REBIOL 2012; 32(2):48-55 (julio-diciembre 2012)

Revista Cientfica de la Facultad de Ciencias Biolgicas Universidad Nacional de Trujillo. Trujillo. Per

Aislamiento de levaduras productoras de etanol a partir de chicha de jora del Mercado Mayorista de Trujillo (Per)
Isolation of yeast producing ethanol from chicha de jora from Mayorista Market Trujillo (Peru)
Heber Robles Castillo, Hel Miranda Chvez y Carmen Lora Cahuas
Laboratorio de Biotecnologa. Departamento de Microbiologa y Parasitologa. Universidad Nacional de Trujillo. Trujillo. Per. hrobles@unitru.edu.pe

RESUMEN
El presente trabajo de investigacin tuvo como objeto aislar levaduras productoras de etanol a partir de Chicha de Jora del mercado Mayorista de Trujillo (Per). Para ello, se tomaron muestras de 500 mL de chicha de jora de cuatro puestos de venta del mercado, con botellas de plstico limpias y desinfectadas. Las muestras se llevaron al Laboratorio de Biotecnologa donde se homogeniz y conserv para el paso posterior de obtencin de las levaduras. El aislamiento de las levaduras productoras de etanol, se hizo por la tcnica de agotamiento por estra en placas Petri conteniendo Agar Sabouraud Sacarosado al 4% (ASS) e incubado a Temperatura ambiente (24 4C) por 5 das. Se aislaron tres colonias tpicas de levaduras, las que al analizarlos al microscopio, slo dos mostraron ser compatibles con la morfologa tpica de Sacharomyces , al ser identificadas con el sistema API 20 AUX, resultaron ser Saccharomyces cerevisiae al 99.9 id excelente identificacin, las que se denominaron S. cerevisiae BT-R1 BT-R2. La evaluacin de la produccin de etanol se hizo a travs de la determinacin de la Capacidad fermentativa (productividades) de las levaduras aisladas y se hizo comprando con la levadura control S. cerevisiae MIT-L51, por el mtodo de Davies-Griffith modificado. Se obtuvieron productividades de 1.59, 0.57 y 0.56 (x 10-2 g etanol/g lev.h) con las levaduras control S. cerevisiae MIT-L51, S. cerevisiae BT-R2 y S. cerevisaie BT-R1, respectivamente. Al evaluar los hallazgos de las productividades, con la prueba t-student, de las levaduras, se encontr que no hay diferencia entre las productividades de S. cerevisiae BT-R1 y BT-R2; sin embargo, si hubo diferencia significativa con respecto a la levadura control. Se logr aislar levaduras productoras de etanol a partir de chicha de jora del mercado Palermo Mayorista de la provincia de Trujillo Per, aunque no superaron la productividad de la levadura control. Palabras clave: aislamiento, Saccharomyces cerevisiae, Chica de Jora, Mercado Palermo, Trujillo.

ABSTRAT
The aim this research was intended as ethanol producing yeasts isolated from corn steep liquor from Palermo market "wholesaler" of the province of Trujillo - Peru. For this purpose, samples of 500 ml from four Mayorista market stalls, plastic bottles clean and sanitized. Samples were taken to the Biotechnology Laboratory where homogenized and preserved for later step of obtaining yeast. Isolation of ethanol-producing yeast was made by the technique of exhaustion streak in Petri dishes containing Sucrose Sabouraud Agar 4% (ASS) and incubated at room temperature (24 4 C) for 5 days. Three colonies were isolated typical yeast, that microscopic analysis showed only two being compatible with the typical morphology of "Saccharomyces", being identified with API 20 AUX, Saccharomyces cerevisiae proved excellent at 99.9 id identification, which is named S. cerevisiae BTR1 and S. cerevisiae BT-R2. The evaluation of ethanol production was made through the determination of the fermentative capacity (productivity) of the yeasts isolated and made purchasing with control yeast S. cerevisaie MIT-L51 by the method of Davies - Griffith modified. Productivities were obtained 1.59, 0.57 and 0.56 (x 10-2 g ethanol / g lev.h) with control yeasts S. cerevisiae MIT-L51, S. cerevisae BT-R2 and S. cerevisaie BT-R1, respectively. In evaluating the findings of productivity, with the Student t test, the yeast found no difference between the productivities of S. cerevisiae BT-R1 and BT-R2, however, if there was significant difference with respect to the control yeast. Was isolated yeast producing ethanol from corn steep liquor from Mayorista market (Trujillo Peru), but did not exceed the productivity of yeast control. Keywords: Isolation. Saccharomyces cerevisiae, corn steep liquor, Mayorista Market. Trujillo.

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INTRODUCCIN Las levaduras estn ampliamente distribuidos en la naturaleza, sus hbitats puede ser no solo las capas superiores del suelo, sino tambin muchas materias orgnicas, sobre todo los de origen vegetal que contienen hidratos de carbono, tambin se pueden aislar del suelo de viedos y huertos, superficies de frutas dulces como uvas, manzanas, limn, etc., de las hojas y otras partes de la planta, asimismo, se puede aislar de las frutas y verduras, en los que se producen la fermentacin del azcar con desprendimiento de CO2 y liberacin de etanol1,2,3. La capacidad fermentativa en mosto de cerveza se determina cuantitativamente midiendo el grado de materia prima que es fermentada a partir de 100 g de extracto de cerveza: las diferentes especies y razas de la levadura se diferencian por el grado fermentativo y por ello se habla de razas poco fermentativas pero a su vez estas especies de levadura pueden variar respecto a las propiedades fermentativas frente a un glcido4. Los procesos de fermentacin requieren en general una serie de operaciones unitarias cuyo objetivo es la conversin de un sustrato dado (fuente de carbono) en un producto final, utilizando un microorganismo como catalizador. Estas operaciones unitarias pretenden tanto el cubrir los requerimientos nutritivos necesarios para el crecimiento y la formacin de productos, como el control del medio ambiente para la optimizacin del proceso5. El proceso de produccin y excrecin de etanol, as como los factores que lo regulen, estn por ser aclarados con el conocimiento de los aspectos fisiolgicos y genticos en la produccin de etanol por las clulas de levaduras6. Sacharomyces cerevisae es la levadura ms utilizada en dicho proceso; sin embargo, existen diferencias entre las especies y las cepas respecto a las condiciones en que logran su mayor rendimiento7,8; se considera que para ello la cepa debe tener buena velocidad de fermentacin y deber ser tolerante a elevadas concentraciones de glucosa y de etanol9,10,11. En la fermentacin espontnea de los mostos de uva se perfilan tres estadios o fases biolgicamente diferenciados; en cada uno de ellos intervienen levaduras de distintas especies con marcadas diferencias fisiolgicas: en la primera fase predominan levaduras productoras de bajo grado alcohlico e importantes concentraciones de cidos voltiles, en la segunda fase figuran de forma casi constante especies de gran pureza fermentativa y productoras de grado alcohlico medio y en la tercera fase distintas especies del gnero Saccharomyces, principalmente S. cerevisiae, tpicamente alcoholigenas, que terminan el proceso fermentativo con el total agotamiento de los azucares 12. En la costa y sierra del norte del Per se ha adoptado como bebida tradicional a la Chicha de Jora, que se elabora en forma artesanal en etapas que se encuentran sistematizadas en: Materia Prima, Coccin, Filtracin y Fermentacin. Sin embargo podemos observar que en la etapa de produccin de Jora se encuentran deficiencias que hacen esta no tenga las capacidades de una Malta de Cebada y un menor rendimiento. Asimismo en las tcnicas de fermentacin artesanales se puede producir sustancias que son txicas para el hombre, y por ltimo sera adecuado el conseguir un mtodo de conservacin que nos permita tenerla siempre lista para ser consumida en estado ptimo de sus caractersticas organolpticas13. Centurin14 realiz la seleccin secundaria de levaduras nativas productoras de etanol aisladas de frutos de la Regin La Libertad evalu las productividades (en g etanol/g lev. h) de los cultivos puros F16, aislado de Fragaria sp Fresa (2.86 x 10-2), C10 y C13, aislados de Spondias purpurea ciruela (4.13 x 10-2 y 4.58 x 10-2 ) y U20, aislado de Vitis vinfera uva, (3.75 x 10 -2), superando, en todos los casos, a la cepa testigo S. cerevisiae MIT L51 (2.54 x 10-2). Posteriormente, Silva15, logr aislar Candida kefyr, Candida Krusei, Hansenula anomala y S. cerevisiae a partir de vinos de fabricacin artesanal del distrito de Cascas. En diversos trabajos utilizando cepas de Saccharomyces sp, se encontr que produjeron entre 5.30 y 6.14 mg de PUC/mL de medio de fermentacin a base de jugo de caa, equivalente en glucosa, en un biorreactor airlift de 0.4 L de volumen con 190 mL de volumen de trabajo incubado a 30C/10 h 16, asimismo, en mostos de dtiles se ha logrado producir biomasa de S. cerevisisae entre 2.97 y 4.72 g /L, utilizando 12.8 g de sacarosa en fermentacin de lote alimentado17. Se sabe que en la chicha de jora existen levaduras seleccionadas con elevado potencial de produccin de etanol. Si se aslan, identifican y caracterizan cinticamente tales levaduras, se podran proponer nuevas estrategias en la produccin de etanol en las empresas productoras del alcohol con

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mejores rendimientos y a bajo costo para de esta manera satisfacer la demanda de alcohol etlico (etanol) del mercado local, regional y nacional. En tal contexto, se plante una investigacin encaminada a aislar levaduras productoras de etanol a partir de chicha de jora del Mercado Mayorista de Trujillo-Per, teniendo en cuenta que all se expende cotidianamente tal bebida con aceptable demanda en ciertos estratos sociales MATERIAL Y MTODOS Material biolgico Dos litros de Chicha de jora que se expenden en cuatro puestos del Mercado Palermo Mayorista de Trujillo-Per. Recoleccin y transporte de la muestra Las muestras se tomaron haciendo uso de botellas plsticas descartables desinfectadas con agua clorada y manteniendo las condiciones de asepsia en todo momento y fueron rotulados con la fecha, hora y condiciones de muestreo. Se tomaron muestras de cuatro puestos de venta de la Chicha de Jora del Mercado Palermo Mayorista con botellas de 0.5 L (500 mL), haciendo un total de 2 L (2000 mL), las que Inmediatamente despus fueron llevados al Laboratorio de Biotecnologa del Departamento de Microbiologa y Parasitologa de la Facultad de Ciencias Biolgicas de la Universidad Nacional de Trujillo. Las muestras se homogenizaron y se mantuvieron en refrigeracin hasta que se aplicaron las tcnicas de aislamiento de levaduras productoras de etanol, descritos ms adelante. Aislamiento de las levaduras productoras de etanol El aislamiento de las levaduras se realiz por la tcnica del agotamiento de muestra por estriado en placa petri servida con Agar Saboudarud Sacarosado al 4% (ASS) e incubado a 24 3C por 5 das. Las colonias que se mostraron como tpicas de levaduras y estuvieron libres de contaminantes, se seleccionaron, anotndoles sus caractersticas y se les asign un cdigo. Obtencin de cultivos puros de levaduras productoras de etanol Cada colonia de levaduras seleccionada en el paso anterior, se analizaron al microscopio a las cuales se les hizo una observacin en fresco y luego un frotis y coloracin simple y Gram. Aquellas colonias que se mostraran como levaduras tipo Saccharomyces y estuvieran libres de contaminantes, se trasladaran a tubos de ensayo con ASS inclinado incubndolo a Temperatura Ambiente (24 4C) por 5 das. Luego de observar el desarrollo microbiano, se les rotul con su cdigo y se conserv en refrigeracin hasta la evaluacin de la capacidad fermentativa (productividades). Obtencin de biomasa de los cultivos puros de levaduras productoras de etanol. Obtenidos los cultivos puros de levaduras en el paso anterior, se procedi a realizar la obtencin de biomasa de los mismos, logrando un franco desarrollo de las levaduras en toda la superficie de placas Petri conteniendo Agar Sabouraud Sacarosado al 4% (ASS) e incubado a Temperatura Ambiente (24 4C) por 5 das, los que se cosecharon con agua peptonada, obtenindose una suspensin densa de las levaduras. Posteriormente, stas suspensiones de levaduras, se centrifugaron a 2000 rpm por 15 minutos (este paso se repiti tres veces), finalmente se obtuvo el peso de la biomasa de la levadura, la que estuvo lista para evaluar su capacidad fermentativa18. Evaluacin de la Capacidad Fermentativa por el Mtodo de Davies-Griffith modificado19 La biomasa de levaduras obtenido en el paso anterior se resuspendi en 10 ml de Caldo Sabouraud Sacarosado al 10% (CSS) y coloc en un dispositivo de fermentacin (10 mL) en condiciones aspticas. Luego se sellada con parafina para evitar la fuga del gas producida por las levaduras; en la parte del embone del dispositivo, se instala una manguera de venoclisis para recoger el gas (Davies & Griffith, 1982). El otro extremo de la manguera de aireacin de pecera, se introduce en una probeta llena de solucin de NaCl al 23% coloreado con Azul de metileno, donde se contabiliza la produccin del Gas producido por las levaduras a travs del tiempo; este proceso se realiz a Temperatura Ambiente (24 4C), por triplicado. Monitoreo de la capacidad fermentativa de levaduras La evaluacin de la capacidad fermentativa (productividades) de cada cultivo puro de levadura se realiz midiendo la produccin de CO2 durante ocho (8) horas continuas de fermentacin, hacindose lecturas cada 2 horas (por triplicado). El volumen de CO2 producido cada dos horas fue convertido en

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productividad (gramos de etanol/gramo de levadura por hora), determinacin que se hizo para cada cultivo puro de levadura. En este paso, se seleccion a la levadura mejor productora de etanol. Anlisis de datos Las Capacidades fermentativas (productividades) de cada cultivo puro de levadura aislada de Chicha de Jora del mercado Palermo Mayorista de la provincia de Trujillo, se clasificaron, organizaron y presentaron en tablas y figuras. Los datos obtenidos de las productividades de las levaduras seleccionadas, fueron evaluados por la prueba de T- Student para comparar y observar las diferencias significativas20. RESULTADOS Se aislaron y seleccionaron tres cultivos puros de levaduras a partir de las muestras de Chicha de Jora de cuatro puestos de venta del mercado Mayorista de Trujillo (Per). De ellos, dos mostraron caractersticas microscpicas y macroscpicas compatibles con S. cerevisiae (Tabla 1, Fig. 1) Tambin se encontr que S. cerevisiae MIT-51, empleado control y las ocho horas, mostr mayor capacidad fermentativa que los aislados BT-R1 y BT-R2, aunque sin mostrar significancia estadstica (P>0,05)
Tabla 1. Caractersticas macro y microscpicas de la levadura aisladas de Chicha de Jora del mercado Mayorista (Trujillo, Per) y cultivadas en Agar-Sabouraud-Sacarosado (4%, pH 5.6, a Temperatura Ambiente 24 4C, utilizando como diluyente de la muestra solucin Salina Fisiolgica)
Caractersticas microscpicas de la levadura compatible con saccharomyces SI SI NO Caractersticas microscpicas de las clulas Clulas redonda u ovaladas estado con yemas Clulas redonda u ovaladas estado con yemas Clulas alargada con proyecciones distales Caractersticas macroscpicas de la levadura Colonias redondas, de aspecto cremoso y convexo. Colonias redondas, de aspecto cremoso y convexo. Colonias redondas, de aspecto cremoso y plano. Denominacin (Cultivo puro)

BT-R1 BT-R2 3

Fig 1. Fotografa microscpica de los cultivos de Saccharomyces cerevisiae BT-R1 (izquierda) y BT-R2 (derecha) aisladas de Chicha de Jora del mercado Mayorista (Trujillo, Per). Tabla 2. Capacidad fermentativa (productividad) de Saccharomyces cerevisiae MIT-L51 (Control) y S. cerevisiae BT-R1 y BT-R2 aisladas de Chicha de Jora del Mercado Palermo Mayorista de la provincia de Trujillo - Per

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Productividad (g etanol/g lev.h) x 10 -2

Saccharomyces cerevisiae

Tiempo (horas)

MIT-L51 BT-R1 BT-R2

0 0 0 0

2 0,424 0,046 0,018

4 0,064 0,2 0,16

6 1,13 0,56 0,47

8 1,59 0,57 0,56

Mtodo Davies - Griffith modificado (Det. Capacidad Fermentativa en Productividad) Medio fermentativo: Caldo Sabouraud Sacarosado al 10% Temperatura Ambiente (24 4C)

Fig. 2. Perfiles de la Capacidad Fermentativa (productividad) de Saccharomyces cerevisiae MIT-L51 (Control) y S. cerevisiae BT-R1 y BT-R2 aisladas de Chicha de Jora del mercado Palermo Mayorista de la provincia de Trujillo - Per, en Caldo Sabouraud Sacarosado 10% y Temperatura Ambiente (24 4C)

DISCUSIN Las exigencias de las industrias manufactureras hacen que cada vez se estn necesitando levaduras con mayores posibilidades de produccin de metabolitos tiles, as en nuestro caso, las levaduras productoras de etanol, es un tema que atrae a pequeos y medianos empresarios para producir alcohol y otros derivados de la fermentacin industrial y a la vez generar fuentes de trabajo. El aislamiento de levaduras productoras de etanol es una prctica que viene ejecutando el hombre desde haces varios miles de aos, con el objeto de producir alcohol, bebidas alcohlicas, bebidas destiladas, pan, y alimentos fermentados. La Chicha de Jora, es una bebida fermentada, que por sus caractersticas de elaboracin, permite seleccionar levaduras productoras de etanol, as en esta experiencia, se aislaron levaduras aisladas, inicialmente como cultivos puros de levaduras, luego se las evalu por el mtodo de Davies-Griffith modificado19, para ver su productividad y finalmente se seleccion a los cultivos puros de levadura denominado S. cerevisiae BT-R1 Y BT-R2, las que mostraron productividades en promedio de 0.57 x 10-2 y 0.56 x 10-2 g etanol/g de lev. h, respectivamente. Estas levaduras no superaron la productividad alcanzada por la levadura control S. cerevisiae MIT-L51 (1.59 x 10-2 g etanol/g lev. h) quien ferment en las mismas condiciones que las levaduras seleccionadas. Los hallazgos obtenidos en el presente trabajo de investigacin, han sido obtenidos en condiciones de trabajo como son la fermentacin en Caldo Sabouraud Sacarosado al 10% (CSS) e incubado a Temperatura ambiente (24 4C) por 8 horas y evaluadas por el mtodo de Davies-Griffith modificado, nos muestran que las productividades alcanzadas no han superado lo encontrado por otros

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investigadores. Tal es el caso de Centurin (2008) quien realiz un trabajo sobre la seleccin secundaria de levaduras nativas productoras de etanol aisladas de frutos de la Regin La Libertad Per, evaluando sus productividades (en g etanol/g lev. h), por el mtodo de Davies-Griffith, los cultivos puros F16, aislado de Fragaria sp Fresa (2.86 x 10-2), C10 y C13, aislados de Spondias purpurea ciruela (4.13 x 10-2 y 4.58 x 10-2 ) y U20, aislado de Vitis vinfera uva, (3.75 x 10 -2), superando, en todos los casos, a la cepa testigo S. cerevisiae MIT L51 (2.54 x 10-2). Las condiciones de evaluacin de la fermentacin no han sido las mismas, lo encontrado en esta trabajo de investigacin probablemente haya sido debido a que para este experimento, no se utiliz la Solucin Azucarada Bufferada (SAB) como nos indica originalmente el mtodo de mtodo de DaviesGriffith, sino que hemos utilizado el CSS al 10%, y en la caso de Centurin, utiliz una Solucin Azucarada Bufferada Enriquecida (SABe), que incluye sales de K2HPO4 (0.2 g %) y NaH2PO4 (0.2 g%). Como sabemos los medios de aislamiento y evaluacin de la capacidad fermentativa juegan un rol importantsimo en la obtencin de levaduras productoras de etanol. El aislamiento y seleccin son actividades que se ejecutan en forma complementarias, no se puede hablar de aislamiento sin pensar en poner las pruebas de seleccin, as un criterio de seleccin (Screening) es que las colonias estn puras sin contaminacin, que desarrollen en forma tpica en los medios de aislamiento, y que sobre todo produzcan el metabolito de inters, el alcohol. Sabemos tambin que las muestras pueden tener una serie de microorganismos acompaantes, por lo que las tcnicas de aislamiento tienen que ser efectivas para lograr aislar cultivos puros de levaduras, as, Silva (2009), logr aislar Candida kefyr, Candida krusei, Hansenula anomala y S. cerevisiae a partir de vinos de fabricacin artesanal del distrito de Cascas, identificndolas con Rapid Yeast identification Panel Microscan (RYID), no evaluando las productividades de etanol. En diversos trabajos utilizando cepas de Saccharomyces sp, se encontr que produjeron entre 5.30 y 6.14 mg de PUC/mL de medio de fermentacin a base de jugo de caa, equivalente en glucosa, en un biorreactor airlift de 0.4 L de volumen con 190 mL de volumen de trabajo incubado a 30C/10 h (Murrugara, 2010), en nuestro trabajo se encontr una produccin de biomasa en Agar Sabouraud Sacarosado al 4%, a temperatura ambiente (24 4C) y por 5 das de incubacin, de 0.293, 0.433 y 0.24 para S. cerevisiae BT-R1, BT-R2 Y MIT-L51, respectivamente. En mostos de dtiles, se ha logrado producir biomasa de S. cerevisisae entre 2.97 y 4.72 g /L, utilizando 12.8 g de sacarosa en fermentacin de lote alimentado17. Se han encontrado otros hallazgos con productividades diferentes a las nuestras, pero en condiciones diferentes de procesamiento, as, Olano (2004), obtuvo a las 30 h de fermentacin y a 30C, utilizando Saccharomyces cerevisiae MIT L51 inmovilizado con 4% de agar, 2,1087 g etanol/h/g lev, con 5% de agar, 1,9602 g etanol/h/g lev y con 6% de agar, 1,8840 g etanol/h/g lev., todas en mosto de uva V. vinfera var. Gross Colman. Puede suponerse entonces, que algunas levaduras son mejores fermentadoras que otras, ms aun teniendo en cuenta que dentro de un mismo gnero de levaduras existen diferentes especies, variedades o razas4. Como se ha observado, la presencia de sales pueden marcar significativamente la diferencia en la seleccin de levaduras productoras de etanol; el potasio resulta indispensable para el crecimiento de las levaduras, pero incluso pequeas cantidades son suficientes; si se hallan presentes cantidades mayores de potasio, pueden ejercer una accin desfavorable sobre el crecimiento y la fermentacin12. El calcio no es necesario para el crecimiento, pero parece ejercer una accin favorable sobre el de la levadura y la fermentacin. El magnesio es imprescindible para el desarrollo de las levaduras y tambin necesario para la fermentacin pes esta sustancia, es uno de los activadores del proceso fermentativo alcohlico. El buen desarrollo de la fermentacin est en parte ligada a la necesidad de evitar que las levaduras estn sometidas a temperaturas demasiado elevadas. La experiencia ha demostrado que son tanto ms sensibles q la elevacin de temperatura cuanto ms vieja sea la poblacin, lo que constituye una causa de ralentizacin y a veces de parada, mientras quedan en el medio azcares an no transformados en alcohol9; es por esto que en el experimento surge la necesidad de trabajar con cultivos jvenes aislados despus de 48 horas de incubacin. Tambin la temperatura, juega su rol importantsimo, pues acelera el crecimiento de las levaduras y la velocidad de fermentacin. Si llega al mximo de 40 C, las clulas comenzarn a morir despus de poco antes el metabolismo haya cambiado, de todos modos esta temperatura est muy por encima de las temperaturas habituales8; es por esto que nuestros ensayos fueron tratados a temperaturas bajas, puesto que las levaduras reducen progresivamente su actividad, hasta cesarla completamente cuando

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se aproxima a 0C, as como a 40 C, considerando que a concentraciones mayores de Calcio , esta actividad elevara un tanto por ciento. El hecho de tratar de mantener la temperatura a un nivel razonablemente bajo no aspira solamente a la mayor regularidad de la fermentacin y mayor grado alcohlico, sino que tiende a frenar la prdida por volatilizacin de una fraccin importante de constituyentes aromticos21. En un proceso de fermentacin alcohlica tiene especial importancia la velocidad de fermentacin 7, este trmino se refiere a la cantidad de alcohol o de CO2 producido por unida de tiempo8. La velocidad de fermentacin den condiciones ambientales similares depende principalmente de la cepa 22 y de la concentracin celular23, por tanto, es posible deducir que aumentando la concentracin celular aumentar la velocidad de fermentacin. Los cultivos puros de levaduras aisladas y seleccionadas a S. cerevisiae BT-R1 Y BT-R2 partir de Chicha de Jora del mercado Mayorista de la Provincia de Trujillo - Per, fueron identificadas con el sistema API 20 C AUX, concluyndose en que pertenecen a la especie S. cerevisiae con un coeficiente de identificacin del 99.9 %, como se conoce el Sistema API son pruebas basadas en el test de auxonograma, es decir, de cmo se comportan las levaduras frente a las fuentes carbonadas, si la asimilan o las fermentan, en base a esto se ha estandarizado un valor numrico el que se compara con unas tablas previamente elaboradas por el sistema y se puede identificar en forma rpida y efectiva24. La capacidad e incapacidad para fermentar carbohidratos hasta etanol y dixido de carbono es la caracterstica ms usada para la diferenciacin de especies. Aunque esto se encuentra menos aplicacin en la definicin de gneros; sin embargo, ocasionalmente es de algn uso. Por ejemplo, el gnero Saccharomyces se caracteriza por la fuerte fermentacin de una o ms azucares25 y es un derivado de la levadura silvestre, usadas en tiempos antiguos para la fabricacin de vino y de cerveza26. Durante el trabajo de aislamiento y seleccin, se ha tenido en cuenta mantener las condiciones constantes, toda vez que durante este proceso, pueden haber factores que pueden influir sustancialmente, como es el caso de los diluyentes, esto en razn de que Valverde27, encontr que los diluyentes, como agua peptonada y destilada tienen influencia en los recuentos de levaduras. CONCLUSIONES Se aislaron y seleccionaron dos cultivos puros de levaduras a partir de Chicha de Jora del mercado Mayorista de Trujillo (Per). Los cultivos puros de levaduras aislada de Chica de Jora del mercado Mayorista de Trujillo fueron identificados como Saccharmonyces cerevisiae con un coeficiente de identificacin excelente al del 99.9% y se les codific BT-R1 y BT-R2. Las productividades de los cultivos puros de S. cerevisiae BT-R1 Y BT-R2 no fueron diferentes significativamente, mientras que si fueron diferentes significativamente con S. cerevisiae MITL51 (control). El promedio de las productividades de la levadura control S. cerevisiae MIT-L51 (1.9 x 10-2 g etanol/g lev.h) fue mayor que las alcanzadas por S. cerevisiae BT-R2 y (0,57 x 10-2 g etanol/g lev.h) y Bt-R1 (0,55 x 10-2 g etanol/g lev.h). AGRADECIMIENTOS A la Oficina General de Promocin de la Investigacin de la Investigacin Cientfica (OGPRODEIN), por haber financiado el presente proyecto identificado con el cdigo: P. I. CODIGO N 18031212131 2012 REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
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