UNIVERSIDAD AUTONOMA DE NUEVO LEON Facultad de Ciencias Biolgicas Licenciatura en Biotecnologa Genmica

Nombre de la Materia: Tcnicas Bsicas de Manipulacin de cidos Nucleicos Nombre del trabajo: Reporte de Investigacin Ttulo del Trabajo: Usos y Aplicaciones del PCR

Nombre del Alumno: Linda Guadalupe Flix Hernndez Grupo: 421 Matrcula: 1481958

04 de Octubre de 2013

Monterrey, Nuevo Len.

INTRODUCCIN PCR son las siglas en ingls de Polymerase Chain Reaction o Reaccin en Cadena Polimerasa. La idea bsica es sintetizar muchas veces un fragmento de DNA utilizando una polimerasa que puede trabajar a temperaturas muy elevadas, ya que proviene de la bacteria Thermus aquaticus, de ah su nombre ms conocido: taq polimerasa. Cuando se hace una reaccin de PCR se simula lo que sucede en una clula cuando se sintetiza el DNA. La PCR se realiza en un Thermo Cycler (Termociclador) es una mquina que calienta y enfra la reaccin en periodos cortos de tiempo. Reactivos necesarios para PCR: Amortiguador (Buffer): 50mM KCl, 10mM Tris. Cl (pH 8.3 a temperatura ambiente) y 1.5 mM MgCl2. MgCl2: Puede estar en forma de MgCl2, MgSO4. Se usa 25mM.Es un cofactor para la funcin de la polimerasa. dNTPs (Dinucleotidos trifosfatados): dATP, dGTP, dCTP, dTTP. -La concentracin de dNTPS, es proporcional al tamao del fragmento que se desea amplificar. -Generalmente, se usa una concentracin de 200M de cada uno. Cebadores primers: Son secuencias cortas de nucletidos 20-24 nucletidos de longitud, complementarias a una regin del DNA que se quiere amplificar. Se usa a concentracin de 1M. DNA molde: El DNA a amplificar puede tener desde 50 a 2,000 nucletidos de longitud. El mnimo va de 10-100 ng. y el mximo entre 400-500 ng. Polimerasa: Generalmente se usa 2 unidades por reaccin. El proceso de PCR incluye 3 pasos bsicos que se repiten 25 veces o ms:

1. Desnaturalizacin: Consiste en separar la doble hebra de DNA y convertirla en hebra sencilla. -Tpicamente se usa una temperatura de 95C - 97C, por 15 a 40 segundos, el tiempo depende del tamao del genoma. 2. Apareamiento o anneling: Los cebadores primers previamente diseados, reaccionan con la hebra sencilla de DNA y se pegan en lugares especficos por complementariedad de bases. 3. Polimerizacin o Extensin: Una Polimerasa de DNA extiende los primers, en el espacio comprendido entre ambos primers, y coloca dinucleotidos trifosfatados (dNTPs) de 5a 3 leyendo el DNA de 3a 5. De esta forma sintetiza la secuencia complementaria de las hebras de DNA molde. Se efecta a 70C por 1 minutos. -Los pasos 1, 2 y 3 se repiten cuantas veces sea necesario.

USOS Y APLICACIONES Usos Permite duplicar un nmero ilimitado de veces un fragmento de ADN. Replicar cientos de miles y millones de veces el DNA, en el transcurrir de pocas horas. Se obtiene una gran cantidad de un fragmento gnico con alto grado de pureza. Aporte al desarrollo de nuevas estrategias de diagnstico. Permite identificar un gen a partir de una muestra muy pequea. Mtodo de deteccin de secuencias de DNA. Permite duplicar un fragmento de DNA en estado impuro. Permite detectar poblaciones residuales de clulas cancerosas en pacientes sometidos a quimioterapia. Anlisis de DNA de cualquier organismo vivo o muerto. Puede utilizarse para detectar la presencia de una secuencia en una muestra.

Aplicaciones Mutagnesis (cambios en la informacin contenida a travs de primers con mutaciones). Con variaciones en la secuencia de los partidores, se produce un segmento de DNA que presente diferencia entre 1 o ms bases respecto al DNA original, As se puede alterar una protena para estudiar o anular su funcin. Esta mutacin puede ser en un sitio determinado de un gen o en un lugar al azar de un gen o genoma.

 Medicina- Pruebas de paternidad. Se obtienen la informacin gentica de cada muestra y la comparan con el fin de identificar la mitad que el hijo hered de la madre y poder saber si la otra mitad coincide o no con la del presunto padre. Amplificando por PCR fragmentos polimrficos de DNA de la madre, del nio y de l o los supuestos padres, y separando por electroforesis se visualizan segmentos que tiene el nio que deben compartir con la madre y padre biolgicos.

Biologa Molecular-Clonacin: A partir de RNA total y en un solo paso (RTPCR) pueden obtenerse cDNAs especficos. Se amplifica un determinado gen o un mRNA que puede introducirse en un vector y luego en un organismo, que al duplicarse tambin duplicar el gen de inters, As se se obtiene una cantidad suficiente de un gen o DNA complementario para secuenciarlo o producir a gran escala la protena que este gen codifica.

 Cuantificacin de mRNAs: Al introducir una modificacin en la PCR se puede estimar la cantidad de mRNA de un gen determinado. Al extraer RNA total de una clula y con el uso de la transcriptasa inversa, se puede producir un DNA complementario de todos los mRNA o de alguno en particular, Con este DNA complementario se puede hacer una PCR para amplificarlos y facilitar la secuenciacin. Deteccin de enfermedades hereditarias. Cada gen en estudio puede ser amplificado por PCR, con los repartidores adecuados, y ser secuenciado para determinar si un individuo porta alguna mutacin que explica la presencia de una enfermedad o su aparicin en el futuro, la que puede ser heredada.

 Huellas Digitales. Se replican pequeas cantidades de ADN para despus compararse. La PCR permite aumentar la cantidad de ADN amplificando ciertos segmentos polimrficos para luego sepralos mediante electroforesis lo que se conoce como huella digitales.

Paleontologa. En algunos tipos de fsiles se conservan cantidades de material gentico de los organismos, que puede proporcionar muchsima informacin sobre organismos extintos, pero qu slo pueden estar disponibles en cantidades suficientes gracias a la PCR.

Sistemtica y filogentica. Las relaciones evolutivas de los organismos se encuentran plasmadas en su DNA. Con la PCR es posible estudiar las relaciones genticas entre los organismos con slo pequeas muestras de tejidos, sin maltratar a los organismos.

CONCLUSIN La fabricacin del PCR ha sido de vital importancia ya que en la vida cotidiana se utiliza en diferentes reas, es una herramienta til de investigacin, a travs de sta se replica muchas veces un fragmento de DNA en un periodo breve de tiempo, lo que en otras condiciones tardaran mucho tiempo en realizarse, lo que permite la investigacin, secuenciacin y anlisis del DNA y no slo de este, sino tambin de otras molculas de igual importancia, realizndose de una manera eficaz y en un periodo corto de tiempo. El PCR tambin brinda a la persona que lo efecta una simulacin de lo que sucede en la clula por lo que hace ms fcil la tarea a los investigadores al momento de analizar sus muestras.

Bibliografa: http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones/libros/530/cap17.pdf http://es.wikipedia.org/wiki/Reacci%C3%B3n_en_cadena_de_la_polimerasa#Aplic aciones http://www.arrakis.es/~ibrabida/vigpcr.html http://medmol.es/tecnicas/13/ http://www.slideshare.net/paulinacamposgomez/aplicaciones-pcr http://www.cienciahoy.org.ar/hoy23/reaccion.htm https://www.google.com.mx/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=3&cad=rj a&ved=0CEMQFjAC&url=http%3A%2F%2Fbiology.uprm.edu%2Flabs%2Fgenetic a%2Fpcr.ppt&ei=LapLUpGkK4yO9AS-rYCoBA&usg=AFQjCNHX647Puzu1mISHR5gLZW4Rgk3-g&bvm=bv.53371865,d.eWU http://www.upo.es/depa/webdex/biocel/page_02.htm http://www.bmbq.uma.es/lbbv/index_archivos/presentbiotec/6-PCR-6.pdf http://repositorio.sistemauno.com.co/secundaria/quimica_c/Ampliaciones/Ampliaci on/Quimica%2011/Usos%20de%20la%20fotocopiadora%20de%20ADN%20o%20 PCR.pdf