UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAU CENTRO DE CINCIAS DA SADE DEPARTAMENTO DE BIOQUMICA E FARMACOLOGIA DISCIPLINA: BIOQUMICA PARA ENFERMAGEM PROFESSORA: Dr.

MARIA DAS GRAAS CASTELO BRANCO SOARES

REAES DE CARACTERIZAO DOS GLICDIOS

GISELLE MARY IBIAPINA BRITO LANA KAROLYNA ROCHA DE OLIVEIRA MARCOS ANDR SIQUEIRA DE SOUSA MARIA DO SOCORRO RIBEIRO DE ARAJO SARMENTO MATHEUS SOUSA MARQUES CARVALHO

TERSINA-2013

RESUMO

Na seguinte pratica objetivou-se a identificao dos glicdios, para isso foram usadas reaes clssicas geralmente coloridas, que so usadas para a identificao de vrios glicdios. Na reao com reagente de Molish foi bem sucedida com glicose e sacarose formao de um anel violeta (na interface dos lquidos), na reao de Benedict para identificao de aucares redutores, os resultados foram positivos para glicose, frutose e amido. Ao utilizarmos o reagente de Seliwanoff, pode-se diferenciar aldose de Cetose, j que o ltimo reage mais intensamente, formando derivados furfurais de colorao avermelhada, e na reao de hidrolise de dissacardeos feita com a sacarose demonstrou que a sacarose um acar no redutor.

INTRODUO

Os glicdios (poliidroxialdedo ou poliidroxicetonas) so as biomolculas mais abundantes no planeta, tendo como funes bsicas: reserva energtica e estrutural, Para um entendimento completo dessas molculas indispensvel o conhecimento de suas estruturas, suas reaes e como eles so identificados nos laboratrios. O reagente de molish(soluo alcolica de -naftol a 5%) sob a ao do cido sulfrico concentrada, os glicdios formam o composto furfural ou os seus derivados. Essas substncias condensam-se com o - naftol e produzem um composto de cor violeta, mostrando que a reao deu positiva para a presena de glicdios, embora no sendo especifica, pois se processa com outras substancias. O reagente de lugol(soluo com iodo) forma com o amido um complexo de cor azulada, e com o glicognio cor vermelha, no produzindo colorao com o iodo, celulose, mono e dissacaridios. O reativo de Benedicte (citrato de sdio, carbonato de sdio anidro, e sulfato de cobre) reage em meio alcalino com a hidroxila anomrica livre (oxi-reduo) formando xido de cobre de cor vermelha ou amarela. A reao de Seliwanoff (resorcinol diludo em acido clordrico) diferencia aldedo de Cetose, formando um composto avermelhado para a funo cetose (reao positiva). bastante comum a utilizao de cidos fortes tais como: cido clordrico e cido sulfrico concentrado para a hidrlise de osdios (oligossacardeos e polissacardeos), para melhores estudos de suas unidades mais simples. (VILLELA, 1973). Essa prtica teve como objetivo a caracterizao e demonstrao das reaes clssicas, com o estudo dirigido para os aspectos qualitativos das reaes com os glicdios: Identificao de glicdios, identificao de redutores, diferenciao entre aldoses e cetoses, hidrlise de di e polissacardeos.

MATERIAL E MTODO

MATERIAIS - Pisceta com agua destilada - Bico de Busen - Suporte para tubo de ensaio

- Tubos de ensaio - Pera - Pipetas REAGENTES

- Soluo de amido 1% - Soluo de glicose 1% - Reativo de Seliwanoff - Sacarose 1% - Reativo de Benedict

- Soluo de frutose 1% - Soluo de cido clordrico - cido sulrico - Reagente de Lugol - Reagente de Molish (Soluo alcoolica de - naftol 5%)

MTODO

1-Reao com reagente de Molish (soluo alcolica de a- naftol a 5% ) Sob a ao desidratante do cido sulfrico concentrado, os glicdios do origem ao furfural ou aos seus derivados. Estas substncias condensam-se com o a - naftol produzindo um composto de cor violeta na interfase. Se um oligossacardeo ou polissacardeo estiver presente, eles so primeiro hidrolisados aos seus monossacardeos constituintes os quais ento so desidratados. As pentoses do o furfural e as hexoses o hidroximetilfurfural. O teste de Molisch considerado uma reao geral para glicdios, quer livres, quer combinados, embora no sendo especfica pois se processa com outras substncias. Preparou-se a seguinte srie de tubos, contendo: Tubo A Tubo B Tubo C 1 mL de gua destilada 1 mL de soluo de glicose 1% 1 mL de soluo de sacarose 1%

Tubo D 1 mL de soluo de amido 1% Colocou-se em cada tubo duas gotas do reagente de Molish. Agitando bem

Foi adicionado cuidadosamente sem agitao, em cada tubo, 1 mL de cido sulfrico concentrado, inclinando o tubo e deixando o cido escorrer lentamente pelas paredes do mesmo. Os tubos foram deixados em repouso na estante por 5 min. Para observar o que acontecia com a reao.

2. Reao com iodo O iodo presente no reagente de lugol forma, com o amido, um complexo de cor azul e com o glicognio , um complexo de cor vermelha. Celulose, mono e dissacardeos no produzem colorao com o iodo. Preparou-se a seguinte srie de tubos, contendo: Tubo A 1 mL de gua destilada Tubo B 1 mL de soluo de glicose 1% Tubo C 1 mL de soluo de sacarose 1% Tubo D 1 mL de soluo de amido 1%

Foi acrescentado, a cada tubo, duas gotas de reagente de lugol, foi misturado e observado o que acontecia. Aqueceu-se ligeiramente no banho-maria o tubo D at mudana da colorao. O tubo foi resfriado em gua corrente e observou-se novamente.

II - IDENTIFICAO DE GLICDIOS REDUTORES Os glicdios que possuem grupamento glicosdico livre (hidroxila anomrica livre), so capazes de reduzir ons de Cu++, Ag+ e Bi++. A reduo do Cu++ conseguida em meio alcalino, a quente:

Cu++ quente

Cu+ alcalino

Cu2O + H2O Vermelho ou amarelo

Mas o Cu++ tambm reage com o meio alcalino: Cu++ alcalino Cu (OH)2 CuO preto

Para evitar que esta reao mascare o teste de presena de glicdio redutor, o on Cu++ mantido em soluo alcalina sob a forma de complexo. H vrios reagentes base de Cu++, (como Fehling , Benedict) que diferem em relao ao solubilizador, ao alcalinizante ou ao reagente para o Cu++ formado. Reativo de Benedict. (Contm citrato de sdio, carbonato de sdio anidro e sulfato de cobre). Reao de Benedict Preparou-se a seguinte srie de tubos, contendo: Tubo A 1 mL de gua destilada Tubo B 1 mL de soluo de glicose 1% Tubo C 1 mL de soluo de frutose 1% Tubo D 1 mL de soluo de amido 1% Foi acrescentado a cada um deles 1 mL do reagente de Benedict. Aqueceu-se 3 minutos, em banho-maria fervente. E se observou o que conteceu.

III-DIFERENCIAO ENTRE ALDOSES E CETOSES

Reao de Seliwanoff - O reagente de Seliwanoff contm resorcinol diludo em cido clordrico. Este teste permite diferenciar aldoses e cetoses, que sob a ao desidratante do cido clordrico so transformadas em derivados de furfural, que se condensam com o resorcinol formando um composto. A reao com cetose rpida e mais intensa pela facilidade de formao do derivado furfural. A sacarose d reao positiva: Explicar este fato.

Preparou-se os seguintes tubos de ensaio: Tubo A 3 mLde Seliwanoff + 5 gotas de gua destilada Tubo B 3 mL de Seliwanoff + 5 gotas de soluo de frutose 1% Tubo C 3 mL de Seliwanoff + 5 gotas de soluo de glicose 1% Tubo D 3 mL de Seliwanoff + 5 gotas de soluo de sacarose 1% Foi colocado em banho-maria 100C. Observou-se de trs em trs minutos, durante aproximadamente 10 minutos.

IV - HIDRLISE DE DISSACARDEOS

A sacarose um dissacardeo encontrado nas plantas (acar comum) e formada por uma unidade de D - glicose e uma de D - frutose com uma ligao do tipo a - 1,2 Oglicosdica. O amido o material de reserva celular dos vegetais. Contm dois tipos de polmeros da glicose, a amilose e a amilopectina. O primeiro consiste de cadeias longas, no ramificadas de unidades de D-glicose conectadas por ligaes a-1,4. A amilopectina altamente ramificada. As ligaes glicosdicas unindo os resduos de glicose nas cadeias da amilopectina so a-1,4, mas os pontos de ramificao, so ligaes a-1,6.

Hidrlise da sacarose

Preparou-se os seguintes tubos de ensaio: Tubo A 2 mL de soluo de sacarose 1% + 3 gotas de cido sulfrico concentrado Tubo B 2 mL de soluo de sacarose 1% + 3 gotas de gua destilada Foi colocado em banho-maria 100C durante trs minutos. Adicionou-se a cada tubo 3 mL do reativo de Benedict . Agitou-se e foi recolocado no banho-maria durante trs minutos.

RESULTADOS

Identificao de glicdios I- Reao com reagente de Molish Composto Tubo A Resultado

1 ml de gua Destilada + 2 Ausncia do Anel gotas do reagente de Molish +1 ml de cido sulfrico 1 ml de soluo de glicose Anel Violeta Tubo B 1% + 2 gotas de reagente de Molish + 1 ml de cido sulfrico 1 ml de soluo de Anel Violeta Tubo C sacarose 1% + 2 gotas de reagente de Molish + 1 ml de cido sulfrico 1 ml de soluo de amido Anel Violeta Tubo D 1% + 2 gotas de reagente de Molish + 1 ml de cido sulfrico FONTE: LABORATRIO DE BIOQUMICA, ACADMICOS DE ENFERMAGEM, 2013.2.

Reao:

Reao com Iodo COMPOSTO Tubo A Tubo B Tubo C 1 ml de gua Destilada+ 2 gotas de lugol 1 ml de soluo de glicose 1% + 2 gotas de lugol 1 ml de soluo de sacarose 1% + 2 gotas de lugol 1 ml de soluo de amido 1% + 2 gotas de lugol RESULTADO Amarelo Amarelo Amarelo

Tubo D

Amarelo

1 ml de soluo de amido Roxo 1% + 2 gotas de lugol + Banho Maria FONTE: LABORATRIO DE BIOQUMICA, ACADMICOS DE ENFERMAGEM, 2013.2.

Reao:

II- Identificao de Glicdios Redutores Reao de Benedict

COMPOSTO Tubo A

RESULTADO

1 ml de gua Destilada + Azul 1ml de Benedict 1 ml de soluo de glicose Laranja Tubo B 1% + 1ml de Benedict 1 ml de soluo de frutose Laranja Tubo C 1%+ 1 ml de Benedict 1 ml de soluo de amido Verde Tubo D 1% + 1 ml de Benedict FONTE: LABORATRIO DE BIOQUMICA, ACADMICOS DE ENFERMAGEM, 2013.2.

Reao:

III- Diferenciao entre Aldoses e Cetoses Reao de Seliwanoff

COMPOSTO 3 min Tubo A

RESULTADO 6 min

9min

3 ml de Seliwanoff + 5 gotas de gua Destilada 3 ml de Rosa Vermelho Vermelho Tubo B Seliwanoff + 5 gotas de soluo de frutose 1% 3 ml de Tubo C Seliwanoff + 5 gotas de soluo de glicose a 1% 3 ml de Rosa Vermelho Vermelho Tubo D Seliwanoff + 5 Rubro gotas de soluo de sacarose 1% FONTE: LABORATRIO DE BIOQUMICA, ACADMICOS DE ENFERMAGEM, 2013.2. Reao:

Hidrolise da Sacarose SOLUO Tubo A RESULTADO

2 ml de sacarose a 1 % + 3 Colorao Verde gotas de Ac. Sulfrico concentrado + 3 ml de Benedict 2 ml de sacarose a 1 % + 3 Colorao Azul Tubo B gotas de gua destilada + 3 ml de Benedict FONTE: LABORATRIO DE BIOQUMICA, ACADMICOS DE ENFERMAGEM, 2013.2. Reao:

DISCUSO I- Identificao de Glicdios 1. Reao de Molish O teste de Molisch um procedimento qumico usado para determinar a presena de hidratos de carbono numa soluo. No procedimento, foram usados 4 tubos (A, B,C e D) onde apenas o tubo C, contendo 1 mL de sacarose 1% , adicionou-se o reativo de Molisch (alfanaftol), com 1 mL de cido sulfrico e depois deixou-se em repouso por 5min. Assim o fenol reage com os produtos incolores e provoca o aparecimento de um anel de colorao lils, o que quer dizer que apenas a sacarose reagiu a reao de Molish. A nica desvantagem que esse teste no especifico pois em outras substancias, o teste pode ser processado embora no tubo A no reagiu por causa da agua. 2. Reao com Iodo Na reao com iodo presente no reagente lugol identificamos nos tubos quais dos compostos eram polissacardeos. Apenas o tubo D, constitudo por 1 mL de soluo de amido 1% reagiu com iodo formando um complexo de cores diferentes, no caso do amido, o complexo de cor ficou com tom azul escuro. Porm, nem todos os polissacardeos, apesar de serem molculas grandes, do complexo colorido com o iodo. Isso porque necessrio que a molcula apresente uma conformao que propicie o "encaixe" do iodo. A celulose um exemplo de polissacardeo que no d reao colorida com o iodo.

II. Identificao de Glicdios Redutores Neste procedimento para identificao usou-se o reagente de Benedict, que um reagente qumico de cor azulado, geralmente usado para detectar a presena de acares e acares redutores, nos quais os glicdios vo possuir um grupamento glicosdico livre que so capazes de reduzir os ons de cobre, que se incluem glicose, galactose, lactose, maltose e manose. O Reagente de Benedict consiste, basicamente, de uma soluo de sulfato cprico em meio alcalino (com muitos ons OH-); e pode ser preparado atravs do carbonato de sdio, citrato de sdio e sulfato cprico. Nos tubo que cotiam carboidratos redutores eles deveriam formar um composto de cor laranja ou avermelhada. Nesse caso os tubos B e C que cotiam glicose e frutose respectivamente so hidratos de carbono redutores, pois o glicdio ao reagir com ons cuproso eles formou o oxido cuproso o que dava a cor laranja ou avermelhada durante a reao de reduo do glicdio. Ento teve-se resultados positivos na qual redutores com cor alaranjada.

III - Diferenciao entre Aldoses e Cetoses O teste que permite diferenciar aldoses e cetoses o reagente de Seliwanoff que contm resorcinol diludo em cido clordrico que sob ao do cido so transformadas em derivados de furfural. A reao com Cetose rpida e mais intensa pela facilidade de formao do derivado furfural. No tubo B, contm 3 ml de Seliwanoff+ 5 gotas de frutose 1%, e houve reao pela presena de uma cetose livre. No tubo D, 3 ml de Seliwanoff+ 5 gotas de sacarose 1%, na qual composta por glicose + frutose, na qual possuem uma cetose livre.

IV - Hidrlise de Dissacardeos Ocorrem situaes especiais quando a sacarose est em gua destilada, no ocorre quebra de molcula quando colocamos o reagente de Benedict, ela no sofre reduo, e continua com a cor azul, aps os 3 minutos no banho maria. Quando colocamos a sacarose com o acido sulfrico, ocorre quebra da molcula em glicose e frutose, em seguida quando colocamos o reagente a colorao fica mais escura e turva devido a frutose que sofre reduo devido ser uma hexose com grupo cetona.

CONCLUSO Com base em todas as informaes relevadas no trabalho que se seguiu, podemos perceber que os glicdios, carboidratos ou acares, so de uma grande variedade de classificao e funes. Estes compostos diferem dos nmeros de tomos de carbono existentes nas suas molculas e grupo funcional principal. Os glicdios so capazes de nos alimentar durante toda a vida, como vimos so os mais abundantes e por isso so os que consumimos mais. E no apenas a funo energtica eles tambm participam da construo corporal dos seres vivos. Outro papel importante dos glicdios participar da estrutura dos cidos nuclicos, tanto do RNA quanto do DNA. No final os glicdios so de grande importncia para todos os animais, principalmente pelo uso que os vegetais fazem deles e que, ao sintetizarem-no, liberam oxignio que renova o ar que respiramos.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS 1. Nelson, D.L., COX, M.M. Lehninger: princpios de bioqumica.4.ed.So Paulo:SARVIER, 2006. 2. DEVLIN, T.M. Manual de Bioqumica com Correlaes Clnicas. 6. ed. So Paulo: Edgard Blcher, 2007. 1186p. 3. VILELLA, BACILA, TASTALDI. Tecnicas e experimentos de bioquimica. 1973 4. CISTERNAS, J. R., MONTE, O., VARGA, J.Fundamentos de bioquimica experimental. 2. ed. Sao Paulo: Atheneo, 2001. 276p