DEPARTAMENTO DE BIOLOGA VEGETAL CURSO DE GENTICA

GUA DE GENTICA 2009

MATERIAL ELABORADO POR LOS DOCENTES

MONTEVIDEO

URUGUAY

UNIVERSIDAD DE LA REPBLICA FACULTAD DE AGRONOMA DEPARTAMENTO DE BIOLOGA VEGETAL

CICLO DE FORMACIN CENTRAL AGRONMICA SUBCICLO DE RECURSOS NATURALES

PROGRAMA DEL CURSO DE GENTICA 2009

OBJETIVOS A. GENERALES 1. Introducir al estudiante en los conocimientos de la Gentica, necesarios para su formacin profesional, as como para los cursos posteriores de Fitotecnia, Zootecnia y las distintas producciones. 2. Incentivar en el estudiante el uso del mtodo cientfico: observacin, experimentacin, anlisis de resultados, elaboracin y discusin de hiptesis y el uso de bibliografa. B. ESPECFICOS 1) Contribuir a que el estudiante conozca, maneje y aplique adecuadamente en casos concretos los conceptos bsicos acerca de: i) Los fundamentos qumicos y fsicos de las informaciones genticas de los seres vivos, as como de su regulacin y su expresin. ii) El modelo mendeliano de herencia. Las principales variantes de ese modelo, sus causas y sus consecuencias. iii) Los mtodos y las herramientas de anlisis gentico en los diversos tipos de seres vivos. iv) El comportamiento de los genes en las poblaciones. v) La variabilidad gentica en los seres vivos, sus diversas fuentes de origen y su importancia en la conservacin, el mejoramiento y en la evolucin. vi) Algunos aspectos de la moderna tecnologa de Gentica Molecular, su aplicabilidad y sus perspectivas. 2) Introducir al estudiante en el conocimiento del Mtodo cientfico y su aplicacin a casos sencillos. 3) Promover a que el estudiante recabe y analice informaciones recurriendo a bibliografa y otras fuentes.

UNIDAD I. ORGANIZACIN Y TRASMISIN DEL MATERIAL GENTICO TEMA 1. GENTICA. VARIABILIDAD EN LOS SERES VIVOS. FENOTIPO, GENOTIPO Y AMBIENTE. INTERACCIN GENOTIPO AMBIENTE. ORIGEN DE LA VARIABILIDAD. ADN, MUTACIONES, GENES Y ALELOS. TEMA 2. REPRODUCCIN EN LOS SERES VIVOS. CICLOS CELULARES: MITOSIS Y MEIOSIS. CROMOSOMAS. ADN EXTRANUCLEAR Y HERENCIA CITOPLASMTICA. TEMA 3. EL MODELO MENDELIANO DE TRASMISIN DE LOS CARACTERES HEREDITARIOS. LEYES DE MENDEL. INTERACCIN INTRAGNICA. ALELOS MLTIPLES. MTODO MENDELIANO. GENEALOGAS. PROBABILIDAD Y CHI CUADRADO. TEMA 4. GENES LIGADOS. ENTRECRUZAMIENTO Y RECOMBINACIN. MAPAS GENTICOS. GENES LIGADOS A LOS CROMOSOMAS SEXUALES. TEMA 5. INTERACCIN GNICA. EPISTASIS. HERENCIA MULTIFACTORIAL. TEMA 6. GENTICA CUANTITATIVA. CARACTERES DE VARIACIN CONTINUA. ESTIMACINES DE NMERO DE GENES Y DE EFECTO DE LOS GENES. ADITIVIDAD. DOMINANCIA. INTERACCIN. PARTICIN DE LA VARIANZA FENOTPICA. HEREDABILIDAD.

UNIDAD II. GENTICA MOLECULAR TEMA 7. ESTRUCTURA DEL GEN EUCARITICO. REGULACIN DE LA EXPRESIN GNICA. TEMA 8. ORGANIZACIN DEL GENOMA EUCARITICO. TEMA 9. ANLISIS Y MANIPULACIN DEL GENOMA. GENMICA ESTRUCTURAL Y FUNCIONAL. INGENIERA GENTICA.

UNIDAD III. GENTICA EVOLUTIVA Y DOMESTICACIN DE LAS ESPECIES TEMA 10. LOS GENES EN LAS POBLACIONES. FRECUENCIAS GENTICAS. POBLACIN EN EQUILIBRIO. FACTORES QUE INFLUYEN EN LAS FRECUENCIAS Y SUS CONSECUENCIAS. TEMA 11. VARIACIONES EN LA ESTRUCTURA Y EN EL NMERO DE LOS CROMOSOMAS. CONSECUENCIAS GENTICAS. TEMA 12. EVOLUCIN NATURAL Y DOMESTICACIN. ESPECIACIN. HIBRIDACIONES INTERESPECFICAS. ORIGEN DE ALGUNAS ESPECIES CULTIVADAS Y SU DOMESTICACIN.

METODOLOGA El curso se desarrollar mediante 2 clases semanales terico-prcticas de dos horas de duracin, (en 8 grupos de 25 estudiantes aproximadamente) y dos clases tericas semanales de dos horas de duracin. EVALUACIN Consistir en: a) En la primera semana de clases se entregar una carpeta de preguntas y/o ejercicios, como tarea domiciliaria. Esta carpeta, servir como gua de estudios y no se exigir su entrega.- En la 3 semana en los grupos terico-prcticos se seleccionarn al azar una o dos de esas preguntas para cada estudiante, las que debern ser respondidas en clase, sin consulta bibliogrfica. Esta prueba tendr un puntaje mximo de 20 puntos. b) Se realizar una prueba parcial escrita cuyo mximo sern 60 puntos, en la 6 semana. c) Posteriormente a esa prueba parcial se entregar una 2 carpeta de preguntas y/o ejercicios, tambin a modo de tarea domiciliaria, relacionada con las ltimas unidades del curso. Esta carpeta, servir como gua de estudios y no se exigir su entrega. En el ltimo tericoprctico del curso se seleccionarn al azar una o dos de esas preguntas para cada estudiante, las que debern ser respondidas en clase, sin consulta bibliogrfica. Esta prueba tendr un puntaje mximo de 20 puntos. Para todas las pruebas de evaluacin, pero en especial para las carpetas, se procurar que, para responder las preguntas, el estudiante, adems de apoyarse en las clases, deba consultar e interpretar la bibliografa disponible.Aprobacin del curso: de acuerdo con los reglamentos vigentes, el curso se aprueba con 51 puntos como mnimo. Se podr exonerar del examen a los estudiantes que alcancen 80 o ms puntos en el curso y que tengan el 50% como mnimo en cada una de las 3 pruebas parciales. BIBLIOGRAFIA Bibliografa bsica Tamarn, R.H. Principios de Gentica. Ed. Revert. 1996 Strickberger, M. W. Gentica. Ed. Omega. S.A. 1988 Griffiths, A.J.; Miller, J.H.; Suzuki, D.T.; Lewontin, R.C.; Gelbart, W.M. An Introduction to Genetic Analysis. Ed. W.H. Freeman & Co. 1998. - Hay versin en espaol en biblioteca de la Facultad de Medicina.- Hay versin electrnica en ingls en: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/ - Los captulos ms importantes para el curso se encuentran para fotocopiar en AEA. Versin electrnica de Conjunto de problemas de gentica mendeliana (Espaol): http:// www.biologia.arizona.edu/mendel/mendel.html Bibliografa complementaria Griffiths, A.J.; Gelbart, W.M.; Miller, J.H.; Lewontin, R.C. Modern Genetic Analysis Slo versin electrnica en: www.ncbi.nlm.nih.gov/books/

Lewin B. Genes IV. Ed. Revert. 1993. Stanfield, W. D. Gentica. Ed. McGraw-Hill. 1978 Allard, R. W. Principios de la mejora gentica de las plantas. Ed. Omega. 1980 Falconer, D. S. Introduccin a la Gentica Cuantitativa. Ed. Cecsa. 1970.Nelson, D. L, & M.M. Cox. Lehninger. Principios de Bioqumica. Ed. Omega. 3era Edicin. 2001. Hartl, D.L. y Jones, E.W. Genetics. Analysis of genes and genomes. Ed. Jones and Bartlett. 2001. Caps. 1, 2 y 3 disponibles en versin electrnica en: http://www.jbpub.com/ genetics/home.cfm

EQUIPO DOCENTE: Dr. Orfeo Crosa. Prof. Agregado de Gentica DT Dra. Cristina Mazzella. Prof. Agregada de Gentica DT Dra. Ing. Agr. Clara Pritsch. Prof. Agregado de Gentica DT Lic. MSc. Jorge Pereira. Prof. Adjunto de Gentica DT Lic. MSc. Magdalena Vaio. Asistente de Gentica Lic. Susana Rodrguez. Ayudante de Gentica Instructivo para el estudiante de la GUA DE GENTICA En la Gua de Gentica el estudiante encontrar , de acuerdo con el orden temtico del Programa, una serie de ejercicios, preguntas y otras propuestas que no pretenden ser exhaustivas ni suficientes sino solamente una gua para el estudio de la asignatura. Se presentan en cada tema ejercicios bsicos que el estudiante deber hacer antes de los terico-prcticos respectivos y que se discutirn en clase. Adems encontrar ejercicios o preguntas complementarias que no necesariamente se discutirn en clase pero que el estudiante debe estar capacitado para responder si su preparacin ha sido adecuada. En todos los casos para la comprensin y resolucin previa el estudiante debe apoyarse en las clases tericas y en la bibliografa que se recomienda en el Programa. En las clases terico-prcticas los ejercicios y preguntas de la gua no slo sern usadas como entrenamiento en su resolucin sino tambin como complemento del desarrollo de los conceptos del tema. Por lo tanto el intento previo de resolucin por parte del estudiante es imprescindible para que el tiempo en clase sea dedicado a la eliminacin de dudas y el completo desarrollo conceptual del tema.

UNIDAD I - TEMA 1
Gentica. Variabilidad en los seres vivos. Fenotipo, Genotipo y ambiente. Interaccin. Origen de la variabilidad.
Objetivos 1. Introducir los conceptos iniciales acerca de la variabilidad en los seres vivos. 2. Conocer su composicin y su origen. Conceptos principales 1. El fenotipo de los seres vivos se origina en la accin del ambiente sobre el genotipo y la interaccin entre ambos. 2. La variabilidad entre seres vivos puede ser de origen ambiental o gentico. 3. Esta ltima se genera por mutaciones y se multiplica especialmente en el proceso de reproduccin sexual. (Ver Meiosis y fecundacin, en el tema 2). 1.- Para algunos organismos de experimentacin es posible hacer copias del mismo (reproduccin vegetativa), realizando luego ensayos que permitan determinar diferencias fenotpicas. El siguiente estudio (Figura 1) fue realizado con la planta altarreina (Achillea millefolium) consisti en colectar 7 plantas cada una de un origen distinto y clonarlas. Se plantaron una de cada origen a 3 distintas altitudes: 30 metros, 1400 metros y a 3050 metros sobre el nivel del mar y se midieron las alturas de las plantas maduras. a) Cul es el promedio de las alturas en cada altitud? Qu sucede con respecto al promedio y el crecimiento de las plantas de origen 4? b) Hay algn genotipo que crezca mejor que el resto en los 3 niveles de altitud? Analice comparativamente los genotipos 1 y 6 en las diferentes alturas. c) Cuntos fenotipos distingue? Se corresponden con cada genotipo? Por qu? d) Grafique en un mismo par de coordenadas el crecimiento de cada uno de los 7 distintos genotipos en las 3 diferentes altitudes. e) En la grfica resultante defina los distintos componentes del fenotipo: genotipo, am biente e interaccin genotipo ambiente. f) Resuma este experimento en un prrafo de 15 renglones como mximo indicando: mtodo utilizado, resultados obtenidos, y principales conclusiones. 2.- Conteste las siguientes preguntas: a) Qu relacin tiene los genotipos y fenotipos de las plantas compuestas de la especie Achillea milliefolium que analiz con el ADN de dichas plantas? b) Cmo se explica que una misma especie vegetal presente individuos con distintos genotipos como concluy en el caso de A. milliefolium? c) Qu diferencias espera encontrar en el ADN y el los procesos de transcripcin y traduccin entre una planta que posee la secuencia normal de ADN en un gen y otra planta que posee solamente la versin mutante de ese gen.? d) Qu se entiende por alelo? e) Qu son las mutaciones puntuales denominadas: sustitucin, deleccin, adicin? Cules son sus posibles orgenes? Qu consecuencias podran generar en el genoma y a nivel fenotpico?

Figura 1

3.- Dada la siguiente secuencia parcial de bases de ADN de un gen: +1 * 5' G A C G T T A G C T A T G C A T G G G A A G G T C C T C A T C C T C T A A A G A C 3' 3' C T G C A A T C G A T A C G T A C C C T T C C A G G A G T A GG A G A T T T C T G 5' Si la hebra codificante fuese la superior: i) Puede identificar el inicio de la regin estructural y reguladora del gen? ii) Escriba el mRNA y el polipptido correspondiente iii) Indique el sentido de la transcripcin y traduccin sealando la localizacin subcelular de cada uno de estos procesos. iv) Cul de las dos hebras suele escribirse en la literatura y por qu? v) Escriba tres mutaciones puntuales: una que altere la secuencia aminoacdica del polipptido; otra en la regin estructural pero que no altere el polipptido resultante; otra en la regin reguladora explicando qu alteracin podra originar. EJERCICIOS COMPLEMENTARIOS: 1.- La fotografa que se presenta (Figura 2) es de un corte del tronco de un rbol Pino de incienso. En el mismo se puede estudiar la historia climtica de una seccin de rbol de 62 aos (nacido en 1904). Durante ese periodo ha pasado por fuego, sequa, lluvias abundantes, plagas, y todo se registra en sus anillos. Normalmente cada ao se produce un solo anillo de crecimiento. Analice la fotografa del corte e indique: a) En qu zonas el crecimiento fue en crculos concntricos (normal) y en qu zonas se encuentra forma asimtrica de crecimiento? b) Establezca zonas donde los anillos de crecimiento tienen separacin amplia, mediana o estrecha. c) En base a lo anterior, plantee cmo los aspectos medioambientales que se detallan a continuacin pueden haber influido para dar en cada zona los distintos aspectos fenotpicos que Ud. analiz. Tenga en cuenta los siguientes factores como gua: i) 1909 poca de crecimiento bueno y rpido, sin disturbios, con abundantes lluvias y sol en primavera y verano ii) 1914 poca de disturbio, la cada de otro rbol lo vuelca hacia un lado iii) 1924 poca en que est rodeado de una poblacin de rboles ms altos. iv) 1927 poca en que la poblacin de rboles que lo rodean son talados. v) 1930 un fuego barre el bosque, afortunadamente este rbol es slo herido levemente. vi) 1942 una prolongada sequa vii) 1957 plaga de larvas de un insecto (sawfly= mosca serrucho) las que se alimenta de hojas y yemas d) Relacione los cambios fenotpicos observados en los anillos de crecimiento con el metabolismo de las clulas de esos tejidos y con la informacin contenida en el ADN de ese rbol.

Este rbol tiene 62 aos de vida. Ha atravesado incendios, sequas, plagas y momentos ptimos. Todo est registrado en sus anillos
1914.- Cuando el rbol tena 10 aos, algo lo empuj inclinndolo. Los anillos son ahora ms anchos del lado de abajo en la medida que ha ido construyendo madera de reaccin para ayudarle a soportarlo.

1924.- El rbol est creciendo rpidamente de nuevo. Pero sus vecinos tambin y sus copas y sus sistemas radiculares compiten por la luz solar y por el agua que el rbol necesita.

1927.- Los rboles de alrededor han sido cosechados. Los ms grandes han sido eliminados y el rbol puede crecer rpidamente otra vez.

1930.- Un incendio ha atacado el bosque. El rbol solo ha sido chamuscado de un lado y luego, ao tras ao, nueva madera se ha ido incorporando por encima

1904.- El rbol una semilla germinando ha nacido

1942.- Estos anillos finos han sido originados en una prolongada sequa. Uno o dos veranos secos no hubieran sido suficientes para para desecar el suelo al punto de enlentecer tanto el crecimiento.

1909.- El rbol crece rpidamente, sin disturbios. Hay suficiente disponibilidad de lluvia y de luz solar en primavera y verano. Los anillos son relativamente amplios y regularmente espaciados.

1957.- Otra serie de anillos finos ha sido causada por una larva que come las hojas y brotes de muchas conferas.

Figura 2

UNIDAD I - TEMA 2 1 parte

Mitosis - Ciclos Biolgicos
Objetivos 1. Ubicar los procesos de divisin celular en el ciclo biolgico de un ser vivo, en especial en vegetales. 2. Reconocer los principales acontecimientos de la mitosis y sus consecuencias genticas. 3. Reconocer las formas de caracterizar a los distintas especies segn nmero y tipo de cromosomas. Principales conceptos 1. La mitosis no modifica la composicin gentica de cada clula. Mantiene el nmero de cromosomas. 2. En la mitosis dos copias idnticas (duplicacin semiconservativa) de la informacin gentica, orga- nizadas en dos cromtidas se distribuyen hacia las dos clulas hijas resultantes. 1.- a) En plantas de un cultivo de cebada se analizaron ncleos celulares del meristemo de raz y de una parte del cambium en divisin. En ambos casos se observaron en metafase: 14 cromosomas. Era esto predecible? Cmo ser la constitucin del genotipo (general) y del genoma de ambas clulas? b) Analice la Figura 4 y describa las tres principales caractersticas de cada una de las fases de la MITOSIS: PROFASE, METAFASE, ANAFASE Y TELOFASE c) A qu se debe que en un organismo todas las clulas somticas o vegetativas tengan la misma constitucin gentica. ? d) En qu etapas del ciclo celular de una clulas somtica en divisin mittica la cantidad de ADN es 2C, en cul es 4C y en cul es C? e) Marque en la fotografa (figura 1-3) que se presenta y sobre los cromosomas de Crepis pulchra (Compuesta= Asteraceae) (2n=2x=8): brazo cromosmico ............................... telmero ................................................. centrmero o constriccin primaria ........ cromtida hermana ................................ constriccin secundaria ......................... regin satlite ........................................ (brazos: p y q) (tel) (cen) (cromtida h.) (const. 2) (sat)

f) Qu representa el IDIOGRAMA de cuatro cromosomas de la parte b) de la fotografa? 2.- Analice la Figura del Ciclo biolgico (Figura 5) de un vegetal superior. a) En qu parte del ciclo ubica procesos de divisin mittica y en dnde ocurre divisiones meiticas. Identifique en la semilla regiones con distintos niveles de ploida y explique sus orgenes. b) El embrin de dicha semilla posee mitocondrias y plastidios (o plastos) con ADN que es extranuclear. Cul fue la va de transmisin desde la planta progenitora y qu consecuencias tiene debido a su origen?

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c) Si llamamos A, a; B, b; D, d; a los 3 pares de cromosomas de una especie diploide cul de los siguientes complementos cromosmicos esperara encontrar en las clulas somticas de esa planta?: AABBDD, AaBbDd, aabbdd, o AABbDb, y por qu.

Figura 4

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Figura 5

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UNIDAD I - TEMA 2 2 parte

Meiosis
Objetivos 1. Reconocer las etapas ms importantes del proceso meitico y sus principales consecuencias. 2. Reconocer el proceso meitico como generador o multiplicador de la variabilidad gentica. 3. Sentar las bases para la comprensin de las Leyes de Mendel. Principales conceptos 1. La Meiosis reduce el nmero de cromosomas a la mitad en un proceso constituido por dos divisiones celulares. 2. Los cromosomas homlogos duplicados, se aparean y luego se distribuyen en las dos clulas hijas de la primera divisin. 3. Las dos cromtidas componentes de cada cromosoma, se distribuyen en las dos clulas hijas de la segunda divisin. 4. Entre el proceso de distribucin aleatoria de los cromosomas en las anafases y la recombinacin entre los homlogos apareados en el paquiteno, se genera o se multiplica la variabilidad gentica preexistente. No hay dos productos meiticos diferentes. 1.- Si obtenemos una muestra representativa de los granos de polen que puede formar una planta con pares cromosmicos que llamaremos 1 1, 2 2, 3 3 complete el siguiente rbol dicotmico y escriba todas las COMBINACIONES CROMOSMICAS que esperara encontrar en ellos. Cuntas combinaciones distintas se darn en este caso?. Qu probabilidad de aparicin tiene cada combinacin? Combinaciones cromosmicas en los ncleos haploides: 3 2 1 2 .......................... 3 .......................... 3 ..........................

3 .......................... 3 ..........................

3 .......................... 3 ..........................

3 .......................... 2.- Se sabe que la constitucin cromosmica del embrin de una semilla de una especie de gramnea es el siguiente, y los cromosomas sin tilde son de origen materno y los restantes de origen paterno: 1 1' - 2 2' - 3 3' - 4 4' - 5 5' - 6 6' - 7 7' a) El nmero 2n de cromosomas o complemento cromosmico de esta especie es: ........ b) El nmero y la composicin cromosmica del endosperma de esta semilla son, respectivamente: ............ y .............. c) Cuando esa semilla germine, la constitucin cromosmica de las clulas somticas de la planta resultante ser: ..................... porque .............................................................................

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d) En las clulas que transitan en metafase I meitica de esta planta, el nmero de bivalentes que se espera observar es: ............... e) Cmo se explica que en una clula en metafase II de esa planta hay 7 cromosomas y no 14? f) Cul es el nmero y cul es la constitucin cromosmica de los granos de polen producidos por dicha planta?. Para esta ltima parte limtese a analizar la distribucin de centrmeros maternos y paternos (y no la presencia de cromtidas de tipo recombinante y de tipo parental). 4.- Si en una poblacin de una especie diploide hay dos alelos para un gen: a) dibuje sobre un par de cromosomas metacntricos cules son todas las posibles combinaciones de dichos alelos que se podran encontrar en distintos individuos. b) Qu se entiende por individuo homocigota para ese gen y a qu se le llama heterocigota?. c) Cuntos homocigotas distintos podra haber en una poblacin? 5.- Realice un esquema de la Meiosis e indique en qu etapas se puede generar variabilidad y de qu tipo. 6.- Analice la Figura 6 donde se representan esquemticamente algunas etapas de la Meiosis: - Se dibujaron solamente dos pares de cromosomas (de un complemento cromosmico mayor) - En cada uno se representa un solo gen (de los cientos de genes que posee cada cromosoma). a) Qu representan las vas 3 superior y 3 inferior?. b) Qu fase est representada en la etapa 4? c) La etapa 5 representa las Anafases II. Qu variabilidad presenta cada juego de cromosomas que estn segregando? 7.- Realice un esquema indicando modos de reproduccin en vegetales (reproduccin sexuada, por apomixis, propagacin vegetativa). Analice comparativamente cules generan en su progenie mayor amplitud gentica y en cules se genera mayor variabilidad. 8.- Si compara especies autgamas con especies algamas, qu puede comentar de la variabilidad que se genera en ambas debido al proceso de la meiosis?. Defina qu es una lnea pura y cmo se puede lograr obtenerlas. EJERCICIOS COMPLEMENTARIOS 1.- En los casos de animales con sistema de determinacin sexual XX/ XY, qu diferencia habr en meiosis con relacin a un gen localizado en la regin homloga de ambos cromosomas y un gen localizado en la regin no homloga del cromosoma X?. 2.- En Lotus tenuis el nmero cromosmico es 2n = 12 (cuatro pares metacntricos y dos submetacntricos). a) Cul es el nmero de centrmeros que se espera observar en un solo NUCLEO en: Metafase I: ................ Anafase I: ............... Metafase II: ................ Anafase II: .............. b) El nmero de centrmeros de origen materno y de origen paterno ser respectivamente: - en las clulas en Metafase I: ............. y ............. - en una clula en Metafase II: ............ y .............

Figura 6

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UNIDAD I - TEMA 3 1 Parte

El modelo mendeliano para una sola caracterstica Primera ley de Mendel
Objetivos.1. Desarrollar adecuada destreza en la mecnica de cruzamientos, prediccin de resultados, anlisis gentico, cruzamientos de prueba, deduccin de genotipos en funcin de resultados de cruzamientos realizados. 2. Conocer y usar adecuadamente las herramientas del anlisis gentico: proporciones, probabilida- des, frecuencias, pruebas estadsticas. 3. Reconocer correctamente la aplicacin de la 1 ley de Mendel en cada cruzamiento planteado. 4. Conocer algunas de las variantes del Modelo mendeliano bsico. Principales conceptos.1. Conceptos de gen, alelos, locus, genotipo, homocigotas, heterocigotas 2. Los alelos de un gen segregan en el proceso de formacin de los gametos. 1 ley de Mendel, com prensin y aplicacin). 3. Conceptos de Cruzamientos de prueba y Retrocruzas, aplicacin y consecuencias. 4. Conceptos de dominancia, codominancia y dominancia incompleta. 5. Alelos mltiples 6. Herencia Ligada al Sexo 1.- En el tomate, el gen que determina color del tallo tiene dos alelos: el dominante P, determina coloracin prpura, mientras que su alelo recesivo p determina coloracin verde. a) Escriba los genotipos posibles de una planta de tallo prpura y de otra de tallo verde. b) Para tres individuos distintos dibuje un par de cromosomas en anafase I y seale en ellos los genes correspondientes a los tres genotipos que represent en a) c) Para esos tres genotipos seale si son homocigotas o heterocigotas e indique qu tipo de gametos y en qu proporcin puede producir cada uno de ellos. d) Plantee los resultados esperados posibles al cruzar una planta de tallo prpura con otro de tallo prpura (muestre las distintas posibilidades, plantee los dameros y las proporciones genotpicas y fenotpicas de la descendencias esperadas). e) Si se planteara cruzar una planta de tallo prpura con una de tallo verde, qu posibilidades de cruzamientos y descendencias habra, muestre sus planteos completos. Y si fuera un cruzamiento entre dos plantas fenotpicamente verdes?. f) Un investigador autofecund una planta de tallo prpura por un lado, y autofecund una de tallo verde. Qu resultados obtiene en la primera generacin en cada caso posible?. g) Indique cules son los resultados posibles al realizarle un cruzamiento de prueba a una planta de tallo prpura. Muestre todos sus planteos. Seale la utilidad del procedimiento. h) Si Ud. cruza una planta homocigota de tallo prpura con una homocigota de tallo verde y a la F1 resultante le realiza las dos retrocruzas posibles. cules son los resultados fenotpicos esperados en cada caso? i) Y si se autofecunda la F1?

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2.- En una gramnea autgama se conocen lneas puras con arista en la espiguilla y lneas puras sin arista. Con el fin de investigar cmo se hereda este carcter, se cruzaron dos lneas puras contrastantes obtenindose una F1. Todas las plantas de esta generacin posean arista. a) Qu conclusin se obtiene de este resultado? b) A continuacin se realizaron cruzamientos entre plantas de la F1 y plantas de la lnea pura sin aristas. El resultado acumulado para todas las progenies obtenidas fue de 73 plantas con arista y 77 sin arista. Cmo se denomina al cruzamiento realizado? c) Qu conclusiones saca de estos resultados?, es segura esta conclusin obtenida?, por qu los resultados obtenidos en este cruzamiento no concuerdan exactamente con lo esperado? d) Conoce alguna prueba estadstica que le ayude a decidir acerca si las conclusiones que obtuvo en c) pueden considerarse como aceptables? Para responder a esta pregunta busque y estudie en la bibliografa de Gentica la forma de utilizar la distribucin JI CUADRADO o CHI CUADRADO que estudi en el curso de MMCCII. Se adjunta una Tabla de dicha distribucin. 3. En el Dondiego de Noche (Mirabilis jalapa) hay 3 colores de flor. Si se cruza una lnea pura de flor roja con una de flor blanca, toda la F1 tiene flor rosada. Si se autofecundan las plantas de la F1, dan en la F2 plantas con flores rojas, plantas con flores rosadas y plantas con flores blancas. En un experimento las cantidades contabilizadas de plantas de la F2 fueron 123 de flores rojas, 251 de flores rosadas y 126 de flores blancas. a) Cmo explica este resultado segn el tipo de herencia de este carcter?. Con los smbolos que Ud. elija, anote todos los cruzamientos realizados, detallando: genotipos, gametos, proporciones, tableros de cruzamientos. b) Confirme o rechace estadsticamente sus conclusiones. Muestre el procedimiento. Tabla de Chi Cuadrado

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EJERCICIOS COMPLEMENTARIOS
OTRAS HERRAMIENTAS PARA EL ANLISIS GENTICO Genealogas. Probabilidad. Distribucin binomial 1.- En muchas especies animales de baja prolificidad e intervalo generacional grande, un recurso para realizar anlisis genticos, sin realizar cruzamientos dirigidos, es estudiar las genealogas (o rboles genealgicos o pedigr) que comprendan individuos con la caracterstica en estudio. Esto es particular- mente vlido en la especie humana donde los cruzamientos no pueden ser dirigidos. La siguiente es parte de la genealoga de una familia humana, en que los individuos en negro, estn afectados de polidactilia, (existencia de ms de 5 dedos en una o varias extremidades): 1G 2G 3G

Considere en su anlisis que esta malformacin es muy poco frecuente en la especie humana: a) Determine si el carcter polidactilia es dominante o recesivo b) Elija un smbolo para cada uno de los alelos del gen involucrado y coloque los genotipos de todos los individuos de la genealoga. c) Calcule cul es la probabilidad de que el matrimonio de la 3 generacin que ya tiene una hija con polidactilia, tenga su siguiente hijo o hija con polidactilia d) Calcule cul es la probabilidad de que, para el matrimonio de la 3 generacin que an no tuvo hijos, los dos primeros que tenga sean normales. e) Y, si tienen 4 hijos, cul es la probabilidad de que los 4 tengan polidactilia? f) Cul es la probabilidad de que dos sean normales y dos tengan polidactilia?. Consulte en la bibliografa de Gentica o en la de MMCCII, la aplicacin de la frmula de probabilidad binomial para responder ms fcilmente a esta ltima pregunta. 2.- En la especie humana el carcter albino es causado por el alelo recesivo de un gen. El alelo dominante produce pigmentacin normal de la piel. a) Cules son los distintos resultados que se pueden esperar si en un matrimonio uno de los cnyuges es albino y el otro no? De qu dependen estos resultados? Busque en el material de apoyo qu frecuencia tiene el alelo para albinismo en nuestra especie. b) Si el matrimonio anterior tiene un hijo normal (no albino), cul es la probabilidad de que el siguiente hijo sea albino?, que los dos siguientes hijos sean normales?, de que de los dos siguientes uno sea albino y otro normal?

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ALELOS MULTIPLES 3) En varias especies vegetales existen genes de autoincompatibilidad, es decir, genes que impiden que un grano de polen desarrolle su tubo polnico y llegue a autofecundar a vulos de la propia planta. En uno de los sistemas de autoincompatibilidad, el polen que tiene uno de los alelos de este gen, no puede fecundar flores de plantas donde ese mismo alelo este presente en el tejido diploide. Analicemos un ejemplo sencillo con 4 alelos que llamaremos s1, s2, s3 y s4. Los granos de polen con el alelo s1 no pueden fecundar las flores de plantas cuyo genotipo sea s1 s2, s1 s3 s1 s4 por ejemplo, pero s pueden fecundar a plantas de genotipo s2 s3. a) Analice el resultado esperable de un cruzamiento entre una planta, s2, s3 y una planta s1, s2 . Analice tambin el cruzamiento recproco. b) Plantee cules son los cruzamientos totalmente incompatibles, cules son semicompatibles y cuales compatibles totalmente. c) Analice las ventajas que le proporciona a estas especies el hecho de que los alelos de autoincompatibilidad sean numerosos. Analice porqu no hay homocigotas.

HERENCIA LIGADA AL SEXO 4) En Drosophila melanogaster la mosca de la fruta el gen que determina ojos rojos (W) es dominante sobre su alelo que determina ojos blancos (w) . El gen que determina esta caracterstica est ubicado en el cromosoma sexual X en la regin no homologa al cromosoma Y.Esto determina algunas diferencias con el modelo mendeliano clsico que, sin embargo, no implican que no se cumpla la 1 ley de Mendel. a) Analice los resultados que se esperan del cruzamiento entre una mosca hembra de una cepa pura de ojos rojos con un macho perteneciente a una cepa pura de ojos blancos. b) Analice los resultados que se esperan del cruzamiento recproco al anterior. c) Explique en que aspectos de las respuestas anteriores est contemplado el cumplimiento de la 1 ley de Mendel.

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UNIDAD I - TEMA 3 2 Parte

El modelo mendeliano para dos o ms caractersticas Segunda ley de Mendel
Objetivos 1. Profundizar en la mecanica de cruzamientos, genotipos, gametos, tableros de Punnett, proporciones esperadas, para cruzamientos que involucran dos o ms genes. 2. Conceptualizar la 2 ley de Mendel. Principales conceptos 1. Los alelos de diferentes genes segregan independientemente y se recombinan al azar. (2 ley de Mendel).2. Los genes que cumplen con la 2 ley son aquellos que estn ubicados en diferentes cromosomas (en cromosomas no homlogos). 1.- Se cruzan una planta homocigota dominante para el color y la forma de la semilla de arveja con una planta homocigota recesiva para ambos caracteres: a) Indique cul es el resultado esperado de ese cruzamiento b) Indique cul es el resultado esperado de cruzar una planta homocigota dominante para el color de la semilla y homocigota recesiva para la forma, con otra homocigota recesiva para el color y homocigota dominante para la forma. c) Obtener los resultados esperados de la autofecundacin de la F1 que resulta de cualquiera de los cruzamientos anteriores. d) Qu espera de realizarle a esa F1 un cruzamiento de prueba?. 2.- Qu tipo de gametos y en que proporcin producirn los individuos con los siguientes genotipos?: 1. AaBbCc 2. AABBCc 3. AaBbcc 4. AabbCCDd Qu resultados genotpicos espera en la descendencia del cruzamiento entre los individuos 1 y 2 de la parte anterior?; y entre el 2 y el 3?

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3.- En Drosophila se cruza una cepa pura de moscas de alas largas y cuerpo oscuro con otra de alas cortas y cuerpo claro. Todas las moscas de la F1 tienen alas largas y cuerpo claro sin que haya diferencia entre ambos sexos. Cuando se cruzaron entre s moscas de la F1 se obtuvieron: 44 16 14 6 individuos de cuerpo claro y alas largas individuos de cuerpo oscuro y alas largas individuos de cuerpo claro y alas cortas individuos de cuerpo oscuro y alas cortas

Considere como probado que tampoco en este caso hay diferencias entre ambos sexos en los resultados, por lo que podemos descartar herencia ligada al sexo: a) Elabore una hiptesis que explique estos resultados asignando a cada caracterstica los smbolos que necesite, y a todos los individuos involucrados su genotipo, si es posible. b) Analice estos resultados estudiando primero cada caracterstica por separado explicando el modo de herencia de cada una y comprobando estadsticamente los resultados. Cumplen cada uno de estos caracteres con la 1 ley de Mendel.? c) Analice estos resultados en conjunto determinando si ambos caracteres cumplen con la 2 ley de Mendel, incluyendo la correspondiente prueba estadstica. d) Considerando las conclusiones a que Ud. lleg en las partes a) y c), y que Drosophila tiene 4 pares de cromosomas de los cules uno es el par sexual: dibuje todos los cromosomas de un macho de la F1 y coloque los genes que determinan estas caractersticas en dichos cromosomas (de modo que no contradigan sus conclusiones).

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UNIDAD I - TEMA 3 3 Parte

Uso de herramientas estadsticas para ejemplos con y sin cumplimiento de la 2 ley de Mendel
Objetivos 1.Profundizar en el conocimiento de las situaciones en que se cumple o no se cumple la 2 ley de Mendel. 2.Aprender el uso de herramientas estadsticas para analizar resultados experimentales. Principales conceptos 1.Los alelos de diferentes genes segregan independientemente y se recombinan al azar. (2 ley de Mendel).2. Los genes que cumplen con la 2 ley son aquellos que estn ubicados en diferentes cromosomas (en cromosomas no homlogos). 1.- En la arveja el color prpura de la flor (P) es dominante sobre el color blanco (p) y la semilla amarilla (R) es dominante sobre la semilla verde (r). A la descendencia del cruzamiento entre una lnea pura dominante para ambos caracteres y una lnea pura recesiva para ambos (F1) se le hizo un cruzamiento de prueba, y los resultados fueron: FENOTIPOS Prpura, Amarillas Prpura, verdes blancas, Amarillas blancas, verdes Observadas 34 32 35 31 plantas Esperadas

a) Los resultados observados concuerdan con los esperados? Compruebe estadsticamente si se cumple para cada gen la 1 ley de Mendel, y luego si se cumple la 2 ley de Mendel. b) La arveja es 2n=14. Represente con lneas todos los cromosomas de la especie y coloque los genes que posean cualquiera de los individuos de la F1 c) Dibuje, esquemticamente, una planta de cada una de las lneas, que se cruzaron y una planta de la F1, diferenciando con colores cada uno de los caracteres involucrados. Tenga en cuenta especialmente, en que momento del ciclo vital de la especie, se expresa cada carcter. 2.- En la misma especie la forma alargada de los granos de polen (L) es dominante sobre la forma redondeada (l). Como en el ejercicio anterior se cruzaron dos lneas puras contrastantes (una dominante y otra recesiva para ambos caracteres) y a la F resultante se le hizo un cruzamiento de prueba. Los resultados fueron:

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FENOTIPOS Prpura, Alargados Prpura, redondeados blancas, Alargados blancas, redondeados

Observados 38 plantas 12 11 39

a) Estos resultados concuerdan con lo que Ud. esperara? Compruebe estadsticamente si se cumple la 1 ley de Mendel, para cada gen involucrado y luego si se cumple la 2 ley de Mendel. b) Qu conclusiones extrae de estos resultados?

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UNIDAD I - TEMA 4 1 Parte

Genes ligados - Mapas Genticos
Objetivos 1. Reconocer la modificacin al modelo mendeliano provocada por el ligamiento entre los genes. 2. Comprender el mecanismo de recombinacin de los genes ligados y sus consecuencias. 3. Comprender la elaboracin de mapas genticos y su utilidad. Principales conceptos 1. Los genes ligados no segregan independientemente. 2. Sin embargo recombinan en un porcentaje dependiente de la distancia. 3. Los conceptos anteriores permiten definir distancias genticas y elaborar mapas genticos. 1.- Supongamos que tenemos las siguientes lneas puras para dos genes con dominancia: (1) RRLL (2) rrll (3)RRll (4)rrLL

El alelo dominante R determina color rojo, y el alelo recesivo r, determina flor blanca; el alelo L determina hoja lisa y el alelo recesivo l determina hoja rugosa. A partir de dichas lneas puras se realizaron dos series de cruzamientos: CRUZAMIENTO 1 RRLL F 1: Cruz. Prueba: Progenie Genotipos: Fenotipos: Observados 400 100 100 400 100 400 400 100 RrLl Rr ll rrLl rrll RrLl Rrll rrLl rrll _____ x Fenotipo: F1 x rrll rrll _____ RRll F1: _____ CRUZAMIENTO 2 x rrLL Fenotipo: _____ F1 x rrll

a) Analice los resultados de cada cruzamiento prueba y establezca si la 1 y 2 Ley de Mendel se cumplen. b) Represente ambos cruzamientos prueba mediante el tablero de Punnett o damero indicando las frecuencias gamticas correspondientes.

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c) Cul es el origen de las desviaciones fenotpicas y genotpicas observadas? d) Analice comparativamente los resultados obtenidos en los dos cruzamientos prueba. Calcule en cada caso el % de recombinacin entre los genes R y L; llega al mismo resultado?; por qu las proporciones genotpicas son diferentes en cada caso?. e) El grado de ligamiento entre estos genes ser estable dentro de una especie? f) Los genes que estn ligados entre s pertenecen a un mismo _____________. g) La identidad y orden de los genes a lo largo de un cromosoma pueden establecerse mediante anlisis de la probabilidad de ________________ entre ellos. Para calcular dicho valor en general se disean ________________. La representacin grfica de esta informacin son los ___________. Son mapas probabilsticos cuyas unidades se expresan en _____ equivalentes a ___________. El mapa gentico es __________para cada especie. Pero pueden haber variantes debido a____________. Realice un esquema del mapa gentico para el ejemplo discutido. Realice un esquema del genotipo de las F1 para cada cruzamiento. 2.- En un dihbrido AaBb a) Esquematice sobre cromosomas las siguientes situaciones: si segregan independientemente si estn ligados en cis, si estn ligados en trans (a 10 cM) si presentan ligamiento total b) en cada uno de los cuatro casos indique qu progenie espera observar y sus probabilidades. 3.- En relacin al tomate (Lycopersicum esculentum, 2n=24): a) En la siguiente tabla se describe la progenie de un cruzamiento prueba en tomate en donde hojas moteadas y plantas enanas son caracteres recesivos. Fenotipo Altura Normal - Hojas normales Altura Normal - Hojas moteadas Plantas Enanas - Hojas normales Plantas Enanas - Hojas moteadas TOTAL Observado 54 455 425 66 1000 1 Frecuencias

Analice estadsticamente los datos (describa la hiptesis nula) y localice los genes en un mapa gentico (Figura 7). Los resultados indican que los genes para altura y tipo de hoja ____________con una probabilidad de ____________. b) Estime ahora la probabilidad de ocurrencia del genotipo doble recesivo en una F . Cul sera el mnimo tamao de la F2 para poder detectarlo? c) Puede identificar en los datos y sus respuestas a este problema las siguientes etapas del mtodo cientfico?: marco conceptual (informacin previa disponible); formulacin de la hiptesis; diseo experimental; obtencin de resultados; anlisis de resultados; discusin e interpretacin de los resultados.

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Figura 7

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EJERCICIOS COMPLEMENTARIOS 1) Utilizando el mapa gentico del tomate de la Figura 7, calcule el tamao mnimo de una F2 para poder detectar al menos una planta de tomate homocigoto que porte flores amarillas (cromosoma 2), fruto amarillo (cromosoma 2) y forma de fruto fasciculada (cromosoma 5). Considere para su respuesta que se disponen de plantas trihbridas y los genes ligados estn en disposicin trans. a) Realice el problema primero slo considerando los 2 caracteres ligados. b) Ahora, estime cul sera su respuesta si los tres genes hubieran estado localizados en diferentes cromosomas. Y si los tres genes hubieran estado completamente ligados (ABC/abc). c) Forma de fruto tiene un importante nmero de variantes, y es un fenotipo que se expresa tarde en la estacin de cultivo. Actualmente el mapa gentico del tomate cuenta con mas de 500 genes y de otras secuencias de ADN mapeadas. Algunas de estas nuevas secuencias se ubican a menos de 2 cM de distancia de importantes genes de forma de fruto. Discuta que ventaja presenta la identificacin de tales secuencias en la seccin de los genotipos objetivo. 2) Describa los tipos de gametos y sus correspondientes frecuencias que formara un trihbrido con el siguiente mapa gentico (considere los distintos casos): G (0.15) F (0.35) 3) Un individuo heterocigoto para tres genes AaBbCc es retrocruzado con otro aabbcc, y una progenie de 1000 descendientes es clasificada por la contribucin gamtica del padre heterocigoto de la siguiente manera: GAMETOS ABC ABc AbC Abc aBC aBc abC abc Total N 216 229 28 27 23 22 216 239 1000 1 Frec. H

a) A partir de estos datos dibuje el mapa gentico de esta especie (2n=4). Considerando dos genes por vez, arme un cuadro mostrando los resultados de la retrocruza. b) Describa el genotipo de las lneas homocigotas parentales que generaron el trihbrido. Realice un esquema del genotipo. c) Cul es la probabilidad de encontrar individuos AABBcc en la F2?.

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Unidad I - Tema 4 2 parte

Genes ligados - Mapas Genticos y Marcadores Moleculares
Objetivos 1. Reconocimiento de la herramienta: marcadores moleculares y su importancia desde el punto de vista de la elaboracin de los mapas genticos y sus usos. 2. Complementar el manejo de los conceptos de ligamiento y mapeo gentico, con el agregado de los marcadores moleculares. Principales conceptos Los marcadores moleculares pueden manejarse como genes con dos o ms alelos en el mapeo gentico y el estudio de la recombinacin. Los marcadores moleculares potencian la herramienta mapas genticos agregando informacin sobre cualquier parte del ADN, sean o no regiones codificantes del mismo. 1.- Una solucin contiene fragmentos de ADN de doble cadena de 3 kb, 6 kb, 9 kb, y 12 kb de tamao. Estos fragmentos se separan mediante electroforesis en gel de agarosa. En el siguiente diagrama de gel, ubique los tamaos de fragmentos con las bandas correspondientes:

(+) nodo 2.- El fragmento de ADN linear que se muestra a continuacin presenta sitios de corte para las enzimas BamHI (B) y EcoRI (E). Esto se denomina un mapa de _________. Es un mapa _________ expresado en _____. No es un mapa gentico (probabilstico). i) En el diagrama que lo acompaa de un gel de electroforesis, indique las posiciones que deberan tener los fragmentos de restriccin obtenidos luego de una digestin con: (a) BamHI sola (b) EcoRI sola (c) BamHI y EcoRI al mismo tiempo. Las lneas punteadas de la derecha del gel indican las posiciones en que las bandas de 112 kb deberan migrar.

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ii) Puede anticipar qu consecuencias tendra la presencia de mutaciones tales como inserciones, delecciones, inversiones y cambios de bases (puntuales) en el sitio de corte y entre sitios de cortes en el patrn de fragmentos de restriccin? Realice un diagrama. iii) Cuando el perfil de fragmentos de restriccin de ADN de diferentes individuos presenta _______________(bandas con distinta movilidad relativa) hablamos de ___________(P_____________en el L____________de F____________ de R______________). 3.- En una secuencia consistente de iguales proporciones de los cuatro nucletidos (A, T, G, C) i) qu probabilidad tiene una secuencia particular de coincidir con un sitio de restriccin para?: (a) Una enzima de restriccin con sitio de corte de 4 bases (b) Una enzima de restriccin con sitio de corte de 6 bases (c) Una enzima de restriccin con sitio de corte de 8 bases ii) con qu frecuencia cortar una enzima que reconoce sitios de 6 bases en un genoma complejo como el trigo de tamao 1.7 x 1010 pb? ser fcil individualizar los fragmentos de restriccin obtenidos en genomas complejos? 4.- La tcnica de hibridacin de creada por Southern implica la transferencia de los fragmentos de restriccin migrados en un gel a una membrana y su posterior hibridacin con sondas especficas. Las SONDAS (probe en ingls) son fragmentos de ADN marcados que formarn molculas hbridas con los fragmentos de restriccin en la medida que exista complementariedad de bases entre sus secuencias. En el diagrama se muestra el sitio de reconocimiento de dos sondas (azul y rojo) en un fragmento de ADN y los sitios de restriccin. Indique qu perfil de fragmentos de restriccin esperara si se parte de una mezcla de los dos fragmentos de ADN de la figura luego de hibridar con : i) la sonda A; ii) la sonda B?

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5.- En el siguiente diagrama, se muestran los fragmentos de ADN correspondientes al locus A de un par de cromosomas homlogos de un bovino. De acuerdo al mapa de restriccin y a la sonda utilizada:

i) se trata de un individuo homocigoto o heterocigoto? ii) qu patrones de bandas esperara encontrar para este individuo? iii) De acuerdo a los datos del problema, escriba los patrones de bandas asociados a los tres genotipos posibles completando el siguiente diagrama: Genotipo (A1, A2) Fenotipo (kb/kb) Diagrama de combinacin allica en un par de cr. Homlogos Patrn de RFLPs para los tres genotipos iv) qu tipo de herencia tiene el marcador RFLP? por qu se llamar marcador molecular? Discuta semejanzas y diferencias entre este marcador molecular y otros marcadores morfolgicos que Ud. conozca.

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6.- En el diagrama de la figura 8 se describen las variantes color de flor y perfil de RFLPs del cruzamiento y progenies F1 y F2 correspondientes. Suponga una especie autgama, diploide. i) Analice primero el carcter color de flor, y luego el perfil RFLP, e indique el tipo de herencia de cada uno. ii) Considerando que los individuos F2 descritos representan a todos los tipos posibles encontrados en una poblacin F2 numerosa qu concluye acerca del grado de asociacin entre estos dos caracteres? iii) Represente sus resultados en un mapa de ligamiento y ubique las combinaciones allicas de un dihbrido en un diagrama de una par de cromosomas homlogos. iv) Discuta el impacto del mapeo de miles de marcadores moleculares en mapas genticos. Datos FENOTIPICOS de la progenie F2 para dos caracteres Color de Flor Planta tipo 1 Planta tipo 2 Planta tipo 3 Planta tipo 4 RFLP

HERENCIA DE MARCADORES
Padre 1 Lnea Pura, flor Roja R/R Padres 6 kb 6 kb/6kb 8 kb 6 kb 8 kb/6kb R/r R/r r/r 8kb/8kb r/r 8 kb Padre 2 Lnea Pura, flor Blanca

R/r Autofecundacin R/R

F1

6 kb/6kb F2 6 kb

8 kb/6kb 8 kb 6 kb Figura 8

8 kb/6kb 8 kb 6 kb

8 kb/8kb 8 kb

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Unidad I - Tema 5
Interaccin gnica. Epistasis. Herencia multifactorial
Objetivos 1. Reconocer los conceptos de Interaccin entre genes no allicos y de epistasis. 2. Manejar ejemplos y modificaciones de las proporciones debidas a dichos fenmenos. 3. Conocer ejemplos de interaccin aditiva y las herramientas para su anlisis, como conceptos previos al anlisis de los Caracteres cuantitativos. Principales conceptos 1. Interaccin gnica significa, accin conjunta entre dos o ms genes para la determinacin de un carcter fenotpico. 2. Epistasis o epstasis significa que alguno de los alelos de un gen impide la expresin de otro gen no allico. 3. Aditividad significa que los distintos genes que determinan una caracterstica suman sus efectos en la determinacin del fenotipo. 4. Adems de ese efecto aditivo pueden ocurrir efectos de dominancia entre los alelos de cada uno de los genes y tambin diversas interacciones epistticas entre los genes no allicos que determinan la caracterstica. 1. Un clsico ejemplo de interaccin entre genes no allicos es el del color del pelaje en ratones. Un gene dominante (A) permite la expresin del color y su alelo recesivo (a) bloquea la sntesis del pigmento melanina (albinos). Por otra parte un gene dominante (N), determina el llamado pelaje agut que es negro con bandas amarillas y su alelo recesivo (n) determina el pelaje negro. El gene a es episttico sobre el parallico N-n. a) Realice un esquema de una posible ruta metablica que explique los posibles resultados fenotpicos finales en el pelaje de los ratones. Explique por qu decimos que hay epistasis y qu significa el trmino comparndolo con casos de interaccin no episttica (ejemplo tipo de cresta en gallos). b) Cules son los resultados esperados del cruzamiento entre individuos dihbridos para los genes citados? Indicar genotipos, fenotipos y proporciones esperadas. c) Si un ratn dihbrido se cruza con una hembra homocigota recesiva, cules seran los resultados esperados? d) Los genes que codifican para color de pelaje en ratones: cumplen con ambas leyes de Mendel? Explique en qu momentos del anlisis lo aplic? 2. Herencia multifactorial o polignica, ejemplo de modelo aditivo: Contamos con dos lneas endocriadas de maz, Zea mays, que difieren en 3 genes para el tamao de mazorca: a1 a1 b1 b1 c1 c1 y a2 a2 b2 b2 c2 c2 .

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El tipo de efecto de estos genes es aditivo sin dominancia (aditivo estricto), y el efecto promedio de la sustitucin allica ha sido estimado en 3 cm para cada gen. El tamao promedio de mazorca de las lneas citadas es de 24 cm y 6 cm, respectivamente. Se cruzaron estas dos lneas obtenindose una poblacin F1 y por cruzamiento entre plantas de esa F1 se obtuvo una poblacin F2. a) Indique cul se espera que sea el genotipo de las plantas F1 y su fenotipo promedio para esta caracterstica. b) Indique cul se espera que sea el tamao promedio de mazorca de la F2 y, sin considerar los efectos ambientales, cuntos fenotipos diferentes se espera en esa F2, cules sern esos fenotipos y en qu frecuencia o proporcin espera obtener cada uno de ellos. Realice el histograma correspondiente. Para contestar con mayor facilidad esta pregunta utilice el tringulo de Pascal adjunto. c) Si hubiera realizado la retrocruza entre la F1 y el progenitor de 6 cm de tamao promedio, cul habra sido la distribucin de los valores fenotpicos esperada en la descendencia. Realice el histograma. Conteste la misma pregunta para la otra retrocruza posible. Compare ambos resultados. d) Los genes que codifican para tamao de mazorca: cumplen con la segunda ley de Mendel? Explique en qu momentos del anlisis lo aplic? Realice un esquema (con el mnimo de cromosomas posibles) que muestre cmo estaran representados los genes de un hbrido de la F1. 3. Suponga, para la misma caracterstica del ejercicio n 2 anterior, que las dos lneas endocriadas originales cuyos genotipos no conociramos, tuvieran tamaos de mazorca de 18 y 12 cm, respectivamente y que al cruzarlas, la F1 result en un tamao promedio de 15 cm. La F2 tuvo tambin una media de 15 cm pero haba desde plantas con 6 cm hasta plantas con 24 cm. Esto se denomina segregacin transgresiva y puede ser un procedimiento til en el mejoramiento para lograr ampliar la variabilidad a partir de materiales preexistentes y obtener lneas ms extremas. Utilizando los mismos smbolos y datos del ejercicio anterior desarrolle una explicacin para los resultados de este cruzamiento.

EJERCICIOS COMPLEMENTARIOS 1. Ejercicios 17 y 18 pg.115 del Cap. 4 del libro de Griffith y otros (hay repartido AEA). 2. En trigos duros (autgamas) existen lneas puras de grano rojizo y lneas puras de grano blanco. El cruzamiento entre lneas puras de ambos tipos genera una F1 constituida por plantas con granos rojizos en el 100% de los casos. La autofecundacin de dichas plantas F1, genera una F2 en la que aparecen granos rojizos y blancos en proporcin 15:1. Interprete genticamente estos resultados y proponga una ruta metablica que conduzca desde una precursor hipottico hasta el pigmento final que se acumula en el pericarpio del grano. En esta ruta deber indicar el lugar y la forma en que inciden el o los genes que Ud. seale como responsables de este carcter.

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3. En el ejercicio 2 complementario, se analiz una proporcin 15:1 en la F2 entre granos de trigo rojizos y blancos. Ya en 1909 Nilsson-Ehle realiz numerosos cruzamientos en esta especie, considerando el mismo carcter: a) Cruzando otras lneas puras de trigo rojizo con lneas puras de trigo blanco obtuvo proporciones de 3:1 en la F2 y cruzando otras lneas puras de trigo rojo con las de trigo blanco obtuvo proporciones de 63:1en la F2. Discuta como explica estos resultados diferentes, en los diferentes casos. b) Nilsson-Ehle observ tambin que entre los granos rojizos haba diferencias en la intensidad de dicho color. Analizando con ms precisin los resultados que haba obtenido en los distintos cruzamientos citados, lleg a la conclusin de que en realidad haba un efecto acumulativo o aditivo de los genes responsables de la sntesis de antocianinas. Es as que reanalizando la proporcin 15:1 detect 5 clases fenotpicas y sus proporciones: Rojo muy fuerte - Rojo fuerte 1 4 - Rojo medio 6 - Rojo claro - Blancos 4 1

Explique estos resultados analizando el damero de Punnett de una F2. c) En qu proporciones se puede transformar la proporcin 63:1 si se considera este forma de accin acumulativa de todos los genes y alelos involucrados? d) Maneje el tringulo de Pascal y realice histogramas para las distintas proporciones en b) y en c). UTILIZACIN DEL TRINGULO DE PASCAL PARA EL CLCULO DE LAS PROPORCIONES ESPERADAS EN F2 RETROCRUZAS Para caractersticas determinadas por varios genes con dos alelos con efecto acumulativo o aditivo entre genes, sin dominancia entre ambos alelos de cada gen. Por ejemplo, dos genes con dos alelos con efecto acumulativo, en los que denominamos como A y como B a los genes que "aportan" a una caracterstica y como a y b a los que "no aportan". Aqu las letras maysculas no significan dominancia. Una F2 resultante de autofecundar una dihbrido resulta genotpicamente en los 9 genotipos habituales, que aqu ordenamos de acuerdo al nmero de "dosis" de genes que aportan (letras maysculas) de la siguiente manera: 1 aabb 2 Aabb 2 aaBb 1 Aabb 1 aaBB 4 AaBb 2 2 AABb 2 AaBB 1 AABB

dosis de genes que aportan (letras maysculas) Proporciones fenotpicas totales

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Los que tienen el mismo nmero de dosis o sustituciones tienen el mismo fenotipo en la caracterstica de que se trate en cada caso. Estas mismas proporciones de la F2 se pueden obtener del tringulo de Pascal, utilizando los renglones pares segn se indica: N de pares de genes 1 1 1 1 1 1 6 5 15 4 10 20 3 6 10 15 2 3 4 5 6 1 1 1 1 1 1 3 2 1

Las flechas en el tringulo indican cmo se obtiene cada coeficiente del tringulo de Pascal (se suman los nmeros de arriba para obtener los del siguiente rengln). Con esto puede continuar indefinidamente el tringulo, para utilizarlo con cualquier nmero de genes. Observe que en el segundo rengln se obtiene al clsica proporcin fenotpica 1: 2:1 de una F2 para un slo par de genes. Observe que el cuarto rengln aparece la proporcin 1:4:6:4:1 que ms arriba hemos obtenido por el procedimiento de agrupar los genotipos segn la cantidad de alelos mayscula en el genotipo. Con un ordenamiento similar de los genotipos se pueden obtener los genotipos que corresponden a cada una de las proporciones para 3 pares de genes (6 rengln). Si adems conoce el efecto fenotpico de cada alelo puede saber los fenotipos de cada grupo.

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Unidad I - Tema 6
Gentica Cuantitativa
Objetivos 1. Conocer las propiedades de los caracteres cuantitativos propiamente dichos. 2. Conocer los componentes de la variabilidad fenotpica y de la variabilidad de origen gentico. 3. Manejar las herramientas de estimacin y anlisis de dichas variabilidades

Principales conceptos 1. Los caracteres cuantitativos propiamente dichos tienen variabilidad continua. 2. Dicha variabilidad, en primera instancia, tiene dos orgenes, el gentico y el ambiental. 3. A su vez, la variabilidad gentica puede descomponerse en variabilidad de origen aditivo, variabilidad debida a dominancia y variabilidad debida a interaccines epistticas. Pueden estimarse los distintos componentes. 4. A pesar de la interferencia de la variabilidad de origen ambiental, diferentes diseos estadsticos permiten realizar estimaciones del nmero de genes participantes, de los efectos (aditivos) de cada gen y de la distribucin de fenotipos debida a la composicin gentica. 1. En el duraznero (preferentemente autgama) se registran caractersticas de tipo cuantitativo como por ejemplo la fecha de maduracin. Existen cultivares con muy variadas fechas de maduracin. Tomaremos como 0 (cero) la fecha de maduracin del cultivar "Marcus" el ms temprano que se cita en la bibliografa. El cultivar "Krummel", el ms tardo que se cita, madura 90 das despus. Supongamos que, para esta caracterstica, estos dos cultivares son homocigotas. Un cruzamiento entre estos dos cultivares gener una F1 con una fecha de maduracin 45 das posterior al cultivar "Marcus". A su vez, por autofecundacin de esta F1 se obtuvo una F2 en la que la media de la fecha de maduracin es tambin de 45 das pero con mucha variabilidad. Se ha estimado que aproximadamente 1 de cada 64 plantas de la F2 madur en fecha similar a la del cultivar "Marcus" y otro tanto maduraron en fecha similar a la de "Krummel". Poblacin Cultivar "Marcus" Cultivar"Krummel" F 1 F 2 Media 0 90 45 45 Varianza 4 4 4 25

Un ensayo estadsticamente vlido en el que se evalu la fecha de maduracin de estas cuatro poblaciones proporcion los resultados citados y algunos ms que se agregan en el siguiente cuadro:

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De acuerdo con los datos aportados conteste las siguientes preguntas explicando sus respuestas: a) Qu tipo de herencia considera Ud. que acta en esta caracterstica? y por qu? Considere el tipo de efecto gnico en su respuesta. b) Cuntos genes estima Ud. que determinan las diferencias entre los cultivares cruzados, en cuanto a la fecha de maduracin? c) En cunto estima el efecto promedio de la sustitucin allica? d) Cuntas clases fenotpicas debera haber en la F 2 si no consideramos efectos ambientales? REALICE UN HISTOGRAMA. e) Considerando ahora la variabilidad fenotpica total de stas poblaciones. Discuta: I el origen de la variabilidad en las distintas poblaciones involucradas I la posibilidad de particionar la variabilidad fenotpica en ambiental y genotpica, en estas poblaciones. f) Defina heredabilidad, discuta la utilidad de estimar este parmetro g) cmo calculara en este ensayo la heredabilidad en sentido amplio que tiene este carcter para la F ? y en cunto estima su valor?. 2 h) por qu se habla de heredabilidad en una poblacin especfica (y en una condicin ambiental especfica) y no de heredabilidad en general para la caracterstica en estudio?

2. Suponga que para una caracterstica polignica y con importante efecto ambiental se cruzan dos lneas puras diferentes, se obtiene una F1 intermedia y por autofecundacin de plantas de esta F1 se obtiene una F2. Se realiza un ensayo estadsticamente vlido en el que se comparan las 4 poblaciones. La varianza de las dos lneas y de la F1 result de magnitud similar y la de la F2 result ser tres veces mayor. a) Estime cul sera el valor de la heredabilidad de este carcter en la poblacin F2 b) Indique cul es el significado de ese valor desde el punto de vista de las posibilidades de obtener avances por seleccin c) Podra obtener avances si intento seleccionar en la poblacin F1? Explique su respuesta.

EJERCICIO COMPLEMENTARIO 1. Se cruzan dos variedades de arroz (lneas puras L1 y L2) obtenindose la F1 y luego la F2 (F1 x F1). Las variedades difieren en el largo del ciclo (cantidad de das desde la siembra hasta que el 50% de las plantas han florecido). Los datos de las poblaciones L1, L2, F1 y F2, obtenidos a partir de una siembra simultnea el 15/10 del mismo ao y lugar, se presentan en el siguiente cuadro:

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Poblacin L1 L2 F1 F2

Largo del ciclo promedio) 70 94 82 82

Varianza 14,5 15,9 13,2 100,4

a) Estime cuntos genes explicaran la diferencia entre el largo del ciclo entre estas variedades si 50 de los 3200 individuos de la F2 florecieron hasta el 24/12. b) Discuta la importancia que puede tener el conocer el nmero de loci involucrados en una caracterstica. c) Estime el efecto promedio de la sustitucin allica, explicando el procedimiento utilizado. d) Estime qu parte de la variabilidad fenotpica de la F2 es de origen gentico y qu parte de origen ambiental. Explique. e) Calcule la heredabilidad en sentido amplio de esa caracterstica en la F2. f) Explique qu importancia tiene conocer dicho valor.

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Unidad II - Tema 7
Estructura del gen eucariota. Regulacin de la expresin gnica
Objetivos 1. Reconocer la estructura y funcin de los diferentes tipos de secuencias que conforman un gen. 2. Visualizar y comprender el origen de las variantes allicas de un gen. 3. Comprender los procesos de regulacin de la expresin gnica Principales conceptos 1. La secuencia completa (genmica) de un gen contiene multiplicidad de seales que se utilizarn en los procesos de transcripcin, edicin del ARNm, traduccin y procesamiento de protenas. 2. El impacto de las mutaciones en un gen (variacin fenotpica) se ver afectado por la localizacin particular de dicha mutacin en la estructura del gen. 3. La regulacin de la expresin gnica se desarrolla con participacin de factores en CIS (regin reguladora) y en TRANS (factores de transcripcin, otros). 1. Se presenta a continuacin la figura 9 que representa la secuencia completa del gen de beta-casena bovina incluyendo sus regiones flanqueantes 5 y 3. i) identifique la regin reguladora y la regin estructural del gen, sealando el tamao de esta ltima en kilobases. ii) cuntos intrones y exones observa? Comente los detalles que observa en cada uno de ellos. iii) identifique secuencias consenso en la regin reguladora. iv) seale el ORF (marco de lectura abierto), calcule el tamao de la protena precursora (inmediatamente luego de la sntesis) y de la protena madura (una vez secretada en la glndula mamaria) teniendo en cuenta que el pptido seal es de 14 AA en el extremo aminoterminal. v) cul de las hebras de ADN del gen est representada y por qu? 2. En qu tipo de biblioteca estar la secuencia completa del gen: genmica o de ADN copia (ADNc)? Justifique su respuesta. 3. Se presenta a continuacin la FIGURA 9b. i) Analice comparativamente las semejanzas y diferencias entre las 5 regiones de genes de casena presentados (TATA box, regiones ricas en AG, otras). Indique dnde comenzara la Regin Estructural de cada gen. ii) Qu importancia puede tener que una regin gnica se conserve evolutivamente? iii) D ejemplos de tipos de mutaciones que pueden explicar los cambios que observ, por ejemplo en las distintas regiones TATA box.

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4. Discuta e interprete las siguientes afirmaciones. Realice diagramas cuando sea pertinente. i) Los genes que codifican las beta casenas as como otras casenas (alfa-s1 y alfa-s2) estn regulados coordinadamente en forma tejido y desarrollo especfica. (Ver figura 9a). ii) La activacin transcripcional de estos genes se producira en respuesta a hormonas peptdicas y esteroides. Realice un diagrama y explique la serie de eventos que conducen a que la transcripcin de estos genes. Por qu se expresa slo en hembras en lactacin? iii) El locus CSN2 (smbolo del gen de la beta casena bovina) mapea en el cromosoma 6 (regin 6q31). Qu implicancias tiene para el mejoramiento gentico que un caracter que se expresa en hembras tenga herencia autosmica?

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Figura 9.-

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Figura 9 a.-

Comparacin de las secuencias 5que son parte de 5 genes de casena distintos que corresponden a bovinos o rata: alfa bovina (BOV alfa-s1), alfa de rata (RAT alfa), beta bovina (BOV beta), beta de rata (RAT beta), y gama de rata (RAT gama).

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Unidad II - Tema 8
Organizacin del genoma eucariota
Objetivos. 1. Identificar los diferentes tipos de secuencias en el genoma y su importancia relativa. Principales conceptos 1. Existe una alta variacin en el tamao del genoma entre las especies vegetales. 2. El genoma eucaritico se compone de un espacio gnico y un espacio no gnico. 3. Diferentes mecanismos explican un gran dinamismo en los cambios de la estructura y funcin del genoma. En principio este tema se desarrolla solamente en el curso terico.

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Unidad II - Tema 9 1 parte

Anlisis y manipulacin del genoma. Genmica estructural y funcional.
Objetivos 1. Describir los abordajes de anlisis estructural y funcional del genoma. Principales conceptos 1. Conceptos de Gentica clsica y gentica reversa. 2. Descubrimiento de genes (secuencias) y de descubrimiento (postulacin) de funciones de genes. 3. El concepto de fenotipo se extiende desde la clsica presencia de atributos del organismo hasta la presencia de ARNm o protenas en una clula. 1. Compare y explique semejanzas y diferencias entre biblioteca genmica y biblioteca de ADN copia. 2. Jimnez-Flores et al (1987) identificaron un clon de ADNc correspondiente a la beta casena en una biblioteca de ADNc preparada a partir de tejido (biopsia) de glndula mamaria en lactacin. La biblioteca fue explorada con anticuerpos contra casena. a) describa en forma general cmo se construye una biblioteca de ADNc y qu tipo de informacin contiene. b) qu entiende por clonacin de genes? en este caso a qu nos referimos con el trmino clon? c) de acuerdo al anlisis que Ud realiz del gen completo de la beta casena bovina, cul sera el tamao del ADNc de este gen? 3. Existen varias tcnicas que permiten verificar la expresin de los genes ya sea a nivel de ARNm, de protena y del fenotipo. a) El anlisis de Northern blot permite visualizar la presencia del ARNm dentro de una poblacin de ARNm utilizando una secuencia del mismo gen como sonda. Qu parte del gen utilizara como sonda? podra utilizar secuencias de otras especies?cul sera el tamao de la banda a visualizar? b) La presencia del ARNm y/o de la protena tambin puede registrarse en cortes de tejido de glndula mamaria. Qu tipo de estrategia utilizara en cada caso? c) Las protenas secretadas hacia el medio extracelular poseen pptidos seales conservados, a qu puede deberse?.

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d) El desarrollo de tcnicas cada vez ms rpidas asegura la posibilidad de analizar miles de secuencias de ADN provenientes de un mismo experimento. El anlisis de expresin global se basa en la secuenciacin de miles de ESTs (expressed sequence tag) que consisten en una rpida secuenciacin de una poblacin de ADNc obtenida a partir de una poblacin de ARNm. En la tabla que se adjunta se describe la composicin de un banco de ESTs de glndula mamaria bovina, mostrndose las ms representadas. A qu factores puede deberse las diferencias que se pueden encontrar si analizamos los ocho estados aqu analizados por separado?. BIBLIOTECA (O CATALOGO) ESTs de GLANDULA MAMARIA BOVINA Bos taurus (ID.5505), realizada a partir de ARNm aislado de tejidos mamarios en 8 estados fisiolgicos, de desarrollo y sanitarios. La DISTRIBUCIN DE FRECUENCIAS DE LAS SECUENCIAS EST (EN UNIGENES) MS ALTAMENTE REPRESENTADAS: 11.56% 5.35% 3.45% 2.87% 1.82% alfa-S1 casena beta casena beta lactoglobulina lactoferrina kappa casena

Referencia: Sonstegard TS et al. 2002. Anlisis de EST de glndula mamaria bovina y anotaciones funcionales de ndice gnico de Bos taurus. Mamm Genome 13: 373-379.

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Unidad II - Tema 9 2 parte

Ingeniera gentica
Objetivos 1. Describir el proceso de ingeniera gentica. 2. Analizar comparativamente este proceso con otras tecnologa de manipulacin gentica y genmica. Principales conceptos 1. El diseo del transgen deber ajustarse al objetivo buscado en cuanto a patrn de expresin (espacial, temporal), origen del transgen, entre otros criterios. 2. Un experimento de transformacin genera varios eventos de transformacin. 3. En general, numerosos eventos deben evaluarse para identificar el genotipo y fenotipo trasgnico buscado. Desarrollo de la soja Roundup Ready I. Resumen de informacin: La lnea o evento de soja GTS 40-3-2 (Soja RR) fue desarrollada por Monsanto Canada Inc. para permitir el uso del glifosato como un sistema alternativo para control de malezas en la produccin de soja (Glicine max). El desarrollo de la lnea GTS 40-3-2 se bas en la tecnologa del ADN recombinante, a travs de la introduccin del gen cp4 epsps aislado de la cepa CP4 de Agrobacterium tumefaciens en la variedad comercial de soja "A5403" (Asgrow Seed Company). Este gen bacteriano codifica una variante tolerante al glifosato de la enzima 5-enolpyruvulshikimate-3-fosfato synthasa (EPSPS). II. Descripcin de la nueva caracterstica 1. Tolerancia a Glifosato(ver Figura 10) El glifosato (N-fosfometilglicina), ingrediente activo del Roundup, es un herbicida sistmico, post emergente, usado en todo el mundo como un agente no selectivo para control de malezas. Se transloca simplsticamente hacia los meristemas de plantas en crecimiento. El glifosato acta como un inhibidor competitivo de la enzima 5-enolpyruvylshikimate-3 fosfato synthase (EPSPS), enzima esencial en la ruta metablica del shikimato encargada de la produccin de los aminocidos aromticos: fenilalanina, tirosina y triptofano (Fig.10) y se localiza en el cloroplasto (Fig. 10). La inhibicin de EPSPS resulta en la acumulacin de shikimato y el bloqueo de la sntesis de los aminocidos aromticos necesarios tanto para su incorporacin en protenas como en la sntesis de metabolitos secundarios. En consecuencia, la presencia de glifosato determina supresin de crecimiento y muerte de la planta. La va biosinttica del shikimato solamente se encuentra en plantas y microorganismos. Se han clonado los genes correspondientes a las enzimas de la va. Mutaciones en el gen que codifica EPSPS o su sobre-expresin determinan tolerancia al glifosato en cultivos celulares o plantas.

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2. Ingeniera (Diseo) Gentica a) El inserto El gen cp4 epsps derivado de la cepa CP4 de Agrobacterium tumefaciens codifica la enzima C4-EPSPS altamente insensible al glifosato. Esta enzima solamente difiere en un aminocido de la versin EPSPS de las plantas (alanina por glicina). Las plantas que expresan C4-EPSPS continan la sntesis de aminocidos aromticos en presencia de glifosato. b) Secuencias reguladoras y otras seales La regin codificante del gen cp4 epsps se coloc bajo la regulacin de un fuerte promotor constitutivo del Virus del Mosaico de Coliflor (P-CaMV E35S) y termina con la secuencia terminador (T-nos) del gen nos (nopalina sintetasa) derivado de Agrobacterium tumefaciens (Fig. 11). Una secuencia de ADN derivada de Petunia x hybrida que codifica para un pptido de trnsito cloroplstico (CTP4 chloroplast transit peptide) fue clonado en el extremo 5 del gen. La secuencia que codifica CTP4 unido a la regin codificante del gen cp4 epsps determinan la produccin de una protena de fusin que facilita la importacin de la enzima recientemente traducida dentro del cloroplasto, donde tanto la ruta de la shikimato como de el sitio de accin de glifosato estn localizado. Una vez importada al cloroplasto, el pptido de trnsito es eliminado y rpidamente degradado por una proteasa especfica. La EPSPS es ubicua en la naturaleza y por lo tanto no se espera que sea txica o alrgena. Cuando se realizaron anlisis comparativos con el banco de secuencias de polipptidos txicos o alergnicos conocidos, la secuencia de aminocidos de la enzima no mostr homologas significativas con ellos. c) Mtodo desarrollado. La variedad de soja comercial A5403 (Asgrow Seed Co.) fue transformada por medio de bombardeo con partculas de oro, con el plasmido vector PV-GMGT04 amplificado en Escherichia coli (ver Fig. 12). El plsmido contiene el gen cp4 epsps (CP4 EPSPS en el esquema de la Fig. 11) que confiere tolerancia a glifosato, el genuidA (GUS en la Fig. 12) para la produccin de beta-glucuronidasa como un marcador reportero y el gen nptII para resistencia a antibiticos (kanamicina) como marcador de seleccin. 3. Evaluacin de las lneas transgnicas a) Caracterizacin de la integracin y estabilidad en el genoma vegetal Se caracterizaron diferentes eventos de transformacin en cuanto a: nmero de copias del casete insertado, presencia de rearreglos y la identificacin de las diferentes secuencias insertadas. En el evento GTS 40-3-2 (Padgette et al., 1995) solo se detect una copia del gen cassette CP4 EPSPS, consistente en el promotor E35S del Virus del Mosaico de Coliflor (CaMV), el pptido de trnsito cloroplstico ct4, la secuencia codificadora cp4 epsps, y la seal de poliadenilacin t-nos (Fig. 12).No se detect incorporacin de ninguna regin codificadora externa a la fusin gnica al vector plasmdico original. En posteriores generaciones se demostr que no hubo segregacin de la fusin gnica descripta anteriormente, mostrando que la lnea GTS 40-3-2 segua patrones clsicos de herencia, para la fusin gnica. Anlisis de ADN durante las seis generaciones siguientes mostraron que la insercin fue estable. Estudios de caracterizacin mas recientes, han mostrado que, durante la integracin del inserto de ADN ocurrieron varios reordenamientos y que, adems del inserto funcional primario, el evento 40-3-2 de soja Roundup Ready contiene dos segmentos pequeos no funcionales de ADN insertado de 250pb y 72pb respectivamente (Monsanto, 2000; Windels et al., 2001).

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b) Expresin estable Sumado al anlisis de estabilidad en la integracin debe confirmarse la estabilidad en el nivel de expresin del transgn. Esto se realiza a varios niveles: transcripcional (acumulacin de ARNm); a nivel proteico (acumulacin de la protena CP4 EPSPS) y a nivel del fenotipo (tolerancia a glifosato) en varios tejidos de la planta. Si bien el promotor es constitutivo y fuerte, diferentes eventos de transformacin pueden generar lneas inestables en su expresin. EXTRADO DE Canadian Food Inspection Agency, Decision Document DD95-05. 1995.The analysis of Food Samples for the Presence of Genetically Modified Organism. Development, Identification and Characterization of a Glifosato Tolerant Soybean Line. Padgette, S. R. et al. 1995. Crop Science 35: 1451-1461.

Figura 10. Dentro del cloroplasto la EPSPS cataliza la reaccin de la shikimato-3-fosfato y fosfoenolpyruvate (PEP) a la forma 5-enolpyruvylshikimato-3-3 fosfato (EPSP) y fosfato. EPSP es un intermediario para la sntesis de aminocidos aromticos. Como una consecuencia de la inhibicin de esta ruta bioqumica, la sntesis de protenas es interrumpida, resultando en la muerte de la planta. EPSPS es el nico objetivo biolgico del glifosato en las planta, y ninguna otra enzima que utilice PEP es inhibida por glifosato.

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Figura 11. Representacin esquemtica del cassette CP4 EPSPS introducido a la Soja RR (Roundup Ready).

Figura 12. Mapa del plsmido (vector) PV-GMGT04 usado en el evento de transformacin de la Soja RR (tomado de Monsanto, 2000)

PREGUNTA 1 i) Identifique y detalle la funcin que cumple cada una de las secuencias del inserto descritas en la Fig. 11. Utilice para su respuesta el diagrama realizado en el punto anterior. En dnde ubica el ORF en este transgen? ii) Si deseara fabricar su propio transgnico resistente al glifosato diferente al descrito anteriormente qu partes del diseo de la Fig. 11 podra mantener constantes y que partes podra modificar? iii) COMPLEMENTARIA: Identifique en la Fig. 12 (plsmido) las secuencias ms relevantes aclarando la funcin que cumple cada una. Identifique tambin la secuencia presente en el evento GTS 40-3-2.

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PREGUNTA 2 i) Describa mediante un diagrama de una clula vegetal el flujo de informacin gentica del gen de la soja que codifica la EPSPS necesaria para la va de shikimato. ii) Complete dicho diagrama en el caso de una planta de soja RR. Cul es el genotipo de una planta transgnica homocigota considerando el gen nativo y el transgn? PREGUNTA 3 En cuanto a la obtencin de plantas transgnicas: i) Seale las principales etapas del proceso de obtencin de plantas transgnicas desde clulas transformadas a plantas transgnicas regeneradas, frtiles y estables. ii) Aclare los trminos: marcador de seleccin, evento de transformacin, generacin To, T1, T2. iii) Seale los criterios a tener en cuenta en el diseo de transgenes. PREGUNTA 4 En la siguiente tabla se presentan los resultados de una F2 (F1 x F1) de un cruzamiento primario entre la lnea homocigota Genticamente Modificada Resistente a Glifosato 40-3-2 (P1) y 17 cultivares no transgnicos (P2). Familia 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 Total Tolerantes 17 10 12 16 16 14 18 10 17 6 15 17 10 16 3 18 19 234 Susceptibles 4 2 4 4 5 3 5 4 7 3 4 1 1 5 1 3 5 61 Total Proporcin

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Teniendo en cuenta la informacin anterior: a) analice los resultados de las 17 familias de descendientes y proponga una proporcin entre ambos fenotipos.

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b) Proponga genotipos para las plantas P1 , P2, F1 y F2. c) Qu tipo de herencia presenta el transgn introducido en la lnea Genticamente Modificada 40-3-2? d) Cmo incorporara el carcter RR a la variedad de soja mejor adaptada a su zona agrcola? qu herramientas discutidas en el curso utilizara para lograr esta incorporacin en el menor tiempo posible?

PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS 1. Comente las implicancias de que las inserciones de los transgenes se realicen en el genoma nuclear y en el genoma cloroplstico en cuanto a la contaminacin (flujo) gentico no deseados. 2. Existen otras alternativas para generar tolerancias a glifosato utilizando genes vegetales como la sobreproduccin de EPSP por amplificacin de nmero de copias (mutagnesis generada durante cultivo in vitro: variacin somaclonal), por control del gen bajo un promotor constitutivo o por mutaciones puntuales en el gen endgeno. Compare dichas estrategias con las presentes en la soja RR.

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Unidad III - Tema 10

Los genes en las poblaciones. Frecuencias genticas. Poblacin en equilibrio. Factores que influyen en las frecuencias y sus consecuencias.
Objetivos 1. Conocer la composicin gentica de una poblacin. 2. Determinar las fuerzas que determinan cambios en poblaciones. 3. Identificar los cambios que producen las diferentes fuerzas en la composicin de la poblacin. Principales conceptos 1. En cualquier especie, la mayor parte de la variacin gentica, dentro y entre poblaciones es causada por la existencia de varios alelos en los diversos loci. 2. El mtodo fundamental para conocer la composicin gentica de las poblaciones es la frecuencia en que los alelos son encontrados en cada locus gnico de inters. 3. La frecuencia de un alelo dado en una poblacin puede cambiar por mutacin, seleccin, migracin o por deriva gentica. 4. En una poblacin ideal en que no actan fuerzas de cambio, una poblacin de cruzamiento aleatorio, mostrar frecuencias genotpicas constantes en un locus dado. En los primeros aos de la Gentica, a partir del redescubrimiento de las Leyes de Mendel, algunos pioneros de esta nueva ciencia se formulaban las siguientes preguntas: 1) En las poblaciones naturales, deban cumplirse las relaciones genotpicas 1 2 1, establecidas por la primera Ley de Mendel para la segregacin de un par de alelos? 2) En dichas poblaciones, los alelos dominantes, por su condicin de dominantes, tenderan a desplazar a los recesivos? En 1908, ambos problemas fueron categricamente resueltos, en sendas publicaciones independientes, por Hardy y Weinberg, fundando las bases tericas de la Gentica de Poblaciones. Estudie la LEY DE HARDY WEINBERG, que trata el equilibrio gentico en las poblaciones naturales. El objetivo de esta prctica, consistir en tratar de responder ambas interrogantes, para lo cual partiremos de una muestra real, tomada de una poblacin natural. Dicha muestra, que fue tomada por Boyd en l939, de la poblacin de beduinos del desierto de Siria, consisti en 208 individuos clasificados en funcin de los grupos sanguneos MN, y est integrada por: MM 119 MN 76 NN 13 TOTAL 208

Observaciones: a) Los grupos sanguneos MN estn determinados por los alelos M y N, siendo la relacin entre ambos alelos de codominancia.

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b) Considere que la muestra es representativa de la poblacin de beduinos del desierto de Siria c) Asumimos como requisito bsico que los casamientos entre los individuos de los tres fenotipos ocurren, exclusivamente, en funcin del azar. d) Tenga en cuenta que para realizar el anlisis el nico conocimiento bsico necesario es la Primera Ley de Mendel e) Discuta la siguiente afirmacin: Los grupos sanguneos MN, cumplen con el punto 3, referido a la aleatoriedad de los casamientos entre los individuos de los tres genotipos posibles. ACTIVIDADES A REALIZAR 1. a) Transforme los valores absolutos para los tres fenotipos de la muestra en frecuencias. Estas frecuencias de la muestra tomada se encuentran en la proporcin mendeliana 1 21? Utilice la prueba de chi 2 para fundamentar su respuesta. b) Teniendo en cuenta que los casamientos ocurren al azar con respecto a los grupos sanguneos y, considerando que se trata de una poblacin estadsticamente repre-sentativa de la poblacin original, discuta si, como suponan algunos pioneros de la gentica, la nueva generacin tender a aproximarse a una proporcin 1 2 1 o no. c) Para verificar su respuesta trabaje directamente con los genotipos, representando en un cuadro todos los casamientos posibles entre los individuos de la poblacin y teniendo en cuenta las frecuencias genotpicas originales. Cul fue el resultado obtenido? d) Si las frecuencias genotpicas originales se hubieran encontrado en la proporcin 1 2 1 cul hubiera sido el resultado obtenido? e) Se puede considerar a los individuos como vehculos de los genes?. Cmo pasan los genes de una generacin a la siguiente o dicho de otra manera, cul es el puente fsico real entre una generacin y la siguiente? f) De acuerdo con su respuesta a esta pregunta, habr una forma ms simple de llegar a la prxima generacin que la utilizada trabajando con los genotipos?. Utilcela. g) Cules son sus conclusiones con respecto a la pregunta de los pioneros de la gentica? 2. Sus resultados del ejercicio anterior sern generalizables o dependern de las frecuencias genotpicas utilizadas? Para responder esta pregunta, estime por la va rpida, como ser la prxima generacin, partiendo de las muestras de las siguientes poblaciones: Grupo Aborgenes australianos Indios americanos (Puebla) Datos de origen desconocido MM 3 83 64 MN 44 46 500 NN 55 11 35 Total 102 140 599

Qu generalizaciones podran hacerse a partir de estos resultados? Discuta qu condiciones deberan cumplirse para que una poblacin natural se encuentre en equilibrio gentico.

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3. Los siguientes son datos de dos poblaciones de una especie vegetal con reproduccin sexuada y de polinizacin abierta. Genotipos AA Aa aa Total: Poblacin 1 85 plantas 430 plantas 485 plantas 1000 plantas Frecuencias Poblacin 2 295 plantas 10 plantas 695 plantas 1000 plantas Frecuencias

a) Calcule las frecuencias genotpicas y gnicas de ambas poblaciones. Realice los planteos claros y ordenados. b) Estime si esas poblaciones se hallan en equilibrio para el locus considerado. Fundamente sus respuestas con los planteos y realice confirmaciones estadsticas cuando lo considere necesario. c) Considerando que ambas poblaciones provienen de una antigua poblacin antecesora que, varias generaciones atrs, se encontraba en equilibrio para dicho locus, con una frecuencia del alelo A de 0,3.c1)Discuta cul, o cules, pueden haber sido los factores (naturales o artificiales) ms relevantes, para que se hayan originado dos poblaciones diferentes a partir de la misma poblacin antecesora. c2)Teniendo en cuenta su respuesta, podra estimar cuntas generaciones, como mnimo, habran transcurrido entre la poblacin antecesora y la actual poblacin 2? Explicite claramente el razonamiento seguido. PROBLEMAS COMPLEMENTARIOS 1. El albinismo es una condicin extremadamente rara en las poblaciones humanas, en la poblacin inglesa, por ejemplo, aproximadamente 1 de cada 20.000 nios nacidos es albino. Se sabe que los albinos son homocigotas para el alelo recesivo s. a) Suponiendo que la poblacin est en equilibrio para esta caracterstica estime la frecuencia del alelo S y las correspondientes frecuencias genotpicas. b) Cmo podramos saber en este caso, con una frecuencia tan baja para uno de los alelos, si la poblacin est en equilibrio? c) Porqu, la mayora de los casos de albinismo, ocurre entre los hijos de los matrimonios entre primos? d) Teniendo en cuenta las frecuencias genotpicas estimadas, estime la probabilidad de que una pareja de fenotipo normal, tenga un hijo albino. 2. Qu relacin piensa Ud. que puede tener el ejemplo del albinismo con la variabilidad gentica natural en las poblaciones, la seleccin, la conservacin del germoplasma y la gentica de poblaciones?

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3. En el maz el gene R origina presencia de antocianinas en la base de las espiguillas femeninas (marlo rojizo) y en otras partes de la planta. Es dominante sobre su alelo r que determina ausencia de antocianinas (marlo blanco). Se tom una muestra de 1000 plantas de una variedad de maz y se contabilizaron 910 plantas de marlo rojizo y las 90 restantes de marlo blanco. a) Suponiendo que esta poblacin est en equilibrio para este locus, estime las frecuencias fenotpicas, gnicas y genotpicas. b) Como, realmente, se desconoce si esta poblacin est o no en equilibrio para este locus, se realiz el siguiente experimento: i. Se dej que todas las plantas de esta variedad, sembradas en una parcela, se fecundaran al azar. ii. Se cosecharon solamente las semillas de las plantas que tuvieran marlo blanco. iii. Al ao siguiente se sembraron esas semillas y se obtuvieron 5000 plantas de las cuales se determin que 3000 tenan marlo rojizo y 2000 marlo blanco. iv. Con estos datos se estimaron las frecuencias gnicas de la variedad original, calclelas. v. Se estim que esa poblacin original no estaba en equilibrio para estos genes, conclusin que fue debidamente comprobada estadsticamente. Analice por qu se lleg a esa conclusin. c) Qu otro experimento podra disearse que le permitira estimar con precisin las frecuencias gnicas y decidir si la poblacin estaba o no en equilibrio para ese locus?.

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Unidad III - Tema 11

Variaciones en la estructura y en el nmero de los cromosomas. Consecuencias genticas.
Objetivos. 1. Analizar aspectos de la variabilidad cromosmica de los organismos, con especial nfasis en plantas. 2. Entender los posibles orgenes y establecimiento de variaciones estructurales y numricas, y sus consecuencias genticas.

Conceptos principales Los genomas son mutables en relacin a estructura y nmero de cromosomas. La poliploida juega un rol preponderante en la variabilidad intraespecfica y la formacin de nuevas especies. 1. Cul ser, a su juicio, la consecuencia cromosmica inmediata de la euploida y en consecuencia, cul ser el efecto gentico inmediato de la euploida? 2. Comparando con la poliploida, las otras mutaciones cromosmicas tendrn un efecto similar? Explique qu efectos se podra esperar en cada una de las mutaciones estructurales, en la aneuploida, en la haploida.Por qu? 3. Suponga una especie vegetal que es autotetraploide con meiosis normal y genotipo AAaa. a) Teniendo en cuenta que en este caso la meiosis es normal, indique cuntas clases de gametos diferentes producir y en qu proporciones. Usando el tablero de Punnett obtenga la posible descendencia de esta planta por autofecundacin. b) Compare sus resultados con los obtenidos a partir de la autofecundacin de un hbrido Aa. Qu ocurri con las proporciones mendelianas clsicas? Qu tipos de herencia estamos comparando? c) A partir de estos resultados considera que la seleccin en poliploides ser ms simple o ms compleja que en diploides? Fundamente su respuesta. 4. Para un gene con dos alelos (A y a) cuntos genotipos tetraploides diferentes son posibles? Escriba dichos genotipos e indique cules son homocigotos y cules son heterocigotos. Suponga que, para el caso del item anterior, considera un segundo gene representado por los alelos B y b. Teniendo en cuenta ambos genes, escriba todos los genotipos posibles e indique cules son homocigotas y cules heterocigotas. Si ambos genes fueran miembros de sendas series allicas, con cuatro alelos diferentes cada una, cmo representara el genotipo ms heterocigtico posible? Si ahora, ubica dichos alelos en el/los correspondientes cromosomas, de cuntas maneras diferentes podra hacerlo? Represntelas grficamente.

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Explique las razones que nos permiten decir, que un organismo tetraploide puede contener mayor variabilidad gentica que un diploide. 5. Qu son gametos no reducidos? Por qu un tetraploide originado a partir de gametos no reducidos tiene la potencialidad de contener ms variabilidad gentica que uno de origen somtico? 6. Qu relacin existe entre la poliploida, la segregacin cromosmica irregular, la formacin de gametos genticamente desbalanceados y la esterilidad cromosmica, tan frecuente en los poliploides? Por qu muchos alopoliploides no presentan esterilidad cromosmica? Cul es el fenmeno citolgico que est en la base de estos problemas? PROBLEMA COMPLEMENTARIO 1. Comparando con la poliploida, las otras mutaciones cromosmicas tendrn un efecto similar? Explique qu efectos se podra esperar en cada una de las mutaciones estructurales, en la aneuploida, en la haploida.Por qu?

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Unidad III - Tema 12

Evolucin natural y domesticacin. Especiacin. Hibridaciones interespecficas. Origen de algunas especies cultivadas y su domesticacin.
Objetivos 1. Introducir los conceptos sobre la evolucin natural de los organismos, con nfasis en vegetales superiores. 2. Realizar un anlisis comparativo con el proceso de domesticacin realizada por el ser humano.

Conceptos principales La evolucin natural como fenmeno de diversificacin. La importancia que tiene el fenmeno de hibridacin interespecfica en los vegetales. Las consecuencias de la domesticacin: El sndrome de domesticacin y el estrechamiento de la base gentica de las plantas cultivadas 1. Se ha avanzado mucho en el estudio de la evolucin en la tribu de las triticeas a la que pertenece el gnero Triticum. a) Analice el esquema sobre evolucin del trigo de la figura 13, anotando segn sea necesario los nmeros cromosmicos o los correspondientes genomios. b) En la evolucin del trigo se descubri un fenmeno gentico de gran importancia que est relacionado con el comportamiento de los cromosomas durante la meiosis de T. aestivum. En qu consiste dicho fenmeno y en qu momento de la evolucin del trigo habra ocurrido? Existir algn recurso experimental que tal vez permita arrojar alguna luz sobre este dilema? La hiptesis sobre la evolucin del trigo expuesta en el esquema podra ser confrontada experimentalmente? c) La evolucin del trigo de pan es un ejemplo de control gentico de la meiosis. Explique esta afirmacin. 2. En la familia de las Crucferas el gnero Brassica es un interesante ejemplo de hibridaciones interespecficas de gran inters econmico. Analice el esquema de la Figura 14. La comparacin de los nmeros cromosmicos de las tres especies originales de Brassica, nos indican algo acerca de los factores implicados en la evolucin de este grupo de plantas?

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Figura 13.-

Figura 14.-

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3. Analice comparativamente los esquemas que explican la evolucin de especies cultivadas de los gneros Triticum y Brassica. Observe que en el primer caso es de fundamental importancia la duplicacin del nmero de cromosomas. Discuta de qu formas puede llegarse a esa duplicacin. PROBLEMAS COMPLEMENTARIOS 1. Las bananas cultivadas son triploides y no tienen semillas. Algunas especies de bananas del gnero Musa son diploides y tienen genomios AA (silvestre comestible) y otras de genomios BB (silvestre no comestible, con alta tolerancia a la sequa y resistencia a varias enfermedades). Las econmicamente ms importante son triploides (2n=3x=33) algunas con genomios AAA, otras AAB y otras ABB. Explique el posible origen de las triploides y la posible relacin entre la triploida y la esterilidad de las bananas. 2. Actualmente se cultivan semillas triploides de sanda, para evitar la formacin de semillas. Las comunes con semilla son diploides. Busque en la bibliografa disponible cmo se llega a obtener las plantas triploides de sanda. 3. La especie de algodn americana, Gossypium hirsutum, tiene 2n=52 cromosomas. Las especies del viejo mundo, G. thurberi y G. herbaceum, tienen 2n=26. En la meiosis de los hbridos entre estas especies se observaron las siguientes caractersticas (II = bivalente; I = univalente): Hbridos G. hirsutum x G. thurberi G. hirsutum x G. herbaceum G. thurberi x G. herbaceum ..... ..... ..... 13 13 13 Comportamiento meitico II cortos + 13 I largos II largos + 13 I cortos I largos + 13 I cortos

a) Interprete filogenticamente estas observaciones mediante un diagrama, indicando claramente las relaciones entre las especies. Cuntos genomios diferentes supone que hay en juego? Indquelos en su diagrama. Cmo podra probar si su interpretacin es correcta? b) Segn los resultados obtenidos, el hbrido entre G. thurberi y G. herbaceum ser frtil o estril? Explique su respuesta Cmo podra restituir la fertilidad en dicho hbrido? GLOSARIO BASICO DE TEMAS 11 Y 12.
Alopoliploida Autopoliploida Aneuploida Bivalentes Cariotipo Cariotipo bsico (x) Cigoteno Colchicina Cromosomas homelogos Cromosomas homlogos Esterilidad cromosmica Euploida Gametos desbalanceados Genomio Herencia dismica Herencia tetrasmica Hbridacin interespecfica Monoploides Multivalentes Mutacin cromosmica Mutacin puntual Nmero cromosmico 2n Poliploida Segregacin irregular Sinapsis Univalentes