1 Un anticoagulante es una sustancia endgena o exgena que interfiere o inhibe la coagulacin de la sangre, creando un estado prohemorrgico.

Los anticoagulantes (tambin conocidos como antitrombticos) impiden la formacin o el crecimiento de cogulos sanguneos. Son importantes porque en la insuficiencia cardaca a menudo se forman cogulos en el corazn o los vasos sanguneos. Aunque se suele decir que los anticoagulantes fluidifican la sangre, en realidad no actan permitiendo que la sangre fluya con ms facilidad por los vasos. Lo que hacen es evitar que la sangre se detenga (y se coagule) donde no debe. EL EDTA Es el anticoagulante de eleccin para hematologa, se utiliza a una concentracin 1mg por 1 c.c. de sangre o 0.5 mls de solucin al 1 % para 5 mls de sangre, o 0.1 mls de solucin al1% para 1 mls de sangre. Una excesiva prolongacin con el anticoagulante hace que se altere las clulas sanguneas. Se recomienda realizar un frotis sanguneo si el envo se prolonga ms de 24 horas. Tambin es el anticoagulante de eleccin para Test de Coombs y para realizar tinciones citoqumicas EDTA (C10H16N2O8) o sal disdica, dipotsica o tripotsica del cidoetilendiaminotetraactico, actuando mediante un efecto quelante sobre el calcio (Ca++), impidiendo el proceso de la coagulacin al fijarlo. Este anticoagulante se utiliza fundamentalmente para la realizacin de recuentos celulares, sobre todo en los autoanalizadores y permite adems la realizacin del hematocrito y del frotis sanguneo hasta dos horas despus de la extraccin de la muestra al mismo tiempo que impide la aglutinacin de las plaquetas. Las sales de potasio tienen la ventaja con respecto a la de sodio, por ser ms fcilmente solubles en sangre cuando las usamos a partir del producto slido, sin embargo , las tres sales afectan el tamao del eritrocito, especialmente despus del almacenamiento de la sangre anticoagulada por espacio de algunas horas. El International Council for Standardization in Hematology (ICSH) recomienda la sal dipotsica como anticoagulante para recolectar muestras sanguneas destinadas al recuento y caracterizacin del tamao celular y especialmente cuando los valores del hematocrito se requieren para la calibracin de los contadores automticos. El K 2EDTA .2H2O posee un peso molecular relativo de 404,1g;1g quela 100 mg de calcio inico y el pH para una solucin al 1% es de4.8+/-1,0. La cantidad de EDTA dihidratado agregada a la sangre debe ser de 1.5-2.2 mg/ml. de sangre total. Esta cantidad es un compromiso entre la cantidad requerida para evitar la coagulacin y la cantidad a la cual se producen las alteraciones celulares. OXALATO DE SODIO Anticoagulante en polvo utilizado sobre todo en determinacin de alcoholemia, estudios del metabolismo de la glucosa. La heparina es un polisacrido de alto peso molecular que consiste de disacridos sulfatados que se repiten de manera variable, por lo que su peso molecular vara entre 3 y 40 Kd. El gran tamao y otras caractersticas, no permiten su utilizacin por va gastrointestinal y es necesario administrarla por va endovenosa, en el caso de la heparina no fraccionada (HNF) o subcutnea en el caso de las heparinas de bajo peso molecular (HBPM). Para que estos agentes puedan actuar, deben unirse previamente a la antitrombina III (ATIII), por lo cual son inhibidores indirectos. La HNF requiere de hospitalizacin para su administracin, ya que se debe inyectar frecuentemente o por infusin continua y necesita un control muy cercano del tiempo de tromboplastina parcial (TTP), pues no solamente inhibe a la trombina sino a una serie de factores de la cascada de coagulacin, con

2 importante riesgo de hemorragia. En contraste, las HBPM dirigen su accin inhibidora al Factor Xa y por lo tanto el riesgo de hemorragia es menor, no requieren de controles de laboratorio y se pueden administrar de forma ambulatoria, por lo que su desarrollo ha constituido un gran avance en anticoagulacin; sin embargo, su uso es ms de tipo preventivo, especialmente previo a intervenciones quirrgicas o en aquellos casos donde est contraindicada la warfarina, puesto que en el tratamiento agudo de las trombosis, el medicamento de eleccin es la heparina sin fraccionar. Ambos tipos de heparina pueden inducir trombocitopenia y trombocitopenia y trombosis, adems su uso prolongado favorece el desarrollo de osteoporosis y fracturas. El citrato de sodio (siglas E331) es un compuesto qumico que, por lo general, se refiere al ion del citrato unido a tres tomos de sodio: el citrato trisdico. Sin embargo, puede tratarse tambin del citrato monosdico o del citrato disdico cuando el citrato se encuentra unido a uno o dos tomos de sodio respectivamente. Qumicamente, los citratos de sodio son sales sdicas del citrato tambin llamado cido ctrico que es un componente comn de las clulas del cuerpo humano. Manejo y Conservacin de la Muestra. El tipo de anlisis que haya de efectuarse influye sobre las recomendaciones que para cada uso corresponde. Algunas muestras se deben analizar de inmediato, un ejemplo de esto es la determinacin del pH y gases en la sangre; otras pueden ser mantenidas en refrigeracin (previa separacin del suero o del plasma). Las determinaciones de: Conteo de plaquetas. Conteo de leucocitos. Determinacin de la velocidad de sedimentacin. Deben de hacerse lo ms pronto posible despus de obtenida la muestra. Durante este lapso las muestras deben tenerse refrigeradas entre 4 y 8C, y antes de ser analizada deben dejarse 15 minutos en rotador (agitador mecnico para asegurar trabajar con una muestra homognea y que haya adquirido la temperatura ambiente). Normas generales METODOS Y PRECAUCIONES La no consecucin de estas normas conlleva el rechazo de la muestra o la no realizacin de una o varias determinaciones. La muestra debe ir debidamente identificada con una etiqueta o escrita a mano y acompaada de una peticin escrita por el facultativo. Se rechaza si carece de identificacin o esta es errnea, tambin si no es remitida o llega sin volante al laboratorio. El tubo debe estar ntegro, sin fracturas o grietas, sin defectos, con vaco, dentro del periodo que indica la fecha de caducidad, con la cantidad adecuada de aditivo o anticoagulante. El tubo debe ser el indicado para el tipo de anlisis con el aditivo o anticoagulante adecuado. Por ejemplo un hemograma no se puede solicitar en un tubo con gelosa, no tiene anticoagulante. Volumen adecuado de sangre en el tubo. El volumen total extrado debe ser suficiente para realizar el anlisis en su totalidad. Para determinar un mayor nmero de parmetros bioqumicos se requiere ms cantidad de sangre. En extracciones peditricas se utilizan microtubos y los analizadores permiten realizar mltiples

3 determinaciones con volmenes pequeos de sangre. La muestra insuficiente debe ser rechazada, pero tambin si se introduce ms cantidad de la adecuada, como ocurre en los tubos de estudio de coagulacin o hemograma si no se respeta la proporcin sangre anticoagulante La sangre debe mezclarse inmediatamente con el anticoagulante una vez que ha entrado en el tubo. Invertir suavemente varias veces o colocarlo en rotores para obtener muestras homogneas, nunca agitar enrgicamente. Cumplir las condiciones de preparacin del paciente ya que la ingesta de alimentos altera numerosos parmetros como la concentracin de glucosa, colesterol o cido rico. Hay estudios que requieren guardar ayuno. En el caso de los nios el tiempo de ayuno se relaciona con el peso y la talla y no debe prolongarse demasiado. A veces la muestra de ser obtenida en un intervalo de tiempo preciso debido a que el paciente toma alguna medicacin que altera el anlisis o hay alguna variacin biolgica que queremos evitar. Evitar la contaminacin de las muestras. Las muestras contaminadas estn hemodiluidas o presentan substancias que pueden alterar los valores del anlisis. Esto puede ocurrir en diversas situaciones: Pacientes sometidos a procedimientos teraputicos o diagnsticos antes de realizar la extraccin. P. Ej. Contrastes, quimioterapia, istopos radiactivos. Pacientes portadores de catteres perifricos y que reciben una solucin IV y en los que se ha realizado una extraccin en el mismo brazo por encima del catter sin interrumpir la administracin y sin esperar al menos dos minutos. O cuando se extrae del mismo catter sin desechar sangre suficiente para lavar la va. Tambin ocurre con las vas centrales y en reservorios heparinizados. Por ello los estudios de coagulacin no deben extraerse del catter, porque incluso cantidades mnimas de heparina pueden alterar resultados. Lo ideal es que se extraigan individualmente mejor que como una parte de la extraccin para varias muestras. En general y sobre todo con las muestras obtenidas por puncin capilar tener en cuenta si se ha utilizado povidona yodada, porque si la sangre est contaminada pueden encontrarse niveles falsos elevados de potasio, fsforo y cido rico. Puede existir una contaminacin progresiva de la muestra de un tubo a otro cuando no se respeta el orden de llenado: Tubos o envases estriles para estudio bacteriolgico (Hemocultivos) si los hubiere. Tubos sin aditivos para anlisis del suero. Tubos con citrato para pruebas de coagulacin. Tubos con citrato para VSG. Tubos con EDTA. Resto de los tubos Transporte adecuado de la muestra. El tiempo excesivo o la temperatura inadecuada de la muestra hacen que se deteriore y sea rechazada o aporte datos errneos.

Hay determinaciones que han de enviarse de forma inmediata para su anlisis o conservacin en el laboratorio hasta que este se realice, por ejemplo el amonio o las catecolaminas. Otras necesitan refrigerarse inmediatamente despus de la extraccin, por ejemplo la gastrina o actividad de renina. A veces es necesaria la congelacin de la muestra como en la determinacin de ACTH (hormona adenocorticotropa). Hay anlisis como los de las crioglobulinas o el de cido lctico donde la muestra necesita una temperatura de 37 y un transporte rpido al laboratorio. Con la correcta conservacin y rpido transporte de la muestra se evita formacin de amoniaco, gliclisis, degradacin de las protenas, alteracin de las substancias por la luz y otros procesos que alteran los resultados. Hay otros factores relacionados con el rechazo de la muestra que aun siendo evitables dependen mas de la tcnica del profesional y de la propia muestra que de los protocolos. Muestra hemolizada. La hemlisis es la ruptura de los hemates que libera hemoglobina y otras substancias en el plasma y este adquiere un color entre rosa y rojo. Esto afecta a varias determinaciones por el aumento en el suero de la sustancia a medir por ejemplo sodio o potasio o tambin por interferencia ptica o qumica durante la fase analtica. Hay varias causas: Relacionadas con la extraccin sangunea: Aguja demasiado fina, hay que elegir calibre 22G,20G. Se aspira demasiado fuerte durante la extraccin. Desplazar el embolo suavemente. Se fuerza el paso de la sangre al tubo a travs de la aguja. Es mejor quitar el tapn y dejar resbalar la sangre por las paredes del tubo. Evitar venas muy pinchadas para no extraer sangre de un hematoma. Relacionadas con la manipulacin en el laboratorio. La muestra debe centrifugarse antes de que este completamente coagulada si el bote no contiene anticoagulante, como el tubo con gelosa. Hay que centrifugar las muestras a las revoluciones adecuadas y en aparatos bien calibrados. Relacionados con el paciente: Reaccin antgeno anticuerpo, reaccin postransfusional, anemia hemoltica, enfermedades hepticas. Muestra coagulada. Debido a una extraccin difcil de larga duracin, por no mezclar la sangre en los tubos adecuadamente o por las caractersticas del paciente.

Muestra con ictericia. La presencia de bilirrubina en la sangre puede alterar algunas determinaciones pero no se considera error dado que no esta relacionado con la extraccin o el tratamiento de la muestra. Muestra lipemica . Son las que tienen alto contenido en grasa y aspecto lechoso y se pueden presentar en pacientes que no han guardado el ayuno recomendado y con una ingesta copiosa de alimentos. Tambin en muestras contaminadas de pacientes sometidos a nutricin parenteral. VELOCIDAD DE SEDIMENTACIN GLOBULAR (VSG) Tipo de prueba Es una prueba de la sangre. Tambin conocida como "Velocidad en la sangre". Qu es? Si se deja en reposo durante cierto perodo de tiempo la sangre total sin coagular, los hemates se separan del plasma y sedimentan en el fondo del recipiente. La velocidad con la cual se produce el descenso de estos hemates se denomina velocidad de sedimentacin globular (VSG). La VSG es una prueba inespecfica que se utiliza para detectar procesos inflamatorios, neoplsicos o tumorales, e infecciosos. Puesto que la VSG tiene carcter inespecfico, no es una prueba diagnstica definitiva de ninguna enfermedad o lesin determinada. Cmo se realiza? toma de muestrasLos glbulos rojos estn normalmente suspendidos en el plasma, flotando por el movimiento constante del torrente circulatorio. In vitro, los glbulos rojos o hemates en la sangre incoagulable van descendiendo progresivamente hasta sedimentarse. La tcnica de realizacin ms extendida se denomina Mtodo de Westergren, en el cual la velocidad de sedimentacin de los glbulos rojos se mide en mm/unidad de tiempo (se suele emplear la hora como unidad de tiempo).

Procedimiento y cuidado del paciente Antes: Explicar el procedimiento al paciente. Suspender los medicamentos que pueden afectar a los resultados de la prueba si es posible. Durante: Recoger 5-10 ml de sangre venosa en un tubo de tapn lavanda. Es muy importante que el tubo para la medicin de la VSG se halle en posicin estrictamente perpendicular. Una oscilacin de 3 grados de inclinacin puede provocar errores de hasta 30%. Asimismo, los soportes de los tubos no deben ser sometidos a ningn tipo de movimiento o vibracin. Las pequeas variaciones diarias en la temperatura ambiente no influyen sobre la velocidad de sedimentacin, pero un cambio brusco y elevado s puede afectarla: cuanto ms alta es la temperatura, mayor es la VSG. La longitud y el dimetro interior del tubo utilizado tambin son factores que pueden modificar el resultado final. Despus: Transportar el espcimen al laboratorio inmediatamente. Aplicar presin o un apsito a presin en el punto de puncin venosa. Evaluar el lugar de la puncin venosa para controlar una posible hemorragia.

Para qu sirve y cundo se realiza? Parmetros seleccionados de la construccin de reticulocitos extraccion de sangreLa prueba puede aplicarse para detectar enfermedades no sospechadas. Muchos clnicos emplean la VSG con esa idea en la evaluacin rutinaria de sus pacientes. Otros la consideran inespecfica y poco til como estudio rutinario. La VSG puede ser til en ocasiones para diferenciar entre entidades patolgicas. Por ejemplo, en el paciente con dolor torcico, la VSG estar aumentada en caso de infarto de miocardio, mientras que ser normal en caso de angina. La VSG es un indicador bastante fiable de la evolucin de la enfermedad, por lo que puede emplearse para controlar el resultado del tratamiento, sobre todo en enfermedades inflamatorias (por ejemplo, enfermedades reumticas o autoinmunes). Es habitual que la VSG aumente cuando la enfermedad empeora y viceversa. Si los resultados de la prueba son equvocos o inconsistentes con la impresin clnica, es habitual realizar otras pruebas (PCR o determinacin de protena C reactiva). Factores que intervienen en los resultados Normalmente la VSG es menor en los nios que en los adultos. En estos ltimos, y a partir de los 60 aos, los valores suelen estar algo aumentados en relacin con los resultados normales. La velocidad de sedimentacin refleja principalmente las modificaciones que sufren las protenas del plasma y que suelen acompaar a la mayora de las infecciones agudas y crnicas, tumores y enfermedades degenerativas. Es un dato que puede ser utilizado para seguir de cerca los progresos de algunas enfermedades, como la tuberculosis y el reumatismo. La VSG es una respuesta inespecfica al deterioro de los tejidos, y denota la presencia de enfermedad, aunque no calibra su gravedad. Una VSG elevada puede hallarse durante el embarazo (en el 2 y 3 trimestre), en las infecciones agudas y crnicas, en la fiebre reumtica, en la artritis reumatoidea, en el infarto de miocardio, nefrosis, hepatitis agudas, menstruacin, tuberculosis, hipotiroidismo, hipertiroidismo, afecciones tumorales avanzadas y anemias, entre otras causas. Tambin pueden dar un aumento de la VSG determinados frmacos, como la metildopa, anticonceptivos orales, teofilinas, vitamina A, penicilamina y procainamida. Un retraso en la VSG lo observamos especialmente en las policitemias o poliglobulias (aumento de los glbulos rojos) y con algunos frmacos, como la aspirina, cortisona y quinina. Cules son los resultados normales? Hombres: hasta 15 mm/h. Mujeres: hasta 20 mm/h. Nios: hasta 10 mm/h. Recin nacidos: 0-2 mm/h. Los reticulocitos son glbulos rojos que no han alcanzado su total madurez. Los mismos se encuentran en niveles elevados en el plasma sanguneo por causa de algunas anemias, cuando el organismo incrementa la produccin de glbulos rojos y los enva al torrente sanguneo antes de que sean maduros.1 Los reticulocitos se caracterizan por presentar una red de filamentos y grnulos que hacen que se tien en el frotis de sangre, distinguindose as de los glbulos rojos maduros. Normalmente representan el 0,5-1,5% del conteo de glbulos rojos,2 pero pueden exceder el 4% cuando compensan la anemia. Morfologa

7 e indicadores identificados para que estas clulas Los reticulocitos son clulas anucleadas para la comparacin los datos correspondientes de los eritrocitos predecesoras de los eritrocitos con la diferencia de Caracterstica Reticulocitos Eritrocitos que poseen grnulos de ribosomas y algunas dimetro (m) 91 > 7,50,3 mitocondrias que les son tiles para sintetizar el volumen (fl) 112,517,5 > 9010 35% de la hemoglobina restante. Este tipo de clulas esta en circulacin perifrica masa de hemoglobina (pg) 29,52,5 = 29,52,5 aproximadamente un da para convertirse hemoglobina (g/dl) 293 < 352,5 posteriormente en un hemate maduro que cumplir con todas las funciones biolgicas de estas clulas. A diferencia de los hemates o glbulos rojos maduros, los reticulocitos an poseen ARN. El reticulocito es la clula roja que antecede en maduracin al eritrocito, es el resultado de la prdida del ncleo que sufre el eritroblasto ortocromtico. Su tamao vara de 10 - 15 micras de dimetro. Maduracin El reticulocito tiene una vida media de dos das en mdula sea, de all sale a la circulacin donde requiere un da para convertirse en clula roja madura. Durante este perodo sintetiza el 20% de la hemoglobina contenida en la clula roja. Se han propuesto varios mecanismos mediante los cuales el reticulocito finaliza su maduracin: autofagia y eyeccin de orgnulos no necesarias, accin "pitting" del bazo y degradacin bioqumica por medio de la 5 pirimidn nucleotidasa. Patologa del reticulocito El reticulocito puede mostrar alteraciones en el tamao y/o presentar cuerpos de inclusin (punteado basfilo, cuerpos de Howell Jolly). La gnesis del aumento de tamao, involucra una respuesta normal de la mdula sea a un estmulo intenso de la eritopoyetna. Dependiendo del grado de estimulacin se pueden presentar los siguientes eventos: Incremento del nmero de reticulocitos en sangre perifrica, normales y aumentados de tamao, a expensas del pool medular. Esto implica una disminucin de la permanencia de estas clulas en mdula sea. Presentacin en circulacin de reticulocitos que pueden alcanzar dos veces el tamao normal, como resultado de la expulsin del ncleo del eritroblasto policromatfilo, saltndose el estadio de eritroblasto ortocromtico. Ambas situaciones, se asocian con reticulocitos inmaduros en sangre perifrica, denominados por los autores macro-reticulocitos de "estrs", reticulocitos medulares, reticulocitos prematuros. Este ltimo trmino fue el acogido por los integrantes de la reunin (Departamento de Hematologa, Servicio de Hematologa Infantil, Servicio de Hematologa de Adultos) para referirse a estas clulas. Utilidad e interpretacin La determinacin de los reticulocitos permite evaluar la produccin eficaz de clulas rojas por la mdula sea. Su utilidad real es conocer la capacidad de respuesta de la mdula en aquellos casos en los cuales hay disminucin de las clulas rojas en sangre perifrica y es necesario que la mdula aumente su produccin para as compensar el dficit de dichas clulas. Esta informacin es de fundamental importancia en el diagnstico de anemias por falla en la produccin (anemia aplsica) y por aumento en la destruccin (anemia hemoltica)1 . La actividad eritropoytica efectiva, de la mdula sea, es proporcional al nmero de reticulocitos en sangre perifrica, este valor representa el grado de produccin y liberacin de eritrocitos por la mdula sea a circulacin. As, los recuentos reticulocitarios superiores a los valores establecidos como normales, indican aumento en la eritropoysis, situacin que se presenta como respuesta a hemorragias (aguda o prdida de sangre) ,1 anemias hemolticas y durante el tratamiento de anemias nutricionales (anemia ferropnica y anemia megaloblstica).

Los recuentos bajos de reticulocitos, sugieren una eritropoysis defectuosa como en los casos de anemia aplsica, crisis aplsica de anemias hemolticas y en la infiltracin de la mdula sea por clulas tumorales. Por lo tanto la evaluacin de los reticulocitos se constituye en una herramienta fundamental el diagnstico de las anemias y de algunas entidades cuya gnesis involucra la produccin eritroide en la mdula sea. Razones de las desviaciones del porcentaje normal de reticulocitos en sangre perifrica Reticulopenia porcentaje bajo de reticulocitos (<20 000/l) Reticulocitosis porcentaje elevado de reticulocitos (>100 000/l) 2 Recin nacidos presin de oxigeno bajo en el ambiente3 o en las personas que viven por encima de 1900 m sobre el nivel del mar durante un largo perodo

Fisiolgicos

Patolgicos

Daos a la mdula sea o Aplasia congnita de la mdula roja o Toxicidad u otros daos al hueso Deficiencia de vitaminas y oligoelementos1 o deficiencia Vitamina B11 (cido flico) o deficiencia de vitamina B12 Anemia perniciosa 4 o deficiencia de hierro tratamiento con citostticos o tratamiento de cncer o tratamiento de ciertas patologas del colgeno deficiencia de eritropoyetina o insuficiencia renal caquexia o infeccines devastadoras, incluyendo sida 1 o algunas enfermedades crnicas anemia aplsica e hipoplstica o anemia de Diamond-Blackfan

hemlisis o influencia de toxinas bacterianas, virus, parsitos de la sangre (malaria, por ejemplo) o razones inmunolgicas o razones mecnicas - en su mayora de las vlvulas artificiales de corazn o talasemia, esferocitosis congnita y otras anemia hemoltica congnita policitemia hemorragias ciertos tipos de cncer o en pacientes con tumores productores de eritropoyetina o pacientes con metstasis seas iatrogenia o medicamentos hematopoyticos o esplenectoma o tratamiento con hierro, cido flico, vitamina B12,

Cuando la respuesta medular en cuanto a produccin de clulas rojas est incrementada, las clulas policromatfilas detectadas en sangre perifrica, dificultan la evaluacin de la macrocitosis, puesto que son clulas con aumento de tamao dada su inmadurez; por lo tanto al realizar esta cuantificacin se debe tener

9 cuidado de no falsear el valor de la macrocitosis a expensas de la policromatofilia estimando una macrocitosis mayor a la real. Es de anotar que en estos casos, el promedio de volumen corpuscular (PVC) se encontrar por encima del valor establecido como normal, tambin falsamente incrementado por el nmero de reticulocitos. Evaluacin en sangre perifrica La eritropoysis efectiva se determina por el recuento de reticulocitos en sangre perifrica,2 el cual se expresa en valor relativo o porcentual (nmero de reticulocitos por 100 clulas rojas) y en valor absoluto (total de reticulocitos circulantes por cada militro (mm) de sangre). El conteo de reticulocitos se puede dar por tincin con un colorante especial para reticulocitos de naturaleza basofila y por el cual las mitocondrias y ribosomas tendrn afinidad y los mostrara en el frotis de un color azul moteado. Valores de referencia (Valor relativo): Hombres 0.6 2.6 % Mujeres 0.4 2.4 % Recin nacidos 2.5 6.5 % (desciende nivel adultos a la segunda semana) (Valor absoluto) 40 100 x 109/L promedio 60 x 109/L Cuando se altera la duracin del estadio reticulocitario en mdula sea, especficamente en las anemias severas, se emplean otras formas para evaluar la produccin de clulas rojas viables como se expresa a continuacin. Cuando tenemos muchos reticulocitos libres en la sangre es seal de haber sufrido algn tipo de estrs o hipoxia porque estimulamos la produccin de eritropoyetina, esta protena induce a la produccin de los precursores del hemate, y por lo tanto de reticulcitos. En microscopa electrnica es fcil de reconocer por su superficie irregular, con invaginaciones y presencia de mltiples orgnulos como: mitocondrias, pequeo nmero de ribosomas, remanentes del aparato de Golgi y protoporfirina. Al microscopio de luz se identifica mediante coloraciones supravitales (azul de cresil brillante, nuevo azl de metileno). El colorante se absorbe y el ARN y los dems orgnulos citoplasmticas se precipitan como sustancia reticulofilamentosa, visible en los extendidos secos, como grnulos amorfos intracelulares que se tien de azul profundo. Coloreado con Wright o Gimsa, el reticulocito se identifica por su basofilia difusa llamada policromatoflia y por ser una clula ligeramente ms grande que el eritrocito. La clula debe poseer al menos dos grnulos de precipitado bien definidos y separados de la membrana para considerarla reticulocito.

Procedimiento para la prueba de reticulocitos Materiales Sangre total con anticoagulante EDTA. Tubos de ensayo. Goteros. Azul de cresil brillante. Bao Mara 37 Lminas. Aceite de inmersin. Procedimiento Colocar en un tubo de ensayo 2 gotas de sangre previamente mezclada. Agregar 2 gotas de colorante filtrado. Mezclar suavemente. Incubar por 10 - 15 minutos en el bao

10 Mara a 37. Al finalizar los 15 minutos mezclar bien el contenido del tubo. Realizar extendidos en lmina y dejas secar a temperatura ambiente. Colocar el extendido sobre la platina del microscopio y enfocar en bajo poder (10X) para localizar el rea donde los glbulos rojos no estn superpuestos. Pasar al objetivo de 100X cuidadosamente y agregar una gota de aceite de inmersin. Iniciar el conteo. Las clulas rojas toman una coloracin griscea verdosa. El RNA presente en los reticulocitos se colorea de azul intenso. Contar todas las clulas rojas presentes en el campo seleccionado y luego enumere los reticulocitos existentes, localizar un segundo campo y continuar hasta que todos los reticulocitos existentes en 1000 clulas rojas hayan sido contadas. Observaciones El recuento se puede realizar en sangre capilar. Los extendidos se pueden realizar en laminilla. El azul de cresil brillante debe filtrarse antes de usarse. Se recomienda repetir el conteo cuando se obtienen valores por encima del 3%. IPR > 3, indica aumento de actividad eritropoytica medular (anemia regenerativa) IPR < 2, indica escasa actividad eritropoytica. Nota:IPR = % reticulocitos corregido Porcentaje de reticulocitos corregido Tiene por objeto establecer los reticulocitos reales teniendo en cuenta la concentracin de clulas rojas en sangre perifrica ya que la volemia del paciente afecta su nmero. En otras palabras, esta correccin debe hacerse cuando se encuentra un hematocrito (Hto) por debajo del nivel establecido como normal, donde la masa eritroide se encuentra disminuida y el recuento de reticulocitos en porcentaje dentro de los lmites de referencia nunca es normal para un individuo anmico. Este porcentaje se obtiene as:1 5 % reticulocitos corregido = % reticulocitos x Hematocrito del paciente / Hematocrito normal Hematocrito normal: Hombres 45%, Mujeres 42%

ndice de produccin de reticulocitos Se necesita una correccin adicional cuando se encuentran macrocitos policromatfilos y/o clulas rojas nucleadas en el frotis de sangre perifrica. Con una estimulacin creciente de eritropoyetina, la mdula sea

11 libera reticulocitos antes de su periodo de maduracin normal, que es de 2 a 3 das en la mdula sea. Estos reticulocitos inmaduros aparecen como eritrocitos policromatfilos grandes (reticulocitos de cambio de estrs) en el frotis de sangre. Esto significa que el tiempo adicional de maduracin en la mdula sea al tiempo de maduracin en sangre perifrica toma ms del da habitual para que los reticulocitos de la sangre perifrica pierdan su retculo y se vuelvan eritrocitos maduros. Mientras ms intensa sea la anemia, ms temprana ser la liberacin de los reticulocitos. El ndice de produccin de reticulocitos (IPR) proporciona una estimacin de la tasa de eritropoysis efectiva en comparacin con la tasa normal de maduracin del reticulocito en sangre perifrica, que corresponde a 1 (un da). Para determinarlo se divide el porcentaje de reticulocitos corregido por el tiempo de maduracin que tendr el reticulocito en sangre perifrica, dependiendo del valor del hematocrito del paciente y as compensar el tiempo que tomar el reticulocito para madurar en sangre perifrica. El recuento manual de reticulocitos, a pesar de la gran utilidad clnica, ha venido perdiendo vigencia debido a mltiples factores que incluyen las variaciones en las coloraciones, error por distribucin en los extendidos, errores estadsticos en la muestra estudiada y amplia variabilidad entre observadores an experimentados.5 Estudios realizados en el Colegio Americano de Patlogos encontr que el coeficiente de variacin (como ndice de error) para el recuento de reticulocitos por mtodos manuales es de 35% (algunos estudios han demostrado ms de 50%) en tanto que para la citometra de flujo es de 8.3%. Por este motivo, el Colegio Americano de Patlogos (que regula las actividades del laboratorio clnico) a partir de 1993 slo acredita el recuento de reticulocitos por mtodos automticos y no recomienda los mtodos manuales por los inconvenientes ya mencionados. El recuento automtico con esta tecnologa analiza de 30.000 a 50.000 clulas por muestra en tanto que por mtodos manuales el recuento se hace sobre 100 eritrocitos. La posibilidad de contar los reticulocitos mediante la citometra de flujo recupera este parmetro como uno de los pilares en el diagnstico, clasificacin y manejo de los sndromes anmicos y en la disfuncin medular... Drepanocitos Hemate maduro en forma de hoz, debido a la presencia de una hemoglobina anormal. A veces se denomina clula falciforme Se encuentran en todo tipo de hemoglobinopatas Hemate atpico, en forma de media luna, que contiene hemoglobina S, una forma anormal de hemoglobina caracterstica de la anemia drepanoctica.

Examen de drepanocitos Un examen de drepanocitos busca la hemoglobina anormal en la sangre que causa la anemia drepanoctica. Forma en que se realiza el examen Se necesita una muestra de sangre. Para obtener informacin sobre la forma como se hace esto, ver el artculo: Venopuncin. Lo que se siente durante el examen Cuando se inserta la aguja para extraer la sangre, algunas personas sienten un dolor moderado, mientras que otras slo sienten un pinchazo o sensacin de picadura. Posteriormente, puede haber algo de sensacin pulstil.

12 Razones por las que se realiza el examen Este examen se hace para determinar si usted tiene hemoglobina anormal que causa enfermedad y rasgo drepanoctico. En la enfermedad drepanoctica, una persona tiene dos genes anormales para la hemoglobina S; mientras que alguien con rasgo drepanoctico slo tiene uno de estos genes anormales y no presenta sntomas o slo sntomas leves. Este examen no establece la diferencia entre estos dos trastornos, por lo que se har otro examen, llamado electroforesis de hemoglobina. Valores normales Un resultado negativo del examen es normal. Los rangos de los valores normales pueden variar ligeramente entre diferentes laboratorios. Algunos utilizan diferentes mediciones o analizan muestras diferentes. Hable con el mdico acerca del significado de los resultados especficos de su examen. Significado de los resultados anormales

Anemia drepanoctica Rasgo falciforme o drepanoctico

Riesgos Las venas y las arterias varan en tamao de un paciente a otro y de un lado del cuerpo a otro, razn por la cual extraer sangre de algunas personas puede ser ms difcil que de otras. Otros riesgos asociados con la extraccin de sangre son leves, pero pueden ser:

Sangrado excesivo Desmayo o sensacin de mareo Hematoma (acumulacin de sangre debajo de la piel) Infeccin (un riesgo leve cada vez que se presenta ruptura de la piel)

Consideraciones Las transfusiones de sangre o la deficiencia de hierro dentro de los 3 meses anteriores pueden producir un resultado falso negativo. Nombres alternativos Examen de hemoglobina S; Sickledex