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UNIVERSIDAD NACIONAL FACULTAD DE CIENCIAS DE LA TIERRA Y EL MAR ESCUELA DE CIENCIAS AGRARIAS

DESCRIPCIN DE PROBLEMAS FITOSANITARIOS DE ORQUDEAS EN DOS AMBIENTES: ZONA PROTECTORA CERROS DE LA CARPINTERA, CARTAGO Y ORQUIDEARIO 25 DE MAYO, SABANILLA DE MONTES DE OCA

Willy J. Salazar Casasa

Campus Omar Dengo Heredia, Costa Rica.

2009

DESCRIPCIN DE PROBLEMAS FITOSANITARIOS DE ORQUDEAS EN DOS AMBIENTES: ZONA PROTECTORA CERROS DE LA CARPINTERA, CARTAGO Y ORQUIDEARIO 25 DE MAYO, SABANILLA DE MONTES DE OCA

Trabajo final de graduacin presentado, como requisito parcial para optar al grado de licenciado en Ingeniera Agronmica
TRIBUNAL EXAMINADOR

Universidad Nacional, Heredia, 2009

RESUMEN El presente estudio fitosanitario de orqudeas se desarroll en dos zonas de muestreo, por un lado en la Zona Protectora Cerros de la Carpintera (ZPCC) de Cartago (condiciones silvestres), y por otra parte en el Orquideario 25 de Mayo (O25M) en Sabanilla de Montes de Oca de San Jos (plantas cultivadas). El objetivo de esta investigacin consisti en comparar la diversidad de patgenos y artrpodos asociados a lesiones visibles en las plantas de las dos regiones. Las muestras recolectadas fueron orqudeas o secciones de sus tejidos con enfermedades o sntomas provocados por artrpodos. El material enfermo se analiz se analiz en el Laboratorio de Fitopatologa, para esto se us la cmara hmeda, aislamiento de tejidos en diferentes medios de cultivos segn el tipo de patgeno. La identificacin de los patgenos se efectu con base a sus caractersticas morfolgicas, la aplicacin de pruebas bacteriologas y la presencia de sntomas asociados a infecciones virales. Las plantas con ataques por artrpodos se catalogaron segn el organismo causante de los sntomas. Los artrpodos recolectados se criaron en el Laboratorio de Entomologa, posteriormente se identificaron con el uso de claves dicotmicas y la ayuda de entomlogos de la UNA, la UCR y el INBio. En varias orqudeas afectadas, sin presencia del agente causal, se determin la familia del artrpodo segn el patrn de alimentacin, as como por los sntomas y los signos presentes en los tejidos. En los dos ambientes se encontr con mayor frecuencia antracnosis y mordeduras de artrpodos. En menor cantidad fueron observadas pudriciones bacteriales, marchitez causada por Fusarium, infecciones de Cercospora, infecciones por patgenos de suelo, sntomas asociados a la infeccin de virus y pudricin negra. Las enfermedades como roya, mancha foliar asociada a Harpographium y mildi negro solo se observaron en La Carpintera, mientras que la falsa roya y la ampolla negra solo se presentaron en el Orquideario. Los ataques por artrpodos se presentaron en las dos zonas, excepto los causados por caros que solo se hallaron en las muestras de los cerros. Los artrpodos asociados a las orqudeas causaron mordeduras, raspaduras, minas foliares, agallas, orificios o decoloraciones por succin de savia. La mayora de problemas fitosanitarios correspondieron a colectas del O25M, donde no existe un equilibrio ecolgico. Los patgenos se observaron en todas las zonas de la Carpintera, pero con menor proporcin en el bosque primario. La principal enfermedad fue la antracnosis, con mayor incidencia en el bosque secundario. Las nicas enfermedades letales fueron, por un lado, infecciones por bacterias en bosque secundario; y por otra parte pudricin negra y marchitez en charral. Los ataques por artrpodos tambin se presentaron en todas las zonas, con mayor incidencia por insectos masticadores. La mayor diversidad de sntomas ocasionados por artrpodos, fueron en el bosque secundario y en charrales. Los insectos chupadores se presentaron en todos los ambientes excepto en el bosque primario. Ninguno de los artrpodos provoc lesiones serias en las plantas, posiblemente por la existencia de factores que los controlaban. Descriptores: Ecologa, Diagnstico fitosanitario, Orqudeas, Patgenos, Artrpodos.

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ABSTRACT SUMMARY The present phytosanitary study in orchids was developed in two zones: in the Carpintera Protective Zone Hills (CPZH) of Cartago (wild conditions) and in the 25th of May Orchidearium (25MO) in Sabanilla, Montes de Oca, San Jos (plants in cultivation). The objective of this investigation was the compare the diverse pathogens and arthropods associated to visible injuries in the plants of the two regions. The samples were orchids or sections of its tissues with diseases or symptoms made by arthropods. The infected material was analyzed in the Phytopathology Laboratory, in the humid chamber, isolations in different media according to the type of pathogen. The identification of the pathogens was made based on the morphological characteristics, the application of bacteriological tests and the presence of associated symptoms to viral infections. The plants with injuries made by arthropods were catalogued according to the organisms that cause the symptoms. The collected arthropods were reared in the Entomology Laboratory; they were identified with the use of dichotomy keys and the aid of the UNA, UCR and INBio entomologists. In several orchids, without the causal agent, the family of the arthropod was determinated according to the feeding pattern, and also by the symptoms and the signs presents in the tissues. In both ambients there were more injuries of antracnose and bites in the tissues by arthropods. In few cases were observed the bacterial infections, wilt of Fusarium, Cercospora infections, soilborn infections, symptoms associated to viral infections and black rot. The diseases that only appeared in the CPZH were Rust, Leafspot associated to Harpographium and Black Mildew, whereas in the 25MO were False Rust and Black Blister. All the injuries by arthropods appeared in the two zones, except the mites that occurred just in the Carpintera. The arthropods associated to the orchids caused bites, scrapes, leaf mines, galls, tissue hollows or discoloration by suction of the sap. Most of the phytosanitary problems appeared in the Orchidearium, because it does not have ecological balance. In the Carpintera there were pathogens in all the zones, but with smaller proportion in the primary forest. The main disease was anthracnose, with greater incidence in the secondary forest. The only lethal diseases that were observed were, bacterial diseases in secondary forest; and black rot and Fusarium wilt in the fallows. The injuries by arthropods also appeared in all the zones, with greater incidence by chewing insects. The greater diversity of injuries took place in the secondary forest and the fallows. The sucking insects appeared in all the environments except in the primary forest. None of the arthropods caused serious injuries in the plants, possibly because there were factors that controlled them. Key words: Ecology, Phytosanitary diagnosis, Orchids, Pathogens, Arthropods.

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DEDICATORIA

A la memoria de mi padre Dr. Eduardo Salazar Ziga

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AGRADECIMIENTOS Mi agradecimiento a las organizaciones e instituciones que hicieron posible el desarrollo de esta tesis: Orquideario 25 de Mayo, Movimiento Cvico del Cantn de la Unin, Campo Escuela Istar, Jardn Botnico Lankester, Ministerio del Ambiente y Energa Sistema Nacional de reas Conservacin: divisin rea de Conservacin Cordillera Volcnica Central, Instituto Nacional de Biodiversidad, Laboratorio y Museo de Entomologa de la Universidad de Costa Rica y los Laboratorios de Fitopatologa y Entomologa de la Escuela de Ciencias Agrarias de la Universidad Nacional.

A los profesores que siempre me han apoyado, les guardo todo mi aprecio.

A mi familia, por ser ejemplo de lucha y tenacidad.

A quienes me acompaaron en las giras de colecta en la Carpintera: Pilar Casasa, Tamara Casasa, Roger Castro, Roger Mesn, Carlos Ossenbach, Mario Ossenbach, Adrin Rivera y Emily Serrano.

Gracias a la msica y a las plantas.

NDICE GENERAL

CAPTULO I.------------------------------------------------------------------------------------------------------------1 1.1 1.2 Introduccin ------------------------------------------------------------------------------------------------1 Objetivos -----------------------------------------------------------------------------------------------------2

CAPTULO II. REVISIN BIBLIOGRFICA -----------------------------------------------------------------3 2.1 Antecedentes de la Zona Protectora Cerros de la Carpintera ------------------------------------3 2.1.1 Datos generales-------------------------------------------------------------------------------------------3 2.1.2 Importancia de la Zona Protectora ---------------------------------------------------------------------3 2.2 2.3 2.4 La familia Orchidaceae -----------------------------------------------------------------------------------5 Sanidad vegetal de las orqudeas -----------------------------------------------------------------------5 Principales problemas fitosanitarios -------------------------------------------------------------------6

2.4.1 Enfermedades abiticas ---------------------------------------------------------------------------------7 2.4.1.1 Quemaduras de sol --------------------------------------------------------------------------------7 2.4.1.2 Desbalances hdricos ------------------------------------------------------------------------------8 2.4.1.3 Enfermedades causadas por temperaturas extremas ------------------------------------------8 2.4.1.4 Problemas nutricionales --------------------------------------------------------------------------8 2.4.1.5 Otros desrdenes fisiolgicos causados por agentes abiticos ------------------------------9 2.4.2 Enfermedades biticas-----------------------------------------------------------------------------------9 2.4.2.1 Antracnosis --------------------------------------------------------------------------------------- 10 2.4.2.2 Marchitez de las orqudeas --------------------------------------------------------------------- 11 2.4.2.3 Manchas foliares de Cercospora--------------------------------------------------------------- 11 2.4.2.4 Roya ----------------------------------------------------------------------------------------------- 12 2.4.2.5 Pudricin Negra---------------------------------------------------------------------------------- 13 2.4.2.6 Enfermedades causadas por bacterias--------------------------------------------------------- 15 2.4.2.7 Enfermedades causadas por virus ------------------------------------------------------------- 15 2.4.2.8 Otras enfermedades presentes en orqudeas ------------------------------------------------- 17 2.4.3 Lesiones ocasionados por artrpodos --------------------------------------------------------------- 18 2.4.3.1 Insectos masticadores --------------------------------------------------------------------------- 19 2.4.3.2 Insectos succionadores de savia --------------------------------------------------------------- 23 2.4.3.3 caros fitfagos --------------------------------------------------------------------------------- 25 CAPTULO III. METODOLOGA ------------------------------------------------------------------------------- 27 3.1 Ubicacin del estudio ------------------------------------------------------------------------------------ 27 3.1.1 Zona Protectora Cerros de la Carpintera ------------------------------------------------------------ 27 3.1.2 Orquideario 25 de Mayo ------------------------------------------------------------------------------ 27 3.2 3.3 3.3.1 3.3.2 3.3.3 3.4 Recoleccin de muestras -------------------------------------------------------------------------------- 29 Anlisis de las muestras vegetales con daos asociados a patgenos -------------------------- 30 Aislamiento de hongos y oomycetes ---------------------------------------------------------------- 30 Aislamiento de bacterias ------------------------------------------------------------------------------ 30 Identificacin de patgenos--------------------------------------------------------------------------- 30 Anlisis de muestras con lesiones asociadas a artrpodos --------------------------------------- 31

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CAPTULO IV. RESULTADOS Y DISCUSIN -------------------------------------------------------------- 32 4.1 4.2 Quemadura de sol ---------------------------------------------------------------------------------------- 32 Enfermedades biticas ---------------------------------------------------------------------------------- 33 Antracnosis---------------------------------------------------------------------------------------------- 33 Marchitez de las orqudeas---------------------------------------------------------------------------- 35 Cercosporiosis ------------------------------------------------------------------------------------------ 36 Presencia de patgenos habitantes del suelo en orqudeas epfitas------------------------------ 37 Roya------------------------------------------------------------------------------------------------------ 38 Mancha foliar asociada a Harpographium sp. ----------------------------------------------------- 38 Mildi negro -------------------------------------------------------------------------------------------- 39 Pudricin negra----------------------------------------------------------------------------------------- 39 Falsa roya o mancha de Cephaleuros virescens --------------------------------------------------- 39 Enfermedades causadas por bacterias --------------------------------------------------------------- 40 Enfermedades causadas por Virus ------------------------------------------------------------------- 41

4.2.1 4.2.2 4.2.3 4.2.4 4.2.5 4.2.6 4.2.7 4.2.8 4.2.9 4.2.10 4.2.11 4.3 4.4

Comparacin de las enfermedades en las dos zonas de estudio -------------------------------- 43 Lesiones ocasionadas por artrpodos ---------------------------------------------------------------- 45

4.4.1 Lesiones causadas por insectos masticadores ------------------------------------------------------ 46 4.4.1.1 Mordeduras y raspaduras de tejidos----------------------------------------------------------- 47 4.4.1.2 Minas---------------------------------------------------------------------------------------------- 51 4.4.1.3 Agallas -------------------------------------------------------------------------------------------- 53 4.4.1.4 Orificios en hojas y seudobulbos -------------------------------------------------------------- 54 4.4.2 4.4.3 4.5 4.6 Lesiones por insectos succionadores de savia------------------------------------------------------ 54 Lesiones por caros ----------------------------------------------------------------------------------- 57 Comparacin de sntomas causados por artrpodos en las dos zonas de estudios --------- 57 Consideraciones finales --------------------------------------------------------------------------------- 59

CAPTULO V. BIBLIOGRAFA --------------------------------------------------------------------------------- 60

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NDICE DE CUADROS Nmero de cuadro 1 2

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Uso de Tierra de la Zona Protectora Cerros de la Carpintera Orqudeas afectadas por quemaduras de sol observadas en la Zona Protectora Cerros de la Carpintera y en el Orquideario 25 de Mayo Orqudeas de la Zona Protectora Cerros de la Carpintera con antracnosis Orqudeas del Orquideario 25 de Mayo con antracnosis Orqudeas afectadas por marchitez causadas por Fusarium sp. en la Zona Protectora Cerros de la Carpintera y en el Orquideario 25 de Mayo Orqudeas con manchas foliares ocasionadas por Cercospora sp. Orqudeas en las cuales se determin la presencia de patgenos habitantes del suelo en la Zona Protectora Cerros de la Carpintera y en el Orquideario 25 de Mayo Orqudeas con pudricin bacteriana en especies de la Zona Protectora Cerros de la Carpintera y el Orquideario 25 de Mayo Orqudeas con sntomas asociados a la infeccin de virus colectadas en la Zona Protectora Cerros de la Carpintera y el Orquideario 25 de Mayo Mordeduras y raspaduras en tejidos en las orqudeas recolectadas en la Zona Protectora Cerros de la Carpintera y el Orquideario 25 de Mayo Minas en tejidos en las orqudeas recolectadas en la Zona Protectora Cerros de la Carpintera y el Orquideario 25 de Mayo Agallas en las races de orqudeas colectadas en la Zona Protectora Cerros de la Carpintera y el Orquideario 25 de Mayo Lesiones en orqudeas de la Zona Protectora Cerros de la Carpintera y el Orquideario 25 de Mayo Lesiones causadas por insectos succionadores de savia en orqudeas de la Zona Protectora Cerros de la Carpintera Lesiones causadas por insectos succionadores de savia en orqudeas del Orquideario 25 de Mayo

3 32

3 4 5

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6 7

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NDICE DE FIGURAS Nmero de figura 1 2 3 4 5 6 7 8 9

Ttulo Mapa de la divisin poltica de la Zona Protectora Cerros de la Carpintera Mapa de la distribucin de tipos de uso de suelo de la Zona Protectora Cerros de la Carpintera Estructuras distintivas de Colletotrichum. A. Acrvulos, B. Setas, C. Conidios Glomerella cingulata. A. Peritecio en hoja con parfisis, ascas, ascsporas y perfasis, B. Parfisis y asca con ascsporas, C. Ascsporas Estructuras distintivas de Fusarium Estructuras distintivas de Cercospora Estructuras distintivas de Sphenospora Principales estructuras de oomycetes que afectan las orqudeas Insectos masticadores que causan lesiones en las orqudeas: A. Orthoptera (Familias: Acrididae y Tettigoniidae), B. Coleoptera (Familias: Curculionidae y Chrysomelidae), C. Hymenoptera (Familia: Formicidae). D. Larvas de Lepidoptera (Familias: Tortricidae y Geometridae), E. Larvas de Diptera (Familia: Cecidomyiidae) Xylosandrus sp. Hembra y macho Stethobaris sp. (Sin. Diorymerellus) A. Estados inmaduros B. Adulto Mordillestena cattleyana. A. Larvas con vista dorsal, frontal y lateral B. Pupa C. Adulto Larvas de Eurytomidae. A. Huevos, B. Primeros instares de la larva, C. Larva adulta Insectos succionadores de savia que causan lesiones en las orqudeas: A. Hemiptera (Familia: Miridae), B. Homoptera (Familia: Aphididae), C. Homoptera (Familias: Diaspididae y Coccidae), D. Homoptera (Familia: Pseudococcidae) caros fitfagos de la familias Tenuipalpidae (A. Brevipalpus, B. Tenuipalpus) y Tetranichidae (C. Tetranichus) Orquideario 25 de Mayo: Sistema de cultivo de las orqudeas en barandas y macetas Cantidad de gneros de orqudeas con sntomas de enfermedades en los dos sitios de estudio Cantidad de gneros de orqudeas con enfermedades en las diferentes zonas de muestreo de la Zona Protectora Cerros de la Carpintera Cantidad de gneros de orqudeas con sntomas causados por artrpodos en los dos sitios de estudio Cantidad de gneros de orqudeas afectadas por artrpodos en las diferentes zonas de muestreo de la Zona Protectora Cerros de la Carpintera

Pgina 4 4 10 11 12 13 13 14 20

10 11 12 13 14

21 21 22 22 24

15 16 17 18 19 20

26 28 44 45 58 58

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NDICE DE ANEXOS Nmero de anexo 1 2 3 4 5 Nombres cientficos Permiso de colecta de orqudeas (Pasaporte cientfico) Evaluacin de la muestra y el sitio de recoleccin Preparacin de medios de cultivo Fotografas de los problemas fitosanitarios

Ttulo

Pgina 72 73 74 75 76

CAPTULO I. 1.1 Introduccin

Las orqudeas son plantas monocotiledneas que pertenecen a la familia Orchidaceae, se encuentran distribuidas sobre toda la superficie de la Tierra, habitando ecosistemas y regiones de orografa muy diferente entre s (Dressler 1993). Ellas son empleadas en la decoracin de jardines, exhibiciones o usadas con fines comestibles (i.e. Vanilla spp. y Laelia automnalis). En Costa Rica el cultivo y la comercializacin de estas plantas se han intensificado, debido a que existe gran cantidad de horticultores y coleccionistas que las cultivan, adems de varios centros de investigacin e instituciones dedicadas a su conservacin (Ortiz-Arias 2002).

Las orqudeas que habitan los ecosistemas naturales permanecen en un equilibrio dinmico, donde hay una integracin y autorregulacin entre los elementos biticos y abiticos, debido a la presencia de mecanismos que reprimen o controlan los agentes antagnicos. Sin embargo, pueden existir factores que amenazan la conservacin de estas plantas como son: la deforestacin, los incendios forestales, la contaminacin ambiental, la erosin gentica y las asociaciones antagnicas. En los ambientes alterados ese balance ha sido roto y las especies sometidas a nuevas condiciones son dependientes de agentes exgenos para sobrevivir y reproducirse normalmente (Rivera 1998).

El estado sanitario de las plantas es afectado por agentes biticos y abiticos presentes en los diferentes sistemas. Las plantas en ecosistemas naturales se conservan, pues los organismos conviven en armona, permitindose la autorregulacin de las diferentes especies, mientras que en ambientes alterados, se requiere de la ayuda del hombre para controlar el desarrollo de los problemas fitosanitarios (Rivera 1999). La observacin de estos problemas en orqudeas empez probablemente con el inicio de su cultivo Desde el siglo XIX se hace referencia, como lo hizo en 1885 Williams, quien se refiri a los diferentes enemigos como artrpodos y patgenos que afectan las orqudeas.

Una forma de contribuir a la conservacin de las orqudeas es la identificacin de los organismos o factores que las afectan. El reconocimiento de los problemas fitosanitarios reales o potenciales permite que estos se puedan controlar evitando la prdida de valiosas especies (Rivera 1998, Rivera y Corrales 2007).

Estudios recientes muestran una amplia diversidad de problemas fitosanitarios en las orqudeas cultivadas, como indican AOS (1975 y 1995), Arditti (1987), Ochoa et al. (1991), Rivera (1990, 1992 y 1998), OSEA (1993), RHS (1995), Cloyd (1999), Monge (2000), ngel (2001), Gates (2001a y 2001b), Chacn (2002),

Freitas-Asta et al. (2002), Ortiz-Arias (2002), Ching-Liang et al. (2003), Corrales y Rivera (2003), OrtizArias et al. (2003), Rivera y Corrales (2003a y 2003b), Crdenas (2003a y 2003b), Kondo et al. (2003), Voegtlin et al. (2003), Amorosi (2004), Gioria (2004), Gutirrez (2005), Johnson (2005a y 2005b), Kitajima et al. (2003 y 2005), Martin (2006), Calvo (2007), CAES (2007), Surez y Mora (2007), Rivera y Corrales (2005a, 2005b, 2007 y 2008) y Salazar et al. (2005, 2007 y 2008). Por el contrario, en orqudeas creciendo en condiciones silvestres, se ha dado ms nfasis a las interrelaciones simbiticas de las plantas epfitas (Benzing 1990) y la informacin sobre las enfermedades y organismos fitfagos es limitado (Walter 1983, Benzing 1990, Janzen y Hallwachs 1999, Chacn 2002, Rivera y Corrales 2007, Salazar et al. 2007 y 2008).

El presente trabajo pretende conocer las relaciones antagnicas en un ecosistema poco alterado y otro altamente intervenido, con el fin de contribuir a una mejor comprensin de los problemas fitosanitarios en ambos ambientes. Para lograr esto se proponen los siguientes objetivos:

1.2

Objetivos

Objetivo general

Comparar los problemas fitosanitarios en orqudeas creciendo bajo condiciones silvestres de la Zona Protectora Cerros de La Carpintera y las cultivadas en el Orquideario 25 de Mayo, por medio del diagnstico y la identificacin de los organismos asociados a lesiones visibles en las plantas.

Objetivos especficos

1- Describir y diagnosticar la causa de los diferentes tipos de lesiones y enfermedades observados en las orqudeas nativas presentes en la Zona Protectora Cerros de la Carpintera y el Orquideario 25 de Mayo.

2- Identificar los patgenos y artrpodos causantes de sntomas, as como las enfermedades abiticas presentes en las orqudeas nativas de las dos zonas estudiadas.

3- Comparar los problemas fitosanitarios presentes en orqudeas nativas de los dos sitios de estudio.

4- Comparar los problemas fitosanitarios en las orqudeas de las diferentes zonas de muestreo de la Zona Protectora Cerros de la Carpintera.

CAPTULO II. REVISIN BIBLIOGRFICA 2.1 2.1.1 Antecedentes de la Zona Protectora Cerros de la Carpintera Datos generales

La Zona Protectora Cerros de la Carpintera (ZPCC) fue creada mediante Decreto Ejecutivo 6112-A del 23 de junio de 1976. Su manejo se rige por la Ley General Forestal No. 7575 del 13 de febrero de 1996. Cuenta con 2.396 hectreas y se distribuye entre cuatro cantones: La Unin (974 has), Cartago Centro (964 has), Desamparados (429 has) y Curridabat (28 has) (Figura 1) (Ossenbach et al. 2003b).

La ZPCC se encuentra bajo rgimen de propiedad privada. El 23 de noviembre de 1999 la oficina de atencin al usuario, Ministerio del Ambiente y la Energa (MINAE), tena registradas 928 propiedades desde 100 m hasta fincas de 450 has (Ossenbach et al. 2003a). A continuacin se hace referencia al uso de la tierra de la ZPCC (Cuadro 1 y Figura 2).

Cuadro 1. Uso de Tierra de la Zona Protectora Cerros de la Carpintera Uso de tierra Bosque primario Bosque secundario Charral Cultivos y pasto Suelo desnudo y ciudades Reforestacin/recuperacin Total rea (has) 618 194 57 769 256 502 2.396 Porcentaje 26 8 2 32 11 21 100

Fuente: SINAC (1993) citado por Ossenbach et al. (2003b)

2.1.2

Importancia de la Zona Protectora

Los Cerros de la Carpintera forman parte de los ltimos bosques primarios de altura del Valle Central de Costa Rica, los cuales son remanentes de lo que fue una slida cubierta forestal de bosque premontano y montano bajo. Su importancia especfica consiste en ser parte de un corredor biolgico entre la Cordillera Volcnica Central y la Cordillera de Talamanca. Sin embargo, su diversidad se ve amenazada por la construccin de carreteras y urbanizaciones a ambos lados de la autopista Curridabat-Cartago (Camposanto La Unin s.f., Ossenbach et al. 2003a).

Figura 1. Mapa de la divisin poltica de la Zona Protectora Cerros de la Carpintera (Fuente: Ossenbach et al. 2003a)

Figura 2. Mapa de la distribucin de tipos de uso de suelo de la Zona Protectora Cerros de la Carpintera (Fuente: Ossenbach et al. 2003a)

2.2

La familia Orchidaceae

La familia Orchidaceae agrupa gran cantidad de especies del Reino Vegetal. Se estima que existen 25.000 especies (Pupulin 2005), agrupadas en alrededor de 900 gneros, adems de 70.000 hbridos artificiales inscritos (Rivera 1998). En Costa Rica hay 1.461 especies, de las cuales 330 (35% de las orqudeas centroamericanas) son endmicas (Ossenbach et al. 2007).

Las orqudeas son plantas herbceas, perennes, cuyo tamao oscila de 3,0 mm, hasta varios metros de altura. Presentan diversos hbitos de crecimiento debido a su gran variabilidad morfolgica; crecen sobre los rboles (epfitas), rocas (litfitas) y en el suelo (terrestres), pero la mayor parte de la familia es epfita (Ortiz-Arias 2002). Las flores pueden medir de 0,2 a 30,0 cm de dimetro (Dressler 1993).

Esta familia se encuentra prcticamente en todos los continentes; sin embargo, su distribucin no es uniforme, sino que se concentra en las regiones tropicales del planeta. An en los trpicos, la distribucin de estas plantas vara entre los continentes y de una a otra regin. La mayor diversidad de especies a nivel mundial se encuentra en las regiones septentrionales de los Andes Suramericanos, las montaas del Istmo Centroamericano, Madagascar, la regin de Indochina y el sureste de China, las islas de Sumatra, Borneo y Nueva Guinea (Pupulin 2005).

En las ltimas dcadas se han afectado negativamente los ecosistemas tropicales, debido a los diferentes modelos de desarrollo polticos y econmicos, los cuales suelen ser destructores de las riquezas naturales. Esta corriente ha puesto en peligro muchas especies de la flora y fauna nativa, particularmente aquellas adaptadas a ecosistemas muy especficos, como es el caso de las orqudeas (Rivera 1998).

2.3

Sanidad vegetal de las orqudeas

Tradicionalmente, cuando se habla de sanidad vegetal se piensa en el binomio planta-agente causal, dejando de lado una serie de conceptos ecolgicos. Para entender los problemas fitosanitarios, se deben tomar en cuenta las condiciones ambientales, ya sea en sistemas inalterados o en sitios donde el hombre ha hecho modificaciones ms o menos significativas (Rivera 1999).

Los componentes biticos y abiticos pueden, en determinados momentos, interferir con el normal desarrollo de una planta en particular. Ninguno de esos componentes puede analizarse por separado, pues existe una intrincada red de interacciones que inhiben o aceleran los procesos sanitarios. Estas interrelaciones pueden ocurrir dentro de los ecosistemas en equilibrio o en sistemas que han sufrido distintos grados de alteraciones (Rivera 1999).

En su estado natural, las orqudeas silvestres forman parte de un sistema, en el cual stas interactan de forma equilibrada con otros seres vivos, por lo que sus poblaciones sobreviven y se multiplican libremente en condiciones ambientales idneas. Cuando las plantas se extraen de su ambiente natural y son manipuladas conforme a los intereses humanos, el balance natural se rompe y comienzan a incrementarse los problemas fitosanitarios, cuya incidencia puede afectar el rendimiento esperado del cultivo o deteriorar la calidad del material vegetal (Crdenas 2003a).

Cuando las orqudeas se extraen del bosque y se colocan en una coleccin o explotacin comercial, algunos de los organismos asociados al buen desarrollo de las plantas estarn ausentes, mientras que otros (no necesariamente benficos) sern ms comunes. Esos cambios en la composicin e interacciones de las poblaciones, pueden afectar el funcionamiento de las plantas, hacindolas ms vulnerables a problemas sanitarios (Rivera 1998).

La sanidad vegetal es un aspecto importante a considerar para la conservacin de las orqudeas. En la medida que se conozcan los agentes que afectan las orqudeas, as se podrn disear estrategias y mtodos apropiados para mantener las diferentes especies (Rivera y Corrales 2005b).

2.4

Principales problemas fitosanitarios

Todo problema fitosanitario es la expresin de una causa bitica o abitica que bajo ciertas condiciones interfieren negativamente en el desarrollo normal de las plantas. Los factores biticos involucran organismos de origen animal (artrpodos y moluscos) as como diferentes microorganismos (patgenos); mientras que los factores abiticos son los elementos inertes de la naturaleza (Rivera 1998). Estos problemas fitosanitarios son ms frecuentes en zonas alteradas por los seres humanos, particularmente en plantas cultivadas en viveros o colecciones.

La cantidad de informacin disponible sobre los agentes que afectan las orqudeas refleja su gran diversidad, distribucin mundial, importancia e inters tanto en profesionales como en aficionados, expertos o principiantes. Esta informacin suele estar dispersa y es difcil de evaluar. Muchas veces el nico punto de referencia es el nombre comn de las enfermedades o el agente causal, lo cual causa confusin debido a la diversidad de nombres usados en diferentes regiones o pases (AOS 1995, Arditti 1987).

Existen horticultores que desconocen o ignoran los cuidados sanitarios en las orqudeas; sin embargo, han desarrollado tcnicas empricas para brindar los requerimientos que demandan las plantas. Ellos tratan de crear las condiciones ambientales que semejen los nichos ecolgicos donde habitan en forma naturalmente. 1

Las orqudeas, al igual que todas las plantas, conviven con una serie de factores que eventualmente les provocan algn tipo de lesin, ya sean de naturaleza bitica o abitica. En condicin silvestre, estos problemas rara vez alcanzan niveles muy altos, debido a que hay un balance regulador entre los componentes del sistema; mientras que en condicin de cultivo es necesario incluir en el manejo inspecciones constantes para detectar los problemas, aprender a reconocerlos y combatirlos (Monge 2000).

2.4.1

Enfermedades abiticas

Las enfermedades abiticas son desrdenes fisiolgicos o efectos adversos que provocan los componentes no vivos del ecosistema en las plantas. Rivera (1998) indica que en ambientes inalterados, hay un equilibrio sostenible entre las orqudeas y el medio ambiente, sin embargo, cuando se pierde la armona hay factores abiticos que las afectan. Estos problemas corresponden a quemaduras de sol, desbalances hdricos, temperaturas extremas y desbalances nutricionales.

2.4.1.1 Quemaduras de sol El exceso de luz solar que reciben las plantas propicia el desarrollo de las llamadas quemaduras de sol. La sobreexposicin a los rayos solares puede causar amarillamiento generalizado, parches clorticos, crecimiento pobre o quemaduras de diverso grado en los tejidos ms expuestos. Las hojas suelen perder su brillo, se decoloran y necrosan mientras que los seudobulbos desarrollan manchas necrticas y se tornan frgiles (Rivera 1990 y 1992, AOS 1995).

En la familia Orchidaceae hay plantas que presentan un amplio rango de requerimientos de luz, que va desde la exposicin directa a los rayos solares, hasta orqudeas que habitan en la penumbra de bosques densos. Cuando los tejidos reciben ms radiacin de la necesaria en forma sostenida, se reduce el contenido de clorofila y hormonas, provocando el lento desarrollo de la planta (Rivera 1998).

Amorosi. 2003. Prcticas culturales de manejo de cultivo de orqudeas. Clnica de Orqudeas, San Jos, Costa Rica. Comunicacin personal ().

2.4.1.2 Desbalances hdricos Tanto la falta como el exceso de agua pueden causar serios problemas fisiolgicos de diferentes intensidades. La falta de agua causa deshidratacin de hojas, seudobulbos y races, ocasionando corrugaciones, prdida de brillantez y clorosis. La planta presenta crecimiento reducido, desecacin en las partes ms viejas, y cada de hojas. El exceso de agua puede provocar amarillamiento foliar, muerte de la raz, y desprendimiento de la planta por falta de anclaje al sustrato. El suministro irregular de agua tambin tiene efectos negativos. Esto ocurre cuando no se brindan los regmenes de humedad apropiados, por lo tanto pueden ocurrir grandes fluctuaciones en la disponibilidad del lquido. Cuando ocurren estos problemas se forma la hoja acorden, que es el corrugamiento de la lmina de las hojas (AOS 1995, Rivera 1998). 2.4.1.3 Enfermedades causadas por temperaturas extremas Las orqudeas que se mantienen a altas temperaturas durante la poca seca pueden presentar sntomas de deshidratacin, botones florales quemados y muerte de brotes nuevos; mientras que a bajas temperaturas ocurre quemadura en los tejidos. Los cambios bruscos de temperatura, an sin llegar a extremos, crean cierta predisposicin en las orqudeas, al desarrollo de enfermedades infecciosas (Rivera 1998). 2.4.1.4 Problemas nutricionales En condiciones silvestres los problemas nutricionales en las orqudeas son leves o no existen, pues la lluvia transporta los compuestos orgnicos e inorgnicos de lo ms alto de los rboles hasta el suelo. En cultivo, el suministro natural de nutrimentos se reduce y no siempre existe una adecuada distribucin de los elementos nutritivos, por lo tanto es necesaria la fertilizacin artificial. Las aplicaciones en exceso de fertilizantes pueden causar decoloraciones y quemaduras, pero tambin ocurre un incremento de suculencia de tejidos debido al exceso de elementos mayores. Estos procesos se dan por la acumulacin excesiva de sales solubles en los mrgenes de las hojas y meristemos radicales. Las plantas sobrefertilizadas con compuestos nitrogenados tienden a formar tejidos muy ricos en agua y compuestos orgnicos, los cuales son altamente apetecibles por organismos antagnicos. Las deficiencias nutricionales son poco frecuentes en orqudeas cultivadas, especialmente porque suelen fertilizarse peridicamente, y la mayora de los sustratos usados para cultivarlas son de origen orgnico, los cuales al descomponerse liberan minerales. Los sntomas de desnutricin ocurren bajo condiciones muy particulares, varios ejemplos son: el uso de fragmentos de roca que no aporta ni retiene minerales, sustratos orgnicos muy degradados, excesiva lixiviacin de sales y fijacin de minerales por efecto del pH.

La carencia de macroelementos es ms notable que la deficiencia de elementos menores. El dficit de nitrgenos y fsforo causa poco crecimiento de las plantas. La falta de nitrgeno induce raquitismo y amarillamiento de follaje, mientras que la deficiencia de fsforo propicia coloraciones prpura en las hojas y poco crecimiento radical. Las deficiencias de potasio se presentan en hojas viejas, las cuales se tornan amarillentas con necrosis de las puntas y mrgenes. Si el problema es calcio se ven quemaduras en el pice de las hojas jvenes que se extienden hacia el resto de la lmina, acompaado de un halo clortico (Rivera 1998). 2.4.1.5 Otros desrdenes fisiolgicos causados por agentes abiticos Las orqudeas pueden presentar daos por el contacto con productos artificiales, principalmente por agroqumicos. Los agroqumicos mal empleados o no aptos para las orqudeas pueden intoxicar las plantas, causando gran variedad de sntomas como: necrosis en las hojas, arrugamientos, bandas blancas y amarillas, cambios de tonalidad en las hojas, defoliaciones, aborto de flores y malformacin de escapos florales. Las plantas tambin son afectadas por productos artificiales que provocan la contaminacin ambiental; entre estos se pueden mencionar los qumicos voltiles causantes de la lluvia cida (nitratos, sulfuros, cloruros y fluoruros) y partculas producto de combustin de motores. En el agua pueden estar presentes aceites, detergentes y sales inorgnicas que afectan en el proceso normal de absorcin de las races.

Otros problemas abiticos en las orqudeas pueden ser efectos de granizo, vientos fuertes, rayos y la deposicin de polvo y holln sobre las hojas. Los dos primeros elementos pueden provocar daos mecnicos, mientras que los rayos causan quemaduras en las plantas cercanas a la zona de impacto o provocan la sntesis localizada de ozono, el cual es txico en las plantas. El polvo y el holln, por otra parte, pueden afectar la fotosntesis o producir compuestos nocivos al reaccionar con la humedad (Rivera 1998). 2.4.2 Enfermedades biticas

Las enfermedades biticas son producidas por agentes vivos, por lo tanto son transmisibles de un individuo a otro (Rivera 1998). Los organismos capaces de causar estas enfermedades se denominan patgenos, entre ellos los ms comunes son hongos, oomycetes, virus, bacterias y nematodos. Tambin existen gneros de plantas parsitas, algas y protozoarios que causan alteraciones fisiolgicas (Arauz 1998). A continuacin se hace referencia a varias de las enfermedades que suelen presentarse en las orqudeas.

2.4.2.1 Antracnosis Esta es una enfermedad que causa manchas foliares ovaladas, circulares o de forma irregular, color caf oscuro, negras o grisceas. Sus cuerpos fructferos son acrvulos, visibles como pequeos puntos oscuros organizados en anillos concntricos o lneas curvas. En especies de hojas carnosas causan depresiones con bordes bien definidos, pero en hojas delgadas las manchas forman hundimiento leve o ausente. En seudobulbos las lesiones tienden a ser ovaladas o irregulares, con un hundimiento muy marcado y colores que van de caf rojizo a negro (segn la especie hospedante). Las flores pueden ser infectadas desde estados tempranos, an cuando estn en capullo, se observan manchas oscuras y hundidas a lo largo de todo el botn, y deformaciones irreversibles. Si la infeccin ocurre tardamente, presentan manchas ovaladas o circulares en ptalos y spalos. Las manchas en flores son de color negro o caf, que al coalescer pueden destruir todos los componentes florales. Los ataques en los escapos y esptulas pueden inducir el aborto de las flores (Rivera 1998, Crdenas 2003a, Gutirrez 2005).

El agente causal de la enfermedad es un hongo de amplia distribucin que presenta tanto la forma asexual (anamorfo) como sexual (teliomorfo). El estado anamrfico es ms frecuente y corresponde a Colletotrichum gloesporioides (Figura 3), el estado teliomrfico es Glomerella cingulata (Figura 4) que se desarrolla en las partes ms viejas de la lesin. Ambas formas originan gran cantidad de esporas que son diseminadas por el salpique de lluvia, organismos vectores, o labores culturales; la fase del teliomorfo produce peritecios con ascosporas que son diseminadas principalmente por el viento. El hongo penetra con rapidez en los tejidos cuando se mantiene un ambiente con alta humedad relativa y superficial. Las quemaduras de sol, nutricin desbalanceada, baja luminosidad y los daos mecnicos ayudan a incrementar la infeccin (Rivera 1998).

Figura 3. Estructuras distintivas de Colletotrichum. A. Acrvulos, B. Setas, C. Conidios (Fuente: Barnett y Hunter 1972)

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Figura 4. Glomerella cingulata. A. Peritecio en hoja con parfisis, ascas, ascsporas y perfasis, B. Parfisis y asca con ascsporas, C. Ascsporas (Fuente: Hanling 1998) 2.4.2.2 Marchitez de las orqudeas La marchitez de las orqudeas es una enfermedad que afecta las races, rizomas y la base de los seudobulbos, presentando sntomas similares a deficiencias nutricionales, prdida de vigor, coloracin amarillenta, distorsin de la lmina foliar, as como el corrugamiento de hojas y seudobulbos. En conjunto, estos sntomas dan una apariencia de marchitez general que conllevan a la muerte de la planta. En las orqudeas esta enfermedad puede ser tanto fulminante como degenerativa, pues las plantas muy susceptibles pueden morir en transcurso de unos meses, o iniciar un proceso irreversible donde declinan lentamente hasta sucumbir por la infeccin. El agente causal de esta enfermedad es el hongo Fusarium oxysporum (Figura 5) que produce tanto conidios como clamidsporas. Los primeros tienen capacidad de infeccin por un tiempo relativamente corto, mientras que las clamidsporas pueden permanecer vivas por un tiempo ms prolongado en residuos orgnicos, dentro del sustrato, o adherido a la superficie de las macetas (Rivera 1998). El hongo puede penetrar por las races o a travs de las heridas en rizomas durante las prcticas culturales (Crdenas 2003a).

2.4.2.3 Manchas foliares de Cercospora El sntoma de la enfermedad se inicia como minsculos puntos amarillos en el envs de las hojas, luego se hacen visibles por el haz y crecen hasta alcanzar 6,0 mm de dimetro. Cuando la infeccin avanza pueden observarse lesiones ligeramente hundidas con el margen oscuro y levantado. La parte central de la mancha

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se torna purprea o negra y eventualmente las hojas caen. La coalescencia de las lesiones puede deteriorar extensas reas de la lmina foliar (Rivera 1998).

Figura 5. Estructuras distintivas de Fusarium (Fuente: Rivera 1998) Los conidios de Cercospora spp. se forman en unas estructuras llamadas esporodoquios (Figura 6) y se dispersan por el viento o por arrastre y salpique de la lluvia. Estas estructuras son visibles en algunos casos como puntos esparcidos sobre la superficie lesionada, en la mayora de las especies de orqudeas se infectan cuando el follaje es joven, pero los sntomas se tornan ms evidentes cuando la hoja envejece (Rivera 1998).

2.4.2.4 Roya En general, los sntomas de las royas son muy similares entre s y se detectan con facilidad. En el envs de las hojas se notan manchas amarillas, que en pocos das se abultan formando pstulas. En algunas especies de orqudeas se forma un halo amarillo alrededor de estas estructuras y en otras solo se observan puntos levantados llenos de uredsporas. Las plantas muy susceptibles forman numerosas pstulas por el haz y el envs, cubriendo extensas porciones a veces circulares, recubiertas por una masa polvosa de uredsporas de color amarillo, anaranjado o caf. La roya provoca defoliacin prematura en las plantas, crecimiento raqutico y floracin muy pobre o nula (Rivera 1998). A nivel mundial se conocen cuatro gneros que

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causan esta enfermedad, pero los ms frecuentes son especies de Sphenospora (Figura 7) y Uredo (Arditti 1987, Rivera y Corrales 2007).

Figura 6. Estructuras distintivas de Cercospora (Fuente: Rivera 1999)

Figura 7. Estructuras distintivas de Sphenospora (Fuente: Rivera 1998) 2.4.2.5 Pudricin Negra Esta enfermedad puede presentarse en todos los rganos de la planta. Por lo general comienza en la parte basal, abarcando races, rizomas y la base de los seudobulbos. Cuando las condiciones climticas son muy hmedas las lesiones avanzan con rapidez cubriendo la mayora de la hoja y provocando su cada. Los

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tejidos afectados presentan coloracin negra o marrn y de consistencia acuosa pero firme. Con frecuencia estas infecciones son acompaadas por invasiones secundarias de otros organismos.

La enfermedad es causada por los oomycetes Phytophthora cactorum y Pythium ultimum (Figura 8). Ambos son organismos que producen esporangios y zoosporas que funcionan como propgulos infecciosos. Los esporangios son diseminados principalmente por el viento o el salpique de lluvia, mientras que las zoosporas pueden movilizarse a cortas distancias por s mismas, nadando en finas pelculas de agua; tambin pueden ser arrastradas por el agua en movimiento y al estar cerca de un hospedante se dirigen a l para establecerse. La diseminacin a grandes distancias puede ocurrir por medio de agua y componentes de sustrato contaminados, as como el transporte de orqudeas u otras plantas ornamentales afectadas por los mismos patgenos. Las esporas sexuales de los oomycetes se conocen como oosporas, estas estructuras son de sobrevivencia (AOS 1995, Rivera 1998).

Figura 8. Principales estructuras de oomycetes que afectan las orqudeas (Fuente: Rivera 1998) Segn Crdenas (2003b), en Costa Rica, el desarrollo de la enfermedad se da en dos pocas bien definidas: en los meses de enero y febrero, con ataques dbiles por la poca humedad y entre los meses de julio a octubre, cuando se presentan mayores infecciones debido a las lluvias intensas.

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2.4.2.6 Enfermedades causadas por bacterias Las bacterias que causan enfermedades utilizan las heridas o aberturas naturales de las plantas para penetrar e iniciar la infeccin, que es ms efectiva cuando existe suficiente humedad sobre los tejidos susceptibles. Las bacterias fitopatognicas, con excepcin de unos gneros, no producen esporas, por lo que los propgulos son sus propias clulas. En las orqudeas, estos patgenos suelen producir pudriciones suaves, pudricin caf, mancha bacterial caf o la ampolla negra.

Las pudriciones suaves las causa Erwinia carotovora, la cual afecta tejidos suculentos de hojas, seudobulbos, rizomas y races. En las hojas inicia produciendo manchas de apariencia acuosa, luego la superficie se arruga y se ablanda. En los seudobulbos aparecen reas de color verde oscuro, amarillas o cafs, con corrugamiento y flacidez de los tejidos, adems suele producir olores desagradables.

La pudricin caf es producida por E. cypripedii, la cual provoca manchas de apariencia acuosa generalmente en el centro de la hoja. Las infecciones tardas se tornan de color caf oscuro, invaden el centro de la planta y la eventualmente le causan la muerte.

La mancha bacterial caf comienza como manchas acuosas en cualquier parte de la hoja que se tornan de color caf oscuro o negro. Si se extiende la invasin, en poco tiempo puede causar la muerte de la planta. El agente causal es del gnero Acidovorax (Surez y Mora 2007).

Otra enfermedad de menor importancia es la ampolla negra, asociada a la presencia de bacterias del gnero Xanthomonas. Los sntomas son abultamientos de la epidermis en los seudobulbos que en su interior estn llenos de lquido. Se le considera como una enfermedad cosmtica porque no hay evidencia de que limite el desarrollo de las plantas, solo da mala apariencia a los tejidos 2 Cuando la ampolla revienta, el tejido subyacente queda oscuro, reseco y deprimido (Crdenas 2003a).

2.4.2.7 Enfermedades causadas por virus Los virus de plantas tienen diferentes formas y tamaos, algunos son elongados formando barras rgidas o flexibles de 10-18 x 300-2000 nm en promedio. Otros virus tienen forma de bacilos con tamaos variables de 52-75 x 270-289 nm. Tambin hay estructuras polidricas con dimetros entre 17,0 y 809 nm. La
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Rivera, G. 2005. Curso: Introduccin a la Orquideologa. Laboratorio de Fitopatologa, Heredia. Com. pers.

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estructura est constituida por cadenas simples de cido nuclico y rodeados de una capa proteica llamada cpside.

El efecto nocivo de los virus en una planta no solo resulta del desvo de energa y compuestos vitales de la clula para producir ms virus, sino que tambin altera los procesos metablicos como la produccin de metabolitos y compuestos ajenos al normal metabolismo celular. Los sntomas que provocan los virus en orqudeas son muy variables an en el mismo hospedante, por lo que para su apropiada identificacin se debe hacer pruebas serolgicas o moleculares (Rivera 1998).

En Costa Rica se han descrito e identificado numerosos virus como el Cymbidium Mosaic Potexvirus (CymMV), Odontoglussum Ringspot Tobamovirus (ORSV), Cucumber Mosaic Cucumovirus (CMV), Cymbidium Ringspot Tombusvirus (CymRSV), Tobacco Rattle Tobravirus (TRV), Orchid Fleck Rhabdovirus (OFV) (Rivera 1998, Chacn 2002, Ortiz-Arias 2002, Freitas-Asta et al. 2002, Ortiz-Arias et al. 2003, Kondo et al. 2003, Kitajima et al. 2005).

Los virus de CymMV y ORSV se consideran los ms importantes en las orqudeas no solo por ser cosmopolitas, sino por sus efectos nocivos. En las hojas desarrollan estras clorticas o necrticas, manchas clorticas, moteados y mosaicos. En los tejidos se pueden presentar patrones lineales, hundimientos y anillos. En flores producen jaspeados, variegados, deformaciones y manchas necrticas. La transmisin de estos virus es mecnica (Chacn 2002).

El CMV es uno de los virus multirraciales, con mayor distribucin a nivel mundial y un amplio mbito de hospedantes. En las orqudeas causa mosaico foliar y estriados en las hojas, mientras que en flores induce el desarrollo de jaspeados. Es transmitido por fidos de manera no persistente y puede diseminarse mecnicamente o por semilla. En las orqudeas se ha encontrado solo en Phalaenopsis en Japn y Taiwn (Rivera 1998, Crdenas 2003a) y en diez gneros de orqudeas en Costa Rica (Chacn 2002).

El CymRSV en orqudeas produce anillos clorticos concntricos en las hojas. No parece estar muy disperso entre las orqudeas, aunque es fcilmente distribuido por contacto foliar o mecnicamente (Chacn 2002).

El TRV tiene amplia distribucin en Euroasia, Norte y Centroamrica, China y Japn, pero est poco distribuido en Nueva Zelanda y Australia. Es transmitido por nemtodos en forma persistente no circulativa, por semilla y mecnicamente. En las orqudeas provoca la deformacin de flores y mosaicos

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foliares (Chacn 2002). En Costa Rica Chacn (2002) lo detect por primera vez en nueve gneros de orqudeas.

El OFV causa sntomas de anillos clorticos o necrticos y moteados en muchas orqudeas por todo el mundo. Es transmitido por Brevipalpus californicus en forma persistente con mayor eficiencia por adultos y ninfas (Kondo et al. 2003, Kitajima et al. 2005).

Otros virus que afectan las orqudeas como son: Tomato Spotted Wilt Tospovirus (TSWV) Tomato Ringspot Nepovirus (ToRSV), Cymbidium Mild Mosaic Rhabdovirus (CymMV), Trichopilia Isometric Virus (TI).

2.4.2.8 Otras enfermedades presentes en orqudeas El mildi negro y la fumagina son dos enfermedades secundarias muy parecidas que suelen presentarse en muchas plantas que crecen en los trpicos (Arditti 1987). El mildi negro se ha documentado en orqudeas provocado por hongos de los gneros Meliola y Lembosia; mientras que la fumagina es causada por Capnodium y Cladosporium (Rivera 1998, ngel 2001, Crdenas 2003a, Rivera y Corrales 2007). En general estos hongos se reproducen superficialmente en hojas y tallos, formando una pelcula de color negro (Arditti 1987). Los hongos de mildi negro son parasticos con hifopodios, que forman un micelio negro sobre los tejidos; mientras que los hongos que producen fumagina son saprfitos y suelen crecer sobre ligamasa (excreciones azucaradas) de escamas, cochinillas, pulgones y moscas blancas (2001). Los efectos negativos que causan las fumaginas consisten en limitar la fotosntesis, pues recubren las hojas, tallos y brotes impidiendo el paso de la luz (ngel 2001). La falsa roya es otra enfermedad leve en las orqudeas, causada por Cephaleuros virescens. Se considera de tipo cosmtica porque no causa lesiones severas, sino que da mala apariencia a las hojas. Inicia con manchas negras o verde oliva en el haz de las hojas, luego se desarrollan colonias anaranjadas o amarillas de apariencia afelpada. Cuando crece libremente puede bloquear la luz solar, afectando el proceso de fotosntesis, generando manchas oscuras en el tejido (Rivera 2005b, Salazar et al. 2007). A continuacin se mencionan otras enfermedades de origen fungoso registradas en Costa Rica (AOS 1995, Rivera 1998, Rivera y Corrales 2007). Mancha de la hoja causada por Alternaria sp. en Cattleya. Mancha de flor causada por Botrytis cinerea en Cattleya, Epidendrum, Gongora, Guarianthe, Miltonia, Phalaenopsis, Peristeria, Pescatorea, Psychopsis, Stanhopea, Vanda y Xylobium. Manchas difusas por Cercosporidium sp. en Cattleya, Encyclia, Lycaste, Stanhopea, Trigonidium.

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Mancha causada por Curvularia lunata en Cattleya. Mancha de la hoja por Diplodia sp. observada en Cattleya, Cymbidium, Epidendrum, Oncidium y Vanda. Marchitez causada por Fusarium oxysporum f. sp. vanillae en cultivos de Vanilla spp. Manchas foliares por Graphium sp. en Cattleya, Cochleanthes, Coelogyne, Guarianthe, Lycaste y Oncidium. Manchas foliares por Guignardia sp. en Ascocentrum y Vanda. Mancha de la hoja por Macrophoma sp. en Cattleya. Mancha zonal causada por Mycoleptodiscus en Brassia, Cattleya, Elleanthus, Gongora, Guarianthe, Maxillaria, Oncidium, Psychopsis, Sobralia, Stanhopea y Xylobium. Moteado caf por Nectria tjibodensis en cultivos de Vanilla. Mal de hilachas causado por Pellicularia koleroga en Vanilla. Mancha de hoja por Phoma oncidii-sphacelati en diferentes especies de Oncidium. Manchas foliares causadas por Phyllosticta sp. en Aspasia, Cattleya, Encyclia, Epidendrum y Vanilla. Pudricin de races por Sclerotium rolfsii en Phaius, Phalaenopsis y Spatoglottis. Mancha foliar causada por Schyzothirium sp. en Elleanthus, Oncidium, Pleurothallis, Sobralia y Stanhopea. Mancha foliar por Septoria sp. en Dendrobium. Adems pueden presentarse bajo ciertas condiciones myxomycetes creciendo superficialmente en Guarianthe, Oncidium, Phaius y Trichopilia.

2.4.3

Lesiones ocasionados por artrpodos

Los artrpodos asociados a las orqudeas pueden ser benficos o antagnicos. Entre los benficos se encuentran los polinizadores o controladores biolgicos (Dressler 1981, Benzing 1990, Roubik y Hanson 2004), mientras que los antagnicos corresponden a organismos fitfagos (Rivera 1998, Monge 2000, Calvo 2007, Surez y Mora 2007). Las lesiones que causan los artrpodos en las orqudeas se han documentado ampliamente a partir de cultivo (Dodson y Gillespie 1967, AOS 1975 y 1995, Rivera 1990 y 1998, OSSEA 1993, Rivera y Corrales 2005a, 2005b y 2007, Salazar et al. 2005, 2007 y 2008, entre muchos otros), mientras que esta informacin en condiciones silvestres es limitada (Benzing 1990). Estos organismos se clasifican como insectos masticadores, insectos succionares de savia, y caros fitfagos (Rivera 1998).

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2.4.3.1 Insectos masticadores Los insectos masticadores se distinguen por poseer un aparato bucal con mandbulas para masticar o morder los rganos de las orqudeas. Los sntomas que provocan son mordeduras, raspaduras, perforaciones, tneles, agallas o minas. Las lesiones las pueden realizar adultos o larvas de diferentes rdenes, entre los cuales se conocen ortpteros (Familias: Acrididae, Gryllidae y Tettigoniidae), colepteros (Familias: Curculionidae y Mordellidae), himenpteros (Familias: Formicidae y Eurytomidae) y larvas de lepidpteros (Familias: Acrolophidae y Tortricidae) (Figura 9). Otros insectos que eventualmente daan flores y botones son las cucarachas (Orden: Blattaria Familia: Dictyoptera) y tijerillas (Orden: Dermaptera) (Costa Lima 1956, Dodson y Gillespie 1967, AOS 1975 y 1995, Rivera 1990 y 1998, RHS 1995, ngel 2001, Gates 2001b, Gioria 2004). Los ortpteros que eventualmente alimentan de orqudeas son los grillos (Familia: Gryllidae) y chapulines (Familias: Acrididae y Tettigoniidae), los cuales lesionan las plantas desde sus estados ninfales y conforme crecen producen daos ms notorios. Estos insectos muerden hojas, seudobulbos, partes florales y races de las orqudeas (Rivera 1998). Dodson y Gillespie (1967) mencionan: Ellos pueden causar estragos al devorar completamente todos los brotes nuevos, suculentos y tiernos, pero cuando estas partes jugosas se acaban, no dudan en consumir cualquier otra seccin de las plantas. Los curculinidos que afectan a las orqudeas son los gneros Xylosandrus (Subfamilia: Scolytinae) y Stethobaris sin: Diorymerellus (Subfamilia: Baridinae). El adulto de Xylosandrus es de color negro, mide entre 1,8 a 2,0 mm de longitud (Figura 10) y construye galeras o tneles en los seudobulbos, causndoles pudriciones y manchas oscuras que ocasionan la muerte de la planta hospedante (Monge 2000). Por otra parte, Stethobaris es de color negro o marrn, de 5,0 mm de largo (Figura 11), generalmente se alimenta de hojas tiernas, seudobulbos y botones florales permitiendo que los patgenos secundarios infecten las plantas (CAES 2007). Las larvas roen los escapos florales, el interior de los ovarios y las mismas flores (Gioria 2004). A veces deterioran las races de las orqudeas (AOS 1975, CAES 2007), pero estos sntomas no se han comprobado en orqudeas de Costa Rica. Estos picudos son plagas de importancia en cultivos de orqudeas de Costa Rica (Corrales y Rivera 2003, Rivera y Corrales 2007). En la familia Mordellidae se conoce la especie Mordillestena cattleyana como daina en especies de orqudeas. Las larvas son de forma elongada y alcanzan una longitud de 7,0 mm, cuando estas salen del huevo perforan los tejidos foliares haciendo minas en direccin de las nervaduras. Los adultos son pubescentes de forma cuneiforme y miden 3,0 mm de largo (Costa Lima 1956). En la Figura 12 se ilustra la morfologa de los diferentes instares de M. cattleyana. En Costa Rica se ha visto en plantas de los gneros Cattleya y Vanda (Rivera y Corrales 2007).

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Figura 9. Insectos masticadores que causan lesiones en las orqudeas: A. Orthoptera (Familias: Acrididae y Tettigoniidae) (Saunders et al. 1998), B. Coleoptera (Familias: Curculionidae y Chrysomelidae) (Andrews y Caballero 1989), C. Hymenoptera (Familia: Formicidae) (Coto y Saunders 2004). D. Larvas de Lepidoptera (Familias: Tortricidae y Geometridae) (Stehr 1991), E. Larvas de Diptera (Familia: Cecidomyiidae) (Stehr 1978) AOS (1975 y 1995), ngel (2001), Gates (2001b), Rivera y Corrales (2007) mencionan daos de importancia por Eurytoma orchidearum (Familia: Eurytomidae), conocida como la avispa de las orqudeas. Los adultos son negros de alas transparentes, las hembras miden 4,0 mm de longitud y los machos son ms pequeos. Las larvas son podas de color blanco, con cuerpo recurvado, miden de 3,5 a 4,0 mm de largo (Figura 13), perforan seudobulbos o brotes de la planta, dejando un orificio de salida que es el sntoma caracterstico y pueden provocar desde crecimientos anormales hasta la muerte de la planta. Otras especies atacan las races, desarrollando la formacin de agallas en la cofia (Gates 2002b, Gioria 2004).

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Figura 10. Xylosandrus sp. hembra y macho (Fuente: Couturier et al. 1994)

Figura 11. Stethobaris (Sin. Diorymerellus) A. Estados inmaduros B. Adulto (Fuente: Costa Lima 1956) Con mucha frecuencia se ven hormigas en plantas a punto de florecer (i.e. Myrmecophila), pero estas no causan mayores daos, sino que por el contrario alejan otros insectos verdaderamente dainos (Rivera 1990). Sin embargo, Rivera y Corrales (2007) se refieren a daos directos de hormigas del gnero Atta sp. (Familia: Formicidae) y Surez y Mora (2007) comentan los efectos indirectos de pequeas hormigas negras que protegen algunos insectos succionadores de savia.

Janzen y Hallawachs (1999) mencionan abejas de los gneros Eulaema (Familia: Apidae Subfamilia: Euglossini) alimentndose de plantas de Catasetum maculatum, pero basndose en los estudios de Dressler (1981) y Roubick y Hanson (2004) posiblemente sean abejas polinizadoras. Cuando estas abejas causan lesiones a las orqudeas lo hacen para obtener la recompensa el nctar, aceites y lpidos de las flores (Walter 1983).

Las larvas de lepidpteros que afectan las orqudeas son especies de la familia Acrolophidae, microlepidpteros de la familia Tortricidae y otras orugas que pueden presentarse de manera fortuita

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(AOS 1975 y 1995, Salazar et al. 2008). La larva de lepidptera llamada la polilla de las orqudeas (Familia: Acrolophidae) se alimenta de las races, brotes jvenes y seudobulbos, aunque a veces puede deteriorar las hojas de las plantas. Las larvas son de color gris o rojizo que forman un capullo con seda griscea muy resistente (Rivera 1998, Salazar et al. 2007). Sus signos corresponden a pequeas esferas de excrementos en el sustrato, adheridos a finos hilos de seda.

Figura 12. Mordillestena cattleyana. A. Larvas con vista dorsal, frontal y lateral B. Pupa C. Adulto (Fuente: Costa Lima 1956)

Figura 13. Larvas de Eurytomidae. A. Huevos, B. Primeros instares de la larva, C. ltimo instar larval (Fuente: DNHE s.f.) Las larvas de los tortrcidos, comnmente llamados enrolladores de hojas o bellmoths 3, son microlepidpteros que se alimentan de hojas terminales o inflorescencias, son de color amarillento o verde
3

Polillas con forma de campana (Fauske 2002c).

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plido de cabeza negra, las orugas adultas miden cerca de 10,0 mm de largo y se contorsionan cuando son molestadas (AOS 1975). Las cucarachas y tijerillas son insectos de menor importancia, distribuidos universalmente en las colecciones de orqudeas, viveros y explotaciones comerciales. Los daos que causan se restringen a las races jvenes, esptulas y flores. En las races se presentan pequeas mordeduras en el meristemo apical o a los lados, por donde posteriormente pueden iniciarse infecciones microbianas. En las flores el dao es ms notorio, pues estos insectos son atrados por el azcar de los nectarios ubicados en esptulas, spalos y ptalos, donde perforan la superficie al alimentarse, deteriorando la flor (Rivera 1998).

2.4.3.2 Insectos succionadores de savia Los insectos succionadores de savia son artrpodos que poseen piezas bucales modificadas para tener acceso al interior de las clulas y alimentarse de ellas. Los principales insectos de este grupo que afectan las orqudeas pertenecen al orden Heteroptera, los cuales son conocidos vernculamente como chinches, fidos, escamas y cochinillas (Figura 14). Otros individuos que ocasionalmente se alimentan de las orqudeas son los trips (Familia: Tysanoptera). El chinche rojo, Tenthecoris orchidearum (Familia: Miridae), se considera como uno de los principales insectos antagnicos en las orqudeas. Los adultos miden cerca de 5,0 mm de largo, son anaranjados y las alas anteriores son azul oscuras con el borde anaranjado. Los huevos son depositados en hojas o seudobulbos. Tanto las ninfas como los adultos succionan la savia de las plantas, causando puntuaciones blanquecinas o moteados clorticos en los puntos de alimentacin, seguidamente las especies afectadas se debilitan, reducindose su normal desarrollo. Algunos chinches inyectan toxinas o facilitan la entrada de patgenos por las heridas; en algunos casos provocan el corrugamiento de los rganos afectados (Gioria 2004, Rivera y Corrales 2007).

Los fidos (Familia: Aphididae), comnmente llamados pulgones, causan la reduccin de crecimiento y la atrofia de rganos, afectando brotes, botones florales e inflorescencias completas. Son insectos pequeos (mximo 3,0 mm de largo), alados o pteros. Se distinguen por poseer apndices abdominales dorsales llamados sirfnculos, por los cuales secretan ligamasa que favorece el crecimiento del mildi negro y fumaginas (Neves s.f., Gioria 2004). Algunas especies provocan lesiones indirectas al transmitir partculas de virus o cuando inyectan sustancias txicas en las planta. Las principales especies que afectan las orqudeas en Costa Rica son de los gneros Aphis, Cerataphis, Sitobion y Macrosiphum (Voegtlin et al. 2003, Rivera y Corrales 2007).

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Figura 14. Insectos succionadores de savia que causan lesiones en las orqudeas: A. Hemiptera (Familia: Miridae) (Fuente: Maldonado 1969), B. Homoptera (Familia: Aphididae) (Fuente: Neves s.f., Voegtlin et al. 2003), C. Homoptera (Familias: Diaspididae y Coccidae) (Fuentes: Andrews y Caballero 1989, Rivera 1998), D. Homoptera (Familia: Pseudococcidae) (Fuente: Johnson 2005b) Las escamas son insectos que producen daos al succionar la savia, sus lesiones varan segn el tipo de tejido que colonizan. Su apariencia es diferente a los insectos comunes; los adultos son inmviles y se mantienen adheridos a la superficie de las plantas. Causan clorosis, prdida de brillo en la epidermis,

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desarrollo anormal de la planta, marchitamiento, secamiento o la muerte. Cuando la infestacin es alta aparecen reas necrticas rodeadas por un halo amarillento o caf en el haz (Rivera 1998, ngel 2001). Las especies de escamas se distinguen por la morfologa de su armadura 4. Se pueden clasificar como escamas suaves, como por ejemplo Aspidiotus, Coccus, Parlatoria y Saissetia; duras Chrysomphalus y Diaspis y estrelladas del gnero Vinsonia (AOS 1995). Las suaves, a diferencia de las dems producen ligamasa, que es el precursor del crecimiento de mildi negro y fumaginas (AOS 1975, Cloyd 1999). La cochinilla, Pseudococcus longispinus (Familia: Pseudococcidae), se encuentra debajo de las brcteas de seudobulbos, sobre races, axilas de hojas, a veces viven en el interior de las inflorescencias. Los daos ms evidentes son la reduccin del crecimiento, clorosis en los rganos afectados y deformacin en las flores. Su cuerpo es blando de coloraciones blancas, rosadas o amarillentas. Se diferencian de las escamas porque en los diferentes estados ninfales y adultos tienen la capacidad de moverse durante toda su vida (Rivera 1998).

Los trips son insectos muy pequeos, miden entre 0,5 y 5,0 mm de largo, se caracterizan por tener un aparato bucal raspador-chupador y las alas estn casi desprovistas de venas. Los trips se alimentan de las la superficie tejidos, causando deformacin de los botones as como decoloraciones y estras en ptalos y spalos. Hacen raspaduras en la epidermis de las hojas causndoles una apariencia plateada (Dodson y Gillespie 1967, AOS 1975 y 1995). Las lesiones efectuadas por estos insectos pueden favorecer el ataque de bacterias y la diseminacin de virus (Ching-Liang et al. 2003).

2.4.3.3 caros fitfagos Los caros fitfagos forman colonias numerosas en las hojas y son difciles de observar sin ayuda de la lupa. Poseen un aparato bucal diseado para remover savia y clorofila de la superficie ms externa de la hoja, causando bronceados, que se manifiestan como coloraciones blanquecinas o plateadas. Con el tiempo provocan ligeros hundimientos y reas necrosadas. Estos artrpodos tambin se alimentan de polen de las orqudeas, induciendo una falsa polinizacin y provocando necrosis en los tejidos florales. El signo ms evidente es la aparicin de mudas y a veces telaraas muy finas (AOS 1975, Rivera 1998). Segn Rivera (1998), los caros son muy numerosos en los trpicos y sus poblaciones son reducidas en condiciones ambientales poco alteradas. Los caros se consideran de gran importancia porque comnmente afectan plantas en invernaderos y de forma secundaria pueden transmitir virus (AOS 1975, Freitas-Asta et al. 2002, Ching-Liang et al. 2003). Las especies ms conocidos por sus lesiones en
4

Armadura: estructura de proteccin, formada por secreciones cerosas y mudas ninfales (Rivera 1998).

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orqudeas son Brevipalpus y Tenuipalpidae de la familia Tenuipalpidae (Ochoa et al. 1991), as como Tetranichus (Familia: Tetranichidae) (Rivera y Corrales 2007) (Figura 15).

Figura 15. caros fitfagos de las familias Tarsonemidae (A. Brevipalpus, B. Tenuipalpus) y Tetranichidae (C. Tetranichus) (Fuentes: Ochoa et al. 1991, Mello 2007)

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CAPTULO III. METODOLOGA 3.1 Ubicacin del estudio

3.1.1 Zona Protectora Cerros de la Carpintera La ZPCC est localizada aproximadamente a unos 6,0 km al sureste de San Jos. La cima de los cerros es divisoria de aguas entre la vertiente Atlntica y la vertiente Pacfica. Los tres picos ms altos (los que se conocen propiamente como La Carpintera) tienen altitud entre los 1800 y 1855 m. Otras altitudes importantes son el Cerro Quiraz (1794 m), Alto Lima (1651 m) y Alto Negro (1747 m) (IGNCR 1981 y 1989). Esta regin cuenta con 71 especies en 37 gneros diferentes de orqudeas 5. El clima en La Carpintera presenta el patrn tpico del Valle Central, con una estacin seca de diciembre a abril y otra lluviosa de mayo a noviembre. La zona tiene precipitacin anual de 1.800 2.400 mm, temperatura anual entre 15 23 C y humedad relativa anual entre 70 90% (Ossenbach et al. 2003a). 3.1.2 Orquideario 25 de Mayo

El Orquideario 25 de Mayo (O25M) es una coleccin privada de orqudeas inscrita ante el MINAE como vivero artesanal desde el 8 de Julio del 2003 por medio de la resolucin OSJ-SC-No V-001. Cuenta con 800 plantas cultivadas 6 en un rea de 200 m2, que corresponde a estructuras de madera colocadas en forma vertical y macetas con tierra o sustrato. Las orqudeas estn cultivadas en diferentes tipos de medios: macetas con tierra o sustrato especial (Fibra de coco, carbn y piedra pmez), fibra de coco fijadas a tubos de PVC y sembradas en tierra (orqudeas terrestres) (Figura 16). Esta coleccin privada est ubicada en Sabanilla, cantn de Montes de Oca, San Jos (9 57 latitud norte y 84 02 longitud oeste), a una altitud de 1.250 m. La zona presenta precipitacin anual de 1.820 mm, temperatura anual entre 16 24 C y humedad de 83 % (IMN 2005). El O25M est constituido por colectas a nivel nacional y plantas de viveros con el fin de facilitar los esfuerzos de conservacin in vivo de la familia Orchidaceae. La conservacin de las plantas se realiza por medio de un plan de manejo, que consiste en tcnicas de horticultura, aplicacin de agroqumicos y abonos. Adems se lleva a cabo un registro de la poca de floracin y fotografas digitales de las especies. En este sistema de cultivo se presentan interacciones benficas que tambin ocurren en los ecosistemas poco alterados. Llegan insectos polinizadores que fecundan las flores y existen hongos micorrzicos que ayudan a la germinacin natural de las semillas de las orqudeas.
5 6

Especies autctonas. Especies autctonas y exticas.

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Figura 16. Orquideario 25 de Mayo: Sistema de cultivo de las orqudeas en barandas y macetas

28

El orquideario ha trabajado junto a orquidelogos para promover la investigacin de estas plantas, como son los casos de diferentes publicaciones: Ossenbach 2003, Ossenbach et al. 2003a, 2003b, 2007; y logstica de actividades referentes a las orqudeas: 2do Seminario Mesoamericano de Orquideologa y Conservacin 2001 y 1er Congreso Internacional de Orquideologa Neotropical 2003. Del mismo modo mantiene contacto con taxnomos para la identificacin de las orqudeas. Actualmente el orquideario se interesa en continuar los estudios en la ZPCC, enfocado a la biodiversidad y conservacin ecolgica de esta zona.

3.2

Recoleccin de muestras

Las muestras empleadas en el presente estudio se colectaron mediante el procedimiento de muestreo de juicio 7 a partir de las orqudeas que presentaron problemas fitosanitarios visibles. Las muestras tomadas fueron plantas o secciones de tejido con problemas fitosanitarios y artrpodos provocando lesiones evidentes en ellas. El trabajo se efectu desde febrero del 2006 hasta octubre del 2007 Las muestras de la ZPCC y el O25M fueron aquellas fsicamente accesibles y representativas de la zona. En la ZPCC se usaron mapas cartogrficos y GPS (Global Positioning System) para ubicar senderos y caminos internos de la regin. Debido a que las colectas de La Carpintera incluyeron organismos protegidos legalmente, se cont con el permiso respectivo del MINAE (ANEXO 2). En cada uno de los sitios donde se tomaron las muestras se hizo un registro de la misma y las condiciones ambientales en que se encontraban, con el uso del formato estandarizado del International Plant Genetic Resources Institute (IPGRI) de recoleccin de germoplasma y modificado segn las caractersticas requeridas para este estudio (ANEXO 3). En el campo se realiz un diagnstico preliminar de las posibles causas de los problemas fitosanitarios presentes en las orqudeas. Las muestras fueron empacadas, etiquetadas y llevadas a los Laboratorios de Fitopatologa o de Entomologa de la Escuela de Ciencias Agrarias (ECA) de la Universidad Nacional (UNA), para los anlisis pertinentes. Se efectu el diagnstico fitosanitario de las plantas a partir de los sntomas de las enfermedades o lesiones de artrpodos. En todos los casos se hizo un registro fotogrfico de los problemas fitosanitarios con el uso de cmara digital y rastreo fotogrfico con scaner (ANEXO 5).

Muestreo de juicio: muestreo intencional, para seleccionar una muestra pequea de una poblacin heterognea, ya

que el investigador con su experiencia, puede identificar los elementos que representen lo mejor posible a la poblacin (Quintana 1996).

29

3.3

Anlisis de las muestras vegetales con daos asociados a patgenos

En el Laboratorio de Fitopatologa se registraron las muestras con la informacin recolectada in situ. Cada muestra se incub en cmara hmeda a temperatura ambiente, colocndolas sobre placas petri invertidas dentro de cajas plsticas conteniendo una toalla hmeda. Para conservar la humedad, cada una de las cajas se introdujo en una bolsa plstica transparente. El tiempo aproximado de incubacin fue de 24 a 48 horas. Los patgenos asociados a las muestras se identificaron por medio de los siguientes procedimientos.

3.3.1

Aislamiento de hongos y oomycetes

Se seleccionaron los tejidos con sntomas tempranos de la posible enfermedad, se lavaron y se cortaron segmentos de 5,0 10,0 mm2 de la lnea de avance de la lesin, para despus desinfectarlos superficialmente con alcohol al 70% y luego con hipoclorito de sodio (NaClO) al 0,5%, por inmersin durante 60 segundos. Seguidamente se enjuagaron dos veces consecutivas con agua destilada estril para remover el exceso de cloro. Finalmente se tomaron los cortes con pinzas estriles y se depositaron en papel absorbente estril para remover el exceso de agua. Una vez drenado el lquido, se colocaron en placas petri en el medio de cultivo correspondiente. Los hongos se aislaron en medio de cultivo papadextrosa-agar (PDA) acidificado y los oomycetes en agar agua (AA) en un inicio y luego agar-jugo de vegetales (V8). Indistintamente del medio usado, los cultivos se incubaron en oscuridad a temperatura ambiente por ocho das para que se desarrollaran las estructuras morfolgicas caractersticas para la posterior identificacin.

3.3.2

Aislamiento de bacterias

El procedimiento para el aislamiento de bacterias fue casi idntico al descrito para hongos y oomycetes, con la diferencia de que los tejidos afectados se colocaron en un medio de PDA sin acidificar. Una vez que crecieron las colonias de bacterias, se hizo el reaislamiento por estriado con asa bacteriolgica en un nuevo medio de cultivo, finalmente se obtuvieron cultivos puros a partir de una sola colonia (Arauz 1998).

3.3.3

Identificacin de patgenos

Los hongos y oomycetes se identificaron por sus rasgos morfolgicos, haciendo preparaciones para microscopio en lactofenol azul. La observacin microscpica se hizo, segn cada caso, a partir del material proveniente del campo, material mantenido en cmara hmeda o del crecimiento de cultivos puros. La identificacin se efectu de acuerdo con la presencia o ausencia de rasgos morfolgicos como: tipo de micelio, oosporas, esporangios, acrvulos, coremios, esporodoquios, picnidios, peritecios, conidiforos y conidios.

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Las bacterias se identificaron usando las pruebas bsicas de bacteriologa (APS 2001) como: tincin de Gram, pruebas de anaerobiosis, crecimiento bacterial en los medios Papa-dextrosa (PD), Yeast extractdextrose-CaCO3 (YDC), Yest-pentose agar (YP), Beef-yeast extract alcalino (BY alcalino) y B de King (KB). En el ANEXO 4 se describe la elaboracin de los diferentes medios de cultivo.

La identificacin tentativa de enfermedades virales se hizo con base a los sntomas presentes en las plantas, debido a que no se cont con las facilidades ms precisas de pruebas serolgicas o moleculares. 3.4 Anlisis de muestras con lesiones asociadas a artrpodos

Los artrpodos recolectados se llevaron al Laboratorio de Entomologa de la ECA. Se anot la informacin respectiva de cada individuo: lugar y fecha de recoleccin, hospedante y rgano afectado. El diagnstico involucr la descripcin de los sntomas presentes en las orqudeas y la clasificacin taxonmica de los agentes causales. Los individuos obtenidos se colocaron en el Museo Entomolgico de la ECA, para futuros estudios.

Los artrpodos inmaduros asociados a las plantas se criaron desde larva a adulto en jaulas o recipientes. Se alimentaron con secciones de la planta hospedante y se les dio un ambiente adecuado para evitar la desecacin. Durante su perodo de crecimiento se observaron los individuos, con el objetivo de anotar sus cambios, la aparicin de eventuales controladores biolgicos o registrar la salida de los adultos de su pupa, cuando estaban en proceso de metamorfosis completa.

La identificacin preeliminar de los adultos se hizo con claves dicotmicas, luego verificadas por entomlogos de la UNA, de la UCR y especialistas en el Instituto Nacional de Biodiversidad (INBio).

En varias orqudeas no se present el agente causal; sin embargo, se manifestaron lesiones que son particulares de ciertos insectos. En tales casos se determinaron las familias de los responsables segn el patrn de alimentacin, los sntomas y los signos presentes en los tejidos afectados. En pocas muestras se presentaron sntomas que podan ser causados por diversos tipos de insecto de diferentes rdenes, por lo tanto no se logr asegurar el tipo de organismo responsable de las lesiones.

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CAPTULO IV. RESULTADOS Y DISCUSIN Una vez que se recolectaron las orqudeas con problemas fitosanitarios de los dos sitios estudiados, se realiz el diagnstico correspondiente de las muestras. A continuacin se presentan los resultados de esta investigacin y su respectiva discusin. Primero se har referencia a las enfermedades y posteriormente a los artrpodos. 4.1 Quemadura de sol

Una de las enfermedades ms frecuentes en este estudio fue la quemadura de sol. Esta enfermedad ocurre cuando la radiacin solar es mayor a la requerida por las plantas y puede causar tanto escaldaduras como edemas en los tejidos, afectando su fisiologa (Rivera 1998). Las quemaduras de sol se presentaron en orqudeas de la ZPCC y del O25M (Cuadro 2), pero con menor frecuencia en condiciones naturales. Las especies con esta enfermedad fueron aquellas que evidentemente estaban expuestas a los rayos solares (Lmina 1: 1-2) Cuadro 2. Orqudeas afectadas por quemaduras de sol observadas en la Zona Protectora Cerros de la Carpintera y en el Orquideario 25 de Mayo Sntoma en los rganos afectados Necrosis de las hojas desde del pice hacia la base Orqudeas de ZPCC Orqudeas del O25M

Elleanthus spp., Epidendrum sp., Elleanthus sp., Epidendrum Maxillaria spp.1, Pleurothallis spp., parkinsonianum.2 4, Guarianthe spp., Sobralia sp.3 Maxillaria aciantha 2, Sobralia sp., Stelis sp., Trigonidium egertonianum, Vanilla pompona, Warcewiczella discolor Epidendrum oerstedii 2, Octomeria Necrosis de las hojas en zonas donde ha incidido la costarricensis radiacin solar, con tejido clortico generalizado
Hongos oportunistas: 1 Cladosporium sp., 2 Colletotrichum sp., 3 Pestalotia sp. y 4 Phoma sp.

Las lesiones se presentaron tanto en hojas delgadas (Elleanthus spp., Epidendrum sp., Maxillaria spp., Sobralia sp., Trigonidium egertonianum y Warcewiczella discolor) como en hojas carnosas (Epidendrum oerstedii, E. parkinsonianum, Guarianthe spp., Vanilla pompona, Octomeria costarricensis, Pleurothallis spp. y Stelis sp.), como resultado de la intensidad lumnica mayor a la requerida por las plantas.

Varios autores mencionan que la sobreexposicin de las plantas a radiaciones solares causa daos de importancia en los tejidos y que estas lesiones pueden convertirse en puerta de entrada para ciertos

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microorganismos patgenos (Arauz 1998, Rivera 1998). En las observaciones hechas se logr encontrar hongos oportunistas desarrollndose sobre los tejidos lesionados por los rayos solares, tales como Cladosporium sp., Colletotrichum sp., Pestalotia sp. y Phoma sp. De ellos el ms importante fue Colletotrichum por ser el causante de una de las principales enfermedades en orqudeas (Gutirrez 2005), mientras que los otros tres hongos se consideran como patgenos dbiles y de poca importancia fitopatolgica en orqudeas (APS 1975, Arditti 1987). Sin embargo, Crdenas (2003a) ha encontrado a Cladosporium desarrollando lesiones serias de fumagina en orqudeas.

4.2

Enfermedades biticas

Las enfermedades biticas que se determinaron a lo largo de esta investigacin fueron: antracnosis, marchitez, cercosporiosis, sntomas asociados a patgenos del suelo, roya, mancha foliar asociada a Harpographium sp., mildi negro y pudricin negra. Otras enfermedades correspondieron a manchas foliares por Cephaleuros virescens, enfermedades causadas por bacterias (pudriciones suaves, ampolla negra) y sntomas atribuibles a la infeccin por virus. Los detalles de cada uno de esos problemas de origen bitico se presentan a continuacin.

4.2.1

Antracnosis

Varios autores mencionan que la antracnosis es una de las enfermedades ms importantes en las orqudeas, as mismo hacen referencia a la variedad de sntomas que desarrolla (Dodson y Gillespie 1967, AOS 1975 y 1995, Arditti 1986, Rivera 1990, 1992 y 1998, ngel 2001, Crdenas 2003a, Gutirrez 2005, Martin 2006, Rivera y Corrales 2007 y 2008, Salazar et al. 2007, Surez y Mora 2007). En los resultados de esta investigacin se registraron diversos hospedantes, con antracnosis en diferentes rganos y sntomas variables segn la especie de orqudeas (Cuadros 3 y 4). Esta enfermedad se encontr en hojas (Lmina 1: 3-5, Lmina 2: 2-3), seudobulbos (Lmina 1: 6, Lmina 2: 1-2), frutos (Lmina 2: 3) y flores (Lmina 2: 4-5).

En este estudio la antracnosis fue determinada en nueve gneros distintos a los mencionados por (Rivera y Corrales 2007), los cuales correspondieron a Comparettia, Lepanthes, Oerstedella, Osmoglossum, Phragmipedium, Prosthechea, Stelis, Stenorrhynchos y Warcewiczella. Esto ampla ms el mbito de hospedantes en orqudeas en Costa Rica, y hace suponer que a futuro se puedan encontrar nuevos gneros de la familia Orchidaceae con esta enfermedad.

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Cuadro 3. Orqudeas de la Zona Protectora Cerros de la Carpintera con antracnosis Orqudeas Comparettia falcata, Epidendrum barbeyanum, Maxillaria sp., Prosthechea lvida Epidendrum sp., Maxillaria sp., Oerstedella spp., Warcewiczella sp. Lepanthes sp.1 Epidendrum spp.2, Maxillaria sp. Sntoma en los rganos afectados Hojas y frutos con manchas necrticas ovaladas, hundimiento del tejido

Hojas con manchas necrticas redondeadas que tornan a color caf, leve hundimiento del tejido Hojas con manchas de color rojo y el tejido hundido Hoja con manchas necrticas o caf, ovaladas o redondas con hundimiento leve o profundo segn el tipo de hoja Stelis sp. Hojas con manchas necrticas irregulares y hundimiento del tejido 1 Xylobium sp. Hojas y seudobulbos con manchas necrticas redondas y una leve hundimiento de los tejidos Prosthechea livida, Oncidium spp., Hojas y seudobulbos con manchas necrticas redondas y un Xylobium sp.1 leve hundimiento de los tejidos Seudobulbo con manchas necrticas o grises, redondeadas o Prosthechea ochraceae irregulares con leve depresin 1 Especies que presentaron la forma sexual de la enfermedad (Glomerella sp.) 2 Una de las especies tuvo crecimiento de Pythium sp. en forma secundaria. Cuadro 4. Orqudeas del Orquideario 25 de Mayo con antracnosis Orqudeas Epidendrum coronatum, E. parkinsonianum, Lockhartia oerstedii Phragmipedium longifolium, Stenorrhynchos speciosum, Trigonidium egertonianum Stelis sp. Oncidium sp. Laelia undulata, Prosthechea livida1, Xylobium squalens Epidendrum coronatum Cochleanthes aromatica, Osmoglossum egertonii, Pescatorea cerina, Prosthechea lvida Epidendrum barbeyanum, E. coronatum Huntleya burtii Sntoma en los rganos afectados Hojas con manchas necrticas ovaladas, con hundimiento del tejido Hojas con manchas necrticas redondas de color caf, con leve hundimiento del tejido Hojas con manchas necrticas en el haz formando una gran mancha, pero con leve hundimiento del tejido Hojas con manchas necrticas ovaladas con un halos amarillo, hundimiento del tejido Seudobulbo con manchas necrticas ovaladas o irregulares, con hundimiento del tejido Flores con manchas necrticas irregulares o redondeadas, con hundimiento del tejido Flores con manchas necrticas redondas y leve hundimiento del tejido Flores con manchas necrticas irregulares o redondeadas, con hundimiento del tejido Flores con manchas caf redondeadas formando anillos concntricos Aborto de flores Flores con necrosis en el pednculo, provocando su cada

Acineta densa Epidendrum oerstedii, Rossioglossum schlieperianum 1 Especie que present la forma sexual de la enfermedad (Glomerella sp.).

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La literatura seala que Colletotrichum spp. puede presentar la fase perfecta del hongo llamada Glomerella (Sutton 1980, Bailey y Jerger 1992), lo cual se observ por Rivera y Corrales (2003a) en 31 gneros de orqudeas incluyendo hbridos de Cattleya. En el presente trabajo se observ tambin la fase teliomrfica del hongo en tres gneros: Xylobium, Lepanthes (Cuadro 3) y Prosthechea (Cuadro 4) donde las dos ltimas plantas son nuevos informes.

La aparicin de Glomerella y Colletotrichum como agentes causantes de la antracnosis demuestra la amplia diversidad morfolgica y patognica de este hongo en orqudeas. Las investigaciones de Broker et al. (1991) muestran que este tipo de hongo hallado frecuentemente en la forma mitosprica, recurren a la recombinacin sexual para generar variabilidad gentica.

4.2.2

Marchitez de las orqudeas

La marchitez de las orqudeas es una enfermedad que est ampliamente documentada (Arditti 1987, AOS 1995, Rivera 1990, 1992 y 1998, Rivera y Corrales 2007). El origen de este problema es la infeccin causada por Fusarium spp. en las races y el rizoma. Rivera (1998) comenta que los sntomas son pudriciones secas, asociada a diversos tonos de prpura o rosa en el tejido del rizoma, acompaadas por deshidratacin y distorsiones en la parte superior de la planta.

La marchitez se present en las dos zonas de muestreo, pero con mayor incidencia en el O25M (Cuadro 5). La enfermedad caus pudriciones secas en las races y rizomas de las orqudeas, asociadas a coloraciones prpura y rosadas en las zonas de avance de las infecciones. Se identific por un decaimiento de las plantas, coloracin verde claro o amarillenta de los seudobulbos y acucharamiento de hojas carnosas. En Costa Rica las infecciones por Fusarium se han determinado en 14 gneros de orqudeas (Rivera y Corrales 2007). En este trabajo el patgeno estaba asociado a varios de esos gneros, de los cuales Prosthechea es un nuevo informe.

La presencia de Fusarium fue distinta en las dos zonas de estudio; por un lado, en las orqudeas de la ZPCC no causaban enfermedades de tipo terminal (Lmina 2: 6), mientras que en el O25M las infecciones eran ms agresivas (Lmina 3: 1-2). En condiciones naturales haba equilibrio ecolgico debido a la diversidad de elementos y factores que eventualmente controlaban los procesos infecciosos del patgeno. En el orquideario la enfermedad de marchitez se favoreca por desbalances ecolgicos, donde las orqudeas se hallaban en un monocultivo, colocadas muy cercanas entre s y se realizaban aplicaciones de fungicidas que controlaban los patgenos, pero tambin mataban los controladores biolgicos.

35

Cuadro 5. Orqudeas afectadas por marchitez causadas por Fusarium sp. en la Zona Protectora Cerros de la Carpintera y en el Orquideario 25 de Mayo
Orqudeas de la ZPCC Prosthechea spp. Sntoma en la planta Marchitez de la planta, con pudricin seca en rizoma. Amarillamiento de los seudobulbos Orqudeas del O25M Brassia verrucosa, Oncidium warzcewiczii Epidendrum parkinsonianum Guarianthe skinneri Sntoma en la planta Marchitez de la planta, pudricin seca, coloracin roja en corte longitudinal del rizoma Raquitismo general de la planta, hojas rojizas, decoloracin del rizoma Marchitez de la planta, con pudricin seca del rizoma

4.2.3

Cercosporiosis

En condiciones silvestres esta enfermedad solamente se determin en Epidendrum radicans, afectando tejidos florales, mientras que en la coleccin se present en varias especies con infecciones en el follaje. En todo el mundo se han descrito manchas foliares en muchos gneros de orqudeas causadas por Cercospora spp. (Arditti 1987, Farr et al. 1989) y en Costa Rica se ha documentado en 23 gneros (Rivera y Corrales 2007). Como se muestra en el Cuadro 6 las infecciones causadas por Cercospora sp., fueron ms frecuentes en el O25M que en la ZPCC. En cultivo se presentaron diferentes patrones de manchas foliares (Lmina 3: 3-4), mientras que en La Carpintera solo se present formando manchas levemente hundidas de color blanco o gris en ptalos y spalos (Lmina 3: 5). Cuadro 6. Orqudeas con manchas foliares ocasionadas por Cercospora sp.
Zona de Especies colectadas muestreo ZPCC Epidendrum radicans O25M Stelis sp. Maxillaria cedralensis M. cucullata M. endresii Oncidium storkii Paphiopedillum wardii Sntoma en los tejidos afectados Manchas foliares blancas o de color grisceo en las flores Manchas necrticas y caf oscuro diminutas principalmente por el envs y por el pice de las hojas Diminutas manchas necrticas y caf oscuro a lo largo del tejido foliar con un halo amarillento, coalescen en una mancha clortica Manchas necrticas en la lmina foliar con un halo amarillento Manchas necrticas en la lmina foliar causando una depresin del tejido, con un halo amarillento alrededor de la necrosis

La literatura consultada informa que las infecciones de Cercospora ocurren en hojas y no en flores. La infeccin de este hongo en las flores de E. radicans pudieron suceder de la misma forma en que ocurre en las hojas. Rivera (1998) explica que Cercospora infecta el follaje cuando es joven y desarrollan los

36

sntomas cuando los tejidos envejecen; en las flores se vieron las infecciones los tejidos cuando estaban en senescencia.

4.2.4

Presencia de patgenos habitantes del suelo en orqudeas epfitas

La infeccin de los patgenos de suelo se ha documentado por varios autores en orqudeas epfitas (i.e. Arditti 1987, AOS 1995, Rivera 1998, Gioria 2004, CAES 2007). En muchos casos esto obedece a malas prcticas de cultivo, donde se utilizan herramientas sin desinfectar, se usan sustratos contaminados o las plantas estn cercanas al suelo. Los patgenos de suelo son Phytophthora, Pythium, Armillaria, Rosellinia, Fusarium, Rhizoctonia, Verticillium y Ceratocystis, los cuales suelen diseminarse por el salpique de agua (Arauz 1998).

En el O25M solo se present Rhizoctonia sp. en Lycaste (Lmina 3: 6) y en la ZPCC se presentaron Rhizoctonia sp. en Lepanthes sp. y Stelis sp.; Verticillium sp. en Prosthechea ochraceae (Lmina 4: 1); y Pythium sp. en Epidendrum sp. En el Cuadro 7 se desglosan los patgenos de suelo asociados a las orqudeas recolectadas en los dos sitios evaluados.

Rhizoctonia caus claras lesiones en Lycaste, mientras que en Lepanthes y Stelis se detect cuando se analizaron los aislamientos a partir de tejidos que originalmente presentaban antracnosis (Cuadro 3). No se pudo determinar la relacin que tena Rhizoctonia con las muestras que provenan de La Carpintera, sin embargo pudo ser un hongo patgeno en estado latente o tal vez un organismo endoftico. Estudios hechos por Otero et al. (2002) explican que este hongo tiene diversidad y especificidad de hospedantes de orqudeas, tanto como patgeno como organismo endoftico. Cuadro 7. Orqudeas en las cuales se determin la presencia de patgenos habitantes del suelo en la Zona Protectora Cerros de la Carpintera y en el Orquideario 25 de Mayo Sitio de muestreo O25M ZPCC Orqudeas infectadas Lycaste sp. Lepanthes sp. Stelis sp. Prosthechea ochraceae Epidendrum sp. Enfermedad Marchitez Asintomtica Asintomtica Marchitez Asintomtica Patgeno asociado Rhizoctonia sp. Rhizoctonia sp. 1 Rhizoctonia sp. 1 Verticillium sp. Pythium sp. 1 Sntoma en los tejidos Necrosis de la base del seudobulbo y clorosis generalizada Races asintomticas Races asintomticas Marchitamiento de la planta, races dbiles y con pudricin seca Tejidos asintomticos

1 Presencia de estos patgenos en forma secundaria a partir de aislamientos de tejido con sntomas de antracnosis.

En las races de Prosthechea ochracea se desarroll un micelio blanco que correspondi al hongo del gnero Verticillium. La planta tena clorosis generalizada y sntomas de antracnosis en los seudobulbos

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(Cuadro 3). La planta se encontraba en condiciones precarias, se hall bajo la sombra de rboles en el suelo reducindose su capacidad fotosinttica, estaba infectada por Colletotrichum y adems tena deficiencias nutricionales. Bajo estas circunstancias era mayor la probabilidad de que algn hongo fitfago oportunista se encontrara asociado a la planta.

Pythium se encontr como organismo secundario en tejidos de Epidendrum infectados por Colletotrichum sp. (Cuadro 3), posiblemente ese oomycete se desarroll a partir de propgulos presentes en esos tejidos cultivados en el laboratorio. Se conoce que Pythium es como un organismo patgeno de suelo asociado a especies de orqudeas (Arditti 1987, AOS 1995), por lo tanto tambin se incluy en los resultados.

4.2.5

Roya

En Costa Rica se ha identificado roya en orqudeas por infeccin de los gneros Sphenospora y Uredo (Rivera 1998). Rivera y Corrales (2007) han encontrado a Uredo asociado a siete gneros de orqudeas y en esta investigacin Pleurothallis es un nuevo hospedante. Esta enfermedad correspondi al desarrollo de pstulas por el envs de las hojas y clorosis en los tejidos infectados (Lmina 4: 2).

La roya solo se encontr en la ZPCC, en un rea de suelo desnudo, con alta deforestacin y poca variabilidad interespecfica. En este tipo de ambientes el balance natural se ha roto y se incrementan los problemas fitosanitarios. En Costa Rica la roya en orqudeas se ha identificado en jardines y colecciones privadas (Rivera y Corrales 2007), pero este es el primer reporte de roya proveniente de condiciones silvestres.

4.2.6

Mancha foliar asociada a Harpographium sp.

En la ZPCC se hall Lepanthes sp. con una mancha foliar necrtica ovalada en el pice de la hoja y con crecimiento de micelio blanco alrededor de la lesin (Lmina 4: 3). El hongo asociado al tejido enfermo se identific como Harpographium sp.

Farr et al. (1989) mencionan que Harpographium se considera fitopatgeno solo en plantas de Carya sp. (Juglandaceae) y Platanus sp. (Platanaceae), por lo tanto no se puede asegurar su capacidad de infectar orqudeas. Este organismo no se ha documentado como patgeno en orqudeas; se deberan realizar estudios de patogenicidad para constatar si Harpographium es capaz de infectar orqudeas.

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4.2.7

Mildi negro

El hongo causante de esta enfermedad se identific como Meliola sp. asociado a una planta de Maxillaria sp. de la ZPCC. Esta enfermedad se ha documentado en varias especies de orqudeas en pases tropicales (Arditti 1987, ngel 2001) incluyendo Costa Rica (Rivera 1998, Crdenas 2003a, Rivera y Corrales 2007).

En la orqudea afectada se observ crecimiento de un micelio negro tanto por el haz como por el envs de las hojas, sin causar infeccin del tejido (Lmina 4: 4). Se observaron manchas clorticas en las partes que se desarrollaba el hongo, esto porque estaba bloqueando el paso de la luz y por ende afectando los procesos fotosintticos. La planta se encontr en un ambiente con alta humedad y bajo sombra, las cuales son las condiciones que Arditti (1987) menciona como las condiciones en que crece el mildi negro.

4.2.8

Pudricin negra

La pudricin negra se ha diagnosticado en diferentes partes del mundo y se considera una de las enfermedades ms dainas en las orqudeas, que causa frecuentes prdidas en invernaderos (Crdenas 2003a). La pudricin negra es una enfermedad cosmopolita que afecta muchos gneros de orqudeas (Arditti 1987).

La nica orqudea que se hall con sntomas de pudricin negra fue Guarianthe skinneri presente en el O25M, causada por Phytophthora sp. La planta afectada mostraba avance de la necrosis desde la base del seudobulbo (Lmina 4: 5). Los tejidos de las hojas, seudobulbos y flores fueron tornndose negros y blandos, para luego provocar la cada de las hojas y botones florales. Tambin se encontr Pythium sp. en Epidendrum de la ZPCC, pero creciendo como organismo secundario en un aislamiento de tejidos con antracnosis (Cuadros 3 y 7). Como se mencion en la seccin 4.2.4, este oomycete posiblemente se origin a partir de propgulos en tejido aislados en PDA acidificado.

Estos agentes causales no se consideraron de gran importancia, debido a que se presentaron solo una vez en cada uno de los sitios de estudio. No obstante, no se omite su relevancia, ya que son patgenos que provocan enfermedades letales en orqudeas cultivadas en todo el pas (Rivera y Corrales 2007).

4.2.9

Falsa roya o mancha de Cephaleuros virescens

La falsa roya, causada por el alga C. virescens, puede aparecer en una amplia variedad de especies vegetales. Las plantas susceptibles a esta enfermedad son especies tropicales tanto cultivadas como

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silvestres (Ordosgoitti 1999, Lpez-Bautista et al. 2002, ACES 2003, APS 2004, Rivera y Corrales 2005b). En el trabajo realizado, C. virescens se observ nicamente en el O25M sobre hojas de Sobralia sp. y Stelis grandis (Lmina 4: 6); no se encontr en orqudeas de la ZPCC, pero no se descarta su presencia en bosque natural, puesto que hay mayor diversidad biolgica que en condiciones de cultivo. Esta alga se ha encontrado en Costa Rica en 11 gneros de orqudeas (Rivera y Corrales 2007) y en esta investigacin Stelis llega a ser un nuevo informe. Los sntomas causados por C. virescens iniciaron con el crecimiento de una mota amarilla que correspondi a los cuerpos fructferos del alga, conforme aumentaba su colonizacin en los tejidos foliares provocaba manchas necrticas.

4.2.10 Enfermedades causadas por bacterias Los causantes de estas enfermedades suelen ser bacterias de los gneros Erwinia, Pseudomonas, Pantoea y Xanthomonas (Arditti 1987), pero tambin hay otros informes como Acidovorax (Rivera 1998, ngel 2001, APS 2001, Stovold et al. 2001, Surez y Mora 2007) y Burkholderia (Keith et al. 2003).

En esta investigacin se presentaron dos tipos de enfermedades causadas por bacterias, las pudriciones suaves y la ampolla negra. Las pudriciones suaves se encontraron en hojas y seudobulbos, mientras que la ampolla negra se present solo en seudobulbos.

Las pudriciones en las hojas correspondieron a manchas de apariencia acuosa. En un inicio adquirieron tonos verde oliva a verde grisceo y negro, con frecuencia los tejidos presentaron una consistencia blanda al tacto. En los seudobulbos se mostraron tejidos con decoloraciones verde oscuro o caf, flacidez y corrugamiento de los tejidos, acompaado en ciertos casos de olores nauseabundos.

Las pudriciones en hojas y seudobulbos fueron causadas por Erwinia sp. en las dos zonas de estudio (Lmina 5: 1-2), y solamente una vez se identific Acidovorax sp. infectando seudobulbos en condiciones silvestres (Lmina 5: 3) (Cuadro 8). Estas bacterias se han documentado por varios autores como patgenos en sistemas de cultivo (AOS 1975, Arditti 1987, Rivera y Corrales 2007, Suarez y Mora 2007), pero a partir de esta investigacin se documentan en orqudeas colectadas en condiciones silvestres.

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Cuadro 8. Orqudeas con pudricin bacteriana en especies de la Zona Protectora Cerros de la Carpintera y el Orquideario 25 de Mayo
Orqudeas de la ZPCC Pleurothallis spp.1 Sntoma Pudricin suave de forma circular en el tejido foliar, con el centro necrosado y un halo acuoso Pudricin suave con necrosis o clorosis en seudobulbos Orqudeas del O25M Brassia gireoudiana 1, Coeliopsis sp.1, Eriopsis wercklei 1 Sntoma Machas necrticas y clorticas en las hojas, con un halo de apariencia acuoso o aceitoso

Maxillaria sp.1, Lycaste sp. 1, Pudricin suave con necrosis y 1 Prosthechea sp. , Scaphyglottis clorosis en los seudobulbos Oncidium globuliferum 2 imbricata1 1: Infecciones de Erwinia 2: Infecciones de Acidovorax. Para la identificacin de esta bacteria se realizaron la prueba bacteriolgica especfica para identificar A. avenae subsp. cattleyae (APS 2001).

Las enfermedades bacterianas en las plantas de los cerros se observaron principalmente en muestras que estaban en el suelo de los senderos, charcos o tierra hmeda, excepto O. globuliferum que se encontr en una cerca pero en un ambiente muy sombreado y con alta humedad relativa. El nmero de plantas afectadas por bacterias fue mayor en cultivo que en condiciones silvestres. Esto se explica porque los patgenos se desarrollan con ms facilidad en condiciones alteradas que en condiciones silvestres. En cultivo las plantas estn muy juntas entre s y al trabajar con ellas se producen frecuentes heridas, de esta forma se facilita la entrada de bacterias fitopatgenas.

La ampolla negra fue determinada nicamente en el O25M afectando plantas de Brassia sp. y Scaphyglottis lindeniana (Lmina 5: 4), las cuales presentaron lesiones en el seudobulbo. Los sntomas correspondieron a la formacin de un saco de contenido acuoso-gelatinoso bajo la epidermis. Mientras Brassia sp. present hundimiento del tejido, en S. lindeniana se manifest un abultamiento. Xanthomonas se reconoce como una bacteria asociada al desarrollo de la Ampolla Negra en las orqudeas (Crdenas 2003b, Rivera y Corrales 2005b), pero no se haba comprobado su fitopatogenicidad. Segn pruebas recientes se demostr que esta bacteria es la causante de los sntomas en las dos orqudeas mencionadas (Arias 2007).

4.2.11 Enfermedades causadas por Virus Otros problemas fitosanitarios observados fueron sntomas atribuibles a virus tanto en el O25M como en la ZPCC. Las orqudeas que presentaron estos problemas se encontraron principalmente en el O25M, mientras que en la ZPCC solo se hall una planta afectada (Cuadro 9).

Se considera que las infecciones de virus en las orqudeas pueden ocurrir en condiciones silvestres de forma natural (Kado 1964 citado por Chacn 2002), sin embargo en la literatura consultada hay ms

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informes de estas enfermedades en orqudeas cultivadas (Chacn 2002, Ortiz-Arias 2002, Ortiz-Arias et al. 2003). que en la naturaleza (Mndez et al. 2002, citado por Chacn 2002).

La orqudea colectada en la ZPCC se hall con sntomas atribuibles a infecciones virales (Lmina 5: 5). Esta planta estaba en bosque secundario, alejada de sitios disturbados o sistemas agrcolas; es posible que las lesiones se hayan manifestado de forma natural.

En las plantas cultivadas en el O25M presentaron mayor cantidad de daos asociados a virus, mostrando claros sntomas en los tejidos foliares (Lmina 5: 6). Esto se explica por la introduccin de plantas provenientes que eventualmente haba pudieron acarrear partculas virales. Chacn (2002) afirma que el ingreso de plantas provenientes de viveros aumenta el riesgo de ingreso y diseminacin de virus, lo cual se incrementa cuando se efectan malas prcticas de cultivo.

Aunque no se hicieron las pruebas correspondientes para detectar los virus, se determin su presencia a partir de sntomas que tpicamente provocan en las orqudeas (Rivera 1998, Chacn 2002, Ortiz-Arias 2002, Ortiz-Arias et al. 2003). Los orquidelogos coinciden que hay gran cantidad de investigacin de virus en orqudeas cultivadas 8, lo cual permite que se puedan asociar ciertos sntomas con la presencia o ausencia de virus, aunque para asegurar esto son necesarias las pruebas biomoleculares. 9 Cuadro 9. Orqudeas con sntomas asociados a la infeccin de virus colectadas en la Zona Protectora Cerros de la Carpintera y el Orquideario 25 de Mayo Sitio de muestreo ZPCC O25M Especies Sntoma en los tejidos de las orqudeas

Prosthechea sp. Manchas necrticas con leve hundimiento, formando un patrn de anillos, con halo clortico Oncidium sp. Rombos clorticos a lo largo de las hojas Oncidium sp. Manchas necrticas irregulares formando un leve hundimiento. Al unirse se forman rombos, con halo clortico Laelia undulata Manchas necrticas irregulares formando un hundimiento de tejido, al coalescer se forman rombos, con halo clortico. Inicia con manchas clorticas de forma romboidal Maxillaria sp. Manchas necrticas irregulares formando un hundimiento de tejido, que coalescen formando rombos con halo clortico Maxillaria sp. Manchas clorticas a lo largo de la hoja, con pequeas manchas necrticas agrupadas formando una gran mancha Trichopilia sp. Manchas necrticas diminutas formando un diseo en forma de rombo

8 9

Pupulin F. 2005. Horticultura. Jardn Botnico Lankester, UCR, Cartago. Comunicacin personal Rivera G. 2006. Virus en orqudeas. Laboratorio de Fitopatologa, UNA, Heredia. Comunicacin Personal

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4.3

Comparacin de las enfermedades en las dos zonas de estudio

La identificacin de las enfermedades de las orqudeas es importante para el control de sus amenazas reales o potenciales. El estudio de las enfermedades se ha realizado principalmente en sistemas de cultivo, como respuesta del ser humano para mantener la buena calidad sanitaria de las plantas, pero tambin es importante hacer investigaciones en sistemas silvestres, con el objetivo de tener una visin global de las enfermedades que las afectan. La conservacin de las orqudeas es posible cuando se brindan las condiciones que permiten mantener los sistemas en que viven.

La quema de sol y la antracnosis fueron dos enfermedades comunes en las orqudeas recolectadas. La quema de sol es causada por exceso de luz solar, mientras que la antracnosis es una causada por infecciones de Colletotrichum que desarrolla manchas necrticas; tanto en condiciones silvestres como en cultivo se observaron estas dos enfermedades con mayor frecuencia. Por otra parte, en las dos zonas de estudio se encontraron otros problemas menos frecuentes que fueron la marchitez de las orqudeas, la cercosporiosis, infecciones de bacterias y los sntomas atribuibles a la infeccin de virus.

En las dos zonas de estudio tambin se encontraron oomycetes, los cuales causan la pudricin negra, pero solo se observaron sus sntomas en Guarianthe, causados por Phytophthora en el orquideario 25 de mayo, mientras que en La Carpintera Pythium se determin de forma secundaria a partir de tejidos con lesiones de Colletotrichum.

Otro patgeno colectado en las dos zonas fue Rhizoctonia, pero al igual que en el caso anterior, solo provoc sntomas en el O25M, mientras que en la ZPCC se observ asociado a las plantas de forma secundaria.

Todas las enfermedades antes mencionadas fueron ms frecuentes y ms agresivas en las especies colectadas del O25M que en la ZPCC, por lo tanto se estima que en cultivo se presentaron las condiciones ideales para el desarrollo de dichos problemas fitosanitarios, mientras que en condiciones silvestres haba factores y elementos autctonos que controlaban su desarrollo.

Las enfermedades que solo se manifestaron en La Carpintera fueron la roya, mancha foliar asociada a hongos de Harpographium y mildi negro, mientras que en el Orquideario lo fueron la falsa roya y la ampolla negra. Estas enfermedades no se consideraron de importancia debido a que no fueron muy frecuentes, pero su presencia muestra la variedad de patgenos que pueden desarrollarse tanto en ecosistemas naturales como en sistemas cultivo.

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En la Figura 17 se observa la frecuencia de problemas causados por patgenos en las dos zonas de estudio.

Figura 17. Cantidad de gneros de orqudeas con sntomas de enfermedades en los dos sitios de estudio En las condiciones de cultivo hay menor estabilidad ecolgica por lo tanto es normal encontrar problemas fitosanitarios, mientras que en condiciones silvestres los problemas que se desarrollan no ocurren en cualquier parte del sistema, sino que se manifiestan solo bajo condiciones donde las relaciones antagnicas se favorecen. Por estas razones se hizo un desglose de las enfermedades que se encontraron en las diferentes regiones de ZPCC (Figura 18). Las diferentes regiones correspondieron a:

Bosque Primario: zona poco explorada por el ser humano, con mayor equilibrio ecolgico Bosque Secundario: zona alterada por el ser humano o por desastres naturales, pero con procesos que propician el equilibrio ecolgico Charral: lugares con matorrales espesos con especies pioneras reas Disturbadas: zonas de cultivo, pastoreo o suelo desnudo

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Figura 18. Cantidad de gneros de orqudeas con enfermedades en las diferentes zonas de muestreo de la Zona Protectora Cerros de la Carpintera Se observ que la antracnosis estaba en todas las zonas de muestreo de La Carpintera, pero con mayor incidencia en el bosque secundario. En bosque primario se presentaron menos patgenos, mientras que en bosque secundario, charral y reas disturbadas hubo ms enfermedades. Las nicas enfermedades que se consideran letales fueron pudriciones suaves causadas por bacterias, la pudricin negra y marchitez de las orqudeas.

4.4

Lesiones ocasionadas por artrpodos

En la interrelacin planta-herbvoro, las orqudeas siempre se vern afectadas por los artrpodos fitfagos. Estos organismos causan diferentes tipos de sntomas en las plantas, pero solo se consideran plagas en sistemas de cultivo, mientras que en el ecosistema son parte esencial del balance natural.

Durante el desarrollo de esta investigacin se encontraron sntomas provocados por insectos masticadores, insectos succionadores de savia y caros. Los insectos se presentaron en ambas zonas de muestreo, mientras que los caros solo se observaron en la ZPCC. A continuacin se describe el diagnstico fitosanitario de las diferentes las lesiones causados por estos organismos.

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4.4.1

Lesiones causadas por insectos masticadores

Las lesiones ms frecuentes fueron mordeduras y raspaduras de tejidos, en menor grado se presentaron distintos tipos de minas. Tambin se observaron casos aislados de agallas en races y lesiones por oviposiciones en hojas y seudobulbos.

Los organismos responsables de los sntomas se agruparon de la siguiente forma: Herbvoros generalistas: Cuando se encontraron las lesiones sin el agente causal no se pudo determinar alguna familia especfica de insectos fitfagos. Los sntomas correspondan a mordeduras de tejidos sin ningn patrn definido de alimentacin. Se consider que los posibles agentes causales fueron grillos (Familia: Gryllidae), chapulines (Familias: Acrididae o Tettigoniidae) o larvas de diferentes familias de lepidpteros o colepteros. Coleoptera: Solo en dos casos se observaron colepteros de las familias Chrysomelidae (Subfamilia: Galerucinae) y Curculionidae, los sntomas que causaron en las hojas fueron raspaduras y cortes curvos en lminas foliares respectivamente. En races se vieron agallas asociadas a unas larvas de curculinidos. Otros sntomas fueron las perforaciones en flores que posiblemente las causaron curculinidos del gnero Stethobaris, conocidos como los picudos de las flores (ngel 2001). Larvas de Lepidoptera: Se refiere a diferentes familias de mariposas nocturnas que en sus etapas inmaduras se alimentan de las orqudeas, causando mordeduras en diferentes tejidos o haciendo minas en hojas. Larvas de Diptera: las larvas de algunos dpteros causan minas diminutas en tejidos carnosos, parecidas a las que hacen larvas de lepidpteros, colepteros e himenpteros. Para realizar las lesiones se ayudan de un gancho bucal que es un tipo de mandbula modificada. Hymenoptera: Este es un orden muy amplio con especies de hbitos muy diferentes, algunos pueden desarrollar minas foliares, agallas en races y habitar dentro de los tejidos de las orqudeas (ngel 2001, Gates 2002b). Cuando se hallaron lesiones de esta naturaleza, sin presencia del agente causal, se determin que pudieron ser provocadas por estos insectos. En un caso se observ un himenptero de la familia Eurytomidae asociado a agallas en races. Tettigoniidae: Aunque no se hallaron insectos de estas familias provocando lesiones se relacionaron con orificios en hojas que son capaces de hacer orificios al ovipositar dentro de las hojas (Saunders et al. 1998, Coto y Saunders 2004).

En los ltimos aos se han publicado trabajos acerca de los insectos masticadores en las orqudeas en los trpicos (AOS 1975 y 1995, Rivera 1990 y 1998, Janzen y Hallwachs 1999, Monge 2000, ngel 2001,

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Corrales y Rivera 2003, Martin 2006, Calvo 2007, Rivera y Corrales 2007 y 2008, Salazar et al. 2007 y 2008), pero la mayora de estas investigaciones no profundizan en el tipo de lesiones que causan los lepidpteros, colepteros y dpteros. A continuacin se desglosan los resultados de los insectos que afectaron las orqudeas as como los sntomas asociados a estas plantas.

4.4.1.1 Mordeduras y raspaduras de tejidos Los insectos masticadores como los chapulines, larvas de lepidpteros y algunos colepteros pueden afectar negativamente las orqudeas (Dodson y Gillespie 1967, AOS 1975, Gioria 2004); sin embargo, solo algunas especies de curculinidos de los gneros Stethobaris y Xylosandrus se consideran de importancia en las orqudeas en Costa Rica (Rivera y Corrales 2007).

Los tejidos mordidos o raspados se hallaron con frecuencia en las dos zonas de estudio, en hojas, seudobulbos, flores y races. Los insectos asociados a las lesiones no causaron la muerte de las orqudeas, pero se deben tomar en cuenta como plagas potenciales bajo condiciones de cultivo intensivo. En el Cuadro 10 se desglosan los resultados de los diferentes insectos masticadores que causaron los sntomas en las muestras recolectadas.

Los sntomas efectuados por herbvoros generalistas se presentaron en 12 gneros en la ZPCC (Lmina 6: 1-2) y ocho gneros en el O25M (Lmina 6: 3-4). Las lesiones no causaron la muerte de las plantas y tampoco provocaron infecciones secundarias en los tejidos. No se comprob cuales especies estaban relacionadas con los sntomas descritos, sin embargo se observaron grillos (Familia: Gryllidae) y chapulines (Familias: Acrididae y Tettigoniidae) cercanos a las plantas afectadas.

Se lograron identificar larvas de las familias Tortricidae (gnero Tina), Geometridae, Acrolophidae y Limacodidae (gnero Acharia sin. Sibine). Las lesiones se observaron en diferentes partes de las plantas, tanto en reas silvestres como en el orquideario.

Los tortrcidos se asociaron al gnero Oerstedella en la ZPCC y a los gneros Cyrtopodium, Epidendrum, Oerstedella, Polystachya y Warcewiczella en el O25M (Cuadro 10). Las larvas de estos insectos eran pequeas (7,0 12,0 mm de largo) (Lmina 6: 5) y cuando eran molestadas se contorsionaban hacia atrs. El principal signo fue la secrecin de seda para enrollar los tejidos foliares y florales, esto con el fin de crear un refugio para pupar (Lmina 6: 6, Lmina 7: 1). Las formas adultas se caracterizaron por ser polillas pardas o amarillentas con una envergadura de 12,0 30,0 mm (Lmina 7: 2).

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Cuadro 10. Mordeduras y raspaduras en tejidos en las orqudeas recolectadas en la Zona Protectora Cerros de la Carpintera y el Orquideario 25 de Mayo
Agente causal Herbvoros Generalistas Sntoma Destruccin de los tejidos de la lmina foliar 1 Especies afectadas de la ZPCC Acianthera cogniauxiana, Epidendrum spp., Macroclinium spp., Maxillaria spp., Oerstedella sp., Oncidium spp., Pleurothallis spp., Prosthechea spp., Stelis spp., Stenorrhynchos sp., Warcewiczella sp. Xylobium spp. --Especies afectadas del O25M Epidendrum sp., Pleurothallis spp., Prescotia stachyodes, Prosthechea crassilabia, Stelis sp.

Ptalos y spalos comidos 1 Larvas de lepidpteros

Arpophyllum giganteum, Laelia undulata, Maxillaria hedwigiae, Miltoniopsis roezlii Warcewiczella discolor2,3, Cyrtopodium macrobulbum 4, Stelis sp.5, Epidendrum phyllocharis 2,6 Elleanthus alberti 3, Polystachya foliosa 4 Epidendrum laucheanum5, E. radicans3 Oerstedella exasperata 3, 12 Arpophyllum giganteum 7, Oncidium sp.7, Sobralia chrysostoma 7, Brassia gireoudiana 8, Osmoglossum convalaroides8

Destruccin de tejido Oerstedella sp. 2,3 a lo largo de la hoja Ptalos, spalos y pednculos comidos Pednculo de la flor masticado en la base Seudobulbos rodos y races masticadas. Signos de heces adheridas a una seda resistente Epidendrum sp.2,5, E. laucheanum 5 --Oncidium spp.8, Prosthechea sp.8

Cortes curvados en Acianthera sicaria1, Pleurothallis sp. 9 1 el margen de las Epidendrum sp. , hojas (patrn en Pleurothallis spp.1 Stelis spp.1 forma de C) Epidendrum radicans, --Pequeos Agujeros en ptalos y spalos 1 Oerstedella sp. Epidendrum sp. 10, Octomeria valeroi11 Chrysomelidae Tejido raspado a lo Epidendrum spp.1, Maxillaria sp.1 1 largo de las hojas Pleurothallis spp. 1: Sin presencia del agente causal 2: No se logr desarrollar la forma adulta del agente causal 3: Tortricidae 4: Tina sp. (Familia: Tortricidae) 5: Geometridae 6: Acharia sp. (Familia: Limacodidae) 7: Polilla de las orqudeas (Familia: Acrolophidae) 8: Sntomas propios de polilla de las orqudeas 9: Exophthalmus scalpthus 10: Daos por Chrysomelidae (Tribu: Alticinii) 11: Daos por Chrysomelidae (Subfamilia: Galerucinae) 12: Parasitada por avispas (Familia: Eulophidae, Subfamilia: Eulophinae) Curculionidae

Uno de los tortrcidos colectado en el O25M estaba parasitado por avispas de la familia Eulophidae (Lmina 7: 3-4). La presencia de estas avispas parasitoides demostr que an en cultivo existen controladores biolgicos. Grissell y Schauff (2003) comentan que varias especies de Eulophidae parasitan larvas de minadores y barrenadores de Lepidoptera y Diptera. En Costa Rica hay gran diversidad biolgica de estas avispas (Hansson 2004).

Las larvas de geomtridos afectaron dos orqudeas del gnero Epidendrum de la ZCCP, mientras que en el O25M los gneros afectados fueron Epidendrum y Stelis. Estas larvas de geomtridos se diferenciaron de los tortrcidos por tener seudopatas solo en los pares A6 y A10, medan de 5,0 a 10,0 mm de largo y su color corresponda a los tejidos que coman (Lmina 7: 5-6). Los signos fueron pequeas bolitas de excremento cerca de los tejidos afectados y a veces restos de seda fina. Los adultos medan entre 15,0 18,0 mm. de envergadura, con las alas de color verde claro, presentando manchas caf en la zona subcostal y radio medial de las alas anteriores (Lmina 8: 1).

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Los tortrcidos y los geomtridos consumen retoos, hojas y flores de muchas familias botnicas (Fauske 2002b y 2002c), los cuales afectan diferentes cultivos en Centroamrica (Saunders et al. 1998, Coto y Saunders 2004). La literatura consultada no se refiere a estos insectos como dainos en las orqudeas, excepto en las publicaciones de AOS (1975) y Salazar et al. (2007 y 2008). Estos insectos son de poca importancia en orqudeas de Costa Rica (Rivera y Corrales 2007), pero en este estudio se catalogaron como plagas de importancia, debido a que en varios casos las polillas deterioraban flores de las plantas, y estos rganos de las orqudeas son considerados como productos principales de orquidearios y jardines botnicos.

Las lesiones causadas por la polilla de las orqudeas (Familia: Acrolophidae) fueron deterioros en seudobulbos y races. Los insectos causales solo se presentaron en el O25M en plantas de Arpophyllum, Brassia, Oncidium, Osmoglossum y Sobralia, mientras que en la ZPCC nicamente se observaron sus sntomas en Oncidium y Prosthechea (Cuadro 10). Las larvas eran de color caf oscuro y medan entre 12,0 15,0 mm de largo (Lmina 8: 2). Los signos correspondieron a tneles hechos con finos hilos de seda griscea, con excrementos adheridos por el exterior y las larvas haciendo sus capullos en el interior (Lmina 8: 3). Los sntomas fueron mordeduras conspicuas en seudobulbos (Lmina 8: 4). Los adultos obtenidos en el laboratorio eran polillas grisceas, medan entre 20 y 30 mm. de envergadura y tenan un diseo de manchas irregulares en las alas anteriores (Lmina 8: 5).

La familia Acrolophidae est constituida por cuatro gneros y sus larvas se alimentan aproximadamente de 300 especies de plantas en zonas silvestres del Nuevo Mundo (Fauske 2002a). Varios autores mencionan que Acrolophus popeanellus es la especie que causa daos en las orqudeas (NCAES 1914, Leslie 1994, ngel 2001).

Las lesiones causadas por Acharia sp. (Familia: Limacodidae) solo se ubicaron en una muestra de Epidendrum phyllocharis del O25M (Cuadro 10). Esta polilla no logr desarrollar la forma adulta, pero se pudo identificar a partir de las caractersticas morfolgicas de la larva, segn la descripcin de Coto y Saunders (2004). Presentaba la cabeza retrada en el primer segmento torxico; en el dorso posea tres pares de protuberancias con espinas urticantes; en la parte media dorsal presentaba una mancha marrn ovalada, rodeada de un borde blanco que asemeja una montura (Lmina 8: 6).

Acharia se ha documentado como una de las principales plagas en palma aceitera en Costa Rica (Mexzn et al. 1996, Coto y Saunders 2004), pero se considera un insecto polfago (Bartlett 2004). Se podra convertir en una plaga potencial en cultivos de orqudeas, mas su presencia en orqudeas fue ocasional.

49

En esta investigacin, de los insectos masticadores, las orugas se observaron mayormente en cultivo que en condiciones naturales. Dado que en el Orquideario se combaten los artrpodos con agroqumicos, se eliminan tanto las plagas como los controladores biolgicos, por lo tanto es posible que la poblacin de los insectos fitfagos aumentara y eventualmente causaran daos a las orqudeas. Adems es posible que los tejidos muy suculentos de las plantas hayan atrado a estos insectos. Se observaron mordeduras de curculinidos en orqudeas tanto en la ZPCC como en cultivo (Cuadro 10), pero solo se encontr Exophthalmus scalpthus en una muestra de Pleurothallis del O25M (Lmina 9: 1). Mientras que en los dems casos solo se reconoci el patrn de alimentacin en forma de C sin el agente causal (Lmina 9: 2). E. scalpthus se identific segn la descripcin de Rodrguez (2008). Este insecto meda 10,0 mm de largo, estaba densamente cubierto de escamas blanco-perladas, cabeza y rostro con punteaduras dispersas, antenas delgadas con el escapo extendido ms all del margen anterior del protrax, presentaba litros con pequeas manchas descubiertas, dispersas y ordenadas asimtricamente (Lmina 9: 1). Las lesiones de mordeduras en el margen de las hojas pueden ser causadas por especies hormigas (Acromyrmex y Atta) o picudos (Familia: Curculionidae). Sin embargo, se diferencian porque las hormigas hacen cortes semicirculares de forma continua (Saunders et al. 1998), mientras que los picudos hacen cortes curvados de 5,0 mm en forma de C. En los resultados se observaron sntomas propios de curculinidos en las hojas, tanto en la ZPCC como en el O25M (Cuadro 10). La mayora de plantas con estos sntomas pertenecan a la tribu Pleurothallidinae, con base a esto parece que hay una tendencia de los picudos a alimentarse del follaje de estas plantas. En las plantas de Epidendrum radicans y Oerstedella exasperata de la ZPCC se observaron pequeos agujeros en las flores (Cuadro 10, Lmina 9: 3), pero sin la presencia del agente causal, posiblemente se haya tratado de otro curculinido. AOS (1975), ngel (2001), Corrales (2003), Gioria (2004) y Rivera y Corrales (2007) han descrito sntomas parecidos causados por pequeos curculinidos negros del gnero Stethobaris.

Otros sntomas que se encontraron en orqudeas fueron raspaduras, pero con mayor frecuencia las muestras de los cerros de La Carpintera (Cuadro 10). Las lesiones se presentaron como tejidos rodos de las hojas carnosas (Lmina 9: 4) y delgadas (Lmina 9: 5). Se determin que las lesiones de este tipo fueron causadas por crisomlidos. 10

Corrales, G. 2008. Raspaduras en hojas de orqudeas causadas por crisomlidos. Profesor Jubilado del Laboratorio de Entomologa, UNA, Heredia. Comunicacin Personal.

10

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Solo se colectaron dos crisomlidos en condiciones de cultivo alimentndose de orqudeas. Uno era rojo de 5,0 mm de largo (Subfamilia: Galerucinae, Tribu: Alticinii) en Oerstedella exasperata (Lmina 9: 5), mientras que el otro era de color amarillo de 13,0 mm de largo con cuatro puntos rojos en los litros, (Subfamilia: Galerucinae) (Lmina 9: 6) en hojas de Octomeria valeroi. Ejemplares de Galerucinae se han documentado como plagas importantes en la agricultura, causando mordeduras o como vectores de virus (Saunders et al. 1998, Moisset 2005). En la literatura consultada, solo Gioria (2004) menciona a un crisomlido del gnero Diabrotica como plaga en las orqudeas en Brasil. Pero en esta investigacin se consider que los crisomlidos eran solo organismos oportunistas.

4.4.1.2 Minas Los insectos minadores documentados en las orqudeas pertenecen a dpteros, colepteros (Familias: Curculionidae y Mordellidae), himenpteros (Familia: Eurytomidae) y lepidpteros (Costa Lima 1956, AOS 1975 y 1995, ngel 2001, Rivera y Corrales 2007, Salazar et al. 2007). Hasta el momento, en Costa Rica, las larvas de estos minadoras se han observado principalmente en orqudeas cercanas a zonas silvestres. Tres ejemplos han sido adultos de picudos perforando en tallos de Sobralia en Gupiles 11, larvas de picudos en flores de Pescatorea en Sarapiqu 12 y larvas de microlepidpteros minadores en hojas de Phalaenopsis en Upala 13. Tanto en condiciones silvestres como en el orquideario se recolectaron hojas carnosas con diferentes patrones de minas. Estas lesiones se presentaron en los gneros Epidendrum, Pleurothallis y Stelis de la ZPCC; y en Maxillaria brunnea colectada en el O25M (Cuadro 11). Los sntomas en unas muestras fueron causados por larvas de dpteros, larvas de lepidpteros (ZPCC) y un curculinido (O25M), en otras muestras no se encontraron los insectos asociados a las lesiones.

Los dpteros desarrollaron minas lineares e irregulares de un grosor menor de 1,0 mm en hojas de Epidendrum sp. y Pleurothallis spp. (Lmina 10: 1-2). En el caso de Epidendrum, el minador era de la familia Agromyzidae, pero en Pleurothallis no se pudieron identificar pues no se lograron sus etapas adultas, solo se determinaron sus lesiones en las lminas foliares. Se conocen diferentes especies de dpteros minadores en cultivos alimenticios (Saunders et al. 1998, Zumbado 1999, Coto y Saunders 2004),

Rivera, G. 2007. Perforaciones causadas por curculionidos en tallos de Sobralia sp. Laboratorio de Fitopatologa, UNA, Heredia. Comunicacin personal. 12 Salazar, W. 2008. Gira de campo: Identificacin de problemas fitosanitarios en orqudeas. Horquetas, Sarapiqu, Heredia. 13 Rivera, G y Salazar, W. 2006. Gira de campo del proyecto: Identificacin de problemas fitosanitarios en orqudeas de Costa Rica, minas en hojas de Phalaenopsis sp. Bijagua, Upala, Alajuela.

11

51

pero a partir de esta investigacin se documentan asociados a las orqudeas. Es necesario realizar otras investigaciones con el fin de identificar los insectos que causan las minas.

Cuadro 11. Minas en tejidos en las orqudeas recolectadas en la Zona Protectora Cerros de la Carpintera y el Orquideario 25 de Mayo
Lesin Minas en muestras de la ZPCC Agente causal Lepidoptera en estado pupal2 Especies afectadas Epidendrum laucheanum Pleurothallis spp. Hymenoptera1 Lepidoptera1 Diptera2 Diptera: Agromyzidae Lepidoptera1 Diptera1 Hymenoptera1 Mina en la muestra del Curculionidae1 O25M Sntoma en las orqudeas Mina linear en hojas. Pueden necrosar el tejido. Grosor >1,0 mm Mina en forma de mancha foliar. Envs raspado con una cobertura de heces y seda. Haz de color caf claro Minas lineares o irregulares en hojas. Pueden necrosar o corrugar el tejido. Grosor >1,0 mm Minas irregulares a lo largo de la hoja. Grosor < 1,0 mm

Pleurothallis spp.

Pleurothallis spp. Epidendrum sp. Pleurothallis spp., Stelis sp. Maxillaria brunnea

Mina de serpentina inicia en el pecolo, contina en el seudobulbo. Se form una celda pupal en el seudobulbo

1: Posible agente causal. 2: No se logr desarrollar la forma adulta del agente causal.

Las minas causadas por lepidpteros fueron de dos tipos, por un lado eran de forma linear en Epidendrum sp., con un grosor mayor a 1,0 mm, y por otro lado con forma de mancha en Pleurothallis sp. (Lmina 10: 3). Los lepidpteros encontrados estaban en forma de pupa, los cuales murieron durante ese instar, por lo tanto no se obtuvieron sus etapas adultas, con lo cual no se observaron las caractersticas morfolgicas para distinguir la familia a la que pertenecan.

Unas plantas de la tribu Pleurothallidinae colectadas en La Carpintera tenan minas inactivas sin el agente causal y sin restos de los mismos (Lmina 10: 4). Con base a la literatura y los resultados antes mencionados, se determin que los insectos responsables pudieron ser himenpteros (gnero Eurytoma) (AOS 1995, ngel 2001), dpteros o lepidpteros. No se pudo determinar el tipo de insecto que provoc las lesiones debido a la ausencia del agente causal, y adems por la variedad de familias que pueden ocasionar estos sntomas. En el Orquideario 25 de Mayo se colect M. brunnea con una mina inactiva, que iniciaba en el pecolo de la hoja y que segua hasta el seudobulbos, en donde el insecto desarroll una celda pupal 14 (Cuadro 11). El
14

Celda pupal: Cavidad dentro del parnquima de las plantas en donde las larvas insectiles forman la pupa.

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causante del dao pudo ser un curculinido, debido a se encontr la cabeza de una larva de esa familia (Lmina 10: 5).

4.4.1.3 Agallas Las agallas son anomalas en la formacin de tejidos producto de picaduras y secrecin de toxinas de insectos que inducen el crecimiento en extensin y por divisin celular. En las orqudeas estas lesiones suelen ocurrir en la cofia de las races, y se le atribuyen a Eurytoma orchidearum, tambin llamada la avispa de las orqudeas (AOS 1975 y 1995, ngel 2001, Gates 2001a y 2001b).

Los nicos insectos encontrados en el interior de las agallas fueron, por un lado himenpteros en Epidendrum de la ZPCC (Lmina 10: 6) y Arpophyllum del Orquideario (Lmina 11: 2). Por otra parte larvas de la familia Curculionidae en Oerstedella de la Carpintera (Lmina 11: 1) (Cuadro 12).

Cuadro 12. Agallas en las races de orqudeas colectadas en la Zona Protectora Cerros de la Carpintera y el Orquideario 25 de Mayo Lesin Agallas en muestras de la ZPCC Sntoma en las races Agente causal Eurytoma sp. Curculionidae2 Eurytomidae 1 Curculionidae1 Larvas de Hymenoptera 2 Especies afectadas Epidendrum sp. Oerstedella spp. Prosthechea sp. Arpophyllum giganteum

Engrosamiento de la cofia

Agallas en muestras del O25M 1. Posible agente causal 2. No se logr la etapa adulta.

La avispa de eurytomidae no se pudo identificar a nivel de especie, por lo tanto no qued claro si corresponda a un agallador o un parsito del agallador original. La literatura menciona que en la familia Eurytomidae hay gran variedad de especies, donde hay tanto agalladores como parasitoides (Gates 2001a, Roubick y Hanson 2004).

Las larvas de picudos asociadas a las agallas no se identificaron apropiadamente debido a que no desarrollaron sus etapas adultas. En varias publicaciones se han observado larvas de curculinidos dentro de los diferentes rganos de las orqudeas (Costa Lima 1956, AOS 1975 y 1995, Monge 2000, Gioria 2004) o viviendo dentro de races (AOS 1975). Corrales y Rivera (2003) mencionan que en Costa Rica los picudos que causan estas lesiones en orqudeas pertenecen al gnero Stethobaris.

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En las muestras de Epidendrum y Prosthechea no se encontraron los agentes causales de las agallas, sin embargo la literatura informa que estos sntomas se asocian a especies de las familias Eurytomidae o Curculionidae.

4.4.1.4 Orificios en hojas y seudobulbos Los orificios en hojas y seudobulbos en las orqudeas se encontraron sin la presencia del agente causal, y provenan en su mayora de la ZPCC (Cuadro 13). Por un lado eran orificios ovalados, de aproximadamente 1,5 mm de dimetro en las hojas, dispuestos en lnea recta, paralelos a la vena central; las plantas con estas lesiones fueron de los gneros Pleurothallis colectadas en las dos zonas de muestreo y Stelis del Orquideario (Lmina 11: 3). Las otras lesiones fueron diminutos orificios semicirculares de 1,0 a 5,0 mm de dimetro, distribuidas al azar en los tejidos carnosos desarrollando necrosis en los tejidos afectados; se manifestaron en Epidendrum, Pleurothallis, Prosthechea y Scaphyglottis colectadas en la ZPCC (Lmina 11: 4-5).

Cuadro 13. Lesiones en orqudeas de la Zona Protectora Cerros de la Carpintera y el Orquideario 25 de Mayo Lesin Orificios en muestras de la ZPCC Agente causal Tettigoniidae1 Especies afectadas Pleurothallis sp. Sntoma en los tejidos Orificios ovalados en la hoja, dispuestos en lnea recta, paralelos a la vena central Crcavas circulares parecidas a puntuaciones en los tejidos. Dimetro < 1,0 mm Orificios ovalados en la hoja, dispuestos en lnea recta, paralelos a la vena central

Orificios en muestras del O25M

1: Posible agente causal

Sin agente causal Epidendrum radicans, Pleurothallis sp., Prosthechea sp., Scaphyglottis micrantha 1 Tettigoniidae Prosthechea sp., Stelis sp.

Los orificios ovalados se asociaron a especies de ortpteros de la familia Tettigoniidae, pues algunos de estos insectos depositan huevos dentro de las hojas (Saunders et al. 1998, Coto y Saunders 2004). En las orqudeas se han visto estos sntomas en colecciones de orqudeas en Costa Rica 15.

4.4.2

Lesiones por insectos succionadores de savia

Los insectos succionadores de savia son organismos que ocasionalmente causan problemas fitosanitarios en las orqudeas. El principal sntoma que provocan es el debilitamiento de la planta al extraer la savia.
Corrales, G. 2006. Oviposiciones de chapulines en orqudeas. Profesor Jubilado del Laboratorio de Fitopatologa, UNA, Heredia. Comunicacin personal.
15

54

Pueden ocasionar otros problemas fitosanitarios como malformaciones al inyectar toxinas, heridas que permiten la entrada de patgenos, crecimiento de fumagina al secretar ligamasa o transmisin de partculas virales. Algunos de estos insectos se consideran plagas de gran importancia en las orqudeas. Los insectos que causan estos daos en orqudeas son los chinches rojos (Familia: Miridae), fidos (Familia: Aphididae), las escamas (Familias: Coccidae y Diaspididae) y las cochinillas (Pseudococcidae) (Rivera 1998, Rivera y Corrales 2007). En los Cuadros 14 y 15 se desglosan los casos que se presentaron tanto en la ZPCC y como en el O25M. Cuadro 14. Lesiones causadas por insectos succionadores de savia en orqudeas la Zona Protectora Cerros de la Carpintera
Agente causal Chinches1 fidos Escamas Indeterminada2 Chrysomphalus sp. Saissetia sp. Especies afectadas Epidendrum sp. Oerstedella sp. Oerstedella exasperata Comparettia falcata Epidendrum sp., Maxillaria sp. Oerstedella sp. Sntoma en las orqudeas Pinchaduras a lo largo de la hoja, ocasionando lesiones clorticas o blanquecinas Leve deformacin de las flores, causando un leve corrugamiento de los spalos Hojas sin sntomas. La escama estaba parasitada por un hongo No hubo lesiones donde se esperara la depresin o clorosis del tejido foliar Hojas sin sntomas conspicuos, se presentan escamas parasitadas por un hongo

1: Posible agente causal 2: Parasitada por hongo

Cuadro 15. Lesiones causadas por insectos succionadores de savia en orqudeas del Orquideario 25 de Mayo
Agente causal Chinches1 Especies afectadas Laelia undulata, Maxillaria ringens, Pleurothallis sp., Prosthechea sp. Prosthechea sp. Oncidium ansiferum Encyclia ceratistes O. ansiferum Guarianthe skinneri Arpophyllum giganteum Epidendrum phyllocharis Oncidium stenoglossum Scaphyglottis micrantha Elleanthus sp. Sntoma en las orqudeas Pinchaduras a lo largo de la hoja, ocasionando lesiones blancas

fidos

Pinchaduras a lo largo del seudobulbo y hojas. Lesiones blancas y arrugamiento del tejido Pinchaduras en hoja y flores Pinchaduras inconspicuas en las flores Clorosis en el punto de lesin y hundimiento del tejido foliar Colonias de insectos en las hojas, de apariencia algodonosa. Clorosis del tejido Hojas sin sntomas conspicuos Clorosis en el punto de lesin y leve depresin del tejido foliar

Escamas

Chrysomphalus sp. Diaspis sp. Saissetia sp.

Aspidiotus sp. 1: Posible agente causal

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Las lesiones por chinches (Familia: Miridae) se observaron en las dos zonas de estudio, pero sin el agente causal. En los cerros las plantas afectadas eran de los gneros Epidendrum y Oerstedella (Cuadro 14), mientras que en el orquideario aparecieron daos en Laelia, Maxillaria, Pleurothallis y Prosthechea (Cuadro 15). En hojas delgadas se desarrollaron manchas clorticas por el haz de la lmina foliar (Lmina 11: 6). En las hojas gruesas, las lesiones fueron decoloraciones blanquecinas en los sitios de alimentacin, como se observ en seudobulbos, pero con corrugamiento de los tejidos (Lmina 12: 1). La mayora de las lesiones por pinchaduras provocaron el desarrollo de infecciones secundarias de Colletotrichum, originando sntomas de antracnosis. En varias publicaciones se hace referencia a lesiones causadas por Tenthecoris orchidearum (Wheeler 2001, Gioria 2004, Rivera y Corrales 2007) que desarrollan sntomas similares a los encontrados en esta investigacin. Los fidos colectados en las dos zonas de estudio, se alimentaban de las hojas y flores, pero sin provocar sntomas conspicuos. En el O25M se recolectaron pulgones en inflorescencias, brotes y hojas adultas de, Encyclia ceratistes, Oerstedella exasperata y Oncidium ansiferum (Lmina 12: 2-3), mientras que en la ZPCC solo se asociaron a escapos florales de O. exasperata. La mayora de las publicaciones sobre plagas en orqudeas mencionan los problemas fitosanitarios por fidos (Dodson y Gillespie 1967, AOS 1995, Rivera 1998, ngel 2001, Corrales 2003, Amorosi 2004, Rivera y Corrales 2007), pero no se conoce mucho del efecto de estos insectos en condiciones naturales. Los pulgones se consideran de mucha importancia porque transmiten seis de los 27 virus que afectan las orqudeas (Lawson 2002 citado por Johnson 2005a). En Costa Rica se han documentado los gneros Aphis, Hysteroneura, Rhopalosiphoninus Toxoptera como vectores del Cucumber Mosaic Virus (CMV) causantes de enfermedades en orqudeas (Voegtlin et al. 2003), de los cuales solo Aphis se ha citado asociado a las orqudeas (Rivera y Corrales 2007). Tanto en el O25M como en la ZPCC se observaron escamas en hojas e inflorescencias (Cuadros 14 y 15). En varias muestras se vieron sntomas de clorosis y depresiones del tejido, pero en algunos las lesiones eran inconspicuas. En condiciones silvestres se presentaron algunas escamas en los gneros de Comparettia (Lmina 12: 4), Epidendrum, Maxillaria y Oerstedella, pero con lesiones muy leves, mientras que en cultivo las escamas fueron ms frecuentes, ocasionando clorosis en los tejidos de Arpophyllum (Lmina 12: 5), Guarianthe, Elleanthus, Epidendrum, Oncidium y Scaphyglottis. Se comprob que en condiciones silvestres tambin haba escamas, las cuales se consideran plagas en los cultivos de orqudeas. Se determin que en ecosistemas naturales estos insectos no afectan drsticamente como sucede en sistemas alterados debido a la presencia de controladores biolgicos. Por ejemplo, se encontr una escama parasitada por un hongos entomopatgenos en Comparettia falcata (Lmina 12: 4).

56

Se presentaron individuos de Saissetia asociados a gneros de Epidendrum, Oncidium y Scaphyglottis en el orquideario y en Oerstedella en La Carpintera, los cuales no parecan causar sntomas en los tejidos que colonizaban, puesto que las plantas no presentaron clorosis o debilitamiento. Segn los resultados obtenidos, se mostr que estas especies de escamas no fueron tan dainas en las orqudeas, an as se consideran plagas comunes en orqudeas cultivadas (AOS 1975, Gipson 2006, Rivera y Corrales 2007). 4.4.3 Lesiones por caros

Las nicas lesiones por caros las causaron tetranquidos en Oerstedella sp. en el Campo Escuela Istar de la ZPCC. Los caros medan 0,3 mm de largo, de color amarillo verdoso en los primeros instares y rojos en la etapa adulta. Las lesiones consistieron en decoloraciones necrticas por el envs de las hojas debido a las raspaduras que hacan en los tejidos. Los signos fueron mudas blancas de los inmaduros que asemejan polvo muy fino (Lmina 12: 6). Los caros de Tetranichidae y de Tenuipalpidae se han documentado en varios gneros de orqudeas en invernaderos o plantas de interior, afectando el follaje y partes florales (AOS 1975 y 1995, Ochoa et al. 1991, Rivera 1998, Ching-Liang et al. 2003, Surez y Mora 2007). Pero, en este estudio la planta hospedante se encontr a la intemperie, brindando las condiciones de microclima ideales para el desarrollo de colonias de caros. 4.5 Comparacin de sntomas causados por artrpodos en las dos zonas de estudios

Los sntomas causados por los artrpodos se presentaron en las dos zonas de estudio; excepto las causadas por caros, que solo se hallaron en condiciones silvestres. Se observ ms cantidad de lesiones por artrpodos masticadores en La Carpintera, y se encontraron ms orqudeas afectadas por insectos succionadores de savia en el Orquideario. La frecuencia en del tipo de lesiones se resume en la Figura 19. En los sistemas de cultivo los artrpodos plaga causan daos en las plantas, pero en ecosistemas estables son seres fitfagos, que se alimentan de las plantas como parte de los procesos naturales. Los sntomas causados por los organismos fitfagos son ms frecuentes en condiciones de cultivo, y en condiciones silvestres sus lesiones pueden ocurrir en cualquier parte del sistema. En esta tesis se pudo observar como se distribuyen las lesiones causados por los artrpodos en las diferentes zonas de la ZPCC a partir de la informacin de cada muestra (Figura 20). Las lesiones de mordeduras y raspaduras de hojas se observaron en todas las zonas, con mayor incidencia en el bosque secundario. Las zonas que presentaron mayor diversidad de problemas por insectos fueron los bosques secundarios y charrales; mientras que en el bosque primario y en reas disturbadas hubo menos ataques por artrpodos. Solamente en condiciones de charral se obtuvo una muestra de caros. Los

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insectos chupadores (chinches, escamas y fidos), considerados como las principales plagas en las orqudeas de Costa Rica, se ubicaron en todos los ambientes excepto en el bosque primario.

Figura 19. Cantidad de gneros de orqudeas con sntomas causados por artrpodos en los dos sitios de estudio

Figura 20. Cantidad de gneros de orqudeas afectadas por artrpodos en las diferentes zonas de muestreo de la Zona Protectora Cerros de la Carpintera

58

4.6

Consideraciones finales

En el tema de conservacin de orqudeas se debe continuar la investigacin de problemas fitosanitarios; pues an no se cuenta con suficiente informacin sobre la diversidad de agentes que pondran en riesgo el desarrollo pleno de estas plantas. Cuando se deterioran los ecosistemas o hay un mal manejo de colecciones in vivo se amenaza la biodiversidad, por cuanto especmenes escasos o en peligro de extincin pueden desaparecer. Las enfermedades emergentes o los artrpodos que potencialmente pueden convertirse en plagas, son aspectos de importancia en el marco de la manipulacin de orqudeas, tanto en condiciones naturales como en zonas alteradas por el hombre. Sin embargo se conocen otros factores negativos como la deforestacin, el trasiego ilegal de plantas, contaminacin ambiental, la erosin gentica, los cuales tambin causan un impacto adverso en la conservacin de estas plantas.

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ANEXO 1. NOMBRES CIENTFICOS

Acianthera cogniauxiana (Schltr.) Pridgeon & M. W. Chase A. sicaria (Lindl.) Pridgeon & M. W. Chase Acidovorax avenae subsp. cattleyae Willems, Goor, Thielemans, Gillis, Kersters, & De Ley Acineta densa Lindl. & Paxt. Acrolophus popeanellus Clemens Arpophyllum giganteum Lindl. Botrytis cinerea Pers. Brassia gireoudiana Rchb. f. & Warsc. B. verrucosa Lindl. Brevipalpus californicus Banks Catasetum maculatum Kunth Cephaleuros virescens Kunze Cladosporium oxysporum Berkeley & Curtis Cochleanthes aromatica (Rchb. f.) R.E. Schult. & Garay Colletotrichum gloesporioides (Penz.) Penz. & Sacc Comparettia falcata Poepp. & Endl Curvularia lunata (Wakker) Boedijn Cyrtopodium macrobulbum (La Llave & Lex) G. A Romero & Carnevali Elleanthus alberti Schltr. Encyclia ceratistes (Lindl.) Schltr. Epidendrum barbeyanum Kraenzl. E. coronatum Ruiz & Pav. E. oerstedii Rchb. f. E. parkinsonianum Hook E. phyllocharis Rchb. f. E. radicans Pavon ex Lindl. E. laucheanum Rolfe & Bonhof Eriopsis wercklei Schltr. Erwinia carotovora (Jones) Holland E. cypripedii (Hory) Bergy et al. Eurytoma orchidearum Westwood Exophthalmus scalpthus Chapman Fusarium oxysporum f.sp. vanillae (Tucker) W.L. Gordon F. oxysporum Scheltr. Glomerella cingulata (Stoneman) Spald. & H. Schreak Guarianthe skinneri (Bateman) Dressler & W.E. Higgins Huntleya burtii Rchb. f. Laelia autumnalis (La Llave & Lex.) Lindl. L. undulata (Lindl.) L.O. Williams Lockhartia oerstedii Rchb. f. Maxillaria aciantha Rchb. f. M. brunnea Linden & Rchb. f. M. cedralensis J.T. Atwood & D.E. Mora M. cucullata Lindl. M. endresii Rchb. f. M. hedwigiae Hamer & Dodson M. ringens Rchb. f. Miltoniopsis roezlii (Rchb. f.) God.-Leb. Mordillestena cattleyana Champion Nectria tjibodensis Penz & Sacc. Octomeria costarricensis Schltr. O. valeroi Ames & C. Schweinf. Oerstedella exasperata Rchb. f. Oncidium ansiferum Rchb. f. O. bryolophotum Rchb. f. O. globuliferum Kunth. O. stenoglossum (Schltr.) Dressler & W.E. Higgins O. storkii Ames & C. Scheweinf. O. warzcewiczii Rchb. f. Osmoglossum convalaroides Schltr. O. egertonii (Lindl.) Schltr. Paphiopedillum wardii Summerh. Pellicularia koleroga Cooke Pescatorea cerina (Lindl.) Rchb. f. Phoma oncidii-sphacelati Tassi Phragmipedium longifolium (Rch. f. & Warsz.) Rolfe Phytophthora cactorum (Leb. & Cohn) Schrot. Polystachya foliosa (Hook.) Rchb. f. Prescotia stachyodes (Sw.) Lindl. Prosthechea crassilabia (Poepp. & Endl.) Carnevali & I. Ramirez P. livida (Lindl.) W.E. Higgins P. ochraceae (Lindl.) W.E. Higgins Pseudococcus longispinus Targioni-Tozzetti Pythium ultimum Trow Rossioglossum schlieperianum (Rchb. f.) Garay & Kenn. Scaphyglottis imbricata (Lindl.) Dressler S. lindeniana (A. Rich. & Gal.) L.O. Williams S. micrantha (Lindl.) Ames & Correll Sclerotium rolfsii Sacc. Sobralia chrysostoma Dressler Stelis grandis (Rolfe) Pridgeon & M.W. Chase Stenorrhynchos speciosum (Jacq.) Spreng. Tenthecoris orchidearum Reuters Trigonidium egertonianum Lindl. Vanilla pompona Schiede Warcewiczella discolor (Lindl.) Rchb. f. Xylobium squalens Lindl.

72

ANEXO 2. PERMISO DE COLECTA DE ORQUDEAS (PASAPORTE CIENTFICO)

73

ANEXO 3. EVALUACIN DE LA MUESTRA Y EL SITIO DE RECOLECCIN*

Accesin:
Provincia: Altitud =

UNA-

Fecha: Cantn: m.s.n.m. Latitud = N Longitud = O

Nombre de Recolectores: Otro nmero sinnimo de accesin: Nombre cientfico: Fuente de la muestra: 1. Silvestre 2. Orquideario 3. Otro:_________________________________________________ Nombre comn:

Tipo de Muestra: 1. Plntula 2. Vegetativa 3. Flor 4. Fruto 5. Larva de insecto 5. Pupa 6. Insecto adulto

Fuentes cercanas de agua: 1. A menos de 50 m Tipo de substrato: 1. Espaldera 2. Cerca 6. Tronco de rbol ( Exposicin a la luz: 1. Soleado 2. Sombra parcial 3. Muy sombreado 3. Paredn 4. Rama cada 5. Rama de rbol ( ) ) 7. Suelo 8. Otro: ____________________________ 2. De 50 a 100 m 3. Ausentes

Diagnstico fitosanitario:

* Modificado de Recoleccin de germoplasma de Sechium en Costa Rica del Programa de Recursos Fitogenticos de la ECA, UNA. Basado en el formato estandarizado del IPGRI

74

ANEXO 4. PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO

Papa-dextrosa-agar (PDA): Para su preparacin se utilizan 200 g de papas peladas y partidas, las cuales se cocinan en 500 ml de agua destilada durante 20 minutos. Simultneamente, en otro recipiente caliente y mediante agitacin se disuelve el agar en 500 ml de agua destilada. El extracto de papas se cuela usando una gasa doblada en varias capas y se mezcla con el agar disuelto. A esta solucin se le agrega 20 g de dextrosa. Tambin se puede usar medio PDA en polvo (39 g/L) El volumen total se lleva a 1 L y el medio se coloca en cajas de Petri o tubos y se esteriliza por 20 minutos a 120 C y a 41 Kg/cm2 (French y Hebert 1980). Papa-dextrosa (PD): Se cocinan 200 g de papas peladas y partidas en 500 ml de agua destilada. Cuando hierva se le cuelan los trozos de papa. Por otro lado en otro recipiente se disuelven 20 g de dextrosa en 500 ml de agua. Se mezclan el agua de papa con el agua de dextrosa, la mezcla final se esteriliza por 20 minutos a 120 C y a 41,0 Kg/cm2 (French y Hebert 1980). Agar Agua (AA) al 3%: Medio de cultivo con nutrimentos que se utiliza para la obtencin de descargas de ascosporas a partir de tejido foliar. Se prepara agregando 30 g de agar granulado en 1 L de agua destilada, que se calienta y agita hasta que el agar se disuelva completamente. El medio se distribuye en recipientes adecuados y se esteriliza durante 20 minutos a 120 C y a 41,0 Kg/cm2 (French y Hebert 1980). Agar-jugo de vegetales (V8): Medio muy nutritivo que estimula la esporulacin del hongo. En su preparacin se utilizan 800 ml de agua destilada, a la cual se le agregan 200 ml de jugo de vegetales V-8, 3 g de carbonato de calcio y 20 g de agar. La mezcla se calienta y agita hasta que los componentes se disuelvan completamente. El medio se coloca en recipientes apropiados, como cajas de Petri; los cuales se esterilizan durante 20 minutos a 120 C y a 41,0 Kg/cm2 (APS 2001). Yeast extract-dextrose-CaCO3 (YDC): Ingredientes: Yeast extract 10 g, Dextrosa (glucosa) 20 g, Carbonato de calcio 20 g, Agar 15 g. Para obtener un medio claramente lechoso, el CaCO3 tiene que estar finamente molida o pulverizada, de otro modo se llegara a precipitar en el fondo. Se esteriliza la mezcla a 3,417 Kg/cm2 por 1 hora o se esteriliza separadamente la dextrosa en 100 ml de agua. El medio esterilizado debera enfriarse a 50 C. Antes de poner el medio en los platos se debe remover bien para que el CaCO3 est bien suspendido, en tal caso se podra utilizar un "vortex (mezclador) (APS 2001). Yeast-peptone agar (YP): A un litro de agua destilada se le agregan 5 g de Yeast extract, 10 g de Peptona y 15 g de agar, posteriormente se esteriliza en una autoclave (APS 2001). Beef-yeast extract alcalino (BY alcalino): En un 500 ml de agua destilada se agregan 0,5 g de Beef extract y 1 g. de Yeast extract, se ajusta el pH a 7,4 al aadir 16 g de CaCO3. Luego se aaden 10 g de agar y la mezcla final se esteriliza en una autoclave (APS 2001). B de King (KB): A un litro de agua destilada se le agregan 3.5 g de la base de B de King, y se le agregan 10 ml de glicerol (APS 2001).

75

ANEXO 5. FOTOGRAFAS DE LOS PROBLEMAS FITOSANITARIOS

LAMINA 1

1 Quemaduras de sol en Pleurothallis de la ZPCC

2 Quemaduras de sol en T. egertonianum del O25M

3 Antracnosis en hojas de E. barbeyanum, ZPCC

4 Antracnosis en hojas de Oerstedella, ZPCC

5 Antracnosis en hoja de Lepanthes, ZPCC

6 Antracnosis en seudobulbos de O. bryolophotum,ZPCC

76

LAMINA 2

1 Antracnosis en seudobulbos de Xylobium, O25M

2 Antracnosis en Prosthechea del O25M

3 Antracnosis en frutos de Maxillaria, ZPCC

4 Antracnosis en flores de A. densa del O25M

5 Antracnosis en flores P. cerina del O25M

6 Marchitez de las orqudeas en Prosthechea, ZPCC

77

LAMINA 3

1 Marchitez de las orqudeas en B.verrucosa, O25M

2 Marchitez de las orqudeas en G. skinneri, O25M

3 Mancha foliar de Cercospora en O. stokii, O25M

4 Mancha foliar de Cercospora en Stelis, O25M

5 Mancha de Cercospora en flores de E. radicans de la ZPCC

6 Marchitez por Rhizoctonia en Lycaste, O25M

78

LAMINA 4

1 P. ochraceae con marchitez asociada a Verticillium de la ZPCC

2 Roya en Pleurothallis de la ZPCC

3 Mancha foliar asociado a Harpographium en Lepanthes de la ZPCC

4 Maxillaria con mildi negro, ZPCC. A1: Peritecio A2: Peritecio con ascsporas

5 G. skinneri con pudricin negra del O25M

6 S. giganteum con falsa roya del O25M

79

LAMINA 5

1 Pudricin bacterial en hojas de Pleurothallis, ZPCC

2 Pudricin bacterial en hoja de Coeliopsis, O25M

3 Pudricin suave en seudobulbo de O. globuliferum de la ZPCC

4 Ampolla negra en S. lindenianum del O25M

5 Sntomas de virosis en Prosthechea de la ZPCC

6 Sntomas de virosis en L. undulata del O25M

80

LAMINA 6

1 Mordeduras por herbvoros generalistas en hojas de Pleurothallis de la ZPCC

2 Mordeduras por herbvoros generalistas en flores de E. laucheanum de la ZPCC

3 Mordeduras por herbvoro generalista en Pleurothallis del O25M

4 Mordeduras por herbvoro generalista en flores de L. undulata en el O25M

5 Larva de tortrcido en Oerstedella de la ZPCC

6. Cyrtopodium con larva de tortrcido del O25M

81

LAMINA 7

1 Flor de Cyrtopodium con pupa de tortrcido del O25M

2 Adulto de tortrcido del gnero Tina

Larvas de Eulophidae

3 Larva de tortrcido parasitada por eulfidos, O25M

4 Adultos de la familia Eulophidae

5 Larva de geomtrido en E. barbeyanum, ZPCC

6 Larva de geomtrido en Stelis del O25M A: Larva de geomtrido

82

LAMINA 8

1 Adulto de geomtrido

2 Larva de Acrolophidae

3 Larva de Acrolophidae formando capullo con sustrato, heces y seda

4 Lesiones de Acrolophidae en Oncidium de la ZPCC

5 Adulto Acrolophidae criado en Laboratorio de Entomologa (Foto: Cortesa G. Corrales)

6 Larva de Acharia en E. phyllocharis del O25M

83

LAMINA 9

1 E. scalpthus en Pleurothallis del O25M

2 Daos por curculiniodos en Epidendrum, ZPCC

3 Daos de curculinidos en flores de orqudeas de la ZPCC. A, B y C: O. exasperata D: E. radicans

4 Daos de crisomlidos en hojas en Pleurothallis de la ZPCC

5 Daos de crisomlidos (Tribu Alticinii) en Epidendrum sp. del O25M

6 Dao de crisomlido (Subfamilia Galerucinae) en O. valeroi del O25M

84

LAMINA 10

1 Mina por dptero en Epidendrum de la ZPCC

2 Minas causada por dpteros en Stelis de la ZPCC

3 Mina en forma de mancha por lepidptera en Pleurothallis, ZPCC. A: Lesin B: Pupa de polilla A

4 Mina inactiva en Pleurothallis de la ZPCC

5 M. brunnea con mina, O25M. A y B: Seudobulbo con celda pupal. C: Restos de curculinido

6 Agalla en las races de Epidendrum con Eurytoma de la ZPCC

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LAMINA 11
A A A B

B C

1 Agalla en races de Oerstedella con curculinidos de la ZPCC. A: Lesiones B: Curculinidos

2 Agallas en las races en A. giganteum, O25M. A y B: Lesiones C: Larvas de avispas dentro de las races

3 Orificios ovalados por oviposiciones de ortpteros en Pleurothallis de la ZPCC

4 Orificios semicirculares en E. radicans de la ZPCC

5 Orificios semicirculares en Prosthechea, ZPCC

6 Pinchaduras de chinches en Oerstedella, ZPCC

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LAMINA 12

1 Pinchaduras de chinches en Prosthechea, O25M

2 Hoja de O. ansiferum con fidos, 025M A1: Colonia de fidos A2: Detalle de fido alado

3 Flores de O. ansiferum con fidos del O25M

4 Escama parasitada en C. falcata de la ZPCC

5 Escamas del gnero Diaspis en A. giganteum colectada en el O25M

6 caros de Tetranichidae en Oerstedella, ZPCC

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