UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO NORTE

Grupo: Bruno Robson Simonetti Silva Fernanda da Silva Pereira Vanessa da Silva Pessa Data: 12/11/10 Disciplina: Bioqumica Fundamental para n!en"eiros Professor: #ui$ Roberto %i$ de &breu

Aula Prtica: EN I!AS

Intro"u#$o: &s en$imas s'o subst(ncias or!(nicas de nature$a normalmente prot)ica* especiali$adas na cat+lise de rea,-es biol.!icas/ st'o entre as biomol)culas mais not+veis devido a sua e0traordin+ria especi1icidade e poder cataltico* que s'o muito superiores aos dos catalisadores produ$idos pelo "omem/ Praticamente todas as rea,-es que caracteri$am o metabolismo celular s'o catalisadas por en$imas* da a !rande import(ncia dessa biomol)cula para a sobreviv2ncia dos diversos or!anismos vivos % S'o catalisadores celulares e0tremamente poderosos que atuam bai0ando a ener!ia de ativa,'o necess+ria para que se d2 a rea,'o qumica acelerando a velocidade da mesma* sem* no entanto participar dela como rea!ente ou produto/ Por serem catalisadores e1icientes* s'o aproveitadas para aplica,-es industriais* como na ind3stria 1armac2utica ou na alimentar/ &tuam ainda como re!uladoras deste con4unto comple0o de rea,-es e s'o* portanto* consideradas as unidades 1uncionais do metabolismo celular/ %i1erentes en$imas catalisam di1erentes passos de vias metab.licas* a!indo de 1orma concertada de modo a n'o interromper o 1lu0o nessas vias/ Por outro lado* cada en$ima pode so1rer re!ula,'o da sua atividade* aumentando5a* diminuindo5a ou mesmo interrompendo5a/ &ssim* o 1lu0o de uma via metab.lica depende da velocidade de cat+lise das en$imas que nela participam/ 6esse conte0to pode se analisar por di1erentes rea,-es 1atores que inibem a atua,'o da en$imas* sua especi1icidade* varia,-es na sua velocidade de atua,'o e o recon"ecimento de sua nature$a prot)ica/ O&'eti(os: 7bservar e entender v+rios aspectos da en$ima 8rease: Sua composi,'o* rea,'o que esta en$ima catalisa* a especi1icidade em rela,'o ao substrato* o que ocorre quando esta ) desnaturada e a inibi,'o por meio de sais de merc3rio/

!aterial e !)to"os: 9aterial: 5 :ubos de nsaio; 5 Suporte para :ubos de nsaio; 5 Pipetas; 5 P2ra; 5 B)quer; 5 #amparina; 5 Reativo de Biureto; 5 Suspens'o de 8rease <Farin"a de Fei4'o de Porco diluda em !licerol =>?@; 5 A!ua %estilada; 5 8r)ia :amponada pB =*0 contendo indicador vermel"o de 1enol; 5 :iour)ia :amponada pB =*0 contendo indicador vermel"o de 1enol; 5 Cloreto de 9erc3rio D >?; 5 Procedimentos: * + Rea#$o "o ,iureto: 5 Colocou5se em um tubo de ensaio 0E !otas de suspens'o de urease; 5 &dicionou5se 2 m# de +!ua destilada e em se!uida a!itou5se a solu,'o; 5 Preparou5se um tubo de ensaio com 2 m# de +!ua destilada; 5 &dicionou5se 2 m# de reativo de Biureto em cada tubo; 5 Comparou5se ambos os tubos e anotou5se os resultados/ - + Teste "e Ati(i"a"e 5 Colocou5se em um tubo de ensaio F m# de 8r)ia :amponada pB =*0 contendo indicador vermel"o de 1enol; 5 &dicionou5se 0E !otas de suspens'o de ur)ase e "omo!enei$ou5se a solu,'o; 5 7bservou5se a mudan,a de cor ap.s cinco minutos/ . + Especifici"a"e 5 m um tubo de ensaio adicionou5se 1 m# de +!ua destilada* 0E !otas de suspens'o de urease e a!itou5se a solu,'o; 5 &dicionou5se F m# de :iour)ia :amponada pB =*0 contendo indicador vermel"o de 1enol; 5 &p.s > minutos comparou5se os resultados com a e0peri2ncia anterior/ / + Desnatura#$o pelo 0alor 5 m um tubo de ensaio adicionou5se 2 m# de +!ua destilada e 0E !otas de suspens'o de ur)ase; 5 &!itou5se a solu,'o; 5 Ferveu5se a solu,'o por 1 minuto; 5 Pipetou5se em um outro tubo de ensaio F m# de 8r)ia :amponada pB =*0 com indicador vermel"o de 1enol e adicionou5se 1 m# da solu,'o do tubo anterior <Suspens'o de ur)ase 1ervida@; 5 &p.s > minutos observou5se se "ouve mudan,a da colora,'o do sistema; 5 Comparou5se o resultado com o da e0peri2ncia 2 <:este de &tividade@/ 1 + Ini&i#$o por sais "e !erc2rio

5 Colocou5se em um tubo de ensaio 2 m# de +!ua destilada e 0E !otas de suspens'o de urease e a!itou5se; 5 &dicionou5se 0> !otas de Cloreto de 9erc3rio D >? e a!itou5se; 5 &dicionou5se F m# de 8r)ia :amponada pB =*0 contendo indicador vermel"o de 1enol; 5 7bservou5se se "ouve mudan,a de colora,'o ap.s > minutos/ Resulta"os e Discuss$o: 6a rea,'o do Biureto* observou5se que somente o tubo que contin"a 8rease desenvolveu colora,'o violeta* devido as li!a,-es peptdicas que esta en$ima cont)m* pois o Biureto rea!e com o cobre o0idado e com os !rupos C76B das li!a,-es peptdicas resultando numa colora,'o violeta/ 6a rea,'o do :este de &tividade* pde5se veri1icar que a 8rease catalisa a rea,'o de decomposi,'o da 8r)ia* pois mesmo a solu,'o de 8r)ia estando 1racamente tamponada a pB =*0* a produ,'o de amnia c"e!ou a uma concentra,'o su1iciente para sobrepu4ar a a,'o do tamp'o/ Com a a4uda do indicador 1enol1talena pode5se veri1icar a mudan,a de pB* que 1icou alcalino devido D !rande quantidade de amnia/ 6a rea,'o da speci1icidade* veri1icou5se que a 8rease s. atua sobre um substrato espec1ico* que ) a 8r)ia* sendo assim n'o se observou mudan,a de colora,'o na solu,'o que 1oi preparada com :iour)ia <Composto semel"ante D 8r)ia@* indicando que o pB n'o 1oi modi1icado* o que nos permite concluir que a 8rease n'o atuou sobre a :iour)ia e n'o produ$iu amnia/ 6a rea,'o da %esnatura,'o pelo calor veri1icou5se que a en$ima 8rease ) desnaturada pela e0posi,'o a altas temperaturas e ap.s isto a en$ima perde sua atividade* isto 1oi evidenciado pelo 1ato de que a mudan,a de colora,'o 1oi muito pequena em rela,'o D mudan,a ocorrida no :este da &tividade* indicando que o pB 1oi levemente modi1icado* o que nos permite concluir que a 8rease perdeu bastante o poder de catalisar a rea,'o depois de ser desnaturada/ 6a rea,'o de Gnibi,'o por Sais de 9erc3rio pde5se constatar que a en$ima 8rease ) inibida pela adi,'o de sais de merc3rio na solu,'o* pois estes li!am5se aos !rupos SB < ssenciais para a atividade en$im+tica@ da en$ima os bloqueiam* por isso observou5se um precipitado e a n'o "ouve mudan,a de colora,'o* indicando que n'o "ouve 1orma,'o de amnia e que a 8rease perdeu seu poder de catalisar a rea,'o/ 3uest4es para fi5a#$o "a Aula Prtica 01 H Iual a 1inalidade de 1a$er a rea,'o do Biureto para a 8reaseJ Resposta: & 1inalidade de 1a$er a rea,'o do Biureto para a 8rease ) evidenciar seu car+ter prot)ico* pois o Biureto rea!e com o cobre e os !rupos C76B das li!a,-es peptdicas e desenvolve uma colora,'o violeta* nos permitindo di$er que "+ li!a,-es peptdicas na en$ima 8rease/ 02 H Iuais os 1atores estudados nessa pr+tica que in1luenciaram na rea,'o en$im+ticaJ Resposta: 7s 1atos estudados nessa pr+tica que in1luenciaram na rea,'o en$im+tica 1oram: 7 substrato* pois a urease possui especi1icidade sobre o substrato ur)ia* lo!o* ela n'o catalisa nen"uma outra rea,'o de nen"uma outra substancia que n'o se4a ur)ia/ &l)m disso a temperatura in1luenciou na rea,'o en$im+tica* pois percebeu5se que ap.s 1erver5se a urease a en$ima perdeu

seu poder cataltico/ 7utro 1ator que in1luenciou na rea,'o en$im+tica 1oi a adi,'o de sais de merc3rio* que atuaram como inibidores pois li!aram5se aos !rupos SB da en$ima < ssenciais para a atividade en$im+tica@ e 1ormaram sais com estes !rupos/ 0F H Por que quando se coloca 8rease com a :iour)ia o vermel"o de 1enol n'o muda de corJ Kusti1ique Resposta: Iuando se coloca 8rease com a :iour)ia n'o ocorre nen"uma rea,'o* pois a 8rease possui especi1icidade sobre a 8r)ia* lo!o* n'o "aver+ 1orma,'o de amnia e consequentemente o vermel"o de 1enol n'o muda de cor* porque o pB da solu,'o n'o se tornar+ alcalino/ 0L H 0plique a inatividade da en$ima nas rea,-es de desnatura,'o pelo calor e de inibi,'o por Sais de 9erc3rio/ Resposta: Iuando se aqueceu a solu,'o contendo urease e depois adicionou5 se ur)ia M indicador vermel"o de 1enol observou5se que a colora,'o mudou muito pouco* o que permite concluir que a en$ima 1oi desnaturada pelo calor e perdeu praticamente toda sua capacidade de catalisar a rea,'o de de!rada,'o da ur)ia/ Iuando adicionou5se sais de merc3rio M urease M ur)ia M indicador vermel"o de 1enol observou5se que a colora,'o permaneceu inalterada* o que permite concluir que os sais de merc3rio possuem e1eito inibidor sobre a urease* pois esta n'o conse!uiu catalisar a rea,'o de de!rada,'o da ur)ia/ & literatura mostra que o merc3rio li!a5se aos !rupos SB da en$ima < ssenciais para &tividade n$im+tica@ e os bloqueia* 1a$endo assim com que a en$ima perca seu poder cataltico/ &l)m disso observou5se a 1orma,'o de um precipitado que seria possivelmente sais 1ormados entre o merc3rio e os !rupos SB da en$ima/ 0onclus$o: Com este relat.rio pde5se concluir que as en$imas s'o estruturas que possuem li!a,-es peptdicas* por isso s'o estruturas prot)icas/ Pde5se tamb)m constatar que a en$ima urease possui especi1icidade sobre um 3nico substrato* a ur)ia/ Por 1im observou5se que al!uns 1atores impedem a atividade en$im+tica por di1erentes motivos: 7 calor desnatura a en$ima e esta perde a sua 1orma inicial* tornando5se incapa$ de catalisar as rea,-es/ Sais de merc3rio inibem a atividade en$im+tica atrav)s da li!a,'o com os !rupos SB da en$ima/

,i&lio6rafia: LEHNINGER, A. L.; NELSON, D. L. COX, M. M. Princpios de Bioqumica. So Paulo: Sarvier, 199 .

CHAMPE, Pa!ela C.; HAR"E#, Ri$%ar& A. Bioqumica Ilustrada. Artes Mdicas. Por'o Ale(re, 199).