JUSTIFICACION El empleo de la papaya para la produccin de papana favorece el eco desarrollo; es decir, promueve el desarrollo de las regiones, al utilizar

racionalmente los recursos naturales con estilos tecnolgicos y formas de organizacin que respetan los patrones sociales y culturales. ANTECEDENTES La catlisis enzimtica como se denomina a la accin de las enzimas es eficiente, altamente especfica, puede llevarse a cabo en condiciones relativamente suaves como temperatura ambiente y pH neutro y permite un control muy preciso de la reaccin. Por ello, la aplicacin de las enzimas a la industria se constituye en uno de los primeros procesos biotecnolgicos de la qumica moderna (Roberts, Turner et al., 1995). Las enzimas han encontrado un gran nmero de aplicaciones en la industria, una de las clases de enzimas con mayor amplitud de aplicacin son las proteasas.1 Las proteasas son enzimas que provocan la hidrlisis o digestin de otras protenas en fragmentos ms pequeos y en ciertas condiciones pueden ser usadas para la sntesis de nuevos compuestos de inters farmacutico (Chaiwut, Kanasawud et al.,2007). Una de las proteasas cuyo uso se encuentra muy difundido es la papana, en realidad una mezcla de papana y quimopapana, que es extrada del ltex de los frutos verdes de la Carica papaya. La aparente temperatura ptima es por tanto, la resultante de dos procesos: 1) el incremento habitual de la velocidad de reaccin con la temperatura, y 2) el incremento de la velocidad de desnaturalizacin trmica de la enzima al sobrepasar una temperatura crtica. Aunque la mayora de las enzimas se inactivan a una temperatura comprendidas entre 55 y 60C, algunas de ellas son completamente estables y conservan su actividad a temperaturas muy superiores, por ejemplo las enzimas de diversas especies de bacterias termfilas En cambio temperaturas extremadamente bajas, detienen la actividad enzimtica pero no las destruyen. Muchas enzimas se pueden conservar mantenindolas a 0C o temperaturas ms bajas.

Efecto de la temperatura en la estabilidad de la enzima. Cabe mencionar, que an las enzimas estando en su aparente temperatura ptima suelen perder actividad enzimtica dependiendo de la duracin del ensayo (Patnaik, 2002). La estabilidad trmica puede determinarse incubando la enzima en ausencia del sustrato, a diferentes temperaturas, de esta se toma una alcuota en la cual de determina su actividad enzimtica a diferentes tiempos. Dando los resultados que se muestran en la Figura 2.12. Donde la enzima es completamente estable (o al menos el % de prdida es menor) en un rango de 20 a 30C, pero a temperaturas mayores de 40C las enzimas pierden un % de actividad, siendo mas notorio a temperaturas como 60 y 70C. (Pandey y col,2003; Whitaker,1994).

La papana se encuentra en el ltex y se colecta haciendo cortes sagitales en los frutos verdes, este fluye despus de hacer cortes superficiales, para coagularse en la superficie del fruto despus de algunos minutos, en un proceso similar a lo que ocurre con las heridas (Silva, Garcia et al., 1997). El ltex gotea en un recipiente apropiado y es secado al sol o en horno a 55-60 grados. Los mismos frutos son cortados nuevamente en diferentes lugares en intervalos semanales. Estos frutos son comestibles, por lo que el ltex y el fruto son utilizados. Se han reportado rendimientos de 20 a 25 kg de papana seca por hectrea durante el primer ao; 90 a 100 kg durante el segundo; 60 a 90 kg en el tercero; 30 a 40 kg en el cuarto, y 20 o menos en el quinto (Mor ton, 1977; Duke y DuCellier, 1993). El 2006, el Per import casi tres millones de dlares en poco ms de 334 toneladas de diferentes tipos de enzimas (grfico 1). Por ello, es de inters el desarrollo de mtodos de extraccin y purificacin avanzados para producir enzimas que satisfagan la demanda interna y que puedan a su vez encontrar un mercado externo. Cerca del 80% de la cerveza producida en los Estados Unidos es tratado con papana, la cual digiere los fragmentos de protena que pueden precipitar, gracias a esta accin la cerveza se mantiene transparente cuando se enfra (Duke y DuCellier, 1993).

METODOLOGIA El ltex que emana de las incisiones fue recolectado en va sos de precipitado pre via mente avados con mezcla sulfocrmica y enjuagados con agua destilada y bidestilada Las muestras recogidas de esa manera fueron tapadas con parafilm y almacenadas en fro en una caja trmica con hielo para su transporte al laboratorio

La solucin desalinizada fue precongelada a -20C y liofilizada a -45C y 0.045 mbar de presin durante 6 horas. Se obtuvo un polvo de color blanco con bastante volumen. Se logr recuperar un mayor nmero de unidades cuando el pH del buffer de extraccin fue 3.00. Se encontr que a valores de pH ms bajos (condiciones ms cidas) la recuperacin fue mayor (grfico 3).

La mxima actividad recuperada se produjo a pH 3.0 a las 0, 24 y 120 horas de haber realizado la extraccin. El resultado se explica porque la papana se encuentra inactiva a pH 3.0 y no se produce la autolisis o autodigestin de la papana por la propia papana (Greenberg y Winnick, 1940); adicionalmente a este efecto de desactivacin reversible se suma el efecto que los iones fosfato y citrato tienen sobre la papana: favorecen la activacin aunque esta no se encuentre al pH ptimo (Kimmel y Smith, 1954). El grfico tambin indica que perodos ms largos de extraccin brindan mayor recuperacin de la actividad.