ABSORCIN DE GLUCOSA EN EL INTESTINO DELGADO DE RATA. Temas de estudio. Estructura y funcin de la pared intestinal.

Mecanismos generales de transporte de sustancias desde la luz intestinal hacia las clulas intestinales y de stas al lquido extracelular. Mecanismo de transporte de glucosa en el intestino delgado. Factores que influyen en el transporte a travs del intestino delgado. INTRODUCCIN. El aparato digestivo tiene como principal funcin proporcionar al organismo agua, electrolitos y sustancias nutritivas, dichos alimentos son transportados a travs del tubo digestivo a una velocidad tal, que permite su digestin y absorcin. Antes que los nutrientes (carbohidratos, protenas y grasas) puedan ser utilizados por el cuerpo, son degradados por hidrlisis enzimtica, proceso conocido como digestin, hasta llegar a ser compuestos lo suficientemente pequeos para poder pasar al interior de las clulas del tubo digestivo y de all llegar a la circulacin, proceso de absorcin intestinal. Durante la digestin los alimentos son sometidos a la accin de secreciones producidas por glndulas digestivas. El intestino delgado se divide funcionalmente en tres partes, pero la estructura bsica de estas regiones es muy similar; el duodeno, que es la primera y ms ancha porcin del intestino delgado, recibe el quimo del extremo pilrico del estmago y es el sitio donde culmina la mayor parte de los procesos digestivos. En las otras dos regiones restantes, llamadas yeyuno e leon respectivamente es en donde fundamentalmente tiene lugar la absorcin de los alimentos digeridos. Las clulas del epitelio intestinal se caracterizan por su borde en cepillo formado por microvellosidades; la superficie de absorcin de la mucosa intestinal est cubierta por vellosidades, tambin la constituyen una gran cantidad de pliegues llamados pliegues de Kerckring; todas estas caractersticas de la mucosa intestinal en conjunto le confieren un rea de absorcin muy grande. La absorcin en el aparato digestivo implica muchos procesos, que incluyen a la difusin simple, la difusin facilitada, el transporte activo y en algunos casos especiales, la pinocitosis. El transporte activo es el principal mecanismo de la absorcin de nutrientes en el intestino delgado. Las clulas involucradas en este proceso transportan elementos nutritivos desde la luz del intestino hacia la sangre, incluso si la concentracin de dichos elementos es mayor en la sangre que en la luz intestinal. Un grupo de nutrientes importantes para el organismo que se absorbe en el intestino delgado es el de los carbohidratos. Por lo general, todos los carbohidratos se absorben en forma de monosacridos y su transporte a travs de la membrana puede producirse en contra del gradiente de concentracin y, por lo tanto, requiere de un aporte de energa metablica. En la membrana plasmtica de las clulas intestinales existe un cotransporte sodio-glucosa que aumenta la concentracin intracelular de glucosa, por lo que sta atraviesa la membrana basolateral de la clula epitelial hacia el lquido extracelular. Objetivos. - Verificar el transporte de glucosa a travs del intestino delgado de rata. - Demostrar de qu manera influye la oxigenacin y la temperatura en la absorcin intestinal de glucosa. - Determinar el efecto del 2-4 dinitrofenol en la absorcin intestinal de glucosa. MATERIAL Y MTODO. Material biolgico:

Una rata en ayuno de 12 horas. Cristalera, instrumental y equipo: Estuche de diseccin. 1 varilla de vidrio. 1 carrete de hilo. 1 caja de Petri. 2 pinzas de tres dedos. 2 cmaras para rganos aislados. 1 termmetro. 2 mecheros. 2 tripies. 2 telas de asbesto. 5 pipetas Pasteur. 2 bulbos. 5 pipetas de 1 ml. 8 tubos de 13x100. 3 vasos de precipitados de 300 ml. 2 bombas de acuario. 1 cnula. 1 jeringa de 1 ml. Tiras reactivas comerciales para la deteccin de glucosa. Material de consumo y soluciones: Solucin Tyrode para mamfero (sin glucosa) Solucin Tyrode-glucosa al 2% Solucin Tyrode-glucosa al 2% y 2-4 dinitrofenol 0.001 M Hielo. Algodn. Hilo. Solucin de pentobarbital. PROCEDIMIENTO: Preparacin de sacos intestinales. Se sacrifica la rata por medio de administracin de pentobarbital seguida de traseccin de la mdula espinal. Abrir el abdomen mediante una incisin en la lnea media abdominal. Ya localizado el intestino delgado se extrae luego de cortar sus uniones ploro-duodenal e leo-cecal y colocarlo en una caja de Petri que contenga solucin de Tyrode fra y aeracin. Cortar tramos de intestino con 2 a 3 cm de longitud, insertar una cnula en la luz del segmento intestinal y, por medio de una jeringa que contenga solucin salina de Tyrode, lavar los segmentos intestinales. Es importante examinar que el tejido no presente perforaciones ya que puede haber escape de la solucin durante el experimento. Siga los pasos que se mencionan para llevar a cabo la inversin de los segmentos intestinales. Se anuda con un hilo uno de los extremos del segmento de manera que quede ocluido completamente; con ayuda de una varilla de vidrio se impulsa el extremo ocluido hacia el extremo abierto, deslizndolo por la varilla (Figura 1). De esta manera la superficie mucosa del intestino queda por fuera y los cabos de hilo del extremo atado quedan por dentro del saco invertido. Sostener con unas pinzas el saco intestinal e introducir por su extremo abierto el tubo de vidrio d la cmara de rganos aislados hasta que sobrepase unos 5 mm, se amarra cuidadosamente este extremo a la varilla (Figura 2).

Figura 3 Coloque el saco intestinal en la cmara de rganos aislados para hacer los experimentos con las diferentes soluciones: Experimento control. Colocar el saco intestinal dentro de la cmara y llenarlo con solucin salina de Tyrode que se encuentre a 37C utilizando una cnula acoplada a una jeringa o una pipeta Pasteur, despus de verificar que el saco no presenta fugas ste se sumerge en una solucin de Tyrode-glucosa, tambin a 37C. Se debe tener cuidado que tanto la solucin interior como la exterior no sobrepasen el borde superior del saco atado a la varilla, inmediatamente acoplar el sistema de aeracin que consiste en una bomba de aire para pecera; la preparacin debe estar en bao de mara para mantener constante la temperatura (Figura 3). Toma de muestra. Tome una muestra, tiempo cero, tanto de la solucin exterior como de la interior del saco intestinal, utilice una cnula conectada a una jeringa o una pipeta Pasteur. Utilizando las tiras reactivas determine la concentracin de glucosa en las muestras; deje pasar 15 minutos y mida nuevamente la concentracin de glucosa, slo de una muestra del interior del saco. Hacer determinaciones cada 15 minutos hasta completar 5; en el tiempo de la ltima determinacin mida nuevamente la concentracin de glucosa en el exterior del saco. Es importante verificar que las condiciones de aeracin y temperatura se mantengan constantes durante todo el experimento. Efecto de la ausencia de oxgeno en la absorcin intestinal de glucosa.

Colocar un saco intestinal que contenga en su interior solucin salina de Tyrode a 37C dentro de una cmara que contenga solucin salina de Tyrode-glucosa a 37C, la preparacin se mantiene sin adaptar el sistema de aeracin pero manteniendo la temperatura constante. Hacer determinaciones de glucosa de la solucin interior y de la exterior del saco y proseguir con las determinaciones en la misma forma y en los tiempos descritos anteriormente. Efecto del 2-4 dinitrofenol en la absorcin intestinal de glucosa. Colocar un saco intestinal en una cmara de rganos aislados en la manera descrita anteriormente, llenar el saco intestinal con una solucin de Tyrode a 37C, en este caso el saco se colocar en una solucin de Tyrode-glucosa con 2-4 dinitrofenol (solucin exterior). Se mide la concentracin de glucosa en el tiempo cero dentro y fuera del saco intestinal y, al igual que en los experimentos anteriores, se realizan 5 determinaciones cada 15 minutos. Determinacin de glucosa por medio de tiras reactivas. Obtener una gota de la solucin problema, ya sea la del interior del saco intestinal o de la solucin exterior, por medio de una cnula limpia conectada a una jeringa. Colocar la gota de la solucin problema en la zona reactiva de la tira y se deja reaccionar durante el tiempo establecido por el fabricante de la tira (el tiempo necesario para la reaccin est indicado en el recipiente de las tiras y puede variar), el cambio de color se efectuar de acuerdo con la concentracin de glucosa presente en la muestra y ste deber ser comparado con la escala cromtica proporcionada en el recipiente de las tiras, la lectura debe efectuarse bajo buenas condiciones de luz. Los resultados que aparecen despus de 3 minutos o slo en los bordes de la zona de prueba no tienen significado confiable. Este mtodo es semicuantitativo y est basado en la reaccin enzimtica de la glucosaoxidasa-peroxidasa especfica para glucosa, la que se manifiesta con una reaccin colorida en la tira reactiva. RESULTADOS. Experimento control. Elabore una tabla con los valores obtenidos de concentracin de glucosa en los diferentes tiempos en que se tomaron las muestras. Al final del experimento se observan cambios en las concentraciones externa e interna. Cmo pueden interpretarse los resultados obtenidos? Haga una grfica en donde se observen los cambios en la concentracin de glucosa, dentro del saco intestinal, con respecto al tiempo. Efecto de la ausencia de oxgeno. Elabore una tabla con los valores obtenidos de concentracin de glucosa en los diferentes tiempos y compare los resultados con los obtenidos en el experimento control. Explique cul es el efecto de la falta de oxigenacin sobre el transporte de glucosa. Haga una grfica con los resultados. Efecto del 2-4 dinitrofenol. Elabore una tabla con los valores obtenidos de concentracin de glucosa en los diferentes tiempos y compare los resultados con los obtenidos en el experimento control. Explique el mecanismo de accin del 2-4 dinitrofenol que afecta al transporte de glucosa en el intestino. Haga una grfica con los resultados.