Tcnicas Parasitologicas

Cpsula de Beal Mtodo de Sedimentacin Simple en Copas Mtodo de Charles - Barthelemy Mtodo de Teleman Examen CPS de Concentracin por Sedimentacin de Muetsras Preservadas con MIF

cpsula de Beal

Fundamento Material Mtodo

FUNDAMENTO Se usa para demostrar la presencia de parsitos que se alojan en duodeno y que en un momento crean dificultades para el diagnostico.

MATERIAL

Vidriera Vidrio de reloj caja petri Pipeta Pasteur Portaobjetos Cubreobjetos

Aparatos Microscopio compuesto

Otros Tela adhesiva Guantes de cirujano Bulbo de goma Cpsula de Beal ( cpsula de gelatina, tipo farmacutico, con hilo trenzado de niln y algodn, de aproximadamente 90 cm. de longitud para adultos y de 70 cm. para nios; en su interior contiene un fragmento de plomo cubierto de silicones; hilo sale por el extremo posterior de la cpsula y cuando esta lista para administrarse, el hilo lo tiene doblado en su interior) Pinzas

METODO 1. Se le pedir al paciente que se presente en el laboratorio por la maana y en ayuno.

2. Se toma la cpsula con las pinzas, del extremo del hilo que sobresale. 3. Se le dice al paciente que ingiera la cpsula, con jugo o te, mantenindola fija del extremo del hilo. 4. Cuando ya ha tragado la cpsula, el extremo del hilo se le fija en la mejilla con cinta adhesiva. 5. Se le pide al paciente que camine un rato y en seguida que se recueste del lado derecho. 6. Se le deja la cpsula de hora a 1 . 7. Pasando el tiempo sealado se extrae el hilo, mediante una tensin suave y sostenida; si estuvo en el duodeno, presentara el hilo en una coloracin verde amarillenta. 8. Se exprime con los dedos pulgar e ndice, y se deposita el producto en el vidrio reloj con una pequea cantidad de solucin salina. 9. Se homogeniza la muestra y se toma una porcin con la pipeta. 10. Se coloca en el portaobjetos y de cubre; y se observa en el microscopio con los objetivos de 10X y 40X.

Mtodo de Sedimentacin Simple en Copas

Fundamento Material Mtodo

FUNDAMENTO

Este procedimiento de decantacin en copas es una tcnica farmacutica conocida desde muchos aos en el cual se utiliza un procedimiento fsico para la separacin de mezclas. Este mtodo tambin es utilizado para el diagnostico de aquellas muestra de heces fecales sospechosas de contener huevos de Fasciola hepatica; el mtodo ha demostrado ser bondadoso para otro tipo de huevos de helmintos e incluso para quistes de protozoario. Las ventajas que tiene, sobre otro, es que hace una concentracin de volmenes considerablemente grandes de materia fecal.

MATERIAL Reactivos Verde de malaquita Detergente Agua de la llave Agua destilada

Soluciones Solucin de detergente al 5% ( Se pasan 5 g de detergente de cualquier marca y se disuelve en 1000 ml de agua; el detergente que no se alcance a disolver, se sedimenta y decanta el sobrenadante o se deja en el frasco donde se guarda la solucin, pues no interfiere en el proceso) Solucin de verde de malaquita al 1% ( Se disuelve el verde de malaquita en los 100 ml de agua y se guarda la solucin en frascos con tapn esmerilado).

Vidriera Copas crnicas Pipeta pasteur Portaobjetos

 Aparatos Otros

Cubreobjetos. Embudo

Microscopio compuesto

Aplicadores de madera Bulbos de caucho Gasa

METODO

1. En el recipiente donde se llevo la muestra al laboratorio se homogeneiza la muestra con agua de la llave y se hace pasar a travs de la gasa previamente colocada en un embudo y recibiendo la suspensin en la copa. 2. Se colocan 5 ml de colorante y se agita con un aplicador 3. Se agregan 5 ml de la solucin de detergente y se agita nuevamente 4. Se completa el volumen de la copa y se deja reposar durante 15 min. 5. Se decanta el sobrenadante y se agrega mas agua, mezclando con el aplicador y se deja reposar otros 15 min. 6. Se decanta nuevamente el sobrenadante. 7. Con la pipeta con bulbo, se toma del sedimento la muestra que se coloca en el portaobjetos y se pone el cubreobjetos.

8. Se observa con el microscopio, usando objetivos de 10X y 40X, cuando sea necesario. 9. Se hacen tres preparaciones de cada sedimento para asegurar la positividad de la muestra. Cuando se tiene suficiente practica se puede utilizar la lupa del microscopio, sobre todo cundo se busca la F. hepatica.

Mtodo de Charles - Barthelemy

Fundamento Material Mtodo

FUNDAMENTO Bueno no hay mucho que decir pero su utilidad es para hacer una buena concentracin de quistes, huevos y larvas. Pero como todo buen mtodo tiene una limitacin que es por resulta antieconmico por los reactivos que utilizan.

MATERIAL Reactivos Formaldehdos Q.P.

Cloruro de sodio cido ctrico cristalizado Agua destilada ter etlico

Soluciones Solucin salina formolada Solucin ctrica formulada Lugol

Vidriera Tubos de ensay Portaobjetos Cubreobjetos Pipeta Pasteur

Aparatos Otros Cpsula de porcelana Tela metlica de malla fina o gasa Tapones de caucho Aplicadores Microscopio compuesto Centrifuga

METODO 1. Suspender 1 a 2 g de materia fecal en 10 ml aprox. En la solucin salina formulada, utilizando la cpsula de porcelana para homogenizar. 2. Pasar la suspensin a travs de la malla o gasa. 3. Centrifugar a 1,8000 rpm durante 60 4. Decantar y agregar el sedimento de solucin ctrica formulada, hasta llenar unos dos tercios de tubos. 5. Agitar con fuerza y aadir el ter hasta del borde. 6. Tape el tubo con el tapn de caucho y agite violentamente hasta lograr la homogenizacin de las sustancias que contiene. 7. Destapar con cuidado el tubo, para evitar la proyeccin de la mezcla y centrifugar durante 30 a 1,800 rpm. 8. Con un aplicador, se rompe el tapn de las heces, gasas y otros restos, agitando ligeramente con el aplicador. 9. Se vuelve a centrifugar durante 30 10. Se rompe nuevamente el tapn superior de restos fecales, desprendindolo de las paredes del tubo con cuidado, ayudndose con el aplicador. 11. S decanta de una sola vez, procurando que quede una pequea cantidad de 2 a 4 gotas liquidas junto con el sedimento. 12. Agrega al sedimento una gota de lugol y agitar el tubo ligeramente para homogenizar. 13. Con la pipeta, se toma una gota de la suspensin coloreada del fondo del tubo y se coloca en el porta y se cubre. 14. Se observa en el microscopio con objetivos 10X y 40X.

Mtodo de Teleman

Fundamento Material Mtodo

FUNDAMENTO En 1908, Telemann describe su mtodo, el cual es modificado por Rivas en 1928, quien cambio el cido clorhdrico por cido actico. En esta seccin se describir el original. La utilidad es para concentracin de huevos, quistes y larvas, sobre todo aquellas muestras que tienen elevadas concentraciones de grasas neutras y cidos grasos libres.

MATERIAL Reactivos ter etlico cido clorhdrico concentrado Agua destilada

Soluciones Solucin de cido clorhdrico al 15%

Vidriera Vaso de precipitado Tubos cnicos Pipeta pasteur Portaobjetos Cubreobjetos

Aparatos Otros Aplicadores Tapn de goma o caucho Gasa o algodn Bulbo de goma Gradilla Microscopio compuesto Centrifuga

METODO 1. Se coloca un fragmento de heces del tamao de un frjol ( aprox. 1 g) 2. Se le agrega en el vaso de precipitados cido clorhdrico al 15%, y se homogeneiza con el aplicador cuidadosamente 3. Se pasa la suspensin por dos capas de gasa o algodn previamente humedecido.

4. Se aade ter en cantidades iguales y se coloca un tapn de caucho o se tapa con el pulgar. 5. Se agita vigorosamente y se afloja el tapn o el dedo para disminuir la presin y se destapa. 6. Se centrfuga a 1500 rpm durante 1. 7. Se saca de la centrifuga y se observan cuatro capas: 1) ter; 2) Tapn de restos fecales; 3) Capa de cido; 4) Sedimento inferior que contiene la forma parasitaria. 8. Se mantiene en el tubo horizontal y con un aplicador de madera y con un movimiento circular, se despega el tapn de restos fecales. 9. Rpidamente, pero con cuidado se vierten el ter, tapn y capa de asido, de manera que quede el sedimento en el tubo. 10. Se mantiene el tubo en posicin horizontal, para evitar que los restos de extracto graso y de tapn fecal bajen por las paredes al sedimento. 11. Se introduce un aplicador con hisopo de algodn y se limpian las paredes del tubo. 12. Con el tubo vertical, se toma parte del sedimento con una pipeta. 13. Se coloca en un portaobjetos y se coloca encima el cubreobjetos. 14. Se examina con el microscopio con los objetivos 10X y 40X.

Examen CPS de Concentracin por Sedimentacin de Muetsras Preservadas con MIF

Fundamento Material

Mtodo

FUNDAMENTO Esta tcnica fue descrita por Blagg y cols. En 1955; es una tcnica semejante a la del formol ter, pero es este caso no se utiliza el formol porque se va a trabajar con una muestra previamente preservada. Esta tcnica permite hacer una buena concentracin de huevos, quistes y larvas personas muy especializadas en el manejo de esta tcnica han descrito concentracin tambin de trofozoitos, aunque algunos otros investigadores sealan que estos se pueden destruir con el ter a pesar de que haya sido previamente fijados y conservados con el MIF. Pero hasta el momento no se a descrito limitaciones, salvo que los reactivos son muy costosos.

MATERIAL Reactivos ter etlico Mertiolate Yodo Yoduro de potasio Formaldehdo Glicerina Agua destilada

Soluciones Solucin de MIF

Vidriera Tubos cnicos Pipeta pasteur Portaobjetos Cubreobjetos

Aparatos Otros Topn de caucho Aplicadores de madera Algodn y gasa Gradilla Microscopio compuesto Centrifuga

METODO 1. Mezclar la suspensin fecal MIF y pasarla a travs de gasa humedecida en MIF a un tubo cnico de centrifugacin. Si no es suficiente la muestra, se aade preservador hasta aproximadamente 10 ml y se agita para homogeneizar. 2. Se le agrega 3 ml de ter, se tapa el tubo con el tapn de caucho y se agita con cuidado, pero vigorosamente, durante 1.

3. Despus de agitar, se quita el tapn con cuidado y se centrifuga a 1500 rpm durante 1. 4. Despus de centrifugar, se forman cuatro capas: 1) ter; 2) restos fecales; 3) solucin MIF; 4) sedimento con las formas parasitarias si las hay. 5. Se desprende el tapn de restos fecales con un aplicador y se decanta, dejando el sedimento 6. Con un hisopo en un aplicador de madera, se limpian las paredes del tubo. 7. Con una pipeta, se toma la muestra de la parte superior del sedimento, se coloca en un portaobjetos y se cubre. 8. Se examina con el microscopio a los objetivos de 10X y 40X.