PRACTICA N 2 CARIOTIPO HUMANO I

INTRODUCCIN Los cromosomas son las estructuras formadas por la condensacin de la cromatina durante los procesos de divisin celular. Se tien intensamente con colorantes bsicos que interaccionan con el DNA. Los cromosomas mitticos humanos cuando estn duplicados tienen una forma similar a una X. Las cromtidas hermanas se mantienen unidas por una regin de constriccin primaria llamada centrmero. Su posicin es variable; si se encuentra en la parte media, los cromosomas son metacntricos; si se encuentra desplazado hacia un extremo (dando brazos de diferente tamao, p y q), produce cromosomas submetacntricos; si est cerca del extremo final sern acrocntricos y si es terminal telocntricos. En el humano existen normalmente cromosomas de los tres primeros tipos, no existiendo telocntricos, los cuales se observan en otros organismos, como por ejemplo el ratn. El cariotipo es el arreglo ordenado de los cromosomas que generalmente se muestra organizado de acuerdo a su tamao y patrn de bandeo de los mismos en la metafase mittica. Representa el complemento cromosmico de un individuo de una especie. El anlisis de las caractersticas de los cromosomas y sus anomalas es el objeto de estudio de la citogentica humana. Cada cromosoma normal tiene una morfologa y un tamao constantes. En la actualidad, el anlisis cromosmico, con una mejora espectacular en su resolucin a nivel citolgico y genmico, es un procedimiento de importancia creciente en numerosas reas de la medicina clnica. Para el anlisis cromosmico sistemtico que se lleva a cabo por motivos clnicos, las clulas tienen que ser capaces de crecer y dividirse rpidamente. Es posible realizarlo con una variedad de tejidos, pero el de eleccin es el cultivo de linfocitos de sangre perifrica. Adems de linfocitos, es posible realizar cultivos (ms laboriosos) de fibroblastos drmicos, de clulas exfoliadas de mucosas, de clulas fetales presentes en el lquido amnitico y otras. Se pueden efectuar preparaciones directas (sin cultivo) de clulas de mdula sea obtenidas por puncin; aunque la calidad de estas preparaciones es menor que las de los cultivos, tienen la ventaja de ser analizables el mismo da de la toma de la muestra. La clasificacin bsica de los cromosomas humanos en metafase fue derivada de conferencias en Denver (1960), Londres (1963) y Chicago (1966). Se acord numerar los autosomas en pares del 1 al 22 de acuerdo al tamao decreciente y posicin del centrmero principalmente. Los 22 pares de autosomas se dividen en 7 grupos (A-G) los cuales son fcilmente distinguibles con tinciones comunes. Los cromosomas sexuales fueron designados X e Y.

El bandeo cromosmico contribuye a identificar los cromosomas individuales y las anomalas estructurales de los cromosomas. Las tcnicas de bandeo incluyen el bandeo de quinacrina, Giemsa, invertido, C y NOR. El bandeo de alta resolucin, utilizando cromosomas en profase o en prometafase, aumenta el nmero de bandas observables. OBJETIVOS

1. Explicar los fundamentos en los que se basa la tcnica de cultivo de linfocitos y el bandeo Giemsa (bandeo G). 2. Reconocer los cromosomas humanos y elaborar un cariotipo a partir de una fotografa.

FUNDAMENTO TEORICO:

Cariotipado clsico
Existen varios mtodos para la visualizacin mediante microscopa ptica de los cromosomas humanos. Los procedimientos ms clsicos consisten en la tincin con sustancias como la mostaza de quinacrina, que permite la observacin de las bandas Q, giemsa, que permite la observacin de las bandas G, R o C (dependiendo del tratamiento que se realice con el ADN). Este bandeo caracterstico de cada uno de los cromosomas est relacionado con regiones de eucromatina (bandas R), heterocromatina facultativa (bandas G), heterocromatina constitutiva (bandas C). El cariotipo de alta resolucin, basado en la tincin de los cromosomas en profase o prometafase, permite distinguir ms de ochocientas bandas. No obstante existen distintas visiones del motivo por el cual se pueden hacer estas correlaciones.El uso de tcnicas de bandeo junto al estudio del cariotipo ha sido utilizado para la deteccin de aberraciones cromosmicas a gran escala. Es decir, aberraciones que afectan a regiones de un cromosomas o al propio cromosoma. Estas aberraciones cromosmicas o anomalas cromosmicas se pueden dividir en numricas y estructurales.Un idiograma es la representacin esquemtica del tamao, forma y patrn de bandas de todo el complemento cromosmico, los cromosomas se sitan alineados por el centrmero, y con el brazo largo siempre hacia abajo.

Los grupos que comprende el cariotipo humano son los siguientes: - Cromosomas grandes Grupo A, (cromosomas 1, 2 y 3), metacntricos Grupo B, (cromosomas 4 y 5), submetacntricos - Cromosomas medianos Grupo C, (cromosomas 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 y adems los cromosomas X), submetacntricos Grupo D, (cromosomas 13, 14 y 15) acrocntricos - Cromosomas pequeos Grupo E, (cromosomas 16, 17 y 18) submetacntricos Grupo F, (cromosomas 19 y 20) metacntricos Grupo G, (cromosomas 21 y 22) acrocntricos

Cariotipo
El cariotipo es el patrn cromosmico de una especie expresado a travs de un cdigo, establecido por convenio, que describe las caractersticas de sus cromosomas. (vase el apartado Nomenclatura de este artculo). Debido a que en el mbito de la clnica suelen ir ligados, el concepto de cariotipo se usa con frecuencia para referirse a un cariograma, el cual es un esquema, foto o dibujo de los cromosomas de una clula metafsica ordenados de acuerdo a su morfologa (metacntricos, submetacntricos, telocntricos, subtelocntricos y acrocntricos) y tamao, que estn caracterizados y representan a todos los individuos de una especie. El cariotipo es caracterstico de cada especie, al igual que el nmero de cromosomas; el ser humano tiene 46 cromosomas (23 pares porque somos diploides o 2n) en el ncleo de cada clula,1 organizados en 22 pares autosmicos y 1 par sexual (hombre XY y mujer XX).Cada brazo ha sido dividido en zonas y cada zona, a su vez, en bandas e incluso las bandas en sub-bandas, gracias a las tcnicas de marcado. No obstante puede darse el caso, en humanos, de que existan otros patrones en los cariotipos, a lo cual se le conoce como aberracin cromosmica.

Los cromosomas se clasifican en 7 grupos, de la A a la G, atendiendo a su longitud relativa y a la posicin del centrmero, que define su morfologa. De esta manera, el cariotipo humano queda formado as:

Grupo A: Se encuentran los pares cromosmicos 1, 2 y 3. Se caracterizan por ser cromosomas muy grandes, casi metacntricos. En concreto, 1 y 3 metacntricos; 2 submetacntrico. Grupo B: Se encuentran los pares cromosmicos 4 y 5. Se trata de cromosomas grandes y submetacntricos (con dos brazos muy diferentes en tamao). Grupo C: Se encuentran los pares cromosmicos 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, X. Son cromosomas medianos submetacntricos. Grupo D: Se encuentran los pares cromosmicos 13, 14 y 15. Se caracterizan por ser cromosomas medianos acrocntricos con satlites. Grupo E: Se encuentran los pares cromosmicos 16, 17 y 18. Son cromosomas pequeos, metacntrico el 16 y submetacntricos 17 y 18. Grupo F: Se encuentran los pares cromosmicos 19 y 20. Se trata de cromosomas pequeos y metacntricos. Grupo G: Se encuentran los pares cromosmicos 21, 22, Y. Se caracterizan por ser cromosomas pequeos y acrocntricos (21 y 22 con satlites).

Mediante el cariotipado se pueden analizar anomalas numricas y estructurales, cosa que sera muy difcil de observar mediante gentica mendeliana.

Requisitos para el estudio del cariotipo

Ante todo, deben guardarse las mximas condiciones de esterilidad. Adems, debe cumplirse lo siguiente:

Las clulas deben encontrarse en divisin. Para ello, se har la incubacin de la muestra en presencia de productos inductores de la mitosis (mitgenos), como es el caso de fitohemoaglutinina. Las clulas deben pararse en prometafase, empleando colchicina, la cual interfiere en la polimerizacin de los microtbulos del huso mittico. Con el objetivo de conseguir una buena separacin cromosmica, las clulas deben someterse a choque osmtico. Para ello, se emplea un medio hipotnico (0,075M KCl), que ocasiona el aumento de volumen de las clulas.

Las clulas tienen que ser fijadas. Hay que proceder a la tincin de los cromosomas para que sean identificables.

Tincin
El estudio de los cariotipos es posible debido a la tincin. Usualmente un colorante adecuado es aplicado despus de que las [clulas] hayan sido detenidas durante la divisin celular mediante una solucin de colchicina. Para humanos los glbulos blancos son los usados ms frecuentemente porque son fcilmente inducidos a crecer y dividirse en cultivo de tejidos. Algunas veces las observaciones pueden ser realizadas cuando las clulas no se estn dividiendo (interfase). El sexo de un neonato feto puede ser determinado por observacin de clulas en la interfase (ver puncin amnitica y corpsculo de Barr). La mayora (pero no todas) las especies tienen un cariotipo estndar. El ser humano normalmente tiene 22 pares de cromosomas autosmicos y un par de cromosomas sexuales. El cariotipo normal para la mujer contiene dos cromosoma X denominado 46,XX, y el varn un cromosoma X y uno Y, denominado 46 XY. Cualquier variacin de este cariotipo estndar puede llevar a anormalidades en el desarrollo. En los laboratorios de Citogentica se utilizan varias tcnicas de bandeo cromosmico. En este sentido, destaca el mtodo de tincin de las bandas de quinacrina (bandas Q). Fue el primero en emplearse, requiere un microscopio de fluorescencia, aunque su uso ya no est tan extendido como el de las bandas de giemsa (bandas G). Para producir estas bandas G se aplica una tincin de Giemsa tras digerir parcialmente las protenas cromosmicas con tripsina. Las bandas reversas (bandas R) requieren tratamiento por calor y en ellas se invierte el patrn normal blanco y negro que se observa en las bandas Q y G. Este mtodo destaca por su gran utilidad en la tincin de los extremos distales de los cromosomas. Existen otras tcnicas de tincin como las bandas C y las NOR (regin de organizadores nucleolares), tiendo estos ltimos especficamente ciertas regiones del cromosoma. As, las bandas C tien la heterocromatina constitutiva, que se localiza normalmente cerca de los centrmeros, y la tincin NOR marca los satlites y tallos de los cromosomas acrocntricos. Las bandas de alta resolucin suponen la tincin de los cromosomas en profase o metafase precoz (prometafase) antes de alcanzar la condensacin mxima. Los cromosomas en profase y prometafase estn ms elongados que los cromosomas en metafase; por este motivo, el nmero de bandas observadas, para el conjunto de

cromosomas, aumenta desde 300-450 hasta casi 800. Ello permite detectar anomalas menos claras, que con las bandas convencionales no suelen apreciarse. Para obtener este tipo de bandas se necesita aadir otro requisito para la realizacin del cariotipo. Se trata de un componente utilizado en quimioterapia, el metotrexato que junto con la colchicina se aade antes de realizar la tincin. MATERIAL Y METODO Materiales Ampliaciones de fotografas de cromosomas humanos en metafase, teidos con Giemsa (bandeo G) Goma Tijeras Regla graduada en milmetros Luna de aumento Hilo pabilo 0.5 m Calculadora Lminas y videos acerca de tcnica de cultivo de linfocitos y cariotipo. Mtodo 1. Contar los cromosomas de la ampliacin fotogrfica y recortar el contorno de cada uno de ellos. 2. Medir las longitudes de brazos largos y cortos y la longitud total de los cromosomas y registrar los datos. 3. Ordenar los cromosomas en una tabla por tamaos caracterizando los cromosomas humanos en M metacntrico, SM submetacntrico y A acrocntrico; considerar como referencia los valores medios de las dimensiones de los brazos del cuadro adjunto 4. Realizar la identificacin de los pares cromosmicos por su patrn de bandas G mostrado por modelo adjunto. 5. Representar el cariotipo colocando los cromosomas manteniendo los centrmeros en una misma lnea, los autosomas en orden decreciente de tamao y los cromosomas sexuales en el extremo inferior derecho.

TAREA A REALIZAR 1. Construir el cariotipo del individuo a quien pertenece la fotografa propuesta. Anote la frmula cromosmica correspondiente.

FOTOGRAFA DE CROMOSOMAS EN METAFASE

CARIOTIPO HUMANO

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FRMULA CROMOSMICA : 46 XY

2.

Realizar un dibujo de su observacin microscpica de lminas con cromosomas.

3. En el siguiente texto que se refiere a la tcnica de cultivo de linfocitos para cariotipo, llenar los espacios vacos con los trminos que crea conveniente. Para la realizacin delCARIOTIPO. Se necesitan 1-3 ml de sangre heparinizada. Tras ello, se realiza la siembra de la sangre perifrica (lo antes posible tras su extraccin, pero puede obtenerse un crecimiento aceptable hasta 2-3 das despus de la extraccin). El medio de cultivo donde se siembra la sangre es un medio que lleva suero fetal de ternera enriquecido y protegido con ANTIBIOTICOS... y ANTIFUNGICOS.., al que se le aade FITOHEMAGLUTININA. Para estimular su crecimiento y transformacin de los linfocitos T. Despus de 72 horas de cultivo, se detiene la divisin celular en metafase aadiendoCOLCHICINA. (inhibe la formacin delHUSO ACROMATICO y la divisin delCENTROMERO.). Posteriormente se aade unaSOLUCION HIPOTONICA..para que las clulas se hinchen y se lisen, con lo que losCROMOSOMAS. se liberan y permanecen intactos los centrmeros, tras ello

se fijan los cromosomas para que no s separen y luego se extienden en portaobjetos. Despus se tien con diversas tcnicas y entonces estn disponibles para el estudio.

CONCLUSIONES El cariotipo humano es el conjunto de cromosomas en la fase M (fase de mximo empaquetamiento de la cromatina). El advenimiento de las tcnicas de bandeo cromosmico, dotan hoy a la citogentica de una nueva herramienta otorgndole una mayor precisin en la individualizacin de los cromosomas, facilitando su agrupamiento y clasificacin morfolgica: la determinacin de aberraciones cromosmicas de importante incidencia en animales con problemas de reduccin de la fertilidad: la localizacin de genes que confluyen al mapeo gentico

ya no me kede mas :( al menos valio la pena...aunke fue muy dificil tener ke verlo, era irreconocible...se nota ke la paso mal...y ....no se....oye...este viuaje me ayudo a pensar mas cosas, tmr, no s eke hacer contigo, trate de borrarte de mi mente too ese tiempo...dime....despues de haber salido konmigo...ke opinas de mi ahora....ke opinas de lo ke spoy despues de ke konversamos, confias mas en mi, me tienes mas desconfianza, no lo se :( ...jaja aunke dijimos ke se trataria sera tranka ya no sera komo antes cuando nos timbrabamos pa entrar o nos leiamos a cada ratiko...mmmmm...te confese muchas cosas de mi dime ke piensas? eres la unika ke le kuento eso...espero no ekivocarme kontio pes