Apontamentos para o 2.

Teste escrito Biologia Celular e molecular I Mestrado Integrado em Medicina Dentria 2013-2014

Tcnicas Citolgicas: Conjunto de operaes a que preciso submeter o material biolgico para ficar em condies de ser observado ao microscpio.

Estas tcnicas podem ser divididas em dois grandes grupos de preparaes: Para microscopia tica e para microscopia eletrnica. Microscopia tica: Existem trs mtodos de preparao de material biolgico para ser observado ao microscpio tico: 1) Preparaes a fresco: Pode ser utilizada a qualquer momento porque permite a observao rpida e imediata; Permite a observao de peas ou micro-organismos em condies de vida, apesar de ser por um curto perodo de tempo; Por vezes usam-se lminas diferentes na preparao a fresco: Lminas escavadas (tem uma cavidade no centro): o material fica assim rodeado de maior quantidade de lquido e ao mesmo tempo no h compresso da lamela sobre as estruturas a observar.

Limitaes do exame a Fresco: o S se aplica a material suficientemente finos e transparentes; o A nutrio das clulas no suficiente e em poucas horas as clulas comeam a morrer; o A observao tem uma durao muito limitada, so portanto preparaes breves que no se podem conservar.

2) Preparaes definitivas sem incluso: 3) Preparaes definitivas com incluso: Observao in vivo: o Corresponde ao estudo das clulas no seu prprio meio.

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o Permite o estudo dos seres vivos de pequenas dimenses (protozorios e bactrias). Observao in vitro: o Permite o estudo das clulas vivias, sendo estas retiradas do meio natural em que vivem e colocadas em solues com composio qumica bem definida, de modo a que o metabolismo celular de processe sem qualquer alterao. Lquidos Fisiolgicos: Para observar todas as manifestaes vitais do material em estudo, procura-se rodear a pea por lquidos favorveis sua vivncia, cuja osmolaridade deve igualar aquela em que o ser vivo realmente vive. 1) Lquido fisiolgico (artificial): o Soluo aquosa de cloreto de sdio 9/1000 para clulas de mamferos e 7/1000 para clulas de animais poiquilotrmicos; 2) Lquido fisiolgico do tecido sanguneo (plasma sanguneo): o Obtido por coagulao seguido de centrifugao, adio de anticoagulante, centrifugao e colheita do plasma sanguneo; 3) Lquido de Ringer: o Usado para exame de clulas de invertebrados e vertebrados pouqilotermicos; o Alm de isotonia, oferece os elementos minerais existentes nos meios em que as clulas vivem e cuja sua falta vai prejudicar o seu metabolismo e a sua estrutura.

Colorao vital: o Para por em evidncia certas estruturas celulares; o Os corantes aumentam o contraste e permitem distinguir regies com o mesmo ndice de refrao; o Para que o protoplasma no morra so usadas solues muito diludas de corantes vitais, tais como: azul-de-metileno, vermelho neutro, azul do Nilo, Verde Janus. Em concentraes da ordem de 1/10.000 a 1/50.000;

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o Com as coloraes vitais observamos para alm da clula e microrganismos: granulaes de secreo, vacolos digestivos,

grnulos, organelos citoplasmticos e ainda partes do ncleo. Corantes Metacromticos: Coram certas estruturas celulares com cores diferentes das suas.

o Para que a morfologia das clulas permanea intacta devem ser utilizadas solues isotnicas na observao de clulas a fresco. o Quando se utiliza uma soluo hipotnica, a gua do meio difunde para o interior das clulas, aumentando p seu tamanho e provocando turgidez celular. o Se a soluo for muito hipertnica, as clulas podem mesmo sofrer lise celular, uma rutura em certos pontos da membrana (apenas nas clulas animais). o Se pelo contrrio a concentrao for hipertnica, a gua sa de dentro da clula para o meio extracelular, e a clula fica plasmolisada.

Aps ter verificado este fenmeno de isotonizao (Fig. 1), fazer penetrar por difuso uma soluo de sacarose 1 M (soluo hipertnica) com o auxlio de papel de filtro e de uma pipeta (no esquecer que a imagem final obtida no microscpio invertida). Lentamente, verifica-se uma exosmose e d-se o fenmeno de plasmlise; observar tambm com a obj. de 40x. Em seguida, pelo mesmo processo de difuso, retirar a soluo de sacarose e fazer penetrar gua (soluo hipotnica). Verifica-se uma endosmose e d-se o fenmeno de desplasmlise.

Utilizando uma lanceta estril, fazer a colheita de uma gota de sangue, a qual sem perda de tempo, se coloca entre lmina e lamela numa gota de sol. de NaCl 0,9% (soro fisiolgico) isotonia.

Apontamentos para o 2. Teste escrito Biologia Celular e molecular I Mestrado Integrado em Medicina Dentria 2013-2014 Repetir 2 e 3 utilizando uma soluo de NaCl 1,5% (sol. hipertnica). Os glbulos vermelhostornam-se globosos e eriados plasmlise Repetir o procedimento utilizando NaCl 0,6%. A clula aumenta de volume devido a uma endosmose, mas a presso exercida no interior da clula no suficiente para a fazer rebentar, verificando-se o fenmeno de turgidez celular. Repetir o procedimento utilizando uma soluo de NaCl 0,4%. A quantidade de gua que penetra no interior da clula exerce uma presso que faz romper a membrana celular, libertando a hemoglobina e tornando a clula mais plida e transparente, designada vulgarmente por fantasma. (O meio que a rodeia apresenta-se com uma tonalidade avermelhada.) Contudo, a clula mantm a sua forma circular, devido presena do citoesqueleto submembranar, que responsvel pela forma dos glbulos. O fenmeno de lise celular em glbulos vermelhos designa-se por hemlise. Nota: Na clula vegetal no se verifica a lise celular pelo facto de possuir uma parede celular que, no s confere proteo clula, como faz com que ela suporte presses elevadas.