La Clula Virtual Men Principal Citoplasma Inclusiones Inclusiones Citoplasmticas:

Materiales Educativos C

Son estructuras o materiales que se almacenan en el citoplasma.

Se pueden evidenciar al microscopio fotnico, ya sea mediante tcnicas HISTOQUMICAS para lpidos, glcidos, o directamente, c de los pigmentos los cuales poseen color propio.

Se localizan en el citoplasma pero no son considerados organoides, sino elementos que resultan del metabolismo celular o que incorporados del medio extracelular y que se alojan en el citosol. Dentro de las inclusiones tenemos: -Glcidos (glucgeno). -Lpidos. -Cristales. -Pigmentos.

Explorar con el cursor para las estructuras

Glcidos:

La glucosa se almacena en el citoplasma bajo la forma de un POLMERO, en este caso un polisacrido, denominado gluc

Las clulas que se especializan en el almacenamiento de glucgeno son los hepatocitos y las clulas musculares, pero la mayora almacenan glucgeno en menores cantidades.

Los glcidos se pueden demostrar al microscopio fotnico utilizando tcnicas HISTOQUMICAS como la tcnica de PAS o el carm Al microscopio electrnico, el glucgeno aparece en grnulos denominados alfa y beta.

Los grnulos de glucgeno beta poseen un dimetro de 15-30 nm y se observan ELECTRONDENSOS y homogneos Los grnulos de glucgeno alfa se aprecian como grumos en forma de rosetas de tamao variable.

Cada grnulo de glucgeno constituye una sola molcula muy ramificada la cual se encuentra rodeada por las ENZIMAS que se e sntesis y degradacin de la molcula.

De esta manera, la glucosa se almacena en el citoplasma de las clulas y es liberada al torrente sanguneo cuando es necesario glicemia (niveles de glucosa en sangre) en concentraciones adecuadas para satisfacer las necesidades metablicas de todas las organismo.

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Lpidos:

Constituyen los depsitos de grasas en el citoplasma. Las clulas especializadas en el almacenamiento de lpidos se denominan adipocitos que conforman el tejido adiposo, pero otras como los hepatocitos y muchas estirpes celulares pueden almacenar grasas en menores cantidades.

Al microscopio fotnico, en cortes coloreados con Hematoxilina -Eosina, las grasas no se ven, pues han sido removidas por las s solventes orgnicos que se utilizan para facilitar la inclusin. Por el contrario, si se realizan cortes por congelacin y se emplea HISTOQUMICAS como la tcnica de Sudn, las grasas se tien de color naranja. Tambien se emplea el osmio que imparte un color negro a las grasas cuando se observan al microscopio electrnico

Las grasas almacenadas son por lo general grasas neutras (triglicridos) INSATURADAS que a temperatura corporal se mantien lquido. Constituyen una principal fuente de energa al ser degradadas en glicerol y cidos grasos.

Las inclusiones de lpidos carecen de membrana, pero las gotitas estn rodeadas de elementos del citoesqueleto y algunas ENZIM para el metabolismo lpidico.

Cristales Vista 3D

Cristales:

Ciertas clulas poseen en su citoplasma o en la LUZ del retculo endoplsmico estructuras en forma de cristales, algunas de las cu reconocidas por microscopistas como inclusiones normales.

Desde el punto de vista bioqumico, se sugiere que son de naturaleza protica y posiblemente constituyan una forma de almacenam compuestos. Algunos virus forman inclusiones cristalinas observables en el ncleo o citoplasma de las clulas infectada

En el testculo humano, las clulas de Leydig poseen cristales citoplasmticos, de 3 um de grosor y hasta ms de 20 um de largo Cristales de Reinke, descubiertos en el ao 1896. Son de forma variable y sus extremos pueden ser redondeados o afilados. Carec por los colorantes comunes pero pueden ser coloreados con azocarmn. Son isotrpicos a la luz polarizada y al microscopio electr una estructura altamente organizada. Aparecen en el testculo desde la pubertad y su significacin es an tema de estu

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Pigmentos:

Son inclusiones que poseen color propio y gracias a esta particularidad, no necesitan coloraciones para poder ser observadas al fotnico.

Clasificacin: 1.-Pigmentos Endgenos: Son sintetizados por las clulas .

-Hemoglobina: Sintetizada por los eritrocitos. Este pigmento es responsable del color rojo de la sangre. Su funcin consiste en el gases en la sangre (el oxgeno, desde los pulmones a los tejidos y el dixido de carbono, desde los tejidos a los pulmon Es una protena conjugada, constituida por la globina y por un grupo Hem, el cual contiene hierro. Cuatro molculas Hem se unen a de globina para producir una molcula de hemoglobina. La hemoglobina al ser degradada origina otros pigmentos denominados: .Hemosiderina (contiene hierro) de color pardo-dorado .Hematoidina y Bilirrubina (carecen de hierro) que al ser OXIDADAS forman la Biliverdina, que imparte el color verde a la

-Melanina: Sintetizada por clulas denominadas melanocitos. Es de color pardo o negro y contribuye con el color de la piel y sus an del iris del ojo. Se localiza ademas en ciertos ncleos del cerebro (locus niger). Es altamente resistente a la mayora de compues incluyendo cidos concentrados, pero puede ser blanqueada por el perxido de hidrgeno y otros agentes OXIDANTES. Se presen de grnulos muy densos, de forma elipsoidal, de 3 x 7 um, denominados melanosomas. Se le atribuye la funcin de proteccin del e las radiaciones presentes en la luz solar.

-Lipofuscina: Es un pigmento que se almacena bajo la forma de CUERPOS RESIDUALES, producto del metabolismo lipdico. Es d amarillento y es considerado un signo de envejecimiento celular, por lo cual aumenta con la edad. Abunda en las neuronas, hepato musculares del miocardio. Se desconoce su funcin.

2.-Pigmentos Exgenos: Provienen del medio ambiente y son incorporados al citoplasma de las clulas.

-Carotenoides: Son de origen vegetal y poseen naturaleza lipdica, de all su afinidad por el tejido adiposo. Imparten el color cara zanahorias, amarillo de huevo, mantequilla y la grasa humana. Ciertos tipos de caroteno son provitaminas que pueden convertirse en vitamina A.

-Minerales: Polvos, tintas, carbn, slice y otros minerales pueden ser fagocitados y permanecer en el citoplasma de las c En las clulas que ejercen la macrofagocitosis, tales como los macrfagos alveolares en los pulmones, los lisosomas no son ca HIDROLIZAR materiales no biolgicos y estas partculas minerales y metlicas inhaladas se van acumulando progresivam La inhalacin de fibras de amianto en la Asbestosis y de partculas de slice en la Silicosis produce a largo plazo destruccin de pulmonares acarreando una insuficiencia respiratoria. Estas enfermedades son denominadas Nosocomiales.

Las CARACTERSTICAS de las sustancias Orgnicas de la Clula son:

- Los GLCIDOS o HIDRATOS de CARBONO, son sustancias orgnicas ternarias de origen casi vegetal, en donde predominan el Carbono (C), Hidrgeno (H) y Oxgeno (O). Para poder ser utilizados mediante el proceso digestivo son transformados en Glucosa. Son alimentos de Funcin ENERGTICA, puesto que se emplean como COMBUSTIBLE en la produccin de energa mediante la Oxidacin.

- Los LPIDOS o MATERIAS GRASAS son compuestos orgnicos ternarios complejos constituidos por molculas de Triglicridos. Se presentan como GRASAS slidas a 20C de origen animal o como ACEITES lquidos a 20C de origen vegetal. Para utilizarlos, los lpidos son transformados mediante el proceso digestivo en CIDOS GRASOS y GLICERINA. Son alimentos con funcin de RESERVA ENERGTICA. Se consumen para producir energa cuando se han agotado los Glcidos.

- Las PROTENAS son compuestos orgnicos cuaternarios de composicin muy compleja, constituidos mediante la formacin de largas cadenas de molculas de aminocidos. Estn presentes en los alimentos de origen animal y vegetal. Para utilizar las Protenas mediante el proceso digestivo, se las descompone en AMINOCIDOS. Son alimentos de funcin PLSTICA o

ESTRUCTURAL, empleados por las clulas para sintetizar sus propias protenas, que son utilizadas en los procesos de crecimiento y reparacin del organismo. Slo se consumen para producir energa cuando se han agotado las reservas de glcidos y de lpidos.

- Las ENZIMAS son catalizadores biolgicos. Un catalizador es una sustancia que acelera las reacciones qumicas sin modificarse; esto significa que puede ser utilizado una y otra vez. Una Coenzima es la parte no proteica de una enzima. Las enzimas (E) son protenas que tienen uno o ms lugares llamados SITIOS ACTIVOS a los cuales se une al Sustrato (S), es decir la sustancia sobre la que acta la enzima. El sustrato es modificado y convertido en 1 o ms Productos (P).

- CIDOS NUCLEICOS son cidos constituidos por ADN y ARN. El ADN (CIDO DESOXIRRIBONUCLEICO), se encuentra en el NCLEO, en un lugar llamado Cromosomas. Las molculas de ADN estn formadas por una DOBLE Cadena de NUCLETIDOS arrollados en forma de doble hlice con giros hacia la derecha o Dextrgira. Los Nucletidos son las unidades monomricas de la macromolcula del ADN, que resultan de la unin covalente de un FOSFATO y una base heterocclica con la PENTOSA. Est constituido por un azcar, que es una Pentosa: la DESOXIRRIBOSA. Presentan Bases Nitrogenadas PRICAS (Adenina y Guanina) y PIRIMDICAS (Timina y Citosina) y poseen un Radical FOSFATO. El ADN est constituido por Cadenas de POLINUCLETIDOS, en donde las Bases Pricas se enfrentan con las Pirimdicas, o sea se una siempre una ADENINA (A) con una TIMINA (T) y una CITOSINA (C) con una GUANINA (G). La funcin es llevar la Informacin gentica de padres a hijos. En sus molculas se encuentra la INFORMACIN GENTICA.

El ARN (CIDO RIBONUCLEICO) se encuentran en el Citoplasma (ARNr y el ARNt) y en el Ncleo se encuentra solamente el ARNm. Las molculas de ARN estn formadas por una SIMPLE Cadena de NUCLETIDOS arrollado en forma de hlice simple. El Nucletido est constituido por un azcar, que es una Pentosa: la RIBOSA. Presentan Bases Nitrogenadas PRICAS (Adenina y Guanina) y PIRIMDICAS (Uracilo y Citosina) y poseen un Radical FOSFATO. El ARN est constituido por una sola cadena de NUCLETIDOS, en donde las Bases Pricas se enfrentan con las Pirimdicas, o sea se une siempre una ADENINA (A) con un URACILO (U) y una CITOSINA (C) con una GUANINA (G). Su funcin es la SNTESIS de PROTENAS.

Las SUSTANCIAS INORGNICAS que necesita la Clula son:

1- El AGUA (H2O) es un alimento vital y est formado por 2 tomos de Hidrgeno y 1 tomo de Oxgeno unidos mediante energa qumica o de activacin. El agua se incorpora como bebida o como componente abundante de la mayora de los otros alimentos que se consumen. El agua es vital porque: a) Es el principal componente del organismo. b) Es el disolvente que permite el cumplimiento del fenmeno de smosis mediante el cual se cumplen procesos fundamentales en las funciones digestiva, respiratoria y excretora. c) Es imprescindible para las Enzimas que provocan y regulan las reacciones qumicas que se producen en el organismo.

2- Las SALES MINERALES son necesarias para la constitucin de diferentes estructuras orgnicas y para diversas funciones. Los minerales son los componentes inorgnicos de la alimentacin, es decir, aquellos que se encuentran en la naturaleza sin formar parte de los seres vivos. Desempean un papel importantsimo en el organismo, ya que son necesarios para la elaboracin de tejidos, sntesis de hormonas y en la mayor parte de las reacciones qumicas en las que intervienen los enzimas. La nica Sal que ingerimos directamente es el Cloruro de Sodio (ClNa o sal de cocina). - El SODIO (Na) interviene en la regulacin del balance hdrico provocando la retencin de agua en el organismo. - El POTASIO (K) acta en el balance hdrico favoreciendo la eliminacin de agua del organismo y participa en la contraccin del msculo cardaco. - El YODO (I) es necesario para que la Glndula Tiroides elabore la secrecin hormonal que regula el metabolismo de los Glcidos. - El HIERRO (Fe) es imprescindible para la formacin de la Hemoglobina de los glbulos rojos. Tambin es imprescindible en la correcta utilizacin de las vitaminas del grupo B. - El CALCIO (Ca) es el responsable de proporcionar dureza y rigidez a los huesos que, a su vez, darn sostn al resto del cuerpo. Forma parte de los huesos, del tejido conjuntivo y de los msculos. Junto con el potasio y el magnesio, es esencial para una buena circulacin de la sangre. - El FSFORO (P) son los que constituyen la parte inorgnica de los huesos. Es un elemento constituyente de la estructuras de los huesos y, en asociacin con ciertos lpidos, da lugar a los

fosfolpidos, que son componentes indispensables de las membranas celulares y del tejido nervioso. - El COBRE (Cu) es importante para un crecimiento saludable. - El FLUOR (F) es importante para los huesos y dientes dndoles una mayor resistencia. Previene la caries dental y fortifica los huesos. . El MAGNESIO (Mg) es imprescindible para la correcta asimilacin del calcio y de la vitamina C. Equilibra el sistema nervioso central (ligera accin sedante), es importante para la correcta transmisin de los impulsos nerviosos y aumenta la secrecin de bilis (favorece una buena digestin de las grasas y la eliminacin de residuos txicos). - El CALCIO (Ca) y el FSFORO (P) son los que constituyen la parte inorgnica de los huesos. Adems el CO2, constituido por un tomo de Carbono y 2 tomos de Oxgeno, que se encuentra en la atmsfera y es fundamental para el proceso de Fotosntesis en los vegetales, que a pesar de contener Carbono, es una molcula inorgnica. - Los XIDOS, HIDRXIDOS, CIDOS, BASES, ANHDRIDOS, etc. tambin son molculas inorgnicas, por ejemplo el xido de Calcio (Ca O), etc.

Composicin qumica de las celulas

Los elementos o componentes qumicos de la clula son tanto inorgnicos como orgnicos. COMPONENTES INORGNICOS:

el agua (h2o) es un alimento vital y est formado por 2 tomos de hidrgeno y 1 tomo de oxgeno unido mediante energa qumica o de activacin. el agua se incorpora como bebida o como componente abundante de la mayora de los otros alimentos que se consumen. el agua es vital porque: a) es el principal componente del organismo. b) es el disolvente que permite el cumplimiento del fenmeno de smosis mediante el cual se cumplen procesos fundamentales en las funciones digestiva, respiratoria y excretora. c) es imprescindible para las enzimas que provocan y regulan las reacciones qumicas que se producen en el organismo.

las sales minerales son necesarias para la constitucin de diferentes estructuras orgnicas y para diversas funciones. la nica sal que ingerimos directamente es el cloruro de sodio ( sal de cocina). otras sales como el potasio, yodo, hierro, calcio, fsforo y otras sales en pequeas cantidades se incorporan

por estar contenidos en distintos alimentos.

el cloro (Cl.) es necesario para la elaboracin del cido clorhdrico del tejido gstrico.

el sodio (na) interviene en la regulacin del balance hdrico provocando la retencin de agua en el organismo.

el potasio (k) acta en el balance hdrico favoreciendo la eliminacin de agua del organismo.

el yodo (i) es necesario para que la glndula tiroides elabore la secrecin hormonal que regula el metabolismo de los glcidos.

el hierro (fe) es imprescindible para la formacin de la hemoglobina de los glbulos rojos.

el calcio (ca) y el fsforo (p) son los que constituyen la parte inorgnica de los huesos. adems el dixido de carbono co2, constituido por un tomo de carbono y 2 tomos de oxgeno, que se encuentra en la atmsfera y es fundamental para el proceso de fotosntesis en los vegetales, que a pesar de contener carbono, es una molcula inorgnica. los xidos, hidrxidos, cidos, bases, anhdridos, etc. tambin son molculas inorgnicas, por ejemplo el xido de calcio

COMPONENTES ORGNICOS

Los glcidos o hidratos de carbono, son sustancias orgnicas ternarias de origen casi vegetal. son ejemplos el almidn, las fculas y los distintos tipos de azcares

presentes en las hortalizas, frutas y verduras frescas y en aquellos productos alimenticios elaborados con harinas. para poder ser utilizados mediante el proceso digestivo son transformados en glucosa. son alimentos de funcin energtica, puesto que se emplean como combustible en la produccin de energa mediante la oxidacin. su valor calrico es de 4 kilocaloras por cada gramo combustionado. Se acumulan en pequeas cantidades en el hgado y en los msculos bajo el nombre de glucgeno.

Los lpidos o materias grasas son compuestos orgnicos ternarios complejos constituidos por molculas de triglicridos. se presentan como grasas slidas a 20c de origen animal o como aceites lquidos a 20c de origen vegetal. las grasas estn presentes en las carnes, la leche y sus derivados. los aceites vegetales son extrados de los frutos y semillas de las plantas oleaginosas y empleados en la alimentacin humana para aderezar o fritar otros alimentos. para utilizarlos, los lpidos son transformados mediante el proceso digestivo en cidos grasos y glicerina. son alimentos con funcin de reserva energtica. se consumen para producir energa cuando se han agotado los glcidos. su valor calrico es de 9 kilocaloras por gramo combustionado. se acumulan en las clulas del tejido adiposo subcutneo, o en el que rodea a algunos rganos o incrustndose en las paredes arteriales en forma de colesterol.

Las protenas son compuestos orgnicos cuaternarios de composicin muy compleja, constituidos mediante la formacin de largas cadenas de molculas de aminocidos. estn presentes en los alimentos de origen animal y vegetal. es abundante su contenido proteico en las carnes, los huevos y la leche y sus derivados. para utilizar las protenas mediante el proceso digestivo, se las descompone en aminocidos. son alimentos de funcin plstica o estructural, empleados por las clulas para sintetizar sus propias protenas, que son utilizadas en los procesos de crecimiento y reparacin del organismo. slo se consumen para producir energa cuando se han agotado las reservas de glcidos y de lpidos. su valor calrixo es de 4 kilocaloras por gramo combustionado..

cidos nucleicos. ADN (cido desoxirribonucleico) - se encuentra en el ncleo. - constituye los cromosomas. - la funcin es llevar la informacin gentica de padres a hijos. en sus molculas se encuentra la informacin gentica. - las molculas de ADN estn formadas por una doble cadena de nucletidos arrollados en forma de doble hlice.

- los nucletidos son la unidades monomricas de la macromolcula del cido nucleico (ADN y ARN), que resultan de la unin covalente de un fosfato y una base heterocclica con la pentosa. - est constituido por un azcar, que es una pentosa: la desoxirribosa. - presentan bases nitrogenadas pricas (adenina y guanina) y bases nitrogenadas pirimdicas (timina y citosina). - presentan el radical fosfato. - el ADN est constituido por cadenas de polinucletidos. - las bases pricas se enfrentan con las pirimdicas, o sea se una siempre una adenina (a) con una timina (t) y una citosina (c) con una guanina (g).

ARN (cido ribonucleico) - se encuentran en el citoplasma (ARN y el ARN). - en el ncleo se encuentra solamente el ADN, o sea el ARN mensajero - las molculas de ARN estn formadas por una simple cadena de nucletidos arrollado en forma de hlice simple. - el nucletido est constituido por un azcar, que es una pentosa: la ribosa. - presentan bases nitrogenadas pricas (adenina y guanina) y bases nitrogenadas pirimdicas (uracilo y citosina). - presentan el radical fosfato. - el ARN est constituido por una sola cadena de nucletido. - las bases pricas se enfrentan con las pirimdicas, o sea se une siempre una adenina (a) con un uracilo (u) y una citosina (c) con una guanina (g). - su funcin es la sntesis de protenas.

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BIOLGICAS LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR

TRABAJO PRCTICO N4: COMPONENTES QUMICOS DE LA CLULA

CURSO: BIO 131, Laboratorio Biologia Celular SECCIN: 18 I. INTRODUCCIN

Desde que Robert Hooke observo las celdillas en el corcho y las llamo clulas, hemos ampliado nuestro conocimiento sobre el funcionamiento de la clula y ms an de sus componentes qumicos, pues sabemos que es la unidad fundamental de la vida y mediante estudios y observaciones realizados por el rea de biologa celular se debe encontrar la respuesta a la pregunta de que estn compuestas? Y Cmo funcionan? (1)

Todos los organismos vivientes estn formados por clulas, las cuales son unidades pequesimas rodeadas por una membrana que la contienen en una solucin acuosa concentrada de sustancias qumicas (2), es aqu donde centraremos nuestro estudio, las observaciones y las reacciones que experimentan estos compuestos.

Existen cuatro componentes orgnicos de la clula, los Azucares o Hidratos de Carbono, que son la fuente de energa para las clulas. Estn compuestas por tomos de Oxigeno, Carbono e Hidrogeno, su unidad bsica son los monosacridos, estos se unen mediante enlaces glucosdicos de tipo covalente para formar disacridos y de estos disacridos surgen los polisacridos y luego los polmetros ms grandes que abarcan hasta los oligosacridos. Los Lpidos o cidos grasos, son los componentes de las membranas celulares y adems sirven de reservorio de energa, mantienen la temperatura y le dan estabilidad mecnica a la clula. Estn compuestos por una cadena hidrocarbonada, una de sus caractersticas fundamentales es que son totalmente insolubles en agua, pero cuando forman una membrana esto cambia y pasan a tener una estructura anfiptica. El tercer componente son las protenas, las cuales son una gran cadena (sobre100) de aminocidos que se unen mediante enlaces peptdicos, cuya funcin principal recae en rigidez estructural y controlar la permeabilidad. Y el cuarto componente qumico de la clula son los cidos nucleicos, cuyo monmero son los nucletidos, que son subunidades de ADN Y del ARN los que almacenan la informacin gentica (3)

Dentro de los mtodos para reconocer la presencia de monosacridos se

encuentra la reaccin de Fehling, para la presencia de polisacridos se utiliza una prueba de Lugol; as para protenas se utiliza el reactivo Biuret y para reconocer la presencia de enzimas se utiliza agua oxigenada.

Para este laboratorio solo nos centraremos en los mtodos para reconocer cuando hay presencia de aminocidos, protenas, cidos grasos o enzimas en las sustancias y algunos alimentos.

II. OBJETIVOS

Objetivo General: Reconocer y diferenciar las molculas orgnicas e inorgnicas que componen la clula; a travs de distintos experimentos que nos mostraran si estas molculas se encuentran presentes o no en las muestras que se utilizarn. Objetivo Especfico: Reconocer en los distintos tipos de muestras que utilizaremos los componentes de las clulas, tales como los hidratos de Carbonos (Monosacridos, Polisacridos), Protenas, lpidos y enzimas en particular la enzima Catalasa.

III. MATERIALES Y MTODOS

1. ACTIVIDAD N1: RECONOCIMIENTO DE HIDRATOS DE CARBONO.

1. Identificacin de monosacridos mediante la reaccin de Fehling: Se preparan 5 tubos de ensayos, numeramos los 5 tubos y aadimos en cada uno la muestra con que se trabajar y se ubican en la gradilla. Se agrega a cada tubo 1 ml del reactivo Fehling A y 1 ml del reactivo Fehling B, luego se agregan 3 ml de cada una de las siguientes muestras en cada tubo: tubo 1: 3 ml de agua destilada + 1 ml de Fehling A + 1 ml Fehling B tubo 2: 3 ml de solucin de glucosa 1% + 1ml de Fehling A + 1ml de Fehling B tubo 3: 3 ml de solucin de almidn + 1 ml de Fehling A + 1ml de Fehling B tubo 4: 3 ml de leche + 1ml de Fehling A + 1ml de Fehling B tubo 5: 3 ml de solucin de NaCl + 1 ml de Fehling A + 1ml de Fehling B Se agitan cada uno de los tubos para homogeneizar y se colocan a bao mara hirviendo por 4 minutos; se retiran y se anotan las observaciones.

2. Identificacin de polisacridos mediante la prueba del Lugol: Se preparan 5 tubos nuevos, se rotulan con los nombres de las muestras que se utilizarn, se agregan 3 ml de cada una de las muestras descritas el la actividad 1 y se agrega a cada uno de los tubos 2 gotas de solucin Lugol diluida y se agita. Se anotan las observaciones.

2. ACTIVIDAD N2: RECONOCIMIENTO DE PROTENAS. Se preparan 5 tubos de ensayos, se rotula cada tubo con el nombre de la respectiva muestra con la que se trabajar, se agrega a cada tubo 2 ml de las siguientes muestras: tubo 1: 2 ml de agua destilada, tubo 2: 2 ml de solucin glicina 1%, tubo 3: 2 ml de clara de huevo 1%, tubo 4: 2 ml de leche, tubo 5: 2 ml de solucin de NaCl

Cuando todos los tubos tienen su respectiva muestra se le agregan 2 ml de reactivo Biuret; se agita y se observa.

3. ACTIVIDAD N3: RECONOCIMIENTO DE LPIDOS. Se toman dos tubos de ensayo; se pone en uno de ellos 3 ml de agua y en el otro tubo 3 ml de ter; a cada uno se le aade 1 ml de aceite y se agita fuertemente. Anotar las observaciones.

4. ACTIVIDAD N4: RECONOCIMIENTO DE ENZIMAS.

Se toman dos tubos de ensayos, en cada tubo se ponen trozos de hgado; en el primer tubo de ensayo con la muestra de hgado se agregan 5 ml de agua oxigenada y se observa la reaccin. Luego, el segundo tubo de ensayo con la muestra de hgado, se lleva a hervir durante unos minutos, se retira y se agregan 5 ml de agua oxigenada, se observa la reaccin. IV. RESULTADOS.

4.1. ACTIVIDAD N1: RECONOCIMIENTO DE HIDRATOS DE CARBONO. 4.1.1. Identificacin de monosacridos mediante la reaccin de Fehling: Lo primero que se observ al mezclar el reactivo Fehling A con el reactivo Fehling B, fue que estos tomaron un color de tono celeste, cuando colocamos las muestras en cada tuvo de ensayo rotulado, el tono celeste reaccion con las

muestras, cambiando a un color azul muy intenso en todas las muestras, excepto la leche; debido a su coloracin blanca el color que tomo fue de un azul ms plido. Despus de que las muestras estuvieron 4 minutos a bao mara; se observaron cambios en la muestra de solucin de glucosa 1% y en la muestra de leche. 1. Cul es el color y la cantidad relativa del precipitado en cada uno de los tubos? El color de la muestra de solucin de glucosa 1% tom un color rojo ladrillo y el precipitado que se form ocupaba ms o menos 1/6 de la solucin total; la leche tom un color lila, mientras que las muestras restantes no presentaron precipitados y mantuvieron su coloracin azul profundo. 2. Cmo explica el comportamiento obtenido en el tubo con la muestra biolgica? El tubo con las muestras biolgicas reaccionaron debido a que se utiliz una reaccin de Fehling que reconoce la presencia de monosacridos; como ambas muestras tenan monosacridos en su estructura, ambas reaccionaron pero en diferente medida; la glucosa reaccion en mayor medida debido a que es un monosacrido, mientras que la leche presenta en su azcar un disacrido; la lactosa. Las muestras restantes no produjeron mayores cambios debido a que no se encontr monosacridos en su estructura.

4.1.2. Identificacin de polisacridos mediante la prueba del Lugol: Al mezclar las muestras con las gotas de lugol en cada tubo de ensayo los resultados fueron; para el tubo n 1 con Agua Destilada, tomo un color caramelo muy plido, con el tubo n 2, que contena una solucin de glucosa al 1% se observo el mismo color en rigor pero con una intensidad mayor, es decir mucho mas oscuro que el tubo anterior, el tubo rotulado con el n 3 tuvo un gran cambio,

este fue el mas intenso de los 5 tubos, tomo un color similar al de la bebida cola , este tuvo contena una solucin de almidn al 1%, el siguiente tubo formo un color lcuma muy plido, pues aunque la reaccin es distinta con el color de la leche el color de la muestra sufre un cambio, y por ultimo el tuvo n 5 que contena una solucin de NaCl al 1% presento un color muy similar al primero, es decir no se observaron grandes variaciones.

ACTIVIDAD N2: RECONOCIMIENTO DE PROTENAS. En los 5 tubos de ensayo pero ahora con diferentes muestras se observo lo siguiente, en el tuvo n 1 que contena Agua Destilada tomo un color celeste muy plido, similar al que tenia el reactivo de Biuret, el tubo n 2 que contena en su interior una solucin de glicina al 1% tomo un color azulino homogneo muy intenso, el cambio lo vimos con el tubo n 3, el que contena las claras de los huevos, este tubo tomo una coloracin muy distinta a las dems, adquiri un color violeta bastante oscuro, esta muestra era ms densa que el resto, el tubo n 4 que contena leche tambin presento un color violeta pero con la reaccin del blanco de la leche que contena este color se ve como un lila, el ultimo tubo observado el que contena la muestra de NaCl se presento igual que el primero, con un color celeste claro y una mezcla bastante homognea y poco densa.

Cmo explica la diferencia de intensidades en los tubos que presentaron una reaccin positiva? La diferencia de intensidades de debe a la concentracin de protenas que presentaba cada muestra; en el caso de la clara de huevos, la intensidad fue mayor debido a que sta contiene gran cantidad de protenas en su estructura; as tambin la solucin de glicina. La leche, tambin presento una reaccin, sin embargo debido a su coloracin blanca se not menos. En el resto de las

muestras no hubo mayores cambios.

ACTIVIDAD N3: RECONOCIMIENTO DE LPIDOS. Se tomaron dos tubos de ensayos; uno con agua destilada y el otro con ter, lo interesante de este experimento que al colocarle aceite, cada uno de los tubos reaccion de manera distinta quedando claramente al descubierto cual presentaba mayor cantidad de lpidos, en el tubo con la muestra de agua destilada se apreci la formacin de miscelas y se podan distinguir a ojo descubierto el agua y el aceite, en cambio en el tubo con ter la mezcla se homogeneiz, quedando ambos compuestos en una sola solucin.

ACTIVIDAD N4: RECONOCIMIENTO DE ENZIMAS. En los dos tubos de ensayo con trozos de hgado se vieron dos reacciones distintas, la primera muestra de hgado crudo, las enzima catalasa estaba activada, al verter agua oxigenada en el tubo comenz a hervir y a salir espuma; adems notamos que adquiri temperatura. Con la segunda muestra la reaccin fue distinta, despus de sacar el tubo del hervor y agregar agua oxigenada; no ocurri ninguna reaccin.

V. DISCUSIN

En la primera actividad desarrollada: Identificacin de monosacridos mediante la reaccin de Fehling, despus de llevar las muestras a bao mara se observ lo siguiente: La muestra que presento mayor cantidad de precipitado fue el tubo n 2:

solucin de glucosa 1 %, ya que de las 5 muestras, sta era la nica que es un monosacrido por excelencia, este monosacrido posee la misma frmula emprica que la fructosa (C6H12O6) pero con diferente estructura, debido a que contiene 6 tomos de carbono se clasifica como una hexosa. En menor cantidad precipit la leche, esta no contiene un monosacrido sino que el tipo de azcar que presenta es un disacrido; la lactosa, formado por una glucosa y una galactosa, aqu radica la diferencia en cuanto a cantidad de precipitado entre las dos muestras y la reaccin que tuvieron. Como reaccin de Fehling permite identificar rpidamente los monosacridos la reaccin de tubo que contena glucosa, fue muy clara y precipito un sexto de la muestra, las tres muestras restantes no presentaron precipitados, ya que en sus componentes, ninguna presenta un monosacrido en su estructura. En la segunda actividad; Identificacin de polisacridos mediante la prueba del Lugol, al reaccionar una muestra con Lugol, podemos identificar la presencia de algn tipo de polisacridos en las muestras utilizadas. En esta reaccin, al adicionarle unas gotas Lugol al almidn produce distintos colores, si ste reacciona con el almidn, el cual es un polisacrido presente en las plantas que sirve como reserva alimenticia, producir un color azul-violeta, esto se debe a la composicin que presenta el almidn sus cadenas de Amilasa y las cadenas de Amilopeptina, estas reaccionan con el yodo del Lugol y producen la diferencia de coloracin, en nuestro experimento el tubo rotulado con el nmero 3 que contena al Almidn 1% present una coloracin distinta, un color caramelo (que es a mezcla del azul con el violeta si se ven separados) esto nos indica que en la muestra hay polisacridos presentes. Este y la glucosa, fueron los dos tubos que presentaron ms variacin en el color, las dems muestras no tienen polisacridos en mayores proporciones, la muestra de la leche, (que contiene un disacrido) present una coloracin caramelo suave, esta variacin en la muestra la atribuimos a la relacin que tiene con el blanco de la leche, lo que provoca que el

olor se haga mas tenue, el agua destilada y la solucin de NaCl no presentaron variacin alguna. En la tercera actividad: Reconocimiento de protenas, este reconocimiento se hizo mediante la reaccin de Biuret, el cual reacciona con los grupos Amino (>NH) del enlace peptdico que une a las protenas, las muestras eran 5: Agua destilada, glicina 1%, clara de huevo 1%, leche y la solucin de NaCl, de estas 5muestras, en tres se observaron variaciones de color; el tubo n 2 que contena glicina, tomo un color azul muy intenso, esto de debe a que la glicina (Gly). La glicina cumple la funcin de ser neurotransmisor y es el ms simple y pequeo de los veinte aminocidos, usado para la formacin de las protenas. Funciona armnicamente con la glutamina, sustancia que juega un papel fundamental en la funcin cerebral. Por lo tanto, como la reaccin de Biuret detecta presencia de protenas, esta reaccion con la solucin de glicina, cambiando de color, el tubo que contena clara de huevo presento una gran diferencia en cuanto a la muestra inicial, adquiri mayor densidad y reaccion a un color violeta muy intenso, esto es bsicamente porque la clara de huevo posee cerca del 10% de protenas de su composicin total (el resto es agua). En concreto el huevo es uno de los alimentos base que contienen protenas, l nos entrega alrededor de 13gr de protenas por cada 100 gr. del peso total. Y la tercera muestra que reaccion con la reaccin de Biuret, fue el tubo N4 que contena leche, esto de debe a que la leche tambin presenta protenas, en el porcentaje de su composicin total. Las dos muestras restantes no presentaron variacin alguna, el debido a que no presentan protenas en su estructura.

En la cuarta actividad: Reconocimiento de lpidos; ocupamos 2 tubos con aceite, a

uno le adicionamos agua destilada y rpidamente observamos que el aceite no presenta solubilidad, es ms; al agitar el tubo el aceite forma una capa sobre el agua donde se distinguen burbujitas, y las formacin de micelas, esta es una emulsin de aspecto lechoso, que es transitoria, ya que desaparece con el reposo, la capa de aceite se sita en la superficie, porque es de menor densidad, esto de debe a que los lpidos no interactan con solventes polares. El aceite al reaccionar con agua, puede formar: micelas, monocapas y bicapas que son grupos con elevada cantidad de lpidos. Otra caracterstica importante de los lpidos es que, si bien son insolubles en agua, son muy solubles en disolventes inorgnicos, como por ejemplo, el benceno, cloroformo, ter, hexano, es el caso del segundo tubo con aceite, al cual le adicionamos ter, al agitar el tubo, se vio una mezcla homognea en la cual no se distingua a simple vista el aceite o el ter.

En la quinta actividad: Reconocimiento de enzimas, obtuvimos dos resultados distintos; en el primer tubo con hgado animal; las observaciones fueron las siguientes: cuando se le agregaron los 5 ml de agua oxigenada comenz a subir espuma por el tubo, hizo burbujeo y adems subi la temperatura, provocando una reaccin exergnica; es decir, una reaccin que libera energa. Esto se debe a que la catalasa es una enzima presente en todos los tejidos animales en especial en el hgado (se encuentra tambin en la saliva) cuya funcin recae en proteger a todos los tejidos de la reaccin toxica producida en el metabolismo celular por el perxido de hidrogeno (agua oxigenada), esta enzima acta sobre l, transformando el 2H2O2 en 2H2O + O2 que son sustancias menos peligrosas para las clulas. En cambio el tubo numero dos con hgado animal; que fue sometido durante unos minutos a un recipiente con agua a 100C, obtuvimos dos cambios; el primero fue el cambio de contextura que presento la muestra, ya no era liquida sino que se

observaba ms bien slida, y el segundo cambio se manifest al adicionarle Agua Oxigenada; no tuvimos ninguna reaccin, porque al someter el tubo a altas temperaturas desnaturalizamos la enzima y esta perdi su funcin cataltica por lo tanto no pudo descomponer el H2O2. Una de las caractersticas para mantener un enzima funcionando, es que se mantenga bajo ciertas condiciones, una de ellas es una temperatura adecuada.

VI. CONCLUSIN

Dentro del prctico realizado aprendimos que existen diferentes mtodos para la identificacin de monosacridos, polisacridos, protenas, lpidos, enzimas, etc. Gracias a que existen componentes qumicos dentro de cada clula; lo que permite la reaccin con diferentes compuestos para determinar si tienen o no presencia de biomolculas. Y segn el mtodo o la reaccin que se utilice se determinar que monmero o polmero se encuentra presente en la clula. VIII. BIBLIOGRAFA.

1._ Bruce Alberts, Dennis Bray, Karen Hopkin, Alexander Johnson, Julian Lewis, Martin Raff, Keith Roberts, Peter Walter. Introduccin a la Biologa Celular (2007). Editorial Medica Panamericana, 2da Edicin. Buenos Aires; Madrid.

Los polifosfatos inorgnicos son hoy dia mi fetiche de estudio. Heredado de la colaboracin que por aos tuvieron el fallecido Premio Nobel Arthur Kornberg y mi mentor de tesis Dr. Carlos A. Jerez. Kornberg es sin dudas el cientfico que ms ha contribuido al descubrimiento de las funciones de este polmero. En mi tesis doctoral estudi el metabolismo de este polmero en bacterias y particularmente su carencia en la clula. Actualmente mi proyecto de investigacin trata del uso de tcnicas de biologa molecular, genmica funcional, protemica, as como de modelos matemticos y uso de redes de interaccin bionformticas para estudiar la carencia de este biopolmero en la clula.

Los Profesores Carlos A. Jerez (izquierda) y Arthur Kornberg (Premio Nobel de Medicina 1959, derecha) durante una visita a Stanford en el ao 2005. La principal fuente de energa en las bacterias como en la mayora de los organismos vivos es el ATP, pero existen otras molculas capaces de sustituir sus funciones como el polifosfato (poliP). Este es un polmero lineal formado por decenas y centenas de residuos de ortofosfato unidos por enlaces fosfoanhdrido ricos en energa. Siendo el fosfato (Pi) un nutriente esencial, muchos organismos incluyendo bacterias, hongos, plantas y animales almacenan Pi y energa en la forma de poliP.

Los polifosfatos inorgnicos. n representa el nmero de los residuos de fosfato. Aparte de sus funciones obvias de reserva energtica y de Pi, la regulacin y funcin de los poliP en los seres vivos permaneci desconocida por muchos aos debido a la falta de mtodos analticos especficos. Las primeras descripciones de poliP dan cuenta de la presencia de grnulos metacromticos en los microorganismos. Estas partculas teidas de rosa con colorantes bsicos fueron llamadas volutina y se los confunda con cidos nucleicos. Luego, con el advenimiento de la microscopa electrnica los poliP se observaron como grnulos densos a los electrones que desaparecan rpidamente bajo el haz de electrones, diferencindose as de la cromatina. Actualmente los poliP se han encontrado en todos los seres vivos en los que se ha buscado: bacterias, hongos, protistas, plantas y animales y tambin en arqueas. En bacterias, los poliP son principalmente citoplasmticos, aunque se han encontrado asociados a otras estructuras celulares y se les puede observar como grnulos densos a los electrones o en forma soluble (Figura 2). Tambin existen pequeas cantidades de poliP en las membranas plasmticas en complejo con poli-b-hidroxibutirato (PHB) y calcio. En eucariontes, los poliP se encuentran en distintos compartimentos celulares como vacuolas, pared celular y ncleo.

Grnulos de poliP en una bacteria del gnero Pseudomonas (Foto tomada por mi). Dentro de las funciones que se le han asignado en los microorganismos se encuentran las siguientes: 1 ) fuente de energa en la sntesis de ATP; 2 ) sustituto del ATP en la fosforilacin de la glucosa y de algunas protenas; 3 ) reserva de fosfato; 4 ) ventaja osmtica sobre el Pi, debido a que como polmero ofrece baja

solubilidad en agua; 5 ) quelante de cationes divalentes; 6 ) amortiguador intracelular de iones alcalinos en algunos microorganismos; 7 ) elemento estructural junto con el poli-?-hidroxibutirato y el Calcio en la membrana de clulas competentes para la transformacin bacteriana; 8 ) regulador del desarrollo celular debido a que se ha encontrado que el poliP y las actividades enzimticas involucradas en su metabolismo se modifican durante los cambios en el desarrollo de algunos microorganismos en respuesta a la deficiencia de uno o varios nutrientes; 9 ) componente de la cpsula bacteriana que podra contribuir en la patognesis de la infeccin. Referencias generales del tema: Kornberg A, Rao NN and Ault-Rich D. 1999. Inorganic polyphosphate: a molecule of many functions. Annu. Rev. Biochem. 68:89-125. Brown MR, Kornberg A. 2004. Inorganic polyphosphate in the origin and survival of species. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101:16085-16087.

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CITOPLASMA. INCLUSIONES CITOPLSMICAS

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CONTENIDOS
CITOPLASMA BACTERIANO (VISIN DE CONJUNTO) | INCLUSIONES DE RESERVA: INCLUSIONES POLISACARDICAS, GRNULOS DE POLI--HIDROXIALCANOATOS, INCLUSIONES DE HIDROCARBUROS,GRNULOS DE CIANOFICINA, GRNULOS DE POLIFOSFATO, GLBULOS DE AZUFRE | OTRAS INCLUSIONES:SALES MINERALES, FICOBILISOMAS | ORGNULOS PROCARITICOS: CARBOXISOMAS, VACUOLAS DE GAS,CLOROSOMAS, MAGNETOSOMAS

1. CITOPLASMA BACTERIANO: VISIN DE CONJUNTO | a Contenidos

El citoplasma bacteriano es la masa de materia viva delimitada por la membrana citoplsmica. En su interior se albergan: cuerpos nucleares (nucleoide); plsmidos (no en todas las cepas bacterianas); ribosomas; inclusiones (no en todas); orgnulos (no en todas). Al igual que en los dems seres vivos, el citoplasma es un sistema coloidal cuya fase dispersante es agua junto con diversas sustancias en solucin (citosol), y cuya fase dispersa est constituida por macromolculas y conjuntos supramoleculares (partculas submicroscpicas). La viscosidad es mayor que la del citoplasma eucaritico, estando desprovisto de corrientes citoplsmicas. Observacin: A microscopa ptica, obviamente es poco lo que se puede distinguir en l. En las clulas jvenes se suele teir de modo uniforme, teniendo un carcter basfilo (debido a la abundancia de ARN). En las clulas viejas se tie irregularmente, debido a la aparicin de inclusiones y a la acumulacin de sustancias de desecho. A microscopa electrnica destaca el carcter granulado, producido por los numerosos ribosomas (que a los aumentos habituales aparecen como partculas esfricas), aunque se observa una zona irregular hacia el centro, ms transparente a los electrones, que se debe a los cuerpos nucleares (nucleoide). En los intersticios entre las partculas granuladas existe una sustancia amorfa en la que no se pueden distinguir ms detalles, y que corresponde a la fase dispersante acuosa de la que hablbamos ms arriba. En este captulo y en los prximos nos dedicaremos al estudio de las principales

estructuras y macromolculas que alberga el citoplasma. Comenzaremos con las inclusiones y orgnulos especiales que presentan algunas bacterias (este cap. 8), para abordar despus la organizacin a gran escala del material gentico bacteriano (cap. 9), y un rpido repaso al proceso de expresin de la informacin gentica contenida en ste (cap. 10, con estudio de los ribosomas bacterianos).

2. INCLUSIONES DE RESERVA | a Contenidos

Son acmulos de sustancias orgnicas o inorgnicas, rodeadas o no de una envuelta limitante de naturaleza protenica, que se originan dentro del citoplasma bajo determinadas condiciones de crecimiento. Constituyen reservas de fuentes de C o N (inclusiones orgnicas) y de P o S (inclusiones inorgnicas). Estudiaremos: 1. Inclusiones orgnicas: a. inclusiones polisacardicas b. grnulos de poli--hidroxibutrico (o, en general de poli-hidroxialcanoatos) c. inclusiones de hidrocarburos d. grnulos de cianoficina 2. Inclusiones inorgnicas: grnulos de polifosfato

a. glbulos de azufre

2.1 INCLUSIONES POLISACARDICAS

Son acumulaciones de (1-->4) glucanos, con ramificaciones en (1--> 6), principalmente almidn o glucgeno (segn especies), que se depositan de modo ms o menos uniforme por todo el citoplasma cuando determinadas bacterias crecen en medios con limitacin de fuente de N, pero donde an sean abundantes las fuentes de C y energa. En esta situacin, se detiene prcticamente la sntesis de protenas y de cidos nucleicos, y la mayor parte del C asimilado se convierte rpidamente en estos materiales de reserva. Cuando a estas clulas las pasamos a un medio rico en N, pero carente de fuente de C, estas inclusiones se usan como

fuente interna de C para la sntesis de cidos nucleicos y protenas. Estas inclusiones actan, pues, como sistemas de almacenamiento de carbonoosmticamente inertes (la clula puede albergar grandes cantidades de glucosa que, si estuvieran como molculas libres dentro del citoplasma, podran tener efectos osmticos muy negativos). Sntesis (veamos el ejemplo del glucgeno):
fosfoglucomutasa

Glucosa-6-P --------------------------------> Glucosa-1-P

ADP-glucosa-pirofosforilasa

Glucosa-1-P + ATP ---------------------------------------> ADP-glucosa + PP

glucgeno sintetasa

ADP-glucosa + { ,1-->4 glucano aceptor}n -----------------------------------------> { ,1->4 glucano}n+1

Sobre este polmero lineal acta la enzima ramificadora (que introduce enlaces (1-->6) con glucosa), de modo que se forma el glucgeno maduro. Degradacin:
glucgeno fosforilasa

Glucgeno --------------------------------> n {glucosa-1-P}

Para la total degradacin del glucgeno se requieren tambin enzimas desramificadoras, capaces de romper los enlaces (1-->6). Observacin: Para observarlas se recurre a la tincin con una solucin de I2 + IK:

glucgeno: aparece de color pardo-rojizo; almidn (amilopectina): color azul.

2.2 GRNULOS DE POLI--HIDROXIBUTRICO (PHB) Y DE POLIHIDROXIALCANOATOS (PHA)

Los grnulos de poli--hidroxibutrico son acmulos del polister del cido hidroxibutrico (= 3-hidroxibutrico), rodeados de una envuelta protenica, y que al igual que en el caso anterior, se producen en ciertas bacterias como reserva osmticamente inerte de C en condiciones de hambre de N. Adems de la proteccin osmtica, estos grnulos suponen la ventaja de neutralizar un metabolito cido (el grupo carboxilo de cada unidad de -hidroxibutrico desaparece como tal, al intervenir en el enlace ster con la siguiente unidad). En las especies de Bacillus constituye la fuente de carbono y energa al inicio de la esporulacin. Una funcin semejante parece implicada a la hora del enquistamiento de Azotobacter. Una clula puede contener de 8 a 12 de estos grnulos, que miden unos 0.2-0.7 m de dimetro, y que van provistos de una envuelta proteica de unos 3-4 nm de grosor. Pueden llegar a representar el 80% en peso de la clula. Sntesis: Se produce por una rama lateral de la ruta de sntesis de los cidos grasos, a travs de -hidroxibutiril-CoA. En los grnulos, el polmero queda asociado a un sistema complejo que ser utilizado en la degradacin, pero este sistema habr de activarse antes. Degradacin: 1. La degradacin comienza con la actuacin de un enzima proteoltico que desorganiza la envuelta proteica de los grnulos; 2. Los grnulos as "activados" sufren ahora la accin de una despolimerasa, que va generando dmeros de hidroxibutrico. 3. Actuacin de una dimerasa especfica, que genera -hidroxibutrico a partir de los steres dimricos. Observacin: A diferencia de los acmulos de polisacridos, los grnulos de PHB son visibles a microscopio ptico en fresco, debido a su elevado ndice de refringencia. Se tien bien mediante Negro-Sudn. Grnulos de poli--hidroxialcanoatos (PHA):

En los ltimos aos est quedando patente que los grnulos descritos de PHB son un ejemplo de una clase ms amplia de grnulos de poli--hidroxi-alcanoatos.

Por ejemplo: cuando determinadas especies de Pseudomonas crecen en n-octano como fuente de carbono, se acumula un polmero de steres del cido -hidroxi-octanoico, con una funcin metablica semejante a la del PHB. Ciertas cepas de Alcaligenes eutrophus, cuando crecen en glucosa y propinico producen copolmeros aleatorios de unidades de -hidroxibutrico y -hidroxivalrico (=3-hidroxipentanoico). Existen interesantes perspectivas de aprovechamiento econmico de estos polmeros, ya que los PHA se comportan como excelentes termoplsticos biodegradables. Por ejemplo, la empresa britnica ICI tiene patentados procesos industriales para fabricar PHA donde casi el 90% de las unidades son de hidroxivalrico, que da un polmero flexible comercializado con el nombre de Biopol . Los polmeros a base de 4- o 5-hidroxibutrico y 3-hidroxibutrico son ms largos, ms elsticos y ms biodegradables (se han empleado en la fabricacin de envases)

2.3 INCLUSIONES DE HIDROCARBUROS

Son acmulos de reserva (con envuelta proteinica) de los hidrocarburos que determinadas bacterias (especialmente Actinomicetos y relacionados) usan como fuente de C.

2.4 GRNULOS DE CIANOFICINA Muchas cianobacterias (Oxifotobacterias) acumulan grandes grnulos refringentes de reservas nitrogenadas cuando se acercan a la fase estacionaria de crecimiento. Estos grnulos de cianoficina son acmulos de un copolmero de arginina y asprtico: consta de un ncleo de poliasprtico, en el que todos los carboxilos de las cadenas laterales estn unidos con L-arginina. Su sntesis no est basada en el mecanismo habitual en ribosomas, ya que no se ve inhibida por el cloramfenicol.

2.5 GRNULOS DE POLIFOSFATOS (= GRNULOS DE VOLUTINA, O GRNULOS METACROMTICOS El nombre de "metacromticos" alude al efecto metacromtico (cambio de color): cuando se tien con los colorantes bsicos azul de toluidina o azul

de metileno envejecido, se colorean de rojo. A microscopio electrnico aparecen muy densos a los electrones. Son acmulos de polifosfato, polmeros lineales del ortofosfato, de longitud variable (por trmino medio, unas 500 unidades), que representan un modo osmticamente inerte de almacenar fosfato. Parece ser que la parte central de estos grnulos constituye un ncleo formado por lpidos y protenas. En algunos casos pueden constituir una fuente de energa, en sustitucin del ATP (se trata en este caso de una especie de "fsil bioqumico?"). Se acumulan cuando algn otro nutriente distinto del fosfato se hace escaso (sobre todo cuando va desapareciendo el sulfato). En estas condiciones se detiene la sntesis de los cidos nucleicos, y la volutina se acumula a la espera de su utilizacin para esta sntesis de nucleicos, cuando aparezca el nutriente originalmente limitante. Su sntesis se produce por adicin secuencial de restos de P a PP, actuando el ATP como donador:

P-P + ATP ------> P-P-P + ADP; (-P-)n + ATP -----> (-P-)n+1 + ADP. Los grnulos de polifosfatos tienen un interesante aspecto aplicado, en la eliminacin de fosfatos en las aguas residuales. En los lodos activados de las plantas de procesamiento de aguas y residuos es muy abundante la bacteria Acinetobacter, que puede llegar a acumular el 24% de su biomasa bajo la forma de polifosfatos. Durante los periodos de aerobiosis, esta bacteria se asegura la energa a partir de sustratros extracelulares, y mientras tanto acumula grnulos de polifosfatos; en anaerobiosis, los niveles de ATP los mantienen a expensas de usar esos grnulos de polifosfato, por lo que el lodo libera fosfatos. Esto se aprovecha para eliminar concentraciones problemticas de fosfatos en aguas residuales, derivadas del uso de fertilizantes y detergentes (proceso "Renpho").

2.6 GLBULOS DE AZUFRE Las inclusiones de S aparecen en dos grupos de bacterias que usan sulfuro de hidrgeno (SH2):
las bacterias purpreas del azufre (que usan el SH2 como donador de electrones para la fotosntesis); bacterias filamentosas no fotosintticas como Beggiatoa o Thiothrix, que lo usan como donador de electrones para sus oxidaciones.

En ambos casos, el sulfuro de hidrgeno es oxidado a azufre elemental (S0), que en el citoplasma se acumula como glbulos muy refringentes y rodeados de envuelta protenica. Estos glbulos son transitorios, ya que el S0 se reutiliza por oxidacin hasta sulfato, cuando en el medio se agota el sulfuro. 3. OTRAS INCLUSIONES | a Contenidos 3.1 INCLUSIONES DE SALES MINERALES Acmulos grandes, densos y refringentes de sales insolubles de calcio (sobre todo carbonatos) que aparecen en algunas bacterias (comoAchromatium), cuyo papel parece consistir en mantenerlas en el fondo de los lagos y ros. 3.2 FICOBILISOMAS Son estructuras supramacromoleculares, en forma de cilindros o bastones, adosadas a la superficie de la membrana tilacoidal de las Oxifotobacterias, confiriendo a sta un tpico aspecto "granuloso" en las micrografas electrnicas. Como se puede ver en el esquema, estn constituidas por pilas de discos a partir de ficobiliprotenas, cromoprotenas que sirven como "antenas" para la captacin de luz en la fotosntesis de estos procariotas. Los grupos cromforos son: ficocianinas, aloficocianinas y ficoeritrina. Como veremos oportunamente, la disposicin ordenada de los distintos pigmentos tiene un papel central en la "canalizacin" de la energa de la luz hacia los centros de reaccin (ubicados ya en plena membrana

tilacoidal) donde se localizan los complejos fotosintticos protenasclorofilas.

4. ORGNULOS PROCARITICOS CITOPLSMICOS | a Contenidos Como ya dijimos, en procariotas no existen por regla general orgnulos citoplsmicos rodeados por unidad de membrana. Las nicas excepciones estn constituidas por los tilacoides de las Oxifotobacterias, ya estudiados en el captulo anterior. En algunos grupos bacterianos se pueden encontrar orgnulos citoplsmicos no rodeados por unidad de membrana (o sea, sin bicapa lipdica). Muchos de ellos presentan envueltas basadas en subunidades de protenas:
carboxisomas vacuolas de gas clorosomas magnetosomas.

4.1 CARBOXISOMAS (= CUERPOS POLIDRICOS) Estructuras presentes en bacterias fotoautotrofas (Oxifotobacterias y ciertas bacterias purpreas) y quimioautotrofas (nitrificantes,Thiobacillus), de apariencia polidrica con tendencia a esfrica. Su dimetro oscila entre 50 y 500 nm, y estn rodeadas de envuelta monocapa proteinica de unos 3,5 nm. El interior tiene aspecto granular, debido a la acumulacin de la enzima ribulosa-bifosfato-carboxilasa (RuBisCo, la carboxidismutasa, el enzima clave en el ciclo de Calvin de asimilacin de CO2). Aunque se pens que eran los sitos de fijacin del CO2, parece ms bien que se trata de reservas de dicha enzima.

4.2 VACUOLAS DE GAS

Son orgnulos muy refringentes al microscopio ptico, que al electrnico muestran una estructura a base de agrupaciones regulares de vesculas de gas. Cada vescula tiene una forma de cilindro bicnico (200-1000 nm de longitud y unos 70 nm de dimetro), rodeado de una monocapa de unidades globulares de protena ensambladas helicoidalmente que dan un aspecto a bandas ("costillas"). Esta envuelta es impermeable al agua, pero permeable a los gases, por lo que la composicin y concentracin del gas dentro de la vescula depende de las que existan en el medio. Conforme se sintetizan y ensamblan las vesculas, el agua va siendo eliminada del interior (vase esquema). La funcin de estas vacuolas es mantener un grado de flotabilidad ptimo en los hbitats acuticos a las bacterias que las poseen, permitindoles alcanzar la profundidad adecuada para su modo de vida (segn los casos, para obtener una intensidad adecuada de luz, concentracin ptima de oxgeno o de otros nutrientes). Las vacuolas de gas son muy frecuentes en Oxifotobacterias y Anoxifotobacterias; tambin se dan en algunas arqueobacterias (Halobacterium, algunas metangenas) y en bacterias prostecadas (Ancalomicrobium, Prosthecomicrobium).

4.3 CLOROSOMAS

Son vesculas oblongas situadas por debajo de la membrana citoplsmica, que contienen los pigmentos antena de las bacterias fotosintticas verdes (antigua familia Chlorobiaceae, dentro de la clase Anoxyphotobacteria). Son invisibles a microscopa ptica; miden 100-150 nm de longitud y unos 50 nm de anchura, estando rodeadas de una monocapa de protenas. Se disponen por debajo de la membrana citoplsmica, sin estar en continuidad con ella, aunque en muchos casos aparecen conectadas a travs de un pednculo de naturaleza no lipdica.

4.4 MAGNETOSOMAS

Son orgnulos sensores del campo magntico terrestre, que aparecen en ciertas bacterias acuticas flageladas microaerfilas o anaerobias (p. ej., en Aquaspirillum magnetotacticum). Consisten en cristales homogneos de magnetita (Fe3O4), de formas cubo-octadricas o de prisma hexagonal, delimitados por una envuelta protenica. Los diversos cristales suelen disponerse en filas paralelas al eje longitudinal de la bacteria, o en otras agrupaciones regulares de varios unidades, hasta varias decenas. Fueron descubiertas en 1975, y se sabe que permiten la orientacin magntica a las bacterias que las poseen (bacterias magnetotcticas), determinando la orientacin de su natacin. En el hemisferio Norte, el campo magntico est orientado hacia abajo, y en el sur hacia arriba. Las bacterias magnetotcticas del hemisferio septentrional se orientan al N, y las del meridional, al S. Por consiguiente, cuando las bacterias son removidas de los fondos donde viven, por magnetotaxia pueden volver al fondo, que es donde encuentran las concentraciones de oxgeno adecuadas para su modo de vida BIBLIOGRAFA | a Contenidos
ARTCULOS DE DIVULGACIN

BLAKEMORE, R.P., R.B. FRANKEL (1982): Navegacin magntica en las bacterias. Inv. y Ciencia, 65 (febrero): 16-24. WALSBY, A.E. (1977): Los vacuolos gasferos de las cianofceas. Inv. y Ciencia 13 (octubre): 62-70.
ARTCULOS DE REVISIN

ALLEN, M.M. (1984): Cyanobacterial cell inclusions. Ann. Rev. Microbiol. 37: 1-25. BLAKEMORE, R.P. (1982): Magnetotactic bacteria. Ann. Rev. Microbiol. 36: 217-238.

DAWES. E.A. (1992): Storage polimers in prokaryotes. En: "Prokaryotic structure and function: a new perspective". Society for General Microbiology & Cambridge University Press, Cambridge, pp. 80-122. MANN, S., N.H.C. SPARKS, R.G. BOARD (1990): Magnetotactic bacteria: microbiology, biomineralization, palaeomagnetism and biotechnology. Adv. Microb. Physiol. 31: 125-181.