2.1 Extraccin de flavonoides en plantas.

Fuentes naturales de obtencin:

Los flavonoides son compuestos fenlicos que constituyen pigmentos naturales presentes en los vegetales y que protegen al organismo del dao producido por agentes oxidantes, como los rayos ultravioletas, la polucin ambiental, sustancias qumicas presentes en los alimentos, etc. El organismo humano no puede producir estas sustancias qumicas protectoras, por lo que deben obtenerse mediante la alimentacin o en forma de suplementos.

Los flavonoides estn presentes en una amplia variedad de alimentos. Por ejemplo, las flavononas se encuentran en los ctricos, las isoflavonas en los productos de soya, las antocianidinas en el vino y el arndano negro, y los flavanos en las manzanas.

En la naturaleza, se encuentran en los vegetales superiores, principalmente en las partes de la planta ms expuestas al sol, que es indispensable para la formacin de estos compuestos. Los flavonoides intervienen en la produccin de la coloracin de flores, hojas y frutos. De manera indirecta, esto colabora en la polinizacin por su efecto de atraccin de algunos insectos. Tambin se encuentran en semillas y frutos, y en bebidas derivadas de ellos tales como el vino, la cerveza, el t verde y el t negro, entre otras. Se encuentran en la pulpa comestible de frutos como los ctricos, cerezas, uvas, albaricoques, grosellas negras, etc. La pimienta verde, el brcoli, las cebollas y los tomates son buenas fuentes vegetales, como tambin el trigo sarraceno. El t verde y el vino tinto tambin contienen varios flavonoides. Muchas plantas aromticas tambin contienen flavonoides, y en ellas estos contribuyen a sus efectos teraputicos. Entre estas se incluyen el gingko, espino, cardo, etc.

Mtodo de extraccin de los flavonoides:

Extraccin.
La extraccin de los diferentes flavonoides se realiza a partir del material vegetal fresco,aunque esta tambin puede realizarse con el material vegetal seco siempre y cuando el proceso de secado no altere la composicin de los flavonoides. El material vegetal debe molerse finamente para de esta forma facilitar la extraccin de los compuestos flavonoicos; estos compuestos se pueden extraer indistintamente debido a la solubilidad que estos presentan en diferentes solventes orgnicos. Los flavonoides que poseen un gran nmero de grupos hidroxilos insustituidos o azcares son considerados compuestos polares, por lo que son moderadamente solubles en solventes polares como: etanol, metanol, butanol, acetona, DMSO, agua. Por otro lado, las agliconas menos polares como isoflavonas y flavanonas tienden a ser ms solubles en solventes tales como teres y cloroformo. La extraccin de estos compuestos se puede realizar con metanol al 85 %, con posterior filtracin. El filtrado se concentra y todo el metanol se remueve; la capa acuosa es sucesivamente compartimentada con una serie de solventes orgnicos como: n-hexano, cloroformo y acetato de etilo. El extracto de hexano generalmente contiene clorofilas gomas y, cuando estn presentes, agliconas de flavonoides altamente metoxiladas como quercetina 3,7, 3, 4 tetrametil ter y 6metoxiquercetina 3,7, 3, 4 tetrametil ter, y los extractos de cloroformo y acetato de etilo son ricos en flavonoides. Este proceso es favorable para la extraccin de la mayora de los flavonoides, pero no para antocianidinas o flavonoides de baja polaridad, los cuales aparecen en la superficie de las plantas. Para antocianidinas se trata el material vegetal con MeOH conteniendo HCl 1%, (v7v) donde la extraccin es inmediata, evidencindose por el cambio de color de la solucin.

Aislamiento y purificacin.
Esta etapa es muy importante en la separacin e identificacin de los flavonoides presentes en el extracto. Con este objetivo se pueden utilizar diferentes tcnicas cromatogrfcas: para la determinacin de flavonoides en extractos crudos de plantas o en fracciones son especialmente utilizadas la cromatografa de papel (CP) y la cromatografa de capa fina (CCF). Por otro lado, son indispen-sables para la separacin de flavonoides la CP preparativa, la CCF, la cromatografa de columna (CC) y especialmente la cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC).

Cromatografa de Papel Bidimensional.

El papel recomendado para el anlisis de los extractos es el Whatman 3 MM (46 x 57 cm) o equivalente; se utilizan mezclas de solventes cloroformo, cido actico, agua o en la primera corrida y cido actico 15-30 % en la segunda, aunque son usadas tambin mezclas de butanol terciario o nbutanol, cido actico y agua.

El revelado del cromatograma se realiza a la luz ultravioleta a una longitud de onda de 366 nm, donde aparecen muchos flavonoides como puntos coloreados; estos se intensifican o cambian de color cuando se someten a vapores de amonaco, pudindose estimar de esta forma el tipo de flavonoide presente en el extracto.Con el uso de reactivos asperjados se aumenta grandemente la sensibilidad del cromatograma en la deteccin de flavonoides, sobre todo cuando los flavonoides son invisibles a la luz ultravioleta o se encuentran como constituyentes menores; los cuatro reactivos ms utilizados con este objetivo son AlCl3, Complejo Difenil-cido brico-etanoamina (Naturstoffreogenz A), Acido sulfanlico diasotado (DSA) y Borohidruro de sodio/HCl.

Cromatografa de Capa Fina.

La cromatografa de capa fina es un mtodo de anlisis rpido, el cual requiere muy pequeas cantidades de muestra; se pueden utilizar como soporte celulosa, silica gel y poliamida. La localizacin de los flavonoides en CCF es la misma que en papel: los platos pueden revelarse a la luz ultravioleta (366 nm) con la presencia o ausencia de vapores de amonaco y/o asperjando con cualquiera de los reactivos de colores descritos anteriormente.
Esta tcnica es usada con los siguientes propsitos: Investigar el solvente para posible uso en cromatografa de columna. Anlisis de fracciones para columna cromatografica. Identificacin de flavonoides por co-cromatografa. Aislamiento de flavonoides puros en pequea escala.

Cromatografa de Columna.
Esta tcnica bsicamente consiste en la aplicacin de una mezcla de flavonoides (en solucin) a la columna,la cual cuenta con un poderoso adsorbente y la subsecuente elucin secuencial de los compuestos individuales con solventes apropiados. Se emplea para la separacin de flavonoides a nivel preparativo y los adsorbentes ms comnmente utilizados en esta tcnica son silica gel,poliamida, celulosa y sephadex. Cromatografa Lquida de Alta Resolucin. Esta tcnica puede ser usada para la separacin, determinacin cuantitativa e identificacin de flavonoides. Muestra niveles de resolucin y sensibilidad mucho mayor que la cromatografa de papel o de capa fina, por lo que es usada para chequear la homogeneidad de las muestras aisladas por otras tcnicas

PARA EXTRAER LOS FLAVONOIDES

2.2 Aplicaciones principales de los flavonoides en los seres vivos

Propiedades anticancerosas: Inhiben el crecimiento de las clulas Cancerosas. En una investigacin en USA se encontr que 35000 mujeres post menopasicas que beban habitualmente ms de dos tazas de t al da, el 32% present menos probabilidad de desarrollar cncer de boca, esfago, estmago, colon y recto, y el 60% menor probabilidad de desarrollar cncer de tracto urinario. El t verde muestra evidencia de ser u buen protector para el cncer de mama. Propiedades cardiotnicas: Reducen el riesgo de enfermedades cardacas Disminucin del colesterol: Poseen la capacidad de disminuir la concentracin de colesterol y triglicridos

Proteccin del hgado: Disminuyen la probabilidad de enfermedades en el hgado y elimina ciertas dolencias digestivas relacionadas con el hgado, como los vmitos Proteccin del estmago: Tienen propiedades antiulcricas al proteger la mucosa gstrica Antiinflamatorios y analgsicos: la hesperidina por sus propiedades antiinflamatorias y analgsicas, se ha utilizado para el tratamiento de ciertas enfermedades como la artritis.

Los flavonoides no poseen las caractersticas de las vitaminas: no son aminas y conforman otro grupo qumico, pero por su accin protectora y la imposibilidad del organismo humano de producirlos merecen ser incorporados al grupo de los nutrientes esenciales. Pueden unirse a los polmeros biolgicos, tales como enzimas, transportadores de hormonas, y ADN; quelar iones metlicos transitorios, tales como Fe2+, Cu2+, Zn2+, catalizar el transporte de electrones, y depurar radicales libre. Los flavonoides retiran oxgeno reactivo especialmente en forma de aniones superxidos, radicales hidroxilos, perxidos lipdicos o hidroperxidos. De esta manera bloquean la accin de dichas sustancias sobre las clulas. Desempean un papel importante en la biologa vegetal; as, responden a la luz y controlan los niveles de las auxinas reguladoras del crecimiento y diferenciacin de las plantas. Otras funciones incluyen un papel antifngico y bactericida, confieren coloracin, lo que puede contribuir a los fenmenos de polinizacin y tienen una importante capacidad para fijar metales como el hierro y el cobre. Los flavonoides son importantes para la salud de los vasos sanguneos. Regulan la permeabilidad del capilar, por eso detienen el flujo de protenas y clulas de sangre, pero permiten el flujo de oxgeno, dixido de carbono y otros nutrientes. Muchos flavonoides incrementan la fortaleza de los vasos capilares, previnindolos de cerrarse fcilmente. Esto es en parte debido a que ciertos flavonoides tienen una accin similar a la de la vitamina C. Esto puede ayudar a proteger los vasos sanguneos contra las infecciones y tambin ayudar a prevenir diversas patologas que podemos adquirir con el pasar de los aos.