Control de Calidad

en parasitologla
Dra. Enedina JimenezCard050
unam.mx
2006 por Editorial Prado, S.A. de C.V.
Todoslosderechosreservados,NingunapartedeestapUblicacion
debe ser reproducida, almacenada en sistema alguno 0
transmitidaporotromedio-electronico,mecanico,fotocopiador,
registrador, etc.- sin permiso previaporescrito de la Editorial.
All rights reserved. No part of this publication may be re-
produced, stored in a retrieval system, or retransmit-
ted, in any form or by any means, electronic, mecha-
nical, photocopying, recording or otherwise, without
the prior permission in writing from the publisher.
ISBN 968-6899-79-0
Editorial Prado, SAde c.v.
Tehuantepec No. 34
Col. Roma Sur
c.P. 06760
Mexico, D.F.
www.editorialprado.com.mx
Supervision: Dionisio Damiani Lopez
Diseno de Portada: D.G. Iran A. Zarza Martinez
Formacion: D.G. IranA. Zarza Martinez
Fotografias: BioI. ApolinarCano Estrada
Agradeceremossussugerencias,
observaciones y comentarios a:
editorial_prado@yahoo.com.mx
TeL/Fax: (55) 19-99-80-83Y57-62-91-60
en atencion a:
Sr. Dionisio Damiani Lopez
Impreso en Mexico
Printed in Mexico
E:INAJIMENEZ CARDOSO

Tiene la Licenciatura de Ingenieria Bioquimica, Maes-
tria yDoctorado en Ciencias con Especialidad en Bioqui-
mica, otorgados por la Escuela Nacional de Ciencias Bio-
logicas (ENCB) del Instituto Politecnico Nacional (IPN),
Mexico, D.F, Investigadora Titular "C" de los lnstitutos
Nacionales de SaIud, Jefa del laboratorio de investiga-
cion en parasitologia del Hospital Infantil de Mexico "Dr.
Federico Gomez", Es miembro titular del Sistema Nacio-
nal de Investigadores Nivel II. Ha publicado 74 articulos
sobre investigaci6n relacionados abioqufmica ybiologfa
molecular de parasitos publicados en revistas nacionales
e internacionales. Ejerce la docencia en los niveles de
postgrado en el IPN yen la Universidad Nacional Autono-
ma de Mexico (UNAM), ala fecha ha impartido 112 cursos
sobre biologfa molecular de parasitos anivel de doctora-
do, maestria, diplomado y especialidad. Es editora de 5
libros sobre Biologia Molecular en Ciencias Medicas y 15
capftulos de libros de investigacion, publicados en revis-
tas nacionales yextranjeras con 82 citas de sus articulos.
Ha formado 53 recursos humanos anivel de Iicenciatura,
8de maestria y2de doctorado.
Parasitos Intestinales
(Protozoarios)
1. METODO COPROPARASITOSCOPICO POR
CONCENTRACION-FLOTACION
1.1. ESPECIMEN DE ESTUDIO
Muestra de materia fecal.
1.2. METODO
Observaci6n microsc6pica de formas parasitarias obtenidas, por
concentraci6nflotaci6n, a partir de muestras de materia fecal
(metodo coproparasitosc6pico de Faust en serie de tres).
1.3. FUNDAMENTO
EI procedimiento de flotaci6n permite la separacj6n de quistes de
protozoarios y de algunos huevos de helmintos mediante el uso
de sulfato de zinc con una gravedad especffica alta (8= 1.18).
(AVll\JlO I
ParAS/lOS In(E'5IJfla/es(PrOWlOooOS)
Las formas parasitarias son recuperadas de una muestra de
materiafecal, en la superfic'lede lasolucion de sulfatode ZinC,
mientras que los desechos celulares de la muestra se locali-
zan en la parte inferior del tubo. Las formas parasitarias son
tenidas con lugol yobservadas al microscopio para su identi-
ficacion.
EI analisis se l\evara acabo en muestras de materia fecal de
pacientescon signosysfntomasclfnicospresuntivosde para-
sitosis intestinal (APENDICE 1).
2. FASE PREANALlTlcA
2.1. PAC/ENTE YCOLECC/ON DE MUESTRAS
El pacienle debe especificar cuando este sometido aregi-
men farmaco16gico de cualquiertipo.
La muestra sera la primera de la manana yremitida al labo-
ralario.
Se recomienda recolectarde5-109de materia fecal (diarrei-
cas0 formadas).
Cuando el paciente sea un bebe, la muestra se tomara del
panal inmediatamente despuesde la emisi6n.
Las muestrasseran detresdiasconseculivos, (enelcasode
sospechade amibiasis, sepueden extenderhastaseis) ysi es
posible entregarseel mismodfade la emisi6n.
La muestra se almacena en un recipiente de bocaancha, de
vidrio0 plastico, limpio, seco, sin residuosorganicossolidos0
liquidosycon tapa hermetica.
Por seguridad este recipiente sera transportado a\ laborato-
rio en una bolsade plastico.
...
(/lPlfUlO I
(onrroJ dE' C a d ~ d err Para!lilOlogia
LAS MUESTRAS SERAN INACEPTABLES EN LAS SIGUIENTES
CONDICIONES:
Muestras contaminadas con agua uorina.
Muestrasde pacientesque hayan consumido bario en los
Oltimos cinco dfas.
Muestras que tengan mas de cinco dfas de emisi6n.
Muestras que presenten contaminaci6n visible con agen-
tes qufmicos, ffsicos y/o biologicos.
Muestras de pacientes que esten en tratamiento con un
medicamento que interfiera en la determinacion.
Muestras en serie que hayan sido emitidasen un solo dia
(deben serde tres dias diferentes).
Muestrasque hayan sidecolectadasdentro de un periodo
mayora10 dfas.
Muestras que hayan side almacenadas a temperaturas
inferiores a 0C y mayores a 50C.
2.2. MANEJO DE MUESTRA
EI analista debe usar bata, guantes ycubrebocas como
medida minima de seguridad.
Cada muestra sera rotulada con la siguiente informacion:
'Fecha decoleccion de la mueslra
*Nombre y numero de idenlificacion delpacienle
*Fecha y nombre delanalisla.
*Indlcaciones especiales (Ejm. uso de medicamenlos)
Todas las muestras frescas deben ser manejadas con
extremo cuidado, debido aque constituyen fuentes impor-
tantes de organismos infecciosos, como bacterias, virus y
parasitos, deben ser acompanadas de una hoja de requi-
sicion yde ser posible una historia cllnica con datos de
importancia para el diagnosticocorrecto (APENOJCE 2)
Para encontrar trofozoitos de protozoarios en las mues-
tras diarreicas es recomendable examinarlasdentro de los
treinta minutos siguientesasu emisi6n, si esto no es posi-
..
(.IIPlllILO 1
Paf,hi,os /n/eS-V()dJes (PfOfozOdrios)
ble adicionar un fijador para conservar la muestra yalma-
cenarla a4C para ser analizadas posteriormente.
Las muestras no diarreicas pueden ser analizadas hasta
24 horas despues de su emisi6n, 0 bien pueden ser alma-
cenadas en un conservador por mas tiempo. Existen una
serie de conservadores qufmicos, que pueden ser utiliza-
dos para la preservaci6n mortologicade las tormas parasi-
tarias en heces, de ellos se puede escogeruno de acuerdo
al tipo de muestra que se tenga.
2.3.INSTALACIONES
Debe existir un area de recepcion de muestras yun area
diferente para desarrollar la metodologfa, en este espacio
deben estar al alcance todos los materiales requeridos y
debe estar restringido para actividades tales como comer,
beber, fumar, etc.
3. FASE ANALlTlCA
3.1. EoulPo DE LABORATORIO
Centrifuga clfnica
Microscopio optico con objetivomicrometrico
Oensitometro
Balanza granataria
3.2. MATERIAL BASICO
Embudo de plastico
Malia de alambre galvanizado
..
CArlIUlO I
Comrolde C.liddd en
Abatelenguas de madera
Pizeta de plastico
Cron6metro
Gradilla
Probetas
Agitador magnetico
Cubreobjetos
Portaobjetos
Tubos de ensaye (13 x100)
3.3. MUESTRAS DE REFERENCIA
Control positivo (+): Muestrasdemateriafecal en formalina
al 5% con diagn6sticopositivode parasitosisconocidas.
Control negativo (-): Muestra de materia fecal con diag-
nostico negativo conocido.
3.4. REACT/VOS
Formalina 5%: Conservador de huevos ylarvas de hel-
mintosyquistes de protozoarios.
Formaldehfdo USP""".." " 50 mL
NaCI 0.85% " ".950mL
Mezclarel formaldehfdo en la solucion salinayagitarcon
agitadormagnetico. (EI formaldehidogeneral mentese ven-
de en una presentacion al 37-40 %, sin embargo para la
preparacion de formalina se consideracomo al 100%).
Almacenar en un trascode vidrio con tap6n de rosca.
Rotularcomo Formalinaal 5%, incluyendolatechade ca-
ducidad de 12 meses posterior ala fecha de elaboraci6n.
Lugol-Yoduro:
Yoduro de Potasio (KI}........ "........... 109
Yodo (I) ....... ".. "" "."".. "" " 59
Agua destilada"" """"." " 100mL
..
I
CAPITULO I
ParasilOS (PrOlOlOdrJOS)
Disolver el KI yel Ien el agua destilada en un matraz de
vidrio adecuado utilizando un agitador magnelico (evitar la
presencia de cristales precipitados).
Almacenar en un frasco de vidrio ambar para proteger
de la luz.
Rotular como Lugol-Yoduro, indicando la fecha de ca-
ducidad que es de dace meses apartir de la fecha de
elaboracian.
Cadavez que se va autilizarse hace unadilucian 1:5can
aguadestilada(estapuede usarsedentrode los 10-14dfas
siguientes).
oChecar laaparienciaffsica antes de usar.
Soluci6n Salina (NaCI 0.85%)
NaCI. ",.",.",." ".." "., 0.85 9
Agua destilada 100mL
oDisolverel NaCI en el aguacan agitadormagneUco
oAlicuotar en frascos de 10 mL tadala soluci6n
oRotularcomo soluci6n salina, incluyendola fechade cadu-
cidad pardacemeses posteriorala fecha de elaboraci6n.
Esterilizar a121 aC durante 15 minutos.
Guardara4ac.
Sulfatode Zinc 33%, ZnS04 (Soluci6n acuosa)
Sulfato de zinc."""" 330 9
Agua destilada "." 670 mL
Disolver ef sulfato de zinc en el agua en un matraz de
vidrio adecuado utilizando un agitador magnetico.
o Ajustarlagravedadespecifica(8) a1,18 par la adician de
sulfatode zinc aagua desti/ada, segun sea el caso.
o En el caso de muestras frescas formalinadas usar sulfato
de zinc con gravedadespecifica (8 )de 1.20.
Aforaryguardaren frascos de vidrio can tapan de rosca.
CAPiTULO I
(owolde (.Mad en Par.5i/ofogia
oMarcar el nombre del reactivo, la concentraci6n yla fe-
cha de caducidad de dace meses posterior ala fecha de
elaboraci6n.
Almacenara4ac.
oChecar lagravedadespecificaantesde usar.
3,5. CONTROL DE GAL/DAD
3.5.1. Calibraci6n delequipo
oTodos los equipos deben contar con una bitckora de uso
ycalibraci6n.
oLacentrifugadebecalibrarsecadadacemeses, cuidando
de que el rotor yel medidor de velocidad funcionen ade-
cuadamente.
oEI microscopio 6ptico debe calibrarse cada dace meses,
incluyendo los objetivos yel ocular micrometrico. Para de-
terminar el tamaiio del parasito se necesita calibrar cada
lente del microscopio para obtener el factor acoeficiente
micrometrico. (Apendice 3)
3.5.2. Eficiencia delmetodo de concentraci6n
porflotaci6n
Asegurarse que los reactivos esten en buenas condicio-
nes, antes de usarlos (formalina, soluci6n salina, lugol y
sulfatode zinc).
oLos microscopios y centrifugasdeben ser calibradoscada
dace meses.
oAI momenta del usa los oculares yobjetivos deben estar
cali bradas y limpios.
Es importanle contarcan fotograffas ylaminillascan pre-
paraciones permanenles de formas parasitarias perfecta-
mente bien idenlificadas.
.. ..
I
CAPITULO I
ParJsjlos In/esl,nalos(PrOl02Qarrosj
Los controres positivos seran formas parasitarias conser-
vadas en viales de coleccion.
Las muestras positivas deben ser analizadas cada 4 me-
ses, en caso de no observarse al microscopio deben ser
concenlrados y recuperados
Todos los resultados deben ser apropiadamente reglstra-
dos en la hoja correspondiente y tener un archivo ordenado
con el expediente de cada paciente (Apendice 4).
3.5.3. Errores ysustancias que interfieren
La eficiencia del metoda depende de la habilidad del ana-
lista, cuando los reactivos estan en condiciones optimas y
el equipo est a calibrado los principales errores son:
*Confusion de artefactos con formas parasitarias.
*Confusion de genera y/o especie del parasito observado.
Tambien existen sustancias que interfieren con la detec-
cion de protozoarios intestinales tales como:
*Aceite mineral
*Bario
*Bismuto
*Antibi6ticos y antiparasitarios
(tetraciclina, metronidazol, timidazol, hemetina).
Por esta razon, el analisis debe hacerse 10 dfas despues
de la ingestion de los mismos.
3.5.4. Artefactos mas comunes en el ana/isis de
concentraci6n pOl'flotaci6n
Componentes de la materia fecal tales como: residuos
de alimentos, productos de digesti6n, celulas epiteliales,
CAPtHILO I
(onrrolde CaiJdaden Parosiwlogia
leucocitos, eritrocitos, bacterias y material derivado de
celulas humanas.
Materiales presentes en las heces como: crista!es de
Charcot-Leyden, fibras vegetales, entre otros.
Otros elementos como son: algas, conidias, esporas,
elementos de plantas, granos de polen, esporas, artefac-
tos de tinci6n, espiras vegetales y levaduras
3.6. PROCEDIMIENTO DEL METODa
I Tomar la materia fecal fresca 0 en formalina y resuspen-
der en =10 mL de agua de la Ilave.
Mezclar bien hasta formar una suspensi6n homogenea.
Pasar la suspensi6n a traves de una malla de alambre
galvanizado y recoger directamente en un tubo de ensaye
(13x100).
Centrifugar a 500 x 9 durante 10 minutos, decantar el
sobrenadante.
Resuspender el sedimento con agua.
Centrifugar a 500 x 9 durante 10 minutos, decantar el
sobrenadante.
Resuspender el sedimento en aproximadamente 2 mL
de la soluci6n de sulfato de zinc (8= 1.18), homogeneizar
completame nte.
I Agregar sulfato de zinc hasta 0.3 cm por abajo de los
bordes del tubo.
I Centrifugar 10 minutos a 500 x g. (en este paso es muy
importante evitar las vibraciones).
AI final de la centrifugaci6n se van a observar dos fases
(el sedimento y la lase superior).
Agregar ZnS04 hasta formar un menisco sobre la super-
ficie de la soluci6n.
I Colocar dos gotas de la soluci6n de lugol, sobre un por-
taobjetos limpio y desengrasado.
0.pITlJLO I
PM.95ir05 (PrOlOZOdrim)
Colocar eJ cubreobjetos en la parte superior del tubo y
depositarlo sobre el portaobjetos, evitando la formacion de
burbujas.
Revisar sistematicamente al microscopio con el objetivo
10x.
5i se observan estructuras sospechosas se observa con
el objetivo 40x para una mejor identificacion
Notas:
* Se puede utillzar solucion salina en lugar de agua, esto es
sobre todo util en la identificacion de formas parasilarias como
Blaslocystis hominis, las cuales pueden deformarse en pre-
sencia de agua eimpedir elcorrecto diagnostico.
EI sulfalo de zinc que se utiliza debe lener una gravedad
especifica de 1.18, sin embargo para muestras formalinadas
serecomienda que sea de 1.20.
La gravedad especffica sedebe revisar cada vez que se va
aulilizar la solucion de sulfalo de zinc.
* Ellugol debe tener una coloracion inlensa, en caso conlrario
desechar y preparar nuevamenle.
3.7. LIM/TAG/ONES DEL METODa
Es poco eficaz para diagnostico de huevos de Taenia spp y
Faciola hepatica, as! como para el diagnostico de larvas y
otras form as parasitarias de alto peso molecular.
3.8. PRECAUGIONES
Las muestras se manejaran con la precaucion que requiere
el empleo de muestras biologicas (uso de guantes, bata y
trabajar en un area destinada unicamente al procesamiento
de las muestras).
(APlnILO I
(onuo) de (dT/dad en Porasilo/ogia
Es recomendable que las muestras diarreicas sean exa-
minadas dentro de los treinta minutos siguientes a su em i-
sian. Generalmente antes de este tiempo solo se pueden
observar trofozoftos.
En cuanto a las muestras semiformadas, estas seran ana-
lizadas en los siguientes 60 minutos de la emision y se
pueden observar, tanto trofozoftos como quistes.
En las muestras bien formadas solo se pueden observar
quistes de protozoarios, huevos y larvas de algunos hel-
mintos y trofozoftos de Dientamoeba tragilis.
Es irnportante contar con Ilustraciones de artefactos y es-
tructuras que pueden ser confundidas con formas parasita-
rias para comparar en momentos de duda y no dar resulta-
dos faIsos positivos
3.9. LlMITES DE REPORTE
EI resultado a reportar puede ser:
Negativo:
Ausencia de formas parasitarias en todas las muestras
analizadas.
Positivo:
Presencia de una 0 mas formas parasitarias en al menos
una de las muestras anal/zadas, En caso de ser positivo se
deben reporiar:
* Estadio 0 etapa
* Genero
* Especie
C
..
C"PITUtO I
PdrJ5ilO' IrlleSlrnale, (PrOlOloano,)
3.10. PARASITOS INTESTINALES COMUNMENTE DIAGNOSTICADOS
POR ESTE METODO DE CDNCENTRACION-FLOTACION
3,10. 1. Protozoarios
3.10.1. 1. CRYPTOSPORIDIUM PARVUM
Habitat:
Es un parasito del tracto gastrointestinal del huma-
no, y hasta ahara se han reportado una serie de
huespedes animales tanto salvajes, como domes-
ticos.
Enfermedad que produce:
Criptosporioidiosis,
Distribuci6n:
Cosmopolita,
Aspectos morfol6gicos:
EI oquiste es de forma oval ypuede Ilegar amedir
de 3-5 11m. Dentro de 131 se observa una estructura
anularque daposteriormenteorigen acuatroespo-
rozoitos, No se linen con azul de metileno ylugol,
por 10 que se requiere tinci6n acido-resislente con
Ziel-Nielhsen.
3,10.1.2. BLASTOCYSTJS HOMINIS (APENDICE 6, FIGURA 1).
Habitat:
Parasita el tracto gastrointestinal.
Enfermedad que produce:
Blastocistosis en pacientes inmunocomprometidos
Distribuci6n:
Cosmopolita
Aspectos morfol6gicos:
Los organismos son generatmente redondos mi- I
den entre 6-4011. Usualmente caracterizados par
un cuerpo central grande semejante a una gran
vacuolaymultiplesnucleos alrededor. Presenta un
f
C",plrlllO I
Con/rol de Caf,d.d en
area de cuerpo central que puede ser tenido con
tricromo 0 permanecer sin tenir. La forma amiboi-
dea puede ser vista en muestras diarreicas recien
emitidas aunque es muy diffcil de diagnosticar por
su gran heterogeneidad en tamano. Puede ser fa-
cilmente confundida con levaduras,
3. 10. 1.3, ENDOLIMAX NANA (APENDICE 6, FIGURA 2).
Habitat:
Es un parasito del tracto gastrointestinal
Distribuci6n:
Cosmopolita
Enfermedad que produce:
Esta especie se ha considerado como un comen-
sal, sin embargo es importante diferenciarlo de
otras especies pat6genas, sobre todo por que su
presencia indicaque el huesped esta infectadocon
otros organismos parasitarios.
Aspectos morfol6gicos:
Trofozoitos de 6-8 11m. Los quistes son ovales, de
6- 81l m, con cuatro nucleos. Estas especies suelen
confundirse con Entamoeba histolytica y Entamoe-
ba coli, sin embargo est aes mucho mas pequena
yla aparienciade losnucleoses caracterfsticapor
presentarun largo endosomas con poca cromatina
en lamembrananuclearyun haloclaro. En ocasio-
nes es diffcildiferenciarla de E. Hominis.
3. 10.1.4. ENTAMOEBA COLI (APENDICE 6, FIGURA 3).
Habitat:
Intestinogrueso
Enfermedad queproduce:
Es comensaJ de intestinogrueso

I
CA,f'ITUlO I
ParJsilO.\ Inteslrnalfls
3.10,2,5. TRICHURIS TRICHIURIA (ApENorcE 6, F,GURA 14).
Habitat:
Ciegoyrectosigmoides,
Enfermedad que produce:
Tricocefalosis, Cuando se Ilega apresentaren forma
masiva, produce prolapso rectal yanemia,
oistribuci6n:
Cosmopolita,
Aspectos morlol6gieos:
Los adultos tienen forma de latigo; la parte anterior,
filiforme, abarcalas Iresquintas partes del cuerpo del
gusano, el resto es grueso; son de color rosado, la
boca es simple, sin labios ytiene una pequena lan-
ceta, Los machos miden de 3a4,5 cm de largo; su
porci6n posterior, mas ancha, se eneuentraenrollada
sobre su cara ventral. En la porci6n ventral emerge
una espicula laneeolada de 2,5 mm de longitud, que
tiene unavainaretractil peneana, eubiertade espinas
pequenas ycurvas en toda su longitud, Las hembras
miden de 3,5 a5emde 10ng'ltud, su extremaposterior
es ramo, sus 6rganos genitales estan formados por
un solo ovario, oviduetoyforma uterina.
4. FASE POSTANALITICA
4.1. REPORTE DE RESULTADOS
Los resultados deben registrarse en unahojapara este fin, la
cual debe archivarse en el expediente del paciente (APENOICE 4),
Siempredebe reportarse:
estructuraobservada (estadio),
*Genera,
4ID
CAPiTULO
(onIto/ de CaJidad 'frl Pdf':Hito/og(a
(sfes posible, de 10 contrario anotarsp,),
Observaciones(examen macroscopico, tecnicas es-
peciales usadasen laidentificaci6n, etc,),
4.1. ALGORITMO DEL METODO COPROPARASITOSCOPICO DE
CONCENTRACfON-FLOTACION
MUESTRA DE MATERIA FECAL (MF) FRESCA 0 FORMALINIZADA.
(PROTOZOARIOS INTESTINALES Y HUEVOS Y LARVAS DE HELMINTOS)
I I
MF
I I
POS/TIVO NEGATIVO
I
I
I I
I
EXAMEN CPS DE CONCENTRACION POR FLOTACION
I I
I
POSITIVO I NEGATIVO I
I I
PREPARACION DE TINCION PERMANENTE
I I
CAl'lTULO I
PardS)IOS Intf'Slloale's(PrOlOlOdflOS)
5. REFERENCIAS
1. Camarena JJ, Borras R, Garda De Lomas J. Coccidios intestinales.
Cryptosporidium eIsospora. En: Perea EJ. Enfermedades Infecciosas y
Microbiologfa Clfnica. Vol. II. Ediciones Doyma, Barcelona 1992, pp 1027-
1033.
2 CartwrightCPo Utilityofmultiplestoolspecimen ova andparasiteexam;-
nationsIn highprevalencesetting. JClin Microbiol1999;37:2408-11.
3. ChanRJ, ChenMI<, YorkN, SetijonoRL, Graham KF, TanowitzlB. Eva-
luation ofacombination rapid immunoassay for deteclion ofGiardia and
Cryptosporidiumantigens. JClin Microbiol2000;38: 393-4.
4. Committee on education. American SocietyofParasitologist. Procedure
suggested for use in examination ofclinicalspecimens forparasiticInfec-
tion. JParasitoI1977;63:959-960.
5. Faust EC, DantoniJS, Odon V, MillerMF, Peres C, Sawilz W, Tobie J,
WalterJH Acriticalstudyofclinicallaboratorytechniques forthe diagnosis
ofprotozoan cysts and helminthes eggs in feces. Am JTrop Med 1938;
18; 169-183.
6. GarCIa LS, BrucknerD. Intestinalprotozoa (Coccidia andMicrosporidla).
En; Diagnostic medicalparasitology. 3"edicion. ASM Press, Washington
1997, pp69-72.
1 GarCIa LS, MVoge. DiagnosticClinicatParasilologyI. Properspecimen
colleclionandprocessing. AmJMedTechnol1980;46:459-67.
8. GarCIa LS, Schmzu RY, Ashin DA. Evaluation ofintestinal protozoan
morphology in polyvinylalcoholpreservative; comparalion ofZinc sulfate
andmercuricchloridebasedfixative. JClin Microbiol1993, 31; 307-10.
9. Garda LS. Practical gUide to Dragnostic Medical Parasitology. ASM
press. Washington DC.
JO. Hiatt RA, Markell EK. How manysloolexaminations are necessary to
deteclpathogens intestmalprotozoa?Am Trop MedHyg 1995;53;36-39.
11. Lindsay OS, Dubey JP, Blagburn BL. Biology ofIsospora spp. from
humans, nonhuman primates, and domestic animals. Clin Microbiol Rev
1997; 10.'19-34.
12. MarshallMM, Naumovitz0, Ortega Y, Sterling CR. Waterborne proto-
zoan pathogens ClinMicrobiolRev 1997; 10;67-85.
13. Morris AJ, Wilson ML, Relies LB. Application ofrejection for sloolova
andparasiteexamination. JClinMicrobiol 1992;30;3213-16.
E
Diagn6stico de Parasitos
Intestinales: Cestodos y
Trematodos
1. METODO COPROPARASITOSCOPICO POR
CONCENTRACION SEDIMENTACION (RITCHIE)
1.1. ESPECIMEN DE ESTUDIO
Muestrade materiafecal.
1.2. METODO DE RITCHIE
Observaci6n microsc6pica de formas parasitarias obtenidas, por
concentracion - sedimentaci6n, apartir de muestras de materia
fecal (analisiscoproparasitosc6pico en serie de tres)
1.3. FUNDAMENTO DEL METODO DE RITCHIE
La centrifugaci6nes un procedimientodeconcentraci6n que per-
mite recuperartodos los protozoai'!OS, huevosylarvas presentes
en la materiafecal aun cuando esten en baja concentraci6n; sin
embargoeste metododejamasfibrasque el metododeflotaci6n.
(Arln.HO II
Djagnoslfco de ParaSIC05 fOleSWldles Ces(odos y TrE'malOO05
EI acetato de etilo se usa para extraer fibras y grasas de las
heces y permite a los parasitos formar un bot6n de centrifu-
gaci6n en el fondo del tubo. La concentraci6n con tormalina
- acetato de etilo tiene las ventajas de ser facil de usar, permite
la recuperaci6n de gran cantidad de organismos y reduce el
error tecnico.
2. FASE PREANALITICA
2.1. PACJNT YCOLECCJON D MUSTRAS
I EI paciente debe especificar cuando este sometido a regi-
men tarmacol6gico de cualquier tipo.
I La muestra debe ser la primera de la manana y debe reo
mitirse allaboratorio.
I Se deben recolectar de 5-10 9 de materia fecal.
I Las muestras deben ser de tres dias consecutivos, y si es
posible deben entregarse el mismo dfa de la emisi6n.
I La muestra debe ser almacenada en un recipiente de
boca ancha, de vidrio 0 plastico, limpio, seco, sin residuos
organicos s61idos 0 Ifquidos y con tapa hermetica.
I Por seguridad este recipiente debe ser transportado al
laboratorio en una bolsa de plastico.
LAS MUESTRAS SERAN INACEPTABLES EN LAS SIGUIENTES
CONDICIONES:
I Muestras contaminadas con agua u orina.
Muestras de pacientes que hayan consumido bario en los
ultimos cinco dfas.
I Muestras que tengan mas de cinco dfas de emisi6n.
I Muestras que presenten contaminaci6n visible con agen
tes qufmicos, tlsicos y/o biol6gicos.
CA.f.lIIUlO II
Coolrolde C.I,dadenP.r.,ilOlogl.
Muestras de pacientes que esten en tratamiento con un
medicamento que interfiera en la determinaci6n.
I Muestras en serie que hayan side emitidas en un solo dfa
(deben ser de tres dias diferentes).
I Muestras que hayan side colectadas dentro de un perio-
do mayor a 10 dias.
Muestras que hayan sido almacenadas a temperaturas
inferiores a acy mayores a 50C.
2.2. MANEJO DE MUESTRAS
EI analista debe usar bata, guantes y cubrebocas como
medida minima de seguridad.
Todas las muestras frescas deben ser manejadas con
extremo cUidado, debido a que constituyen fuentes impor
tantes de organismos infecciosos, como bacterias, virus y
parasitos.
Cada muestra debe ser rotulada con la siguiente infor-
maci6n:
'Feeha de coleceion de la muestra.
*Nombre y numerode idenlificaCJon delpaciente.
'Feeha ynombre delanalista.
'Indicaeiones espeeiales (porej. usa de medicamentos)
. La muestra debe ser acompanada de una hoja de requi-
sici6n y de ser posible una historia clfnica con datos de
importancia para el diagn6stico correcto.
I Las muestras pueden ser analizadas hasta 24 horas
despu8s de su emisi6n, 0 bien pueden ser almacenadas
en un conservador por mas tiempo. Existen una serie de
conservadores qufmicos, que pueden ser utilizados para
la preservaci6n morfol6gica de las formas parasitarias en
heces, de ellos se puede escoger uno de acuerdo al tipo
de muestra que se tenga.
..
CltplrUlO II
DJagn6slf<:o de- ParasflOs Jnresunales: (e:,/od05 yTremarodos
2.3. INSTALACIONES
Debe existir un area de recepci6n de muestras yun area
para desarrollar la metodologfa, en este espacio deben estar
gl alcancetodoslosmaterialesrequeridosydebeestarrestrin-
gido paraactividadestales comocomer, beber, fumar, etc.
3. FASE ANALITICA
3.1. EoulPo DE LABORATOR/O
Centrffugac1fnica
Microscopio 6pticocon objetivomicrometricocalibrado
Balanzagranataria
3.2. MATERIAL BAS/CO
Abatelenguas de madera
Pizetade plasticode 250 mL
Cron6metro
Gradilla
Probetas
Agitadormagnetico
Cubreobjetos
Portaobjetos
Tubos conicos paracentrifugade 15mL
Pipeta pasteurcon bulbo
3.-3. MUESTRAS DE REFERENCIA
Control positivo (+): Muestrademateriafecal en formalina al
5% con diagnosticopositivodeparasitosisconocida.

(;;PHIJLO II
(on/(olde (aJ:daden Paras/'%gia
3.4. REACT/VOS
Formaldehfdo5%,formaldehfdosoluci6n al 37%,frascode
un litro, catalogo 2106-02. JT Baker, SA de CV.
Formaldehfdoa137% 50 mL
NaCI0.85% 950 mL
Mezclarelformaldehfdoenla soluci6n salinayagitarcon agi-
tador magnetico. (EI formaldehfdo generalmente se vende en
unapresentaci6na137-40%, sinembargopara la preparaci6n
de formalina se considera como aI100%).
Almacenamientoyestabilidad
Almacenar atemperatura ambiente en un frasco de vidrio
con tapon de rosca
Estabilidad: un anaposterioralafecha de elaboraci6n
Lugol- Yodo
Yoduro de Potasio (KI) 109
Yodo(I)............................................. 59
Aguadestilada 100mL
Disolver el KI yel Ien el agua destilada en un matraz de
vidrio adecuado utilizando un agitador magnetico (evitar la
presenciade cristales precipitados).
Almacenamientoyestabilidad.
Almacenaren unfrascode vidrioambarparaprotegerdelaluz.
Estabilidad: Doce mesesapartirde la fecha de elaboraci6n.
Cadavez que se va autilizar se hace una diluci6n 1:5 con
agua destilada (esta puede usarse dentro de los 10-14 dfas
siguientes).
Checarlaaparienciafisica antes de usar.
Solucion isot6nicade c1orurode sodio:
Frascocon 500 mL. Abbott: Cada 100mLcontiene
0.9 9de NaCI en aguainyectable.
Almacenamientoyestabilidad.
Almacenar a4C.
..
CAPJrUlQ 11
DidgnoSltCO de JJ1fes{JnQle5 Ceslooo5 y Trematodos
Estabilidad frasco cerrado: Hasta fecha de caducidad de la
etiqueta.
Estabilidad frasco abierto: un mes despues de haber sido
abierto.
Acetato de etilo (CH
3
COO
z
H
s
)'
Frascode 4L, cata/ogo 9280-03J.T.
BakerS.AdeC.v.
Almacenamiento yestabilidad.
Almacenar atemperatura ambiente.
Estabilidadfrascocerrado: Hastafecha de caducidad de
la etiqueta.
Estabilidad frasco abierto: Un ana despues de haber
sido abierto.
3.5. CONTROL DE CAUDAD
3.5.1. Calibraci6n del equipo
Todos los equipos deben contar con una bitacora de uso y
calibraci6n.
Lacentritugadebecalibrarsecadadocemeses,cuidandodeque
el rotoryel medidorde velocidadfuncionen adecuadamente.
EI microscopio 6ptico debe calibrarse cada doce meses, in-
cluyendo losobjetivosyel ocularmicrometrico.
3.5.2. Eficiencia del metodo de concentraci6n por
sedimentaci6n
Asegurarse que los reactivos esten en buenas condicio-
nes, antes de usarlos (formalina, solwci6n salina, lugol y
acetato de etilo ).
Los microscopiosycentrifugasdeben sercalibradoscada
doce meses.
4D
CAPlrULO 11
(ontrol de Caltdad en Pa;asitologia
AI momentadel usolos ocularesyobjetivosdeben estarca-
libradosylimpios.
Se deben tener fotograflas ylaminillas con preparaciones
permanentesde formas parasitarias perfectamente bien iden-
tificadas.
Sedebe contarcon formas parasitariasconservadas en via-
lesde colecc16n para usarloscomo control positivo.
Las muestras positivasdeben seranalizadascada4meses,
en caso de no observarse al microscopic deben ser concen-
trados yrecuperados
Todos los resultadosdeben serapropiadamente registrados
en lahojacorrespondiente ytener un archivoordenadocon el
expedientede cada paciente.
3.5.3. Errores ysustancias que interfieren
Laeficienciadel metoda dependede la habilidad del analista,
cuando losreactivos estanencondiciones 6ptimasyelequipo
estacalibrado losprincipales errores son:
'Confusiondeartefactoscon formas parasitarias.
*Confusion de genero y/o especie del parasitoobser-
vado.
Existen sustancias que interfieren con la detecci6n de parasi-
tos intestinalestalescomo:
*Aceite mineral
*Bario
'Bismuto
Antibi6ticos Yantiparasitarios
(tetraciclina, metronidazol, hemetina)
3.6. PROCEDIMIENTO DEL METODO
Antes de iniciar el procedimiento corroborar que todas las
muestrasvienen preservadascon formalina, si no es as! ana-
dir formalina hasta obtener la relaci6n 1:3 de muestra:forma-
E
(A?HUlO \1
Oiagr16sllco de PdfdSIl05 (rw;,sr,nd!es (eslodos 'I Tremawdos
lina, dejar reposar las muestras con formalina al menos 30
minutos
Numerar de manera consecutiva los tubos de ensaye de
13 x 100 ( usar lapiz graso cuando el tubo tenga area rugosa
especial para escribir en el , poner un anillo de masking-tape
cuando el tubo no tenga esa area).
Colocar los tubos en la gradilia en forma consecutiva.
Corroborar que el frasco que contiene 1a materia fecal este
cerrado correctamente y no hay derrames, agitar fuertemente
la muestra de 1a2minutos para homogenizar la materia fecal
con la solucion de formalina.
Destapar con cuidado el frasco. Si la muestra esta muy es-
pesa, anadir un poco mas de formalina para tener la relacion
1:5 de muestra: formalina y agitar nuevamente.
Transferir la suspension al tubo con el numero correspon-
diente, lienarlo hasta las 2/3 partes del tubo.
Agregar NaCI al 0.9% hasta casi lIenar el tubo , teniendo
cuidado que ambos tubos tengan el mismo nive!. Colocar los
tubos pareados en canastilla de centrifugacion y poslciones
opuestas.
Centrifugar 10 min a 500 Xg.
Decante el sobrenadante en la tarja. Vaciar en un solo movi-
miento dejando el sedimento.
Anadir 5 mL de formalina al 5%.
Colocar los tapones de rosca a cada tubo y agitar vigorosa-
mente por 10 menos 30 segundos. En este paso el tuba puede
destaparse, por la presion de los liquldos, cUldar de no orien-
tarlo hacla usted.
Dejar reposar el tubo de 15 a 30 seg y destaparlo.
Centrifugar 10 min a 500 Xg.
Al sacar los tubos de la centrifuga se observaran 4 capas:
1) acetato de etilo en la superficie; 2) un tapon de restos
fecales; 3) formaldehido; 4) sedimento en el fondo del tubo,
conteniendo los elementos parasitarios.
..
Clf'JTUlO 11
Conrrolde (af,dad fin ParasilolOgia
Desprender las tres capas superiores con un aplicador de
madera y decantar en un solo movimiento.
Con una pipeta pasteur mezclar el sedimento con la formali-
na remanente.
Si el sedimento es aun muy espeso agregar una gota de
solucion salina isotonica y mezclar.
Utilizar un portaobjetos para cada muestra. Numerar cada
portaobjetos con el numero correspondiente.
Colocar una gota de la muestra en un portaobjetos, agregar
una gota de yodo, mezclar con una esquina del cubreobjetos
Colocar el cubreobjetos.
Observar toda la preparacion con objetivo de 1Ox, si observa
algo sospechoso verificar en 40x. AI menos 1/3 parte del area
total debe observarse con objetlvo de 40x.
Los quistes de los protozoarios se deben observar amarillo-oro
en su citoplasma, gluc6geno de color cafe intense y nuc/eos
refractiles, su tamano fluctua entre 5a 70 ~ l m .
Las caracterfsticas utiles en la identificacion de los huevos
de taenia son: redondos 0 Ilgeramente ovales miden aproxi-
madamente entre 31 a 43 ~ l m , tienen una membrana gruesa y
radiada y en su interior se distlnguen 3 pares de ganchos.
Colocar todas las muestras procesadas del dia ( los frascos
orig!nales con formalin a en una bolsa roja). Sobre la bolsa en
forma clara, escribir inlciales del tecnico y fecha, mantenerlas
durante 48 horas, las entregara el teclllco al personal de inten-
dencia como residuos peligrosos biologico infeccioso.
3.7. LIMITACIONES DEL METODa
La centniugaci6n a velocidades supenores a 500 9 pueden
colapsar algunos tipos de huevos.
EI acetato de etilo es flamable, debe utilizarse en lugares
bien ventilados y en ausencia de cualquier tipo de flama.
~ .
~
(AP[hJLO 11
D1cJgn051ko de Par.."SJl03 Inl ')lmales Ce5wdos yTfemalOdos
EI examen de una sola mueslra puede revelar de 30 a 50%
de todos los parasitos,
Microsc6picamente, los objetos que pueden confundirse con
huevos de helmintos son: granos de polen, esporas de hon-
gos, fragmentos vegetales, huevos de acaros y nematodos de
vida libre. Las fibras vegetales pueden confundirse con larvas
de nematodos. Los artefactos encontrados en heces pueden
distinguirse de huevos de parasitos y larvas ya que usualmen-
te no tienen caracteristicas morfol6gicas precisas y tamanos
apropiados.
En el momento de tomar el concentrado de la superficie se
puede hacer sin sacar el tubo de la centriluga para evitar que
el movimiento diluya la lase formada.
Debido a que se usan varios reactivos y tubos c6nicos, resul-
ta poco econ6mico el metodo, las preparaciones quedan muy
sucias porque con la sedimentaci6n, aparte de concentrarse
formas parasitarias, se concentran otros materiales.
3.8. PRECAUCIONES
Las muestras deben manejarse con la precauci6n que re-
quiere e! emp[eo de muestras biol6gicas (uso de guantes, bata
y trabajar en un area destinada unicamente al procesamiento
de las muestras). Formadas solo se pueden observar quistes
de protozoarios, huevos y larvas de algunos helmintos y trolo-
zoftos de Dientamoeba tragi/is.
Es importante contar con ilustraciones de artefactos yes
tructuras que pueden ser confundidas con formas parasit arias
para comparar en momentos de duda y no dar resultados fal-
sos positivos
..
CAP(TULO II
Comrolde ~ J d d d en Parasi(ofogla
3.9. LiM/TES DE REPORTE
EI resultado a reportar puede limitarse dando:
Negativo: Ausencia de formas parasitarias en todas las
muestras analizadas por mal manejo en la tecnica .
Positivo: Presencia de un artefacto
3.10. PARASITOS /NTESTINALES DIAGNOSTICADOS POR EL
METOOO DE CONCENTRACION SEDIMENTACION
3.10.1. Helmintos intestinales
3.10. 1. 1. TAENIA SOLIUM (APENOICE 6, FIr;URAS 15 A 17).
Habitat:
Intestino delgado.
Enfermedad que producen:
Taeniosis.
Distribuci6n geografica:
Mundial.
Morfolog a ~
Huevos:
Son morfol6gicamente indiferenciables los de T. sa-
ginata yT. sofium; son esfericos, miden de 25 a 45
flm; se linen intensamente de cafe con ellugol; tie.nen
tres capas: una externa mucoide y granulosa que se
pierde con facilidad; la media que es la cubierta del
embri6n es gruesa y radiada y la interna propia de la
oncosfera 0 embri6n hexacanto lIamado as! par tener
tres pares de ganchos que no corresponden a los de
algunos adultos (ApENorCf 6, FIGURA 15)
Adultos:
Taenia solium: mide de 2a4metros de largo, tiene es-
c6lex, cuello y cadena estrobilar 0 estr6bilo, el esc61ex
esta armada con una doble corona de ganchos y tiene
..
(';PlftllO II
D1dg110HicO de IrueS(Jndles Cesrodm y
sito, de estossalen el eferente, deferenteyvesicula
seminal que penetra en la bolsa del cirro yfinal-
mente termina en el pora genital masculino que se
abreen el atriogenital. EI femenino estacompuesto
porun ovarioaladerechade la lineamedia longitu-
dinal,delantedeltesticuloanterior; hayabundantes
glandulas vitelinas que se encuentran distribufdas
par las zonas laterales del cuerpo del trematodo y
estas tienen ademas su receptaculo vitel6geno; el
ootipo esta rodeado por la glandula de Mehlis; el
uteroes corto yse extiendedesde el ootipohastael
atrio genital atraves del poro genital femenino.
Huevos:
Son grandes yovoides, miden de 12 a180 /lm de
largo por 60 a100 de ancho; en el extremo mas
puntiagudo presentan un pequeno operculo; sin
tinci6n, en examenes en fresco, tienen un color
que varia del amarillo brillante al cafe; con lugol
adquieren unatonalidad mucho mas oscura.
4. FASE POSTANALlTlCA
4.1. REPORTE DE RESULTADOS
Los resultados'deben registrarse en una hoja disenada para
este fin lacual debe seranexadaen el expediente del pacien-
teo Siempredebe reportarse:
*La estructuraobservada (estadio).
*Genero.
*Especie (Sl es posible, de 10 contrarioanotarsp) .
.*Observaciones (examen macroscOpico, tecnicas es-
peciales usadas en la identificaci6n, etc.)
..
CAf.'-rULO II
(on(rol de Call dad en PdrdsilO/oia
5. REFERENCIAS
1. Moms AJ, Wilson ML, Reller LB. Application of rejection lor stool ova and
parasite examinations. J Clin Microbiol 1992;30.' 3213-16,
2. Parasitology subcommittee. Microbiology section of scientific assembly.
American Society of Medical Technology. Recommended procedures for
the examination of clinical specimens submitted for the diagnosis of parasi
tic infection. Am J Med Techno! 1978;44: 1101-06.
E
Toma de muestra,
recipienteIimpio,
secoyIibrede
detergente
Calibrarel equipo
(centrifugay
microscopio).
Verificarelbuenes-
tadodelosreactivos
yque lamues-
tra nopresente
interferencias
Reporte de
resultados (Valorde
referencia: negativo)
ControldeCaUdad en Parasitologfa
APENDICE 1
CONTROL DE CAUDAD EN
EL DIACNOSTICO DE PARAslTOS
..

PROCEDIMIENTOI
I
-. I I
F ASE PREANALiTICA I FASE POSTANALfTICA IFASE ANALITICA
I I I
I
Transportede
lamuestra
I
Recepcion.
Datoscompletos
delpaciente.
Fecha yhorade
larecoleccion
Fechade recepcion.
Codigode la muestra
I
Realizaranal isis
de materia
fecal, sangre y/o tejido
I
Identificaciondelas
formas parasitarias
teiiidascon lugol,
usando microme-
tro, incluircontrol
positivo, comparar
con fotograffasy
laminillasde coleccion
I
Archivarunacopiadel
resultado con losdatosdel
paciente, de la muestra, del
analistaydellaboratorio
I
Evaluacionde resultados.
Reportarcasosra-
rosparalosesludios
epidemiol6gicos,y
realizarunacoleccion
con tinci6npermanenle
..
-I Confrol GlUdad Parasilologla
APENDICE 2
FORMA DE ADMISION
I I
Edad (Aiio/mes/dia)
Nom... pacient.
I I I .egislro Nombredel.edico I
Tipodemuestra I IAnalisisarealizar
Diagn6sticopresuntivo
Fechadeemisi6ndelasmuestras Numerodemuestras
I I
Nombreyfirma del analista
querecibi6 la muestra I I
..
Conlrol Calldad en ParasitologYa
APENDICE 3
CALIBRACION DEL MICROSCOPIO
.,
-
A. Secoloca el micr6metroobjetivoel cual es un por-
taobjetos en cuyocentro se haya grabadauna es-
calade 1a2mmcon 100a200divisionesrespec-
tivamente, cada una de lascuales mide 1011m, se
centra y sa enfoca la escala con el objetivo que
se calibrara.
B. En seguidase coloca el micr6metro oculardentro
del ocular normal, este consiste en un disco de
vidrio de 12 mm de diametro con una escala de 5
mm grabada cada milfmetro con 10 divisiones de
10011m cada una.
C, Se enfocan las escalas del micr6metro ocular y del
objetivo y se hacen coincidirexactamente en dos If-
neas de ambas escalas, preferentemente en algun
extremo de las mismas. A partir de la primera Ifnea
que coincida, se cuentan los espacios que median
entre ella y la siguiente linea que coincide. Se ob-
tendran dos cifras, una que pertenece al ndmero de
IIneas correspondi,entes a las divisiones del micr6-
metroobjetivoel cualsemultiplicapor10queson las
micrasquemide cada unayotracifraquecorrespon-
de alas divisiones del micr6metro ocular. EI cocien-
te del numero de divisiones del micr6metro objetivo
entre el numero de divisiones del oculares el factor
ocoeficiente micromEHrico que representa en micras
cada divisi6n del micrometroocular.
..

Control Calidad .nParalltologfa
Coeficientemicrometrico=
(No. dedivisionesdel micrometroobjetivo) 10
No. dedivisiones del micrometroocular
Determinaciondeltamano
* 5esustituyeel micrometroobjetivo porla preparaciony
se enfoca.
* 5e cuentan las divisiones que cubren a la forma para-
sitaria y su numero se multiplica por el coeficiente mi-
crometrico. EI resultado es el tamano que tiene el pa-
rasito.
C
Conlrold.Calidad Par.sit%gia
APENDICE 4
HOJA DE RESULTADOS
Edad (Ano/mes/dia)
INombredel paclente
I
IReglstoo INombredel_'cc
I I
Tipodemuestra Estudiorealizado
analizada
Diagn6sticopresuntivo
IRes,'ados
I
IOb",,,aclone.
I
Nombreyfirmadelanalista
IFeeha
I
..