Revista de la Facultad de Medicina versin impresa ISSN 0798-0469 RFM v.25 n.1 Caracas ene.

2002

EFECTOS DE EXTRACTOS VEGETALES SOBRE LA ABSOCIN INTESTINAL DE GLUCOSA Y SU CAPTACIN POR VESCULAS DE MEMBRANA APICAL DE ENTEROCITOS AH Mrquez1, N Motta1 y F Gonzlez-Mujica1.
1. 1 Seccin de Bioqumica Mdica. Instituto de Medicina Experimental. Facultad de Medicina. Universidad Central de Venezuela.

RESUMEN: en el presente trabajo se midi el efecto que los extractos acuosos de las hojas Bauhinia megalandra, Momordica charantia y Taraxacum officinale, tienen sobre la absorcin intestinal de glucosa, utilizando segmentos intestinales aislados. Tambin se estudi el efecto que el extracto de B. megalandra tienen sobre la captacin de [14C]-glucosa por vesculas de borde apical de enterocito por el mtodo de la filtracin rpida. La absorcin intestinal de glucosa fue inhibida solamente por el extracto de B. megalandra, en una manera dependiente de la concentracin y con un efecto aditivo al de la floricina. La captacin de [14C]-glucosa por vesculas de borde apical de enterocito fue drsticamente inhibida por la presencia del extracto de B. megalandra, siendo su efecto de una magnitud similar al de 1 mM floricina. El extracto de las hojas de B. megalandra inhibe la absorcin intestinal de glucosa por bloquear el cotransportador Na+-glucosa. Palabras Clave: Bauhinia megalandra, Momordica charantia, Taraxacum officinale, Absorcin intestinal de glucosa, Captacin de glucosa. Abstract: The effect of the aqueous extract of leaves from Bauhinia megalandra, Momordica charantia and Taraxacum officinale on the glucose intestinal absorption was measured, using isolated intestinal segments. Also the effect of B. megalandra leaves extract on the [14C]-glucose uptake by enterocyte brush border membrane vesicles was studied, by the fast filtration method. The B. megalandra leaves extract was the only one able to inhibit the intestinal glucose absorption in a concentration dependant way and additive to phlorizine. B. megalandra leaves extract

drastically reduced the [14C]-glucose uptake by enterocyte brush border membrane vesicles in a similar amount as 1 mM phlorizine does. B. megalandra leaves extract inhibited intestinal glucose absorption by blocking the Na+-glucose cotransporter. Key Words: Bauhinia megalandra, Momordica charantia, Taraxacum officinale, Intestinal glucose absorption, Glucose uptake.

INTRODUCCIN Existen diversas plantas empleadas tradicionalmente en el tratamiento de la diabetes como hipoglicemiantes orales, entre las cuales se encuentran Momordica charantia, Bauhinia megalandra y Taraxacum officinale. La glicemia depende entre otros factores del aporte de carbohidratos en la dieta, los cuales deben ser digeridos y la glucosa resultante absorbida. La absorcin de glucosa en el intestino delgado se realiza en 2 fases: La glucosa es transportada a travs de la membrana apical mediante un transportador sodioglucosa (SGLT1), hacia el interior del enterocito. Cuando se acumula la glucosa dentro de la clula, circula a favor de su gradiente a travs de la clula hasta la membrana basolateral, donde por difusin facilitada (GLUT2), llega al plasma. Gonzlez-Mujica, et al(1), demostraron que extractos acuosos de B. megalandra inhiben la neoglucognesis de rebanadas de hgado de ratas y producen una inhibicin no competitiva del transportador de la glucosa-6-fosfato del complejo glucosa-6-fosfatasa microsomal heptica. Delgado, et al(2), encontraron que el extracto acuoso de M. charantia produce una inhibicin competitiva del transportador de glucosa-6-fosfato del complejo de la glucosa-6-fosfatasa microsomal heptica. Ramrez y Van Cooten(3) encontraron que los extractos acuosos de M. charantia y B. megalandra producan una estimulacin de la secrecin de insulina por islotes pancreticos aislados de ratas. Gonzlez-Mujica, et al(4)demostraron la inhibicin de la neoglucognesis y de la glucosa-6-fosfatasa por dos flavonas purificadas a partir de extractos metanlicos de B. megalandra. En el presente trabajo nos proponemos determinar el efecto de extractos acuosos de M. charantia, B. megalandra y T. officinale, en la absorcin intestinal de D-glucosa y en la captacin de D-glucosa por vesculas de membrana apical de enterocitos de rata. MATERIALES Y MTODOS La planta B. megalandra fue recolectada en la U.C.V. en Junio de 1999. Las plantas de M. charantia y T. officinale se recolectaron en los Altos Mirandinos en Noviembre de 1998. Las tres

plantas fueron identificadas por el Dr. S. Tillet, en el Herbario Ovalles de la facultad de Farmacia de la U.C.V. Cada uno de los extractos se prepar hirviendo las hojas de las plantas durante un minuto en agua destilada en la proporcin de 1 g de hojas por 5 mL de agua. Se dejo enfriar a temperatura ambiente y se ajust el pH a 7. La absorcin intestinal de glucosa fue medida utilizando la metodologa descrita en Rendina(5). Se aisl membrana apical de enterocitos de intestino de rata siguiendo la metodologa de Kessler, et al(6). La pureza relativa de la fraccin de vesculas se estim midiendo la actividad de las siguientes enzimas marcadoras: Maltasa(7), Na+, K+, ATPasa, sensible a Ouabana(8), Succinato Citrocromo-c-reductasa(9) y b-glucuronidasa(10) y por microscopa electrnica. La captacin de D-[14C]glucosa por vesculas de borde apical se ensay por el mtodo de filtracin rpida descrita por Hopfer, et al(11), en ausencia y presencia del extracto vegetal. RESULTADOS Debido a que en los 16 primeros centmetros de intestino delgado (4 segmentos de 4 cm c/u), la absorcin de glucosa permanece constante (resultados no mostrados), para los experimentos de absorcin la colocacin de las diferentes muestras se realiz de forma aleatoria. En la figura 1A se observa que 52 UA264m del extracto de B. megalandra, tienen un efecto inhibitorio de la absorcin de glucosa, por el contrario cantidades iguales de los extractos de M. charantia y T. officinale no presentan efectos sobre este proceso. En la figura 1B se observa que a medida que incrementa la concentracin del extracto deB. megalandra desde 13 UA264m a 104 AU264m, incrementa la inhibicin de la absorcin de glucosa, indicando un efecto dosis-dependiente. En la figura 1C se observa que el extracto de B. megalandra y la floricina aparentemente realizan una inhibicin aditiva de la absorcin de glucosa, indicando que posiblemente la accin inhibitoria del extracto B. megalandra, se realiza a nivel del cotransportador sodio-glucosa (SGLT1). Los resultados de la enzimas marcadoras y de la microscopa electrnica (resultados no mostrados) sugieren que las vesculas obtenidas representan una fraccin altamente enriquecida con membrana apical de enterocito de rata (10 veces) y con una contaminacin poco importante con otras membranas celulares (0.5 veces). La figura 2 muestra que el mximo de la captacin de D-[14C]glucosa por vesculas de membrana apical de intestino se alcanza a los 30 segundos, para luego descender hasta los 45 segundos, donde se alcanza un plateau hasta los 150 segundos. Cuando se incubaron las vesculas con floricina (1 mM) o con extracto B. megalandra (52 UA264), se observa claramente la inhibicin del mximo de captacin de D-[14C]glucosa observado a los 30 segundos. Figura 1 : Efecto de extractos vegetales y floricina sobre la absorcin intestinal de glucosa

En 4 segmentos consecutivos de intestino, se inyecto 1 mL de solucin 10 mM de glucosa, en ausencia (G) o presencia de 52 UA264 de extractos de M. charantia (CA) o B. megalandra (CV) o T. officinale (DL), Fig 1A. En ausencia (0) o presencia de concentraciones crecientes del extracto de B. megalandra (CV), Fig 1B. En presencia del extracto (G + CV) o en presencia de floricina (G + F) o en presencia del extracto y la floricina (G + CV +F ), Fig 1C. A los 30 min. se determin la cantidad de glucosa absorbida. Todos los datos representan el promedio desviacin estndar de 6-9 determinaciones independientes. Figura 2: Captacin de D-[14C]glucosa por vesculas de borde apical de enterocito de rata

Las vesculas cargadas internamente con KCl 100 mM, fueron incubadas con 2 mM de glucosa y 100 mM de NaCl (). Con 50 UA264nm del extracto acuoso de B. megalandra (?). Con 1mM de floricina.(?). Todos los datos representan el promedio desviacin estndar de 9-10 determinaciones independientes. DISCUSIN

Los resultados del presente trabajo sugieren fuertemente que la inhibicin de la absorcin intestinal de D-glucosa, producida por el extracto acuoso de B. megalandra y observado en los experimentos in vivo, es la consecuencia de la inhibicin del transportador SGLT1, presente en la membrana apical, como se demostr en los experimentos de captacin de D-[14C]glucosa. El efecto inhibitorio del extracto acuoso de las hojas de B. megalandra sobre la absorcin intestinal de glucosa y sobre la captacin de D-[14C]glucosa por vesculas de membrana apical de enterocito, se debe posiblemente a la presencia de flavonoides, los cuales han sido sugeridos como responsables del efecto hipoglicemiante de los extractos de esta planta(12). El espectro de absorcin (resultados no mostrados) del extracto de B. megalandra muestra un pico a 264 nm, longitud de onda a la cual los flavonoides poseen su mximo de absorbancia y posiblemente la ausencia de este pico en los espectros de M. charantia y T. officinale sea responsable de que los extractos acuosos de estas plantas no tengan efecto alguno en la absorcin intestinal de glucosa. El extracto acuoso de B. megalandra pudiera ser til en el control de la hiperglicemia del diabtico, ya que inhibe la absorcin intestinal de glucosa. CONCLUSIONES Los extractos de T. officinale y M. charantia, no modifican la absorcin intestinal de glucosa. El extracto acuoso de las hojas de B. megalandra, inhibe la absorcin intestinal de glucosa, de una manera dosis-dependiente a nivel del SGLT1, posiblemente por la presencia de flavonoides. El extracto acuoso de B. megalandra inhibe la captacin de D-[14C]glucosa a nivel del transportador SGLT1 presente en la membrana apical del enterocito de rata. AGRADECIMIENTOS Al Dr Julio Vivas por su colaboracin en la discusin del presente trabajo. Al Consejo de Desarrollo Cientfico y Humanstico de la U.C.V., por el soporte econmico (PI 09-33-4788-2000).

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS 1. Gonzlez-Mujica F, Motta N and Becerra A. Inhibition of Hepatic Neoglucogenesis and Glucose6-Phosphatase by Aqueous Extract of Bauhinia megalandra Leaves. Phytother. Res. 1998; 12: 291293. [ Links ] 2. Delgado A, Cabrera P, Motta N y Gonzlez-Mujica F. Efecto del extracto acuoso de Momordica charantia sobre la glucosa-6-fosfatasa y sobre la neoglucogenesis. VIII Congreso Latinoamericano de Etnomedicina. Valparaiso-Chile. 1999. [ Links ] 3. Ramrez Z. y Van Cooten V. Efectos de extractos acuosos de hojas deMomordica charantia y Bauhinia megalandra sobre la liberacin de insulina por islotes de langerhans aislados

de pancras de rata.Trabajo especial de grado. Facultad de Medicina. Escuela de Bioanlisis. Universidad Central de Venezuela. 1999. [ Links ] 4. Gonzlez-Mujica F, Motta N, Perdomo E, Mndez J y Hasegawa M. Inhibicin de la neoglucognesis y de la glucosa-6-fosfatasa heptica por flavonas purificadas a partir de hojas de Bauhinia megalandra. Rev. Latinoam. Qum. 2000; 28: 127-8. [ Links ] 5. Rendina G. Tcnicas de bioqumica aplicada. Mxico. Interamericana. 1974; p 191. [ Links ]

6. Kessler M, Acuto O, Storellic C, Murer H, Muller M and Semenzag G. A modified procedure for the rapid preparation of efficiently transporting vesicles from small intestinal brush border membranes. Biochem. Biophys. Acta. 1978; 506: 136-154. [ Links ] 7. Pradere JD. Efecto de la tioacetamida sobre el transporte renal de glucosa. Tesis de M. Sc. En Ciencias Fisiolgicas. Facultad de medicina. Universidad Central Venezuela. 1987. [ Links ] 8. Del Castillo JR and Robinson. The simultaneous preparation of basolateral and brush-border membrane vesicles from guineag-pig intestinal epithelium, and the determination of the orientation of the basolateral vesicles. Biochem. Biophys. Acta. 1982; 668: 45-56. [ Links ] 9. Green DE, Mii S and Kohout PM. Studies on the terminal electron transport sistem. Biochem J. 1955; 217: 551-567. [ Links ] 10. Bergmeyer H. Methods of enzymatic analysis. Academic Press. 2da ed. New York. 1965; p. 869. [ Links ] 11. Hopfer U, Nelson K, Perroto J and Isselbacher KJ. Glucose transport in isolated brush border membrane from rat small intestine. J. Biol. Chem. 1973; 248: 25-32. [ Links ] 12. El-Wahab, Wassel GM and Armmar N. Flavonoid constituents in the different organs of selected Bauhinia species and effects on blood glucose. Herba Hung. 1987; 26: 27-39. [ Links ]

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