PRACTICA N 4 CULTIVOS MICROBIANOS UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS ARPASI ORDOO Dennys Alfredo dealfred_111@hotmail.

com RESUMEN: Los medios de cultivo constituyen la herramienta fundamental en los laboratorios de Microbiologa, por lo que realizar pruebas de control de calidad a los medios preparados es vital, con el fin de comprobar si estos cumplen con sus especificaciones y si la metodologa empleada en su preparacin es satisfactoria. Teniendo as como objetivos: Establecer los fundamentos tericos para la preparacin de medios de cultivo, Aprender la clasificacin y uso de los medios de cultivo y Preparar medios de cultivo y manejar adecuadamente la autoclave (olla a presin). Metodologa: Esterilizacin y preparacin de medio de cultivo (tcnicas por disolucin, puntos y exposicin de placa). Los resultados obtenidos aun no son definidos, ya que no se observo si realmente crecieron los microorganismos. Pero si se llego a la conclusin de que existen diferentes maneras de cultivar o sembrar microorganismos, de acuerdo al uso y necesidad de los medios de cultivo, Para ello tenemos que saber los fundamentos tericos para la preparacin de medios de cultivo. Palabras Clave.- Cultivo microbiano, Disolucin, Exposicin, Plaqueado.

ABSTRACT The culture media are the fundamental tool in microbiology labs , so testing quality control is vital media prepared in order to check whether they meet your specifications and whether the methodology used in their preparation is satisfactory. Taking and objectives : To establish the theoretical foundations for the preparation of culture media , Learning classification and use of culture media and culture media Prepare and properly handle the autoclave ( pressure cooker ) . Methodology: Sterilization and preparation of the culture medium (by dissolution techniques, and plate exposure points). The results are not yet defined, since it was not observed if actually grew microorganisms. But if I conclude that there are different ways to cultivate or sow microorganisms, according to the use and need for culture media, for this we need to know the theoretical basis for the preparation of culture media. Keywords.- Microbial culture, Dissolution, Exhibition, plating.

I.

INTRODUCCION

En biologa, y especficamente en microbiologa, un cultivo es un mtodo para la multiplicacin de microorganismos, tales como bacterias, hongos y parsitos, en el que se prepara un medio ptimo para favorecer el proceso deseado. Un cultivo es empleado como un mtodo fundamental para el estudio de las bacterias y otros microorganismos que causan enfermedades en medicina humana y veterinaria ( Restrepo et al, 2003)

A los cultivos microbianos originalmente se les designaba como prebiticos, sin embargo, en 1989 la Administracin de Frmacos y Alimentos (FDA de Estados Unidos de Norteamrica) estableci que no era adecuado el nombre de probitico; por lo tanto, se modific la nomenclatura a cultivos microbianos proporcionados directamente o cultivos microbianos (Gonzlez 1995).

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin de oxgeno adecuado, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante. [1]

Hubert (1987), Jones y Thomas (1987) mencionan que los cultivos de levadura presentan varias caractersticas importantes: 1) No son patgenos, ni txicos, 2) No se absorben en el tracto digestivo, 3) No dejan residuos en los tejidos animales, 4) Se utilizan en pequeas cantidades, 5) Proliferan in vivo e in vitro, 6) Promueven el crecimiento de bacterias celulolticas, 7) Son estables a temperaturas elevadas y 8) No causan mutacin.

La elaboracin de medios de cultivo requiere proporcionar los elementos antes citados en una forma asimilable. As, por ejemplo, el C debe estar en forma de carbono orgnico para los hetertrofos y como CO2 para los auttrofos, el N en forma de NH4, de NO3 o de NO2 o en forma de aminocidos a los que se pueda tomar su grupo amino. [2]

II.

ANTECEDENTES:

Estos antecedentes, no son exactos pero tiene similitud con nuestra practica ya q para estas investigaciones se utilizaron cultivos microbianos.

Las poblaciones de bacterias totales, bacterias fijadoras de N atmosfrico de vida libre, bacterias asimiladoras de N, bacterias degradadoras de petrleo, hongos totales y hongos degradadores de petrleo se encontraron en sistemas rizosfricos de los pastos alemn y cabezn, establecidos en Gleysoles contaminados con derrame reciente, en Gleysol con derrame crnico y muy contaminado y en Gleysol no contaminado con petrleo. Las poblaciones de bacterias totales, bacterias fijadoras de N atmosfrico de vida libre, bacterias asimiladoras de N, bacterias degradadoras de petrleo, hongos totales y hongos degradadores de petrleo se encontraron en sistemas rizosfricos de los pastos alemn y cabezn, establecidos en Gleysoles contaminados con derrame reciente, en Gleysol con derrame crnico y muy contaminado y en Gleysol no contaminado con petrleo. (Rivera M. et al, 2002).

Se obtuvo mejores resultados por el mtodo del papel filtro y aceite esencial no encapsulado, con un halo de inhibicin de 1.7 cm, no se evidenci diferencias respecto al tipo de cultivo (levadura pura o mohos y levaduras presentes en tomate). Respecto al empleo del aceite esencial encapsulado se puede decir que no tuvo un efecto significativo ya que el medio de cultivo se encontraba con una humedad muy elevada, humedeciendo excesivamente las cpsulas de la -ciclo dextrina diluyendo la liberacin y accin del aceite esencial. (Chamorro A. et al, 2010).

Se observa tambin un efecto de la variedad de papa sobre las poblaciones de estos microorganismos en la rizsfera, lo que confirma la influencia de los exudados de la planta sobre las poblaciones rizosfricas. Del total de 17 muestras procesadas se obtuvieron 63 aislamientos de Bacillus spp., 29 (46%) de Huancavelica y 34 (54%) de Puno; 37 aislamientos de Actinomicetos, 32 (87%) de Huancavelica y 5 (13%) de Puno y 50 aislamientos de Azotobacter spp., 37 (74%) de Huancavelica y 13 (26%) de Puno, observndose para estos dos ltimos casos una mayor diversidad en suelos de pH cido. (Calvo P. et al, 2008).

III.

OBJETIVOS:

Establecer los fundamentos tericos para la preparacin de medios de cultivo. Aprender la clasificacin y uso de los medios de cultivo. Preparar medios de cultivo y manejar adecuadamente la autoclave (olla a presin) IV. MATERIAL Y METODOS:

4.1.- Materiales: - mecheros Bunsen - Aza de siembra - 5 placas petry - 1 matraz de 500 mL - 1 balanza - 1 esptula - 1 probeta de 250 mL - 2 tubos de ensayo - Cinta Masking tape - Agar Saboraud - Plumn indeleble - Trapo - Muestras de hongos - Muestras de tierra. - Agua destilada
Figura 1

4.2.- Mtodos:

4.2.1.- ESTERILIZADO: Se realiza el mismo proceso, utilizado en la anterior practica (preparacin de medios y esterilizacin de materiales) 1.- Lavar material con detergente lquido, enjuagar con abundante agua de la llave y al final con agua destilada. 2.- Secar el material de vidrio de preferencia en horno, si no es posible secar al aire. 3. En las pipetas poner un filtro de algodn en la boquilla y envolver con papel Kraft.

4.- Envolver las cajas de Petri y tubos de ensayo. 5.- Introducir los hisopos en un tubo y tapar con algodn.

6.- Identificar con nombre y marcar el volumen en el papel de las pipetas. 7.- Listo para ser esterilizado. 4.2.2.-PREPARACION DE MEDIO DE CULTIVO: 1.- Leer cuidadosamente el membrete del medio de cultivo (leer las indicaciones para el preparado) 2.- Calcular la cantidad necesaria para preparar 120 ml de Agar Saboraud Exactamente seria:

65g AS X

---------------------- 1L ---------------------120 ml

X= 7.8 g AS
Figura 2.

3.- Disolver el medio en 100mL de agua destilada y una vez disuelto completar el volumen a 120mL. (Dejar reposar 1 a 2 minutos) 4.- Tapar el matraz y calentar hasta disolver totalmente durante 1 a 2 minutos. 5.- Alistar tubos de ensayo y vaciar equitativamente la solucin, luego taparlo con algodn y etiquetarlos.

Figura 3. Procedemos a esterilizar todo.

4.2.3.- EMPEZAMOS A PLAQUEAR. A) Tcnicas de disoluciones: Para ello se preparo una muestra, aparte de tierra (1 g de tierra y 9ml de agua destilada)
Figura 4.

Luego se empez a colocar en las placas. Para ellos se saco la muestra ya preparada con una pipeta, Seguidamente se coloco la muestra en el centro de la placa y se cubri con el agar preparado.

Figura 5 y 6.

B) Tcnica por Puntos ( se realiza en una muestra ya plaqueada)

1.- Esterilizar los bordes. 2.- Alistar las placas. 3.- Esterilizar la boca del matraz 4.- Vaciar a una placa 5.- Hacer movimientos suaves

Despus de plaquear, esperar a que se gelifique el Agar. Luego cargar con hongos y empezar a colocar en distintos lugares ( en cada punto, como se muestra en la figura 8)

Figura 7 y 8.

C) Exposicin de Placa (Agar Gelificado)

Despus que quedo gelificado , Destapar y exponer la placa al medio ambiente (durante 30 minutos)
Figura 9

Luego de todo el procedimiento. Marcar con lapicero indeleble y Llevar a la incubadora

Figura 10.

V.

RESULTADOS Y DISCUSIN

Bueno aun no se ha revisado los resultados, Pero de acuerdo a los pasos que hicimos, esta claro que deberan quedarnos de este modo

Figura 11. Sembrados por disoluciones.

Figura 12. Sembrado por Puntos

Tras la incubacin, el nmero de colonias resultantes. se corresponde con el nmero de clulas vivas que inicialmente haba en la dilucin de la muestra sembrada. Podemos contar clulas vivas! (Balsalobre J.) VI. CONCLUSIONES.-

Se llego a la conclusin de que existen diferentes maneras de cultivar o sembrar microorganismos, de acuerdo al uso y necesidad de los medios de cultivo, Para ello tenemos que saber los fundamentos tericos para la preparacin de medios de cultivo.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:

Restrepo A.,Robledo J., Leiderman E., Restrepo M., Botero D. y Bedoya V. (2003) Enfermedades Infecciosas. 6ta Edicin. Ediciones Quebecor Word, Bogota S.A. Colombia Disponible en: http://books.google.com.pe/books?id=67FIJx2qf U8C&pg=PA14&redir_ esc=y#v=onepage&q&f=false Avendao, B.H., Gonzlez, M.S.S., Garca-Bojalil, C., Mendoza, M.G.D., Brcenas, G.R. 1995 Efecto del nivel de rastrojo de maz y de un cultivo de levadura (Saccharomyces cerevisiae; Yea-Sacc1026) en el valor nutritivo de dietas para borregos en crecimiento. Memorias VII Congreso Nacional AMENA, Veracruz. Jones, C. And Thomas, C. 1987 Maintenance of strain specificity and bile tolerance when producing. In: T.P. Lyons Ed. Biotechnology in the Feed Industry. Alltechs. Biotechnology center. Nicholasville, KY. USA. Hubert, J.T. 1987 Fungal additives for lactating cows. Department of animal Sci. University of Arizona, USA. Rivera M., Rodrguez R., Ferrera R., Fernndez L., Volke V. (2002). Adaptacin y seleccin de microorganismos autctonos en medios de cultivos enriquecidos con petrleo crudo. Disponible en: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=57320407

Chamorro A., Quispe S., Quito V., Moiss R., Beltrn Susy K. (2010). Evaluacin de la Capacidad Antimicrobiana del Aceite Esencial de Organo (Origanum vulgare) Micro encapsuladas en -ciclo dextrina Aplicados en Cultivos Microbianos Disponible en: http://papiros.upeu.edu.pe/bitstream/handle/123456789/217/RICTAV1N102.pdf?se quence=1 Calvo P., Reymundo L. y Ziga D. (2008). Estudio de las poblaciones microbianas de la rizsfera del cultivo de papa (solanum tuberosum) en zonas alto andinas. Disponible en: http://www.scielo.org.pe/pdf/ecol/v7n1-2/a17v7n1-2.pdf Balsalobre J. preparacin y anlisis de cultivos de microorganismos con las limitaciones de un laboratorio de secundaria Disponible en: http://www.murciencia.com/upload/comunicaciones/34_preparacion_analaisis_culti vos.pdf

[1] Los Cultivos en Microbiologa. Pagina web: http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioMedios.htm Fecha de revisin: 16/11/2013. Buscador: www.google.com.pe [2] Importancia de los medios de cultivo. Pagina web: http://www.buenastareas.com/ensayos/Importancia-De-Los-Medios-DeCultivo/442561.html Fecha de revisin: 16/11/2013 Buscador: www.google.com.pe