Objetivo particular particular. .

Al finalizar esta unidad el alumno conocer la secuencia de descubrimientos que dieron origen al nacimiento de la Biologa Molecular y comprender la importancia del ADN como depositario de la informacin gentica de los seres vivos. Adems, el alumno conocer la composicin, estructura y propiedades fisicoqumicas del ADN y ARN. Contenidos: Contenidos : Importancia de la informacin biolgica. Secuencia de experimentos que confirmaron al ADN como depositario de la informacin biolgica. Nucletidos. Estructura, nomenclatura y funcin como componentes de los ac. nucleicos. Estructura de la molcula de ADN. Tipos de ADN. Estructura de la molcula de ARN. Tipos de ARN. Propiedades fisicoqumicas del ADN y del ARN.

UNIDAD I. INTRODUCCIN A LA BIOLOGA MOLECULAR

1

Vida:
Capacidad de mantener, utilizar y perpetuar informacin biolgica.
Funciones vitales Metabolismo Informacin biolgica Desarrollo

Adaptacin

La complejidad de un organismo puede relacionarse con la cantidad de informacin biolgica que mantenga y maneje. Organismos sencillos sencillos: : Poca informacin (viroides, virus, procariontes) Organismos complejos complejos: : Mucha informacin (animales superiores, plantas superiores)

Darwin y Wallace (1859): Postularon que todos los seres vivos han evolucionado a partir de formas preexistentes a travs de un proceso de cambios secunciales que se han dado en perodos muy largos de tiempo. Primera nocin de la importancia del flujo de la informacin biolgica entre los organismos.

Evolucin: Acumulacin y seleccin de informacin biolgica

ORGANISMO SENCILLO

ORGANISMO COMPLEJO

INFORMACION BIOLOGICA

La cantidad de informacin biolgica que se comparte es una medida de la relacin que existe entre dos organismos.

Cmo se transmite la informacin biolgica de un organismo a otro?

Factor particular que se transfiere sin cambio de los padres a la progenie

Fue el primero en diferenciar el fenotipo (apariencia del individuo) del genotipo (constitucin gentica del individuo). Us a la planta de chcharo como modelo experimental. Realiz infinidad de cruzas tratando de entender cmo se transfieren las caractersticas de los padres a la progenie.

Mendel mostr que la expresin de caractersticas fsicas contrastantes, por ejemplo flores rojas o blancas en plantas de chcharo, est controlada por un par de genes diferentes. En este caso, el gen dominante (C) especifica flores rojas, mientras que el gen recesivo (c) especifica flores blancas. Existen tres posibles combinaciones genotpicas: CC, Cc y cc. El fenotipo dominante (flores rojas) se expresa cuando se presentan dos copias del gen, CC. Las flores rojas tambin se presentan en el genotipo mezclado, Cc, en donde el efecto del gen C domina sobre el recesivo c. El fenotipo recesivo (flores blancas) se expresa nicamente con el genotipo cc.

Mendel postul que durante la formacin de los gametos (meiosis): Los genes parentales para cada caracterstica segregan de tal forma que cada clula sexual contiene un solo tipo. Como consecuencia, cada miembro del par, tiene la misma probabilidad de ocurrir en un gameto. Los genes para caractersticas diferentes se distribuyen en los gametos de manera independiente uno del otro. Como consecuencia, cualquier combinacin de genes tiene la misma probabilidad de ocurrir.
Segregacin de los genes que codifican para el color y textura de la semilla del chcharo.
10

Walter Sutton y Theodor Boveri (1902)

Estudiaron el movimiento de los cromosomas durante la meiosis en el saltamontes. Encontraron que este organismo posee 11 pares de cromosomas y que los gametos formados a travs de la meiosis contienen solo un cromosoma de cada par de cromosomas homlogos. Este hecho coincide con el comportamiento de los genes sugerido por Mendel, por lo tanto Sutton concluy que la informacin biolgica (genes) podra estar depositada en los cromosomas.

En dnde se encuentra la informacin biolgica de un organismo?

11

Stevens y Wilson (1905)

Nettie Stevens

Edmund Beecher Wilson

Estudiaron el comportamiento de los cromosomas X y Y. Encontraron que el sexo est determinado por la presencia de estos cromosomas. Observaron que el movimiento de estos cromosomas durante la meiosis para formar los gametos fue el que se poda predecir de acuerdo a los postulados de Mendel. Este hecho apoy la afirmacin de Sutton y Boveri de que los genes se encontraban en los cromosomas.

12

Morgan y colaboradores (1920) Realizaron un gran nmero de experimentos acerca de la herencia de varias caractersticas en la mosca de la fruta (Drosophila). Demostraron que todos los genes de un organismo, y no solo los involucrados en la determinacin del sexo, estn localizados en los cromosomas. Fue el primer grupo que visualiz la gran relacin existente entre la teora de la evolucin de Darwin y los principios de la gentica postulados por Mendel.

13

Conclusin: La informacin biolgica (genes) radica en los cromosomas

14

La informacin biolgica (gen) es una molcula o partcula fsica que pueda transferirse de un organismo a otro?

15

Griffit (1928) Realiz varios experimentos con Diplococcus pneumoniae, la bacteria que causa la neumona. Encontr que existan dos cepas de este organismo. La cepa S, que posea una cpsula lisa de polisacridos que era esencial para el proceso de infeccin, y la cepa R de apariencia rugosa que carece de cpsula y por lo tanto no es infecciosa.
16

La presencia de la bacteria virulenta muerta con calor era capaz de transformar a la bacteria incapaz de producir infeccin en virulenta. Griffit concluy que algn compuesto o partcula fsica que se transfera de la bacteria muerta a la viva era el responsable de este cambio. Llam a este compuesto "Principio de transformacin".

17

Cul es la funcin del principio de transformacin (gen)?

Beadle y Tatum (1941) Realizaron estudios metablicos en el hongo Neurospora. Encuentran que una mutacin en un gen hace que el organismo sea incapaz de llevar a cabo una reaccin enzimtica especfica. Introducen el concepto de que los genes regulan el metabolismo celular a travs de la produccin de enzimas especficas. Postulan que un gen es responsable de la presencia de una enzima.

Un gen = Una enzima

18

19

En el material gentico se encuentran codificadas las enzimas (protenas), por lo tanto la molcula que contenga la informacin biolgica debe ser al menos tan complicada como las protenas para las que codifica. El material gentico se encuentra en los cromosomas, los cromosomas estn formados por protenas y ADN, por tanto el material gentico debe ser protena o ADN. El ADN haba sido descubierto desde 1868 por Miescher, pero su funcin se desconoci hasta 1944).

En qu tipo de molcula radica el material gentico?

20

Avery, McLeod y McCarthy (1944) Avery, Fraccionaron el lisado de neumococos usado por Griffit en sus experimentos, descubriendo que el principio de transformacin se encuentra en el ADN y no en las protenas.

21

Hershey y Chase (1952)

Ratificaron que el material gentico es el ADN. Experimentos de marcaje radioactivo con bacteriofagos.

Martha Chase and Alfred Hershey

22

Puede transferirse de un organismo a otro sin perder su funcin.

Gen: Entidad relativamente estable (Inestabilidad = Mutacin)

ADN: Material gentico universal (depositario de la informacin biolgica, genes, principio de transformacin).

Gen: Porcin de una molcula de ADN que lleva la informacin para la sntesis de una cadena polipeptdica.

Excepcines: Viroides y virus de ARN (No poseen ADN).

23

cidos nuclicos: Polmeros de nucletidos unidos por enlaces fosfodister. ADN: Ac. Desoxirribonucleico ARN: Ac. Ribonucleico Nucletidos: Molculas complejas compuestas por:
? Base nitrogenada (anillo heterocclico CN). ? Pentosa (Ribosa en ARN y desoxirribosa en ADN). ? Grupo(s) fosfato.

ADN: A, G, T, C ARN: A, G, U, C

ESTRUCURA Y PROPIEDADES DE LOS AC. NUCLICOS

24

Nucleosido: Base nitrogenada + pentosa Nucleotido: Base nitrogenada + pentosa + fosfato(s)

BASE Adenina Guanina Citosina Timina Uracilo NUCLEOSIDO Adenosina Guanosina Citidina Timidina Uridina NUCLEOTIDO Ac. adenilico Ac. guanilico Ac. citidilico Ac. timidilico Ac. uridilico ABREVIATURA ADN ARN dAMP AMP dGMP GMP dCMP CMP dTMP UMP

Ac. nuclico: Polmero de nucletidos

Toda molcula de ac. nuclico tiene un extremo 5` con un grupo fosfato libre, y un extremo 3`con un OH libre.

25

Chargaff y col. (1949(1949-1953)

Desarrollaron mtodos cromatogrficos para separar las bases (nucletidos) que componen las molculas de ADN de varias especies. Encontraron que, sin importar el origen del ADN, la proporcin de residuos de A es siempre proporcional a los residuos de T, mientras que la proporcin de residuos de G es siempre proporcional a los residuos de C. Esto ocurre en el ADN de todas las especies. Conclusin: Hay un patrn definido en la composicin de las molculas de ADN en todos los organismos.

Cul es la estructura de la molcula de ADN?

26

Apareamiento de bases: Capacidad para formar puentes de H entre pares de bases (llamadas complementarias). Dada por el tamao y forma de los anillos heterocclicos libres de los ac. nuclicos.
Apareamiento de bases: Una de las caractersticas ms importantes desde el punto de vista gentico, ya que facilita el proceso de duplicacin del ADN (reproduccin). Cualquiera de las dos cadenas que forman la molcula de ADN contiene la informacin que se requiere para sintetizar la complementaria.
27

Rosalind Franklin (1950(19501953) y Astbury (1938(19381947)

Analizaron la molcula de ADN usando la tcnica de difraccin de rayos X, que haba sido desarrollada previamente y utilizada para estudiar protenas. De estos estudios concluyeron que el ADN tiene una estructura helicoidal con una periodicidad de 3.4 nm (1 nm = 10 ). Tomando como base estos y otros resultados, Watson y Crick dilucidaron en 1953 la estructura de la molcula de ADN.

28

Modelo de Watson y Crick para la estructura del ADN

1. 2. 3. Dos cadenas de polinucletidos se enrollan en torno a un eje central imaginario, formando una doble hlice que gira hacia la derecha. Las dos cadenas son antiparalelas, de tal forma que el extremo 5`de una de las cadenas coincide con el extremo 3`de la cadena complementaria. Las bases nitrogenadas de ambas cadenas son estructuran planas que yacen perpendiculares al eje. Estn separadas una de otra 0.34 nm y se localizan en el interior de la estructura de la doble hlice (esto es importante ya que son relativamente hidrofbicas). Las bases nitrogenadas de las cadenas opuestas estn apareadas unas con otras por medio de la formacin de puentes de H. Solo son posibles los pares A-T, T-A, G-C y C-G. La doble hlice da una vuelta completa cada 3.4 nm, por lo tanto, hay 10 bases en cada cadena por cada vuelta. En cualquier segmento de la molcula aparecen de manera alterna surcos mayores y surcos menores. La doble hlice completa tiene un dimetro de 2 nm.
29

4.

5. 6. 7.

30

A strand of DNA tracked using cores. The red curve is the core. The blue curves are the DNA edges implied by the core location and radius.

31

Formas alternas de la molcula de ADN

ADN forma B Es la forma descrita por Watson y Crick. Se presenta en condiciones acuosas de baja salinidad (condiciones biolgicas normales). 10 pb por vuelta. Dimetro de 2 nm. Giro a la derecha. ADN forma A Se presenta en soluciones de alta concentracin de sales o en condiciones de deshidratacin. Es dudoso que se presente bajo condiciones biolgicas normales. El ARN de doble cadena toma esta forma. 11 pb por vuelta. Dimetro de 2.3 nm. Giro a la derecha.
32

ADN forma Z Forma muy diferente a las anteriores. Se presume que podra presentarse in vivo y que su forma nica podra marcar dentro de los cromosomas sitios de interaccin con otras molculas. 12 pb por vuelta. Dimetro de 1.8 nm. nm . Conformacin en zig.zag. Giro a la izquierda

33

Extremos 5`y 3`unidos covalentemente. Presentes en:

? ? ? ? Genomas de procariontes Mitocondrias y plastidios Genoma de algunos virus Plsmidos bacterianos

ADN circular. Genoma del virus SV40.

Molculas de ADN circulares

34

ESTRUCTURA DEL ARN

Diferencias con respecto al ADN:

? Ribosa en lugar de desoxirribosa. ? Uracilo en lugar de timina.

Casi siempre es de cadena sencilla, pero esta cadena suele plegarse sobre si misma para formar regiones de doble cadena y estructuras tridimensionales complejas. El genoma de algunos virus es ARN de doble cadena. La formacin de molculas de ARN de doble cadena es un mecanismo importante para la regulacin gentica en eucariontes (silenciamiento de genes).
35

El ARN se produce como copia complementaria de una de las dos cadenas de la molcula de ADN, en un proceso llamado transcripcin.

Existen 3 tipos bsicos de ARN: ARNm (mensajero) ARNr (ribosomal) ARNt (de transferencia). Los tres participan en el proceso de sntesis de protenas (traduccin).

36

Propiedades del ADN

DesnaturalizacinDesnaturalizacin -renaturalizacin Desnaturalizacin:

? Rompimiento de puentes de H entre bases complementarias que trae como consecuencia la separacin de las dos cadenas. ? La desnaturalizacin es causada por: Calor, lcalis, formamida, urea, etc.

Renaturalizacin: Renaturalizacin :

? Ocurre cuando se da una disminucin de la temperatura o eliminacin del agente desnaturalizante. Formacin de nuevos puentes de H entre las bases complementarias.

37

Hibridacin molecular:

Cuando se desnaturaliza una molcula de ADN y se deja renaturalizar, cada una de las cadenas no necesariamente se tiene que volver a unir a su complementaria, sino que se unir con cualquier cadena o segmento de cadena que tenga las bases complementarias. De esta forma se generan molculas hbridas.

38

Absorcin de luz UV

El ADN muestra una absorcin mxima en el rango de 254-260 nm, debido a la interaccin entre la luz UV y los anillos heterocclicos de las bases nitrogenadas. Absorcin a 260 nm:
BASES LIBRES > ADN CS > ADN DC

Razn: En el ADNdc las bases estn alineadas en un mismo plano, reduciendo su absorcin de luz UV.

39

Efecto hipercrmico hipercrmico: :

Incremento en la absorcin a 260 nm al desnaturalizarse la doble cadena de ADN. ADN rico en AT: TM ms baja. ADN rico en GC: TM ms alta Razn: Nmero de puentes de H Aprox. la TM se incrementa en 0.4 C por cada 1% que se eleva la proporcin GC/AT.

ABS 260 nm TM

70 C

80 C 90 C 100C

TM: Temp. a la cual el 50% del ADN se encuentra disociado, Usualmente entre 85-95 C.

40

La propiedad de absorcin de luz UV del ADN es til para su cuantificacin por medio de la espectrofotometra.
A) DETERMINACION DE LA CONCENTRACION DE ADN EN UNA MUESTRA Se sabe que una unidad de abs. a 260 nm equivale a 50 g/ml de ADN de doble cadena. Mediante esta relacin puede obtenerse fcilmente la concentracin de ADN por mtodos espectrofotomtricos utilizando como parmetro nicamente la abs. a 260 nm.

g/ml de ADN = 50 ( abs abs. . 260 )(Factor de dilucin)

B. DETERMINACION DE LA PUREZA DE UNA MUESTRA DE ADN Se ha observado que la relacin entre la abs. a 260 y la abs. a 280 de una muestra de ADN es un indicador muy confiable del grado de pureza de la misma. Se considera que una muestra tiene una pureza aceptable cuando la relacin abs. 260 / abs. 280 esta entre 1.7 y 2. Una relacin menor a 1.7 indica contaminacin por protenas o compuestos fenlicos.

C. CONTAMINACIN POR PARTCULAS SUSPENDIDAS La absorbancia a 325 nm refleja la presencia de contaminacin por partculas suspendidas en la muestra o bien indica que la celda usada para hacer la lectura est sucia. En una muestra pura de ADN la absrobancia a 325 nm debe ser menor a 0.01.

41

Metilacin del ADN:

Adicin de grupos metilo a las bases nitrogenadas (Principalmente Citosina). Modificacin qumica capaz de inactivar genes o secuencias de ADN reguladoras. Responsable de fenmenos epigenticos.
42