesfilos o termfilos. Disponibilidad de gases: segn sean aerobias, facultativas, anaerobias Agitacin
Tipos de medio Estado: slido, semislidos, lquido (suspendido, inmovilizado). Composicin: sintticos, complejos, enriquecidos, selectivos, diferenciales, mantenimiento.

SELECCIN MICROORGANISMO
Tipo Metabolismo

Criterios

Seleccin del microorganismo productor (clula)

Tipo producto

Calor Sustratos

Clula (Metabolismo)

Productos qumicos

Biomasa (clulas)

Adaptado de Biochemical Engineering. Blanch. H. p. 164

SELECCIN MICROORGANISMO INFORMACIN NECESARIA

Conocimiento del metabolismo y cintica de crecimiento y de produccin .

Calor Sustratos Clula (Metabolismo) Productos qumicos

Biomasa (clulas) Adaptado de Biochemical Engineering. Blanch. H. p. 164

Quimitrofos, aspectos generales: La energa se obtiene a partir de la oxidacin o degradacin de sustancias (catabolismo). La fuente de energa acta como donador de electrones y requiere reaccin de oxidacin reduccin completa para que libere energa (aceptor electrones oxgeno, nitrito, nitrato, sulfato entre otros). Muchos emplean como fuente de energa y carbono monosacridos, se pueden metabolizar por distintas vas (gluclisis, hexosas monofosfato, etner Doudoroff y fosfocetolasa) para dar origen a precursores (catabolismo) y biosntesis de unidades estructurales y macromolculas (anabolismo). Se producen metabolitos secundarios, no asociados con el crecimiento.

Seleccin microorganismo medio de cultivo y condiciones

Seleccin del microorganismo 1. Estabilidad gentica de la cepa y de fcil conservacin por largos periodos sin prdida de caractersticas. 2. Cepa libre de contaminantes. 3. Su velocidad de crecimiento debera ser alta y llevar a cabo el ciclo fermentativo en tiempo corto. 4. Alto rendimiento del producto deseado 5. Facilidad de extraccin de los productos. Puede ser obtenido del medio natural por aislamiento
Conocimiento del microorganismo Metabolismo y cintica Definicin del medio de cultivo y condiciones del biorreactor Sustrato: Fuentes de energa y otros requerimientos nutricionales; concentraciones Requerimientos de oxgeno y mecanismo de aporte Condiciones de agitacin, temperatura, pH Estrategias de alimentacin

TCNICA DE FERMENTACIN ESTRATEGIAS DE ALIMENTACIN , MEZCLA, AGITACIN, AIREACIN, SELECCIN DEL BIORREACTOR, CONTROL

BIORREACCIN

Fermentaciones en estado slido: Viable para el caso de hongos y levaduras, principalmente.

Ventajas A) Medios de cultivo simples, generalmente subproductos agrcolas lo que los hace econmicos. B) La baja actividad del agua ayuda a evitar contaminaciones. C) La concentracin natural del sustrato permite utilizar reactores ms pequeos. Desventajas A) Limitada a microorganismos que crecen en bajos contenidos de humedad. B) La extraccin del calor metablico puede ser un problema. C) Dificultad en medicin de parmetros de la fermentacin. D) Los procesos de transferencia de masa son limitados por la difusin. E) Muchos aspectos ingenieriles como el diseo de reactores y el escalado estn muy poco caracterizados. F) El tiempo de fermentacin es mayor debido a que generalmente se utilizan microorganismos que presentan bajas velocidades especficas de crecimiento.

TCNICA DE FERMENTACIN ESTRATEGIAS DE ALIMENTACIN , MEZCLA, AGITACIN, AIREACIN, SELECCIN DEL BIORREACTOR, CONTROL

BIORREACCIN

Medio suspendido: el sustrato se encuentra diluido o suspendido en una gran cantidad de agua.
Ventajas: A) Los tiempos requeridos para el crecimiento y generacin de metabolitos es menor. B) Se mejoran los procesos de transferencia de masa y de calor. C) El control de las condiciones de proceso se facilita, entre otros pH, temperatura, disponibilidad de oxgeno, entre otros. D) Facilita la estandarizacin de procesos y el control de calidad de los productos. Permite el desarrollo de estrategias de produccin en cultivo continuo. E) Desde el punto de vista ingenieril, existen avances en relacin con las estrategias de diseo de reactores y escalado.

Limitaciones: a) Concentracin celular b) Manejo del flujo c) Reutilizacin de las clulas d) Operacin continua e) Posibilidad de dao mecnico delas clulas

TCNICA DE FERMENTACIN ESTRATEGIAS DE ALIMENTACIN , MEZCLA, AGITACIN, AIREACIN, SELECCIN DEL BIORREACTOR, CONTROL

BIORREACCIN

Fermentaciones con

espacio, manteniendo al mismo tiempo una actividad metablica y viabilidad deseada.

cultivo inmovilizado: localizacin del microorganismo en una regin definida del

Ventajas: A) Posibilidad de usar de manera continua el microorganismo, queda retenido en el biorreactor; ingreso de sustrato y salida de productos continua. B) Los biorreactores pueden operar con flujos mayores a los correspondientes en cultivos libres.

C) Las clulas se protegen por daos mecnicos producidos por la agitacin. D) En operacin discontinua, la inmovilizacin facilita la reutilizacin de la biomasa.
E) Suelen reducirse los efectos de contaminacin accidental del proceso.

ESTRATEGIAS DE ALIMENTACIN , MEZCLA, AGITACIN, AIREACIN, SELECCIN DEL BIORREACTOR, CONTROL

BIORREACCIN

CARACTERSTICA BIOPROCESO Transferencia de masa

ESTRATEGIAS Agitacin (dispersin gas o mecnica), tcnica de fermentacin.

Inhibicin por sustrato Inhibicin por producto

Concentracin celular baja: Tipo de producto vs inhibicin, vs comportamiento diuxico

Alimentacin (lote alimentado) y Mezcla completa. Eliminacin del producto en la medida en que se forma
Inmovilizacin, recirculacin. Tcnicas de alimentacin Eliminacin de productos Mantenimiento pH, T. Etapas en la fermentacin

MEZCLA, AGITACIN, AIREACIN, SELECCIN DEL BIORREACTOR

CARACTERSTICA A DEFINIR FACTORES ASOCIADOS CONSIDERACIONES Variacin caractersticas reolgicas en el tiempo. Concentracin celular Morfologa, crecimiento filamentos, pellets. Flexibilidad (P osmtica) Concentracin de sustratos. Concentracin productos extracelulares. Tanques agitados con rodetes. Tanques agitados rodetes, deflectores Aire insuflado. (aerbicas) Tener en cuenta control espuma Mecanismo de esterilizacin (vapor de caldera) Filtros

BIORREACCIN

Mezcla

Viscosidad del caldo de cultivo

Tipo de mezclador

Transmisin de calor

Necesidades de esterilizacin

Necesidades de refrigeracin
Aporte O2 Aerobio vs. anaerobio

Mantenimiento de temperatura (30-37C, ms general) Retiro QR Especie microorganismo y fase crecimiento Fuente de carbono. Necesidad de difusores, coalescencia (sales) Formacin espuma
Etapas en la produccin, Formas de operacin, Alimentacin Separacin in situ

Estrategias de alimentacin, retiro de

Tipo de producto Metabolismo, inhibicin