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Morfologa y estructuras bacterianas.

Clasificacin de los microorganismos. Hay una clasificacin que divide a los microorganismos en: celulares y acelulares. - Organismos celulares: la propiedad bsica de estos organismos es que presentan membrana plasmtica. Todos estos organismos tienen metabolismo, es decir un conjunto de reacciones qumicas que tienen lugar dentro de la membrana plasmtica con el propsito de obtener energa (reacciones catablicas) y crear nuevos componentes de su estructura (reacciones anablicas). El material gentico de los organismos celulares se caracteriza por: 1. presentar simultneamente ADN yARN. 2. Por lo general, es un ADN de cadena doble y un ARN de cadena sencilla. - Organismos acelulares: se aprovechan de las clulas para realizar sus funciones vitales. Es decir, son parsitos obligados ya que necesitan infectar clulas para sobrevivir, reproducirse... Su material gentico, los organismo acelulares se caracterizan por: 1. presentar nicamente un solo tipo de cido nucleico (ADN o ARN). 2. Ser ADN o ARN en cadena doble o sencilla (cualquiera de las 4 posibilidades). Los organismos acelulares: LOS VIRUS. El cido nucleico (genoma) de los virus est encerrado en el interior de la cpsida, cuya funcin es nicamente proteger dicho genoma. En algunos casos por fuera de la cpsida hay una otra estructura fosfolipdica denominada: envoltura lipoproteica. Gracias a esta envoltura podemos clasificar a los virus en: - Virus envueltos: cido nucleico + cpsida + envoltura lipoproteica. - Virus desnudos: cido nucleico + cpsida. Adems de los vrtices de la cpsida salen una proteinas que el virus usa como mtodo de reconocimiento celular (para reconocer a las clulas vctimas de su infeccin). 4- Los organismos celulares. Dentro de ellos distinguimos entre: - Clulas procariotas. - Clulas eucariotas. Clulas procariotas. evolucionan hacia lo simple.. Multiplicacin muy rpida. (minutos) No se adaptan bien a los cambios. No intrones: duplicacin del ADN ms sencilla. El ADN, forma una nica molcula. NO realiza mitosis. ADN esparcido en el citoplasma. Citoplasma no compartimentalizado, no se distinguen orgnulos. Clulas eucariotas. evolucionan hacia lo complejo. Multiplicacin ms lenta (min 12 horas) Gran capacidad de adaptacin. Si intrones: duplicacin ms lenta. El ADN forma muchas molculas: cromosomas. Si mitosis. ADN en el ncleo celular. Citoplasma est compartimentalizado, s hay orgnulos.

Para la misma funcin, los componentes de la clula procariota son ms pequeos (los ribosomas 70S son procariotas y los 80S son eucarioticos).

Ocurre los mismo con las ARN polimerasas (en eucariotas son 3 y estn formadas por 14 polipptidos, y en procariotas slo hay una y est formada por 5 polipptidos). - Las Bacterias. El dimetro tipico de las bacterias es en torno a 1 micrmetro, aunque tambin las hay gigantescas. Distinguimos 3 tipos segn forma: -Cocos. Tienen una morfologa esfrica, por lo que disminuye su contacto con el ambiente. Se transmiten por va area, produciendo afecciones respiratorias. Al tener menor superficie en contacto con el ambiente, tienen menos acceso a los alimentos y tienen dificultad para crecer al cultivarse. Se localizan en sitios con muchos nutrientes. - Bacilos. Tienen mayor superficie en contacto con el ambiente que los cocos. Incorporan fcilmente nutrientes por lo que pueden causar infecciones en lugares por poca cantidad de nutrientes (vas urinarias por ejemplo). Es raro que se transmitan por el aire, sino que prefieres los lquidos o los alimentos como vas de infeccin. Casi todos los bacilos tienen flagelos, que les dotan de movilidad. Al tener mayor superficie en contacto con el ambiente son ms sensibles a las adversidades del medio ambiente, y por esa razn muchos recurren a la porduccin de esporas. Las esporas se definen como: clulas desecadas, sin metabolismo que permiten sobrevivir a la clula en condiciones adversas. Son la forma de vida ms resistente conocida. - Espirilos. Tienen forma de espiral. Esta forma les permite penetrar en medios muy densos. Son bacterias muy delgadas y muy sensibles al ambiente. Necesitan transmitirse rpidamente de una persona a otra, para garantizar su supervivencia. Por esa razn, muchas ETS son producidas por espirilos. Estructura general de las bacterias. Todas las bacterias tienen una membrana que es una bicapa lipdica similar a la de las clulas humanas. Sin embargo, son ms flexibles porque carecen de colesterol. Por fuera de la membrana presentan una especie de cscara rgida y dura, que las protege y que est formada por polisacridos duros (celulosa). Esta cscara se llama: PARED. Tiene dos funciones: - dar forma a la clula. - proteger del medio ambiente. La presencia de pared hace que la membrana carezca de colesterol. Las bacterias tambin pueden tener flagelos. Otras bacterias en cambio, pueden tener pelos que tienen funciones importantes para la infeccin. Otra estructura importante puede ser el glicocaliz, que es tpico de todas las bacterias patgenas. En el interior de las bacterias encontramos: - Su citoplamas que se caracteriza porque: 1- no presenta orgnulos. 2- no tiene citoesqueleto (actina y miosina).

3- hay muchos ribosomas. 4- no aparato de Golgi. 5- material gentico no separado del resto del citoesqueleto, normalmente una cadena de ADN doble circular. 6- Algunas bacterias pueden tener cadenas de ADN ms pequeas denomidas: plsmidos. Estos segmentos de ADN codifican estructuras que le dan ventajas en determinadas condiciones para la infeccin etc, pero nunca codificarn funciones esenciales para su supervivencia. Flagelos. Tiene forma de espiral. Se insertan tanto a la membrana celular como a la pared celular. Tienen su origen en el citoplasma ya que necesitan ATP para desarrollar el movimiento. Giran como una hlice, facilitando el movimiento de la bacteria. Las proteinas de los flagelos son antignicas, Ag-H. Las bacterias se clasifican en tres grupos en funcin del flagelo: - Monotricos: un nico flagelo. - Dofotricos: varios flagelos que salen de un mismo sitio y forman una especie de penacho. - Peritricos: tienen muchos flagelos por su superficie. Pelos. Su codificacin para su formacin se encuentra en genes auxiliares, plsmidos. Hay dos tipos: - comunes: son formaciones filiformes. Complejos proteicos. Rectos e inmviles Su funcin es fijar las bacterias a la superficie, es decir, son anclas que la bacteria utiliza para anclarse a las superficies y no ser arrastradas por los fluidos. - Sexuales: Iguales caractersticas que las anteriores pero con funciones diferentes. Actuan como puente conectando dos bacterias permietiendo transmitir ADN, en forma de plasmidos, de una bacteria a otra. Los pelos sexuales son la principal fuente de transmisin y variabilidad de las bacterias. Tienen mucha importancia en la propagacin de resistencias a antibiticos. Virus bacterianos. Las bacterias tienen sus propios virus que se llaman: bacterifagos. Tienen una morfologa similar a la de los virus que forman parte de los organismo acelulares. Tienen morfologa hexagonal y presentan una estructura que sobresale, que constituye la cola del virus (q los virus animales no la tienen) y que es imprescindible para infectar a las bacterias. Esta cola sirve para solventar la pared rgida y gruesa de las bacerias. Acta como una jeringuilla que inocula el virus. Esporas. Las esporas, como se ha dicho antes, son clulas disecadas, sin metabolismo que permiten a la clula sobrevivir en condiciones adversas durante un tiempo ilimitado.

Tcnicas de tincin. Fundamentos

El tamao de la mayora de las clulas bacterianas es tal que resultan difciles de ver con el microscopio ptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la clula y el medio que la rodea, y el medio ms simple de aumentar el contraste es la utilizacin de colorantes. Estos pueden emplearse para distinguir entre tipos diferentes de clulas o para revelar la presencia de determinados constituyentes celulares, tales como flagelos, esporas, cpsulas, paredes celulares, centros de actividad respiratoria, etc. Las clulas generalmente son tratadas para coagular el protoplasma antes de teirlas, proceso llamado fijacin. Para bacterias, la fijacin por el calor es lo ms corriente, aunque tambin puede fijarse con sustancias qumicas como formaldehido, cidos y alcoholes. Despus de la fijacin, si se aade el colorante, no se producen ulteriores cambios estruturales en el protoplasma. La fijacin se realiza habitualmente en clulas que han sido fijadas sobre un portaobjetos, tratando despus ste con el agente fijador, y siguiendo inmediatamente el proceso de tincin. La fijacin produce habitualmente el encogimiento de las clulas; la tincin, por el contrario, hace que las clulas aparezcan mayores que lo que son realmente, de manera que las medidas de las clulas que han sido fijadas o teidas no pueden realizarse con mucha precisin. La mayora de los colorantes son compuestos orgnicos que tienen alguna afinidad especfica por los materiales celulares. Muchos colorantes utilizados con frecuencia son molculas cargadas positivamente (cationes) y se combinan con intensidad con los constituyentes celulares cargados negativamente, tales como los cidos nucleicos y los polisacridos cidos. Ejemplos de colorantes catinicos son el azul de metileno, el cristal violeta y la safranina. Otros colorantes son molculas cargadas negativameute (aniones) y se combinan con los constituyentes celulares cargados positivamente, tales como muchas protenas. Esos colorantes incluyen la eosina, la fucsina cida y el rojo Congo. Otro grupo de colorantes son sustancias liposolubles; los colorantes de este grupo se combinan con los materiales lipdicos de la clula, usndose a menudo para revelar la localizacin de las gotculas o depstos de grasa. Un ejemplo de colorante liposoluble es el negro Sudn. Algunos colorantes teirn mejor slo despus de que la clula haya sido tratada con otra sustancia qumica, que no es un colorante por s mismo. Esta sustancia se denomina mordiente; un mordiente habitual es el cido tnco. El mordiente se combina con un constituyente celular y lo altera de tal modo que ahora s podr atacar el colorante. Si se desea simplemente incrementar el contraste de las clulas para la microscopa, son suficientes los procedimientos simples de tincin. El azul de metileno es un buen colorante

simple que acta sobre todas las clulas bacterianas rpidamente y que no produce un color tan intenso que oscurezca los detalles celulares. Es especialmente til para detectar la presencia de bacterias en muestras naturales, puesto que la mayor parte del material no celular no se tie. La tincin negativa es el reverso del procedimiento de tincin usual: las clulas se dejan sin teir, pero se colorea en cambio el medio que las rodea. Lo que se ve, por tanto, es el perfil de las clulas. La sustancia utilizada para la tincin negativa es un material opaco que no tiene afinidad por los constituyentes celulares y que simplemente rodea las clulas, tal como la tinta china (que es una suspensin de particulas de carbono coloidal) o la nigrosina (un colorante negro insoluble en agua). La tincin negativa es un modo satisfactorio de aumentar el contraste de las clulas en la microscopia ptica, pero su mxima utilidad est en revelar la presencia de cpsulas alrededor de las clulas bacterianas. Los mtodos de tincin son de gran utilidad, pero deben usarse siempre con precaucin, ya que pueden conducir a errores. Las molculas de colorante forman en ocasiones precipitados o agregados que parecen estructuras celulares autnticas, pero que son formaciones completamente artificiales inducidas por el mismo colorante. Tales estructuras se denominan artefactos, y deben tomarse muchas precauciones para tener la seguridad de que no nos estamos equivocando al creer que un artefacto es una estructura realmente existente.

Preparacin de un frotis
Sobre un portaobjetos de vidrio, limpio y seco, se coloca una gota del material que se va a teir (si es lquido) o se hace rodar el hisopo con que se tom la muestra. Una vez que el hisopo ha tocado la superficie del portaobjetos, que no est estril, ya no puede ser empleado para inocular los medios de cultivo. Puede usarse una aguja estril para transferir una pequea cantidad de un cultivo bacteriano a la superficie del portaobjetos. Este material es suspendido en una gota de agua o solucin salina previamente colocada sobre el portaobjetos. Cuando se trata de colonias muy pequeas que pueden perderse en una gota de lquido se emplea una varilla delgada de madera estril con la cual se toca la colonia obtenindose as una fraccin apreciable del desarrollo. El material se frota directamente sobre el portaobjetos, donde puede visualizarse con facilidad. El material colocado en el portaobjetos se deja secar al aire o bien se pasa varias veces por la zona azul de la llama de un mechero de Bunsen hasta que el vidrio est tan caliente que moleste al tacto pero no queme

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