OBTENO E CARACTERIZAO DE LIGNINA DE MADEIRAS

Mrcio Andr de Lima Silveira, 2 Adriane Maria Ferreira Milagres

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Bolsista de iniciao Cientfica FAPESP, discente do curso de Engenharia Bioqumica Professor da Escola de Engenharia de Lorena da Universidade de So Paulo

1,2

Escola de Engenharia de Lorena da Universidade de So Paulo. Estrada Municipal do Campinho, s/n, Campus Lorena - SP, CEP 12602-810 e-mail: marcioals@alunos.eel.usp.br

RESUMO - A lignina um dos principais componentes da madeira. Sua estrutura difcil de ser caracterizada em razo de sua complexa formao baseada em unidades fenilpropanicas interligadas por diferentes tipos de ligao, como tambm pelas modificaes estruturais que sofre durante o processo de separao da parede celular. O estudo da degradao da lignina pode ser til na melhoria do processo de obteno da pasta celulsica na indstria do papel, e esse mesmo processo de degradao pode ser aplicado como tratamento de efluentes txteis no que se diz respeito descolorao de corantes recalcitrantes. Dois diferentes tipos de madeiras Eucalyptus grandis e Pinus radiata foram utilizadas para se obter uma frao solvel de lignina. As madeiras foram modas e ento sofreram tratamento com etanol e depois lcali, e solubilizadas utilizando-se dioxano. As ligninas obtidas foram caracterizadas por mtodos espectrofotomtricos no UV/visvel tendo sua absortividade medida em 280 nm e anlise de espectro infravermelho buscando bandas caractersticas de lignina. A quantidade de hidroxilas fenlicas, -carbonilas - insaturadas e -carbonilas foram quantificadas. Os rendimentos de obteno de lignina foram abaixo do esperado, provavelmente pela granulometria usada. As absortividades encontradas foram prximas s encontradas na literatura, e os espectros infravermelhos obtidos indicam picos caractersticos de lignina. Palavras-Chave: lignina, dioxano, Eucalyptus grandis, Pinus radiata.

INTRODUO
A lignina um dos principais componentes dos tecidos de gimnospermas e angiospermas, ocorrendo em vegetais e tecidos vasculares. A lignina apresenta um papel importante no transporte de gua, nutrientes e metablitos, sendo responsvel pela resistncia mecnica de vegetais. Sabe-se tambm que seres como fungos, algas e liquens no so lignificados (Fengel e Wegener, 1989). Mesmo aps muitos estudos terem sido realizados, sua estrutura ainda no pode ser completamente determinada, o que se deve principalmente a grande diversidade da estrutura das ligninas quando se passa de um vegetal para outro, ou at mesmo quando so analisadas partes diferentes de uma mesma planta. As condies do meio em que o vegetal se encontra tambm podem interferir na constituio da lignina, transformando assim a lignina num composto de estrutura difcil de ser caracterizada. Isto se deve a sua complexidade de formao, baseada em unidades fenilpropanides interligadas por diferentes tipos de ligaes, como tambm porque sofre modificaes estruturais

durante seu isolamento das paredes celulares. (Morais, 1987 e 1992) A lignina pode ser definida com um polmero derivado de unidades fenilpropanides denominadas C6C3 ou, simplesmente, unidades C9, repetidas de forma irregular, que tem sua origem na polimerizao desidrogenativa do lcool coniferlico. Lapierre (1993) classificou a lignina em core e no core, com base na sua suscetibilidade relativa hidrlise. Lignina no core: consiste de compostos fenlicos de baixa massa molecular, liberados da parede celular por hidrlise, que representada por cidos p-hidroxicinmico ster-ligados. Lignina core: consiste em polmeros fenilpropanides da parede celular, altamente condensados e muito resistentes degradao. Eles so compostos de unidades p-hidroxifenilas (H), guaiacila (G) e siringila (S) em propores diferentes (figura 1), de acordo com sua origem.

VIII Congresso Brasileiro de Engenharia Qumica em Iniciao Cientfica

27 a 30 de julho de 2009 Uberlndia, Minas Gerais, Brasil

permaneceu durante uma hora com NaOH em ebulio. Obteno de uma frao solvel de lignina A lignina foi isolada em atmosfera de nitrognio tambm, seguindo os mesmos cuidados para a retirada do oxignio do sistema, segundo o mtodo do dioxano (Browning, 1967). Dez gramas (10 g) de madeira pr-tratada com lcali foi colocada em um balo de duas bocas de 500 mL, em uma delas foi colocada uma coluna de destilao em refluxo, e na outra uma entrada de nitrognio juntamente a um termmetro. Usouse 200 ml de solvente contendo a mistura dioxano-gua (9:1 v/v) e 1,456 g de cido clordrico equivalente a 0,2M. A mistura reacional foi aquecida e mantida a 82-87 C por um perodo de 40 min. Ento, esperou-se a mistura esfriar at aproximadamente 50 C sempre mantendo a atmosfera de nitrognio. A fase lquida foi separada e o resduo slido foi submetido a mais uma extrao com 160 mL de soluo cida dioxano/gua por um perodo de 30 min. A fase lquida dessa segunda extrao tambm foi separada e combinada com a da extrao anterior, e ento levada para concentrar a 1/5 do volume original. O concentrado foi lentamente gotejado em gua destilada gelada (por volta de 600 mL), fazendo com que a lignina precipitasse. Essa lignina isolada foi filtrada e liofilizada. Anlise espectroscpica da na lignina no UV/Visvel Uma amostra de lignina foi dissolvida em dioxano 50% na concentrao de 20 mg/L e seu espectro de UV/visvel registrado em espectrofotmetro. Foi calculada a absortividade da lignina na regio de 280 nm. Anlise espectroscpica regio do infravermelho das ligninas na

(a)

(b)
Figura 1 Estrutura das unidades fenilpropanides p-hirdroxifenil (H), guaiacila (G) e siringila (S) Pode-se ento classificar as ligninas segundo a presena dessas unidades. Para ligninas de madeira dura, angiospermas, so formadas por unidades G e S, j para ligninas de madeira mole, gimnospermas, so formadas fundamentalmente de unidades G. Porm existem algumas espcies de gimnospermas que apresentam abundncia de G e S. (Chen, 1991).

MATERIAS E MTODOS
Preparo do Material Os cavacos de Eucalyptus grandis (no texto referido como eucalipto) e Pinus radiata (no texto referido como pinos) foram modos e peneirados a 35 mesh e colocados dentro de saches de papel de filtro. Um balo contendo soluo de etanol 90% foi ligado a um condensador tipo Soxhlet, no qual foram colocados os saches. O balo foi aquecido atravs de uma manta trmica e o sistema foi mantido at que o etanol que se acumulasse no Soxhlet antes do refluxo ficasse novamente transparente. Tratamento lcali da madeira O tratamento alcalino usado apenas em eucalipto. Um balo de duas bocas foi preparado com soluo de NaOH 0,3 % (0,075 mol/L) e a madeira livre de extrativos (na proporo 50:1 lquido-madeira). Em uma das bocas foi colocada uma coluna de destilao em refluxo, na outra uma entrada de nitrognio. O N2 foi borbulhado na soluo durante 5 minutos para retirada do oxignio do sistema. Em seguida, o sistema foi aquecido com uma manta trmica. O tratamento

Foram preparadas pastilhas (atravs da compactao a 10-12 kgf/cm sob vcuo), de brometo de potssio contendo 1 mg de lignina e, a seguir, foram registrados os espectros na regio de 4000 a 800 cm-1. As bandas em (3412 cm-1 a 3460 cm-1) referem-se a grupos O-H -1 -1 (estiramento); (92842 cm a 3000 cm ) a grupos C-H (estiramento); (1750 cm-1) grupos carbonila no conjugados; (1593 cm-1 a 1605 cm-1) anis aromticos (vibrao) e tambm estiramento de -1 -1 grupos C=O conjugados; (1505 cm a 1515 cm ) grupos C-H em anel aromtico (caracterstica de -1 -1 lignina); (1300 cm a 1520 cm ) regio de grupos -1 -1 C-H variados; (1221 cm a 1230 cm ) grupos CC, C-O e C=O (estiramento); (1000 cm-1 a 1125 cm-1) grupo C-O (deformao).

Determinao de hidroxilas fenlicas Utilizou-se o mtodo da espectroscopia UV diferencial que consiste na varredura, em um espectrofotmetro de duplo feixe, de uma soluo de lignina em meio bsico contra a mesma soluo em meio cido. A determinao de OH fenlico foi feita com base na absortividade mdia de compostos modelos de lignina (Wexler, 1964). Uma soluo de lignina foi preparada atravs da diluio de 1,0 mL de uma soluo 20 mg/L em 10 mL de soluo de dioxano 50 %. O pH das solues foi ajustado em 13, com hidrxido de sdio 1,0 M. Um branco de cada amostra foi feito na mesma diluio, porm em pH 1, ajustado pela adio de cido clordrico 1,0 M. A varredura da soluo alcalina contra a soluo cida foi realizada. A equao 1 descreve a forma como o teor de hidroxilas fenlicas foi determinado.

E342 = A342 x massa molar da frmula C9 da lignina em questo/ Clig X = n de -carbonilas - insaturadas / C9 Y = n de -carbonilas / C9 A310 e A342 = Absorbncias nos respectivos comprimentos de onda, no espectro da soluo sem reduo contra a soluo reduzida (ambas em mesma concentrao). Clig = concentrao de lignina em g/L Os ndices numricos das equaes so valores obtidos a partir da determinao de carbonilas em compostos modelos de lignina (acetoguaiacona e coniferaldedo) (Adler e Marton, 1959).

RESULTADOS E DISCUSSO
Obteno de uma frao solvel de lignina A obteno de uma frao solvel de lignina segundo o mtodo do dioxano se mostrou um processo delicado. O rendimento de obteno no foi alto como esperado, o que pode ser justificado pela madeira moda no ter sido peneirada em uma malha com mesh maior, fazendo assim com que o material fosse mais finamente dividido, tendo uma maior rea superficial em contato com os reagentes do tratamento e da fase de isolamento da lignina, aumentando o rendimento das reaes. Outra dificuldade encontrada foi a transferncia quantitativa da madeira durante as etapas de extrao. A figura 2 mostra a porcentagem de massa perdida aps o tratamento com etanol para ambas as madeiras estudadas, a porcentagem de massa perdida no tratamento alcalino para a madeira dura, e, por fim, a porcentagem de lignina obtida considerando como 100% de obteno a massa total de lignina que cada madeira tem em sua composio. E. grandis tem 20,61% de sua massa em lignina, enquanto P. radiata tem 22,13% (Shebani et al., 2008). Anlise espectroscpica regio do UV-Visvel das ligninas na

(1) Onde: %OHfenlico = porcentagem de hidroxilas fenlicas ABS250 = Absorbncia da soluo em 250 nm, subtrada da absorbncia relativa a linha base do espectro. CLig = Concentrao de lignina em g/L 0,192 = relao de porcentagem de OH fenlico por absortividade em 250 nm (L/g.cm), determinada para vrios compostos modelos de lignina, em g/L. Determinao de carbonilas Foram misturados 2,0 ml de uma soluo 20 mg/L de lignina em dioxano 50% e 1 ml de soluo 0,05 M de boroidreto de sdio (190 mg de boroidreto em 100 ml de hidrxido de sdio 0,03 M). A mistura ficou no escuro por 45 horas, a temperatura ambiente. Posteriormente, os espectros diferenciais foram registrados na regio de 200-400 nm, contra uma soluo no reduzida da amostra na mesma concentrao. (Adler et al., 1959). O clculo do teor de grupos carbonila (estruturas tipo acetoguaiacona e coniferaldedo) foi realizado atravs da resoluo das equaes 2 e 3 (Adler e Marton, 1959; Ferraz, 1991):

(2) (3) Onde: E310 = A310 x massa molar da frmula C9 da lignina em questo/ Clig

As figuras 3 e 4 mostram os espectros das ligninas isoladas de eucalipto e pinos, respectivamente. De modo geral, os espectros apresentaram caractersticas de lignina, com absorbncia mxima em 280 nm (Fengel e Wegner, 1989). Os valores de absortividade em 280 nm para eucalipto e pinos foram de, 10,3 L.g-1 -1 -1 e 18,2 L.g cm , respectivamente. A 1cm absoro em 280 nm atribuda presena de anis aromticos substitudos com grupos oxigenados (Fengel e Wegner, 1989). Ligninas purificadas mostram valores de absortividades que variam entre 12 e 20 L.g-1cm-1 (Fengel e Wegner, 1989), sendo que os valores obtidos

nesses experimento se mostram prximos aos usuais.

Figura 4 Absortividade em funo do comprimento de onda para lignina de P. radiata. Figura 2 Resultados de obteno de lignina. A barra azul representa a porcentagem de massa perdida aps tratamento com etanol, a barra vermelha a porcentagem de massa perdida aps tratamento alcalino, a barra verde representa a porcentagem de obteno de lignina considerando 100% como o total de lignina esperado para o material. Anlise espectroscpica regio do UV-Visvel das ligninas na Anlise espectroscpica das regio do infravermelho mdio ligninas na

Foram obtidos os espectros das ligninas de eucalipto (figura 5) e pinos (figura 6) na regio do infravermelho. Os espectros possuem bandas caractersticas de lignina (Faix, 1991). Os espectros aqui apresentados tm funo mais descritiva e de confirmao da presena de grupos caractersticos das ligninas.

As figuras 3 e 4 mostram os espectros das ligninas isoladas de eucalipto e pinos, respectivamente. De modo geral, os espectros apresentaram caractersticas de lignina, com absorbncia mxima em 280 nm (Fengel e Wegner, 1989). Os valores de absortividade em 280 nm para eucalipto e pinos foram de, 10,3 L.g1cm-1 e 18,2 L.g-1cm-1, respectivamente. A absoro em 280 nm atribuda presena de anis aromticos substitudos com grupos oxigenados (Fengel e Wegner, 1989). Ligninas purificadas mostram valores de absortividades -1 -1 que variam entre 12 e 20 L.g cm (Fengel e Wegner, 1989), sendo que os valores obtidos nesses experimento se mostram prximos aos usuais.

Figura 5 Espectro no infravermelho da lignina de E. grandis. Determinao de carbonilas (estrutura tipo coniferaldedo e acetoguaiacona) e hidroxilas fenlicas O teor de hidroxilas fenlicas no pode ser calculado, pois os espectros obtidos para as duas ligninas no definiram uma regio de mnimo com a qual pudesse ser traada uma linha base para ser subtrada da absorbncia em 250 nm. Supese que os estabilizantes contidos no Dioxano utilizado tanto durante a extrao da frao solvel de lignina como no preparo das solues de lignina interferem nas leituras a baixos comprimentos de onda, onde ocorre a formao do limite inferior. Os espectros obtidos nessa anlise se encontram nas figuras 7 e 8.

Figura 3 Absortividade em funo do comprimento de onda para lignina de E. grandis.

Figura 6 Espectro no infravermelho da lignina de P. radiata.

Figura 8 Espectro diferencial na regio UV/Visvel de uma soluo de lignina de P. radiata em pH 13 contra a mesma soluo em pH 1. Os espectros obtidos na anlise de carbonilas so mostrados nas figuras 9 e 10. A lignina reduzida aquela que sofreu reao com boroidetro de sdio, enquanto a no reduzida a mesma lignina sem ter reagido com o boroidreto de sdio.

Determinao de carbonilas (estrutura tipo coniferaldedo e acetoguaiacona) e hidroxilas fenlicas O teor de hidroxilas fenlicas no pode ser calculado, pois os espectros obtidos para as duas ligninas no definiram uma regio de mnimo com a qual pudesse ser traada uma linha base para ser subtrada da absorbncia em 250 nm. Supese que os estabilizantes contidos no dioxano utilizado tanto durante a extrao da frao solvel de lignina como no preparo das solues de lignina interferem nas leituras a baixos comprimentos de onda, onde ocorre a formao do limite inferior. Os espectros obtidos nessa anlise se encontram nas figuras 7 e 8.

Figura 9 Espectro obtido a partir de uma soluo de lignina de E. grandis no reduzida contra uma soluo reduzida com boridreto de sdio.

Figura 7 Espectro diferencial na regio UVVisvel de uma soluo de lignina de E. grandis em pH 13 contra a mesma soluo em pH 1

Figura 10 Espectro obtido a partir de uma soluo de lignina de P. radiata no reduzida contra uma soluo reduzida com boridreto de sdio

Os teores de carbonilas calculados se encontram na tabela 1. Como as anlises efetuadas aqui s tm como finalidade confirmar as amostras como lignina, anlises elementares no sero realizadas, sendo assim as massas molares de

frmula C9 das ligninas no so conhecidas. Por isso, foi proposta uma massa molar mdia de 180 g/mol por unidade C9 para ambas as ligninas, de forma que podemos obter um valor mdio para comparao de carbonilas e hidroxilas fenlicas entre as duas ligninas em estudo.

Tabela 1 Valores calculados para carbonilas para os dois tipos de lignina

-carbonilas - insaturadas por 100 unidades C9 Lignina Eucalipto Lignina Pinus 0,74 0,06

-carbonilas por 100 unidades C9 6,54 3,00

CONCLUSO
O presente trabalho obteve uma frao de lignina solvel em solvente orgnico, que pode ser comprovada a partir dos ensaios de caracterizao, pois as amostras apresentaram caractersticas de lignina. O mtodo de purificao de lignina nas condies utilizadas um processo sensvel, j que objetiva uma lignina que no se oxide durante o processo. Os rendimentos obtidos podem ser aumentados se a madeira moda tiver um tamanho de partcula ainda menor. Os mtodos espectroscpicos para anlise de carbonilas e hidroxilas fenlicas no se mostraram precisos, sendo assim, para estudos quantitativos, outras tcnicas so recomendadas.

LAPIERRE C, 1993. Application of new methods for the investigation of lignin structure. In: JUNG HG, BUXTON DR, HATFIELD RD, et al. Forage cell wall structure and digestibility. Madison: American Society for Agronomy, P.113-163. MORAIS SAL, 1987. Contribuio ao estudo qumico de ligninas de Eucalyptos grandis. Belo Horizonte, 175p. Dissertao (Mestrado em Qumica) UFMG/ICEx. MORAIS SAL, 1992. Contribuio ao estudo qumico e escpectroscpico da lignina de madeira moda do Eucalypto grandis: isolamento, quantificao e anlise estrutural. Belo Horizonte, 192, 260p. Tese (Doutorado em Qumica) UFMG/ICEx. SHEBANI AN, van REENEN AJ, MEINCKEN M. 2008. The effect of wood extractives on the thermal stability of different woods species. Thermochimica Acta. (471) 43-50. WEXLER, AS. 1961. Characterization of lignosulfonates by ultraviolet spectrometry. Analytical chemestry. (36): 213-221.

AGRADECIMENTOS
Agradeo ao Prof. Dr. Andr Ferraz pela ajuda no desenvolvimento de alguns dos experimentos, ao Fernando Masarin por muitas dvidas sanadas, aos meus colegas de laboratrio, e a Fundao de Amparo a Pesquisa de So Paulo pelo financiamento do trabalho (Processo n 2008/6039-8).

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
ADLER E, MARTON J. 1959. Zur Kenntnis der carbonylgrupen in lignin I. Acta Chem. Scan. (13): 75-96. BROWNING, B. L. 1967. Methods in Wood Chemistry; Interscience Publishers: New York; Vol. II, pp 732-734. CHEN CL, 1991. Lignins. Occurrence in wood tissues, isolation reactions and structure. In: LEWIS M, GOLDSTEIN IS (ed.). Wood Structure and composition. N.i. : Marcel Dekker. FAIX, O. 1991. Classification of Lignins from Different Botanical Origins by FT-IR Spectroscopy. Holzforschung. 1991 (45):21-27. FENGEL D, WEGENER G, 1989. Wood Chemestry, Ultrasstructure and Reactions. Berlin: Walter de Grutyer, pp 132-191 FERRAZ, A. Contribuio ao estudo do ascomiceto Chrisonila sitophilia: biodegradao da madeira e seus componentes. Instituto de Qumica. Universidade de Campinas.