Introduo a Biotecnologia

Tcnico em Biotecnologia 2013

Semana 2

Biotecnologia
A Biotecnologia pode ser definida como qualquer aplicao ou tcnica que utiliza sistemas biolgicos, organismos vivos ou derivados desses, para produzir ou modificar produtos e processos de uso especfico tanto de origem animal quanto vegetal, ou seja, um conjunto de conhecimentos tcnicos e mtodos, de base cientfica ou pr tica, que permite a utilizao de seres vivos como parte integrante e ativa do processo de produo industrial de bens e servios!

Histrico
" uso da Biotecnologia teve o seu incio com os processos fermentativos, cuja utilizao, acaba se confundindo com a prpria histria da humanidade! A produo de bebidas alcolicas pela fermentao de gros de cereais j era conhecida pelos sumrios e babil#nios antes do ano $!%%% a!&! 'ais tarde, por volta do ano (!%%% a! &!, os egpcios, que j utilizavam o fermento para fabricar cerveja, passaram a empreg )lo tambm na fabricao de po! "utras aplica*es como a produo de vinagre, iogurte e queijos tambm eram utilizados! 'esmo com toda essa produo, no eram conhecidos os agentes causadores das fermenta*es que ficaram ocultos por mil+nios! ,omente no sculo -.//, o pesquisador Antom .an 0eeu1enhoc2, atravs da visualizao em microscpio, descreveu a e3ist+ncia de seres to min4sculos que eram invisveis a olho nu! 5oi somente (%% anos depois que 0ouis 6asteur , em 789$, provou que a causa das fermenta*es era a ao desses seres min4sculos, os microrganismos, caindo por terra a teoria, at ento vigente, que a fermentao era um processo puramente qumico! 5oi ainda 6asteur que provou que cada tipo de fermentao era realizado por um microrganismo especfico e que estes podiam viver e se reproduzir na aus+ncia de ar! :m 78;9, :duard Buchner, demonstrou ser possvel a converso de a4car em lcool, utilizando clulas de levedura maceradas, ou seja, na aus+ncia de organismos vivos! A partir de 7;(8, com a descoberta da penicilina por Ale3ander 5leming, muitos tipos de antibiticos foram desenvolvidos no mundo! ,endo, portanto, a produo de antibiticos o grande marco de refer+ncia na fermentao industrial! <a dcada de =%, durante a segunda guerra mundial, os antibiticos passaram a integrar os processos industriais fermentativos, principalmente nos :stados >nidos, baseando)se inicialmente na sntese da penicilina e, posteriormente, da estreptomicina!

" avano da biotecnologia teve incio em 7;?@ quando Aatson e &ric2 apresentaram o modelo de dupla hlice do B<A! ,eguiu com a descoberta de Arber, em 7;$%, de uma enzima, denominada de enzima restritiva, em bactrias, que seccionou o B<A de organismos em pontos precisos! :m 7;9@ &ohen e BoCer removeram um gene especfico de uma bactria e colocaram)no dentro de outro, usando a enzima restritiva! ,endo esse o incio da tecnologia do B<A recombinante ou engenharia gentica! <o ano de 7;99 genes de outros organismos foram transferidos para bactrias, um procedimento que eventualmente contribuiu para a primeira transfer+ncia do gene humano pela Associao da &arolina do <orte 6ara a 6esquisa Biomdica, (%%$! "s avanos biolgicos e tecnolgicos proporcionaram o desenvolvimento de quatro gera*es de tecnologias de reproduo assistida para humanos e animais, sendo elasD ) 7a EeraoD /nseminao artificial, criopreservao de gametas e embri*esF ) (G EeraoD superovulao e transfer+ncia de embri*esF ) @G EeraoD se3agem esperm tica e embrion ria, a recuperao de ocitos e a fertilizao in vitroF ) =G EeraoD clonagem por transfer+ncia nuclear de clulas embrion rias ou som ticas, a transgenia e a biologia de clulas)tronco!

Perodo !"000 a" #" 2"000 a"#" 1-./ d" #" 1--011210 121011250 1250112/0 12/3 10.3 12-2

Principais contecimentos $e$idas alcolicas %cer&e'a e &in(o) so produ*idas por sumrios e $a$il+nios pani,icao e $e$idas ,ermentadas so utili*adas por egpcios e gregos Pasteur mostra 0ue a ,ermentao causada por microrganismos surgimento da ,ermentao industrial %3cido l3ctico4 etanol4 &inagre) sntese de glicerol4 acetona e 3cido ctrico anti$iticos so produ*idos em larga escala por processos ,ermentati&os esta$elecida a estrutura do 67 incio da engen(aria gentica insulina (umana produ*ida

Atualmente, crescente o ritmo de desenvolvimento do setor de biotecnologia, isso faz com que haja cada vez mais a interao entre a ci+ncia e a tecnologia, como por

e3emploD biologia molecular, fisiologia, microbiologia, engenharia qumica, engenharia ambiental, etc!

8tili*ao e 3reas de atuao

A Biotecnologia encontra muitas e diferentes aplica*es importantes em v rios segmentos de atividade, sendo que suas aplica*es na ind4stria constituem o objetivo principal da chamada Biotecnologia /ndustrial! Agricultura Cultura de Tecidos >ma das reas mais promissoras na Biotecnologia a da cultura de tecidos! H uma rea j antiga, que teve inicio por volta dos anos (%, mas que s alcanou progressos razo veis a partir do fim da dcada de $%, devido I necessidade de produzir quantidades crescentes de alimentos e matrias primas para a ind4stria <os tecidos e clulas cultivadas Jin vitroK pode)se introduzir altera*es por ao de agentes fsicos ou qumicos com maior efici+ncia do que em plantas inteiras! Assim, as ta3as de altera*es podem ser aumentadas e, a partir dessas culturas, pode)se conseguir a regenerao de plantas com caractersticas diferentes! :3istindo assim a possibilidade de fuso de clulas com caractersticas diversas, possibilitando novos tipos de combinao, ou ate mesmo a combinao de material gentico de clulas provenientes de espcies muitas vezes diferentes umas das outras! >ma das vantagens que atravs dessa tcnica pode)se gerar um grande n4mero de material clonado em curto espao de tempo e em ambientes reduzidos, sendo ainda indicada para a eliminao de doenas e aumento de produtividade com maiores lucros para o produtor! #ontrole Biolgico de Pragas "s danos que os insetos e pragas causam I agricultura, so a causa de grandes perdas para o produtor!

As principais causas desses prejuzos so a monocultura e o uso indiscriminado de produtos qumicos e defensivos agrcolas que acabam por eliminar os inimigos naturais que e3istem em culturas diversificadas, provocando o desequilbrio ecolgico nas reas de plantio, que conseqLentemente geram condi*es propcias para o aparecimento de pragas alm de aumentar a sua resist+ncia! "s microrganismos patog+nicos aos insetos e pragas so adequados a redu*es especficas, enquanto que os predadores naturais e insetos benficos so preservados ou podem se desenvolver, estabelecendo o equilbrio natural! 6ortanto, os inseticidas microbiolgicos so considerados como uma forma alternativa de controle de pragas! :ntre esses podem ser mencionadosD ) fungos ) cigarrinha da folha da cana)de)a4carF ) vrus ) granulose da broca da cana)de)a4carF lagarta da laranjaF ) parasitas moscasD broca da cana)de)a4carF ) vespasD broca da cana)de)a4carF ) bactriasD to3inas ) lagarta do algodo e legumes ) moscas domsticas e bicheiras! moscas azuis e verdes, moscas das frutas Sementes A melhoria da produtividade agrcola pode ser conseguida mediante o uso de sementes melhoradas geneticamente! 6rodutos como a batata , cacau, caf, cana)de) a4car, arroz, cebola, laranja, milho, soja e tomate tiveram progresso na produo agrcola nos 4ltimos anos atravs do melhoramento gentico e seleo de cultivos de maior produtividade e resist+ncia a fatores ambientais! 9inerao %:i;i&iao Bacteriana de 9inrios ) <o campo da metalurgia e3trativa, mais especificamente da hidrometalurgia, a li3iviao bacteriana de minrios vem merecendo crescente ateno como alternativa para os processos convencionais! ,emelhante a li3iviao convencional, baseia)se na solubilidade dos metais em solu*es adequadas por meio de rea*es qumicas e tambm de rea*es bioqumicas, utilizando a Biotecnologia como grande aliada! &obre, urMnio e zinco so e3emplos de minerais que podem ser recuperados atravs de li3iviao bacteriana! Pecu3ria Inseminao Artificial A tcnica de inseminao artificial em bovinos teve um r pido crescimento a partir de meados da dcada de 9%! Bevido ao aperfeioamento dessa tcnica, esto ocorrendo cada vez mais mudanas no cen rio nacional, como por e3emploD aumento da

produtividade na produo leiteira e liberao de reas antes ocupadas com pastagens para outras atividades agrcolas! Transferncia de Embries " estudo de transfer+ncia de embri*es novo no 6as, tendo sido iniciado no final da dcada de 9%! A transfer+ncia de embri*es na seleo de mes de produtoras e reprodutores, na propagao de raas com caractersticas raras de produtividade, no aumento do percentual de caractersticas genticas e na diminuio do intervalo entre gera*es! Sa<de Antibiticos "s antibiticos so empregados no combate a infec*es causadas por microrganismos, notadamente bactrias, tanto no organismo humano como no animal e vegetal! ,o usados tambm no controle de infec*es em determinados processos fermentativos! "s antibiticos se constituem no grupo de maior importMncia econ#mica, entre os produtos obtidos por fermentao! Atualmente e3istem mais de ?!%%% tipos diferentes de antibiticos conhecidos, tendo sido a sua produo grandemente impactada pelo melhoramento gentico dos microrganismos utilizados! Protenas reguladoras do metabolismo A produo dessas macromolculas por microrganismos, teve grande impulso com as pesquisas do B<A recombinante! ,endo seus principais produtosD insulina humana, interferon, horm#nio de crescimento humano, peptdeos neuroativos, etc! Transformao de esterides A cortisona, descoberta no incio da dcada de @%, e suas propriedades no combate I artrite reum tica, levou I pesquisa do desenvolvimento de muitos compostos similares, hoje industrializados e comercializados! /nicialmente, a sntese da cortisona era feita por via qumica! 6osteriormente, algumas das etapas principais da sntese passaram a ser realizadas por microrganismos o que proporcionou substancial barateamento no custo final! Vacinas A Biotecnologia, atravs da tcnica do B<A recombinante, no tem medido esforos no desenvolvimento de novos agentes imunizantes para influenza tipos A e B, herpes, plio e hepatite A e B! .acinas de origem bacteriana, para diversos tipos de meningite, tem sido produzidas por meio de fermentao, bem como o componente pertussis da vacina trplice!

Processos =ermentati&os Atravs desse mtodo, diversas empresas por todo o mundo produzem e comercializam produtos obtidos atravs de processos fermentativos, tendo sido a produo em escala industrial de bens, atravs de processos microbiolgicos, iniciada a partir da primeira guerra mundial! Atualmente, e3istem mais de uma centena de produtos vi veis de serem obtidos atravs da via fermentativa, e cada vez mais usando a Biotecnologia a seu favor! En imas :nzimas so molculas de protenas que t+m a funo de catalisar rea*es, sendo produzidas por microrganismos! A principal fonte de obteno de enzimas so os microrganismos, embora muitas enzimas de aplicao industrial tenham sua origem nos tecidos animal ou vegetalD renina, obtida do est#mago de bezerros e papana, obtida do mamo, por e3emplo! "s principais tipos de enzimas comercializados atualmente so as proteases, glucoamilase, a)amilase e glicose isomerase! !cidos "rg#nicos Bentre os cidos orgMnicos que podem ser produzidos atravs da Biotecnologia por processos fermentativos destacam)seD o cido actico, o cido ctrico e o cido l ctico, os tr+s de largo uso industrial, principalmente na rea de alimentos, com a funo de acidulantes! Amino$cidos "s amino cidos constituem a unidade b sica das protenas, " ser humano necessita basicamente de (% amino cidos para as suas necessidades de metabolismo e desenvolvimento orgMnico! Bestes, oito no so sintetizados pelo organismo necessitando, pois, serem ingeridos atravs de alimentos! :ntretanto, dois amino cidos revestem ) se de especial importMnciaD a metionina e a lisina, dado ao fato de no se encontrarem presentes nos cereais! A metionina no foi obtida por processos fermentativos, porm 8%N da lisina produzida so obtidas por via microbiolgica! "utros importantes amino cidos sintetizados por via fermentativaD cido glutMmico, cido asp rtico, triptofano! Vitaminas Oradicionalmente utilizadas como suplemento alimentar para o ser humano e animais, as vitaminas so, em sua maioria, sintetizadas quimicamente! :ntretanto, algumas delas como as do comple3o B, notadamente a B(, so produzidas por biosntese microbiana!

%io&olmeros &omercialmente entende)se por biopolmeros determinados polissacardeos e3cretados por microrganismos! "s principais biopolmeros encontrados no mercado so as gomas 3antana e as de3tranas! As primeiras representam a maior parte do mercado, sendo aplicadas como aditivos em alimentosD estabilizantes de suspenso lquidas e genelatizantes! 'ol(entes Or+s so os principais solventes orgMnicos produzidos por microrganismosD etanol, butanol e acetona! Bestes, o etanol se reveste de especial importMncia no conte3to brasileiro pelo seu destaque no segmento da economia! Be$idas lcolicas As bebidas alcolicas so to antigas quanto I humanidade e numerosas como suas etnias! 5encios, assrios, babil#nios, hebreus, egpcios, chineses, germanos, gregos e romanos mencionaram)nas e cada povo tem praticamente as suas, a partir das fontes naturais prprias de a4cares e produtos amil ceos comoD frutas, cana)de)a4car, milho, trigo, arroz, batata, centeio, aveia, cevada, e mesmo razes e folhas! Bevemos lembrar que esses produtos de fermentao alcolica originavam)se na antigLidade de processos espontMneos de fermentao e que s em poca mais recente comeara a serem usados nas ind4strias, para a sua fabricao, os modernos mtodos da Biotecnologia! As bebidas alcolicas podem ser classificadas emD ) fermentadasD cerveja, vinho saqu+, sidra, etc! ) fermento ) destiladasD aguardente, rum, usque, conhaque, vodca, gim, etc! 9icrorganismos " uso de protena unicelular ) ,&6 Psingle cell proteinQ para a nutrio animal tem)se mostrado mais atraente que para a ingesto humana haja visto que ocorrem problemas quanto I digestibilidade, pelo ser humano, da grande quantidade de cidos nuclicos componentes da ,&6! Oodavia, muitas ind4strias t+m construdo f bricas para a produo de protenas unicelular nos 4ltimos anos, principalmente na :uropa, :stados >nidos e Rapo! limentos Biversos so os produtos alimentcios modificados ou produzidos atravs de processos fermentativos!

Alguns como queijos, iogurte, etc! so utilizados pela humanidade h mais de (!%%% anos! 6icles, azeitonas, po, chucrute so outros alimentos que tem a participao de processos biolgicos em sua obteno e que usam a Biotecnologia para obter uma melhor produo!

>oc? aprendeu@

7Q Befina com suas palavras o que biotecnologiaS (Q &om quais disciplinas a biotecnologia interageS @Q Tuais as principais reas de utilizao da biotecnologiaS =Q <a sua opinio, a biotecnologia ajuda ou atrapalha os seres humanos! Befenda seu ponto de vistaS ?Q B+ que maneira a biotecnologia ajudou a humanidade a evoluir na antiguidadeS

Semana 3

Tcnicas Biotecnolgicas
Cultura de Tecidos Vegetais Baseia)se na capacidade que a planta tem de dar origem a uma nova planta, a partir de qualquer parte dela, por meio da ativao e da represso de genes, chamado de Ootipotencia celular! H muito utilizada quando desejamosD obter plantas livres de doenas, multiplicar rapidamente um grande numero de plantas, obter hbridos que no podem ser obtidos pela polinizao natural, fundir clulas de origem diferente, preservar banco de germoplasma, obter plantas haplides, obter variantes somaclonais Pplantas que sofrem muta*es espontMneasQ Clonagem H a produo de indivduos geneticamente iguais! &onsiste em um processo de reproduo asse3uada, que resulta na obteno de copias geneticamente id+nticas de um mesmo ser vivo Pmicroorganismo vegetal ou animalQ!

 Transgnicos "s organismos geneticamente modificados P"E'sQ ou transg+nicos so aqueles que tiveram genes diferentes, de qualquer outro ser vivo inseridos em seu cdigo gentico! " processo consiste na transfer+ncia de um ou mais genes respons veis por determinada caracterstica de um organismo para o outro, ao qual pretende se incorporar esta caracterstica!

C)lulas Tronco &lulas tronco so clulas com capacidade de auto)replicao, isto , com capacidade de gerar uma copia id+ntica de si mesma e com potencial de diferenciar)se em v rios tecidos!

 Tera&ia *nica ou *enetera&ia H a insero de genes nas clulas e tecidos de um individuo para o tratamento de uma doena, em especial, doenas heredit rias! A terapia gentica visa a suplementar com alelos funcionais aqueles que so defeituosos!

+arcadores +oleculares ,o quaisquer caractersticas, processos bioqumicos ou fragmentos de B<A, os quais permitem a distino de indivduos geneticamente diferentes! " teste de paternidade, utilizando B<A, um e3emplo cl ssico da aplicao da biologia molecular na biotecnologia! As tcnicas de biologia molecular requerem a utilizao de aparelhos especficos para aumentar a quantidade de B<A necess rio para verificar diferenas entre indivduos! :ste aparelho o termociclador, respons vel pelas rea*es de 6&U Preao em cadeia da polimeraseQ! H por meio da 6&U que se amplifica a quantidade de B<A do material biolgico!

"s marcadores moleculares podem au3iliar emD V V V V V V V V V V deteco de muta*esF identificao de doenasF isolamento de genesF teste de paternidadeF proteo de variedadesF estimativa da distMncia gentica entre os parentais para a predio da heteroseF facilitar a seleoF an lise de caracteres quantitativosF estudos filogenticosF seleo de genitores!

Alm dos marcadores moleculares e3istem os de luminesc+ncia PE>,, E56Q! :sses vo produzir cores para visualizar onde est ocorrendo a variao da caracterstica!

I#SI %Intra #Atoplasm Sperm In'ection)

Orata)se de uma tcnica de fertilizao in vitro, que se diferencia da convencional, pelo fato de se colocar o espermatozide diretamente no interior do vulo! &om o r pido avano e desenvolvimento da tcnica de fecundao in .itro P5/.Q em mamferos e em humanos, em conjunto com a transfer+ncia de embri*es, houve um grande aumento na procura por alternativas para contornar os casos em que a adeso dos gametas no possvel quando a 5ertilizao in .itro tradicional utilizada!

Bescrita pela primeira vez na dcada de ;%, essa tcnica muito parecida com a fertilizao in (itro tradicional, j que em ambos os processos a fecundao ocorre fora do corpo feminino e W caso os resultados sejam favor veis W alguns embri*es so transferidos para o referido local, no m 3imo at ? dias aps a coleta dos gametas! A principal diferena que, na inseminao artificial, cerca de 7%% mil espermatozides, para cada gameta feminino, so colocados em uma placa de petri, tubo de ensaio ou provetaF e depois so direcionados para uma estufa, onde possivelmente ocorrer a fecundao! R na /&,/, um 4nico espermatozide introduzido diretamente no ovcito, com au3lio de instrumentais especficos, para atingir esse objetivo! >m dos primeiros passos, comum a ambos os processos, consiste na estimulao dos ov rios, com a finalidade de provocar o desenvolvimento dos folculos! 6ara tal, a mulher far o uso de alguns horm#nios, durante um perodo de apro3imadamente duas semanas! &om freqL+ncia, ela se submeter a e3ames de ultrassom, a fim de precisar, com e3atido, o momento da ovulao! "correndo tal evento, e sob sedao leve, a paciente ter seus folculos ovarianos aspirados, utilizando)se de uma agulha e um aparelho especial de suco! &omo um procedimento simples, quase indolor, cerca de uma hora depois ela poder dei3ar a clnica que fez o procedimento! Tuanto aos espermatozides, geralmente feita a coleta do s+men do companheiro nesse mesmo dia! <o caso de homens que no lanam esperma com espermatozides, como os vasectomizados, tais gametas podem ser obtidos diretamente do epiddimo ou do testculo, por meio de procedimento tambm relativamente simples! :m laboratrio, os espermatozides, em meio de cultura especial, sero selecionados e, depois, passaro pela capacitao Pprocesso que ocorre naturalmente no muco cervical feminino, promovendo o amadurecimento desses gametasQ! 6or outro lado sero separados os ovcitos mais maduros! Bepois, as clulas que os circundam sero removidas, em um processo denominado desnudao! Aps tais procedimentos, utilizando)se de pipeta de suco, agulha especial, microscpio e micromanipuladoresF cada espermatozide ser injetado diretamente em um ovcito! Bepois, os zigotos sero colocados em meio de cultura em uma placa de petri, tubo de ensaio ou provetaF e depois direcionados a uma incubadora, ficando ali por cerca de dezoito horas! &aso ocorra o desenvolvimento de embri*es, alguns deles sero transferidos para o 4tero materno, utilizando um cateter especial que os direcionar at a cavidade uterina! Oal procedimento tambm relativamente simples, requerendo somente apro3imados sessenta minutos de repouso! 6rovavelmente a possvel futura gestante far uso de alguns f rmacos, com a finalidade de reduzir as chances de inviabilizao da gravidez! A ta3a de sucesso da /&,/ bastante vari vel, embora se apresente, geralmente, mais eficaz que a fertilizao in (itro comum! A habilidade da equipe mdica, qualidade dos gametas, idade da mulher e n4mero de embri*es transferidos so alguns fatores que interferem nos resultados!

Se;agem =etal e esperm3tica

:m humanos, sua aplicao visa minimizar as chances de ocorr+ncia de doenas genticas ligadas ao se3o, visa tambm determinar o se3o do beb+ a partir da oitava semana de vida gestacional! ,e3agem fetal um teste utilizado para se determinar o se3o do beb+ por meio de uma pequena amostra de sangue perifrico materno! >ma vez que, tanto clulas fetais quanto, principalmente, o B<A fetal livre de clula atravessam a barreira placent ria e alcanam a corrente sangunea da gestante! Assim, uma simples puno venosa permite a realizao do teste em qualquer situao em que se deseje conhecer o se3o do beb+! :sse teste se baseia na identificao de seqL+ncias do cromossomo X numa amostra de plasma materno por meio da tcnica de reao em cadeia da polimerase P6&UQ! &omo apenas indivduos do se3o masculino possuem esse cromossomo sua presena indica um menino e, por e3cluso, sua aus+ncia indica uma menina! R nos animais de produo, tem intuito de aumentar a rentabilidade de um empreendimento, pois com essa tcnica possvel definir que se3o sero os animais que iro nascer na fazenda ou criatrio, e com isso rebanhos de gado de corte que tem a prefer+ncia por macho, pois, este possui mais rendimento de carcaa em relao a f+meas da mesma idade, podero criar somente machos se preferirem! <o caso de produo de animais puros, a m 3ima produtividade alcanada quando toda a prog+nie do se3o feminino, pois a converso alimentar da matriz inversamente proporcional ao numero de bezerros gerados pela mesma, podendo assim optar pelo se3o feminino na hora da escolha do s+men a ser implantado! :sse teste realizado por centrifugao em gradiente de densidade, baseado na centrifugao dos espermatozides onde h a separao das clulas contendo cromossomo - ou X, porque e3iste uma diferena de massa relacionada com a quantidade de B<A e protena nuclear sendo maior nos portadores do cromossomo -! 6ode tambm ser realizado atravs de citometria de flu3o, onde o conte4do do B<A determinado por um corante fluorescente PYoechst @@@=(Q, que facilmente penetra na membrana da clula esperm tica e liga)se ao conte4do de B<A! "s espermatozides contendo cromossomos - coram)se =N a mais do que aqueles que possuem o cromossomo X! A e3posio do corante a luz, com particular comprimento de onda, permite que um computador analise esses =N a mais de fluoresc+ncia, e conseqLentemente, maior quantidade de B<A, e desta forma separa as clulas contendo cromossomos - e X! >oc? aprendeu@ 7Q :3plique com suas palavras o que so Ocnicas Biotecnolgicas (Q Tual a diferena entre &lonagem e OransgeniaS @Q " que so 'arcadores moleculares e quais so suas aplica*esS

=Q "nde pode ser aplicada a Ocnica Biotecnolgica /&,/ P/ntra &Ctoplasm ,perm /njectionQS ?Q Tuais as vantagens e desvantagens da ,e3agem fetal e esperm ticaS

Semana 5

Inseminao arti,icial

A primeira inseminao artificial de que se tem registro, foi realizada pelos rabes em 7@@(, em eqLinos! 6orm a primeira inseminao de poder cientfico, realizada em 799;, quando um italiano chamado 0 zaro ,palanzani, colheu o s+men de um cachorro e aplicou em uma cadela em cio, a qual pariu @ filhotes! <o final do sculo -./// um mdico ingl+s, Yunter, obteve os primeiros resultados! <os anos 9% esta tcnica foi bastante utilizada de forma no muito precisa, gerando bai3o ndice de sucesso! &om a chegada da fertilizao Zin vitroZ nos anos 8% esta tcnica foi temporariamente abandonada e considerada bastante arcaica! :ntretanto, nos dias de hoje, a inseminao artificial encontra novamente espao no tratamento de casal infrtil! A /nseminao Artificial tem como requisitos b sicos na mulher a presena de ao menos uma tuba plvica e cavidade uterina normal! &onsiste em depositar os espermatozides, previamente selecionados, no interior do 4tero! :3istem duas modalidades de inseminao artificialD /nseminao Artificial /ntra)&ervical P/&Q! /nseminao Artificial /ntra)>terina P/>Q! A /nseminao Artificial /ntra)&ervical permite reproduzir as condi*es fisiolgicas da relao se3ual, porm, no apresenta, teoricamente, nenhum elemento de superioridade em relao ao ato se3ual! H utilizada em casos de impossibilidade de uma relao se3ual normal ou de uma ejaculao intra)vaginal Pmal)formao se3ualF dist4rbios se3uaisF dist4rbios na ejaculaoQ! A /nseminao Artificial /ntra)>terina consiste em depositar espermatozides mveis capacitados Paptos a fertilizar, ps)tratamento do s+men em laboratrioQ no fundo da cavidade uterina aps a induo da ovulao! " mnimo e3igido so ? milh*es de espermatozides selecionados ao final do preparo de s+men no laboratrio!

 Etapas da Inseminao Artificial em humanos H necess rio haver uma estimulao ovariana! A estimulao feita atravs de horm#nios de forma controlada para no ocorrer a hiperestimulao ovariana e gravidez m4ltipla! Associado I estimulao ovariana, os espermatozides so selecionados em laboratrio! " esperma formado pelo lquido seminal e pelos espermatozides! <a inseminao, os espermatozides so separados do lquido seminal, sendo apenas os espermatozides utilizados! &omo os espermatozides so colocados acima do orifcio interno do colo do 4tero, o lquido seminal no necess rio porque este serve como meio de transporte para os espermatozides! " lquido seminal substitudo por um meio de cultura adequado! " processo de separao do esperma consiste na centrifugao do ejaculado em conjunto com um meio de cultura! :sta centrifugao faz a separao da parte slida Pespermatozides e clulasQ da parte lquida Pmeio de cultura e lquido seminalQ! " resultado da centrifugao que contm os melhores espermatozides injetado no interior do 4tero da paciente da seguinte formaD A paciente fica em posio ginecolgica e o mdico coloca um espculo Paparelho utilizado para e3ames ginecolgicosQ na vagina! Aps desinfeco do orifcio do colo o 4tero, um cateter introduzido at o interior do 4tero! " concentrado de espermatozide previamente selecionado injetado diretamente no interior do 4tero! Aps a injeo de espermatozide o cateter retirado! A fertilizao neste caso Zin vivoZ, dentro das tubas! :ssa tcnica pode ser aplicada tanto em humanos quanto em animais, tendo sempre como principio a deposio do espermatozide no 4tero da f+mea, no momento mais adequado para a fertilizao do ovulo, ao invs da copula com o reprodutor ou ato se3ual, com a finalidade de concepo! Inseminao arti,icial em animais Atualmente v rios pases inseminam seus rebanhos bovinos em escala bastante elevada! 6odemos citar a Binamarca com praticamente 7%%N de seu rebanho em regime de inseminao ArtificialF A ,ucia com ;%NF Ochecoslov quia com 8?N, os :stados >nidos com 9?N! Oodavia, a situao do Brasil um tanto diferente, pois a inseminao artificial atinge somente 9N das f+meas em condi*es de reproduo, sendo utilizada pela primeira vez em 7;=%, adquirindo impulso a partir de 7;9%, quando nasceram as principais empresas especializadas no ramo! . rias so as vantagens da /nseminao ArtificialD 'elhoramento do rebanho em menor tempo e a um bai3o custo, atravs da

utilizao de s+men de reprodutores comprovadamente superiores para produo de leite e carne! &ontrole de doenasD 6ela monta natural, freqLentemente o touro pode transmitir Is vacas algumas doenas e vice)versa, o que pelo processo da inseminao artificial no ocorre! 6ermite ao criador cruzar f+meas zebunas com touros de raa europias e vice) versa, atravs da utilizao de s+men desses touros! ,abemos que em muitas regi*es de clima quente esses animais dificilmente se adaptam ao sistema de monta natural! :vita acidentes que podem ocorrer durante a cobertura de uma vaca por touro muito pesado! :vita acidentes com pessoal, os quais podem ocorrer quando se trabalha com animais de temperamento agressivo! Aumenta o n4mero de descendentes de um reprodutor! ,abe)se que um touro cobre a cada ano, a campo, cerca de @% vacas! :m regime de monta controlada pode servir a um m 3imo de 7%% f+meas, a cada ano! /sso significa que, considerando ser de 7% anos a vida reprodutiva de um touro, temos um total de @%% a 7%%% filhos por animal, durante sua vida! &om a /nseminao Artificial esse n4mero e3traordinariamente aumentado, podendo um reprodutor ter mais de 7%!%%% filhos! Assim, fica f cil entender como a /nseminao Artificial favorece o melhoramento do rebanho, pois esses touros esto sendo usados em v rios rebanhos, no pas e mesmo no e3terior com grande n4mero de filhos nascidos! "bteno de melhores ndices de fertilidades! Aproveitamento de touros frteis incapacitados para a monta! 6roporciona maior uniformidade aos rebanhos! 6roporciona o nascimento dos filhos aps a morte do pai, face a possibilidade de congelamento e estocagem do s+men, garantindo assim a continuidade desses reprodutores!

=I> %=ertili*ao in >itro)

" nascimento de 0ouise Bro1n, em (? de julho de 7;98, a primeira criana concebida aps fertilizao Zin vitroZ e transfer+ncia de embrio, marcou o incio de uma era de e3traordin rio processo no entendimento e tratamento dos problemas relacionados I fertilizao humana! A 5/. uma tcnica de reproduo assistida muitas vezes denominada "Beb de Proveta", que consiste na manipulao dos gametas em laboratrio e aps fecundao, introduo do embrio no organismo materno! /sto , captao dos vulos diretamente do ov rio fertilizando com os espermatozides do marido[parceiro fora do corpo, em laboratrio, ou seja, Zin vitroZ! "s embri*es selecionados so transferidos para a cavidade uterina para que possa ocorrer a implantao e a gravidez de =8 a 9( horas aps a captao dos vulos! A 5/. indicada para casos de leso das tubas, como seqLela de infeco tub ria Pdoena inflamatria plvicaQ, ou gravidez nas trompas, ou laqueadura sem chance de reverso, ou endometriose, infertilidade masculina e naqueles casos de infertilidade sem causa aparente! Eta&as da ,ertili ao -in VitroH feita a induo da ovulao por drogas injet veis para estimular o crescimento dos folculos Ppequenas bolsas com os vulos dentroQ e provocar a ovulao, aumentando assim o n4mero e a qualidade dos vulos! Beve)se realizar o monitoramento do crescimento dos folculos ovarianos atravs da ultra)sonografia transvaginal, com o objetivo de individualizar as doses do medicamento e prevenir os efeitos colaterais! Tuando os folculos atingem em torno de 78 mm eles so considerados maduros e aplicada uma injeo de Y&E PEonadotrofina &ori#nica Yumana ) horm#nio que marca a maturao final dos vulos e define o momento da coletaQ! ,ob uma sedao endovenosa ou anestesia local, os folculos so coletados atravs da vagina com uma sonda ecogr fica acoplada I agulha apropriada para este

fim, guiada por au3lio de ultra)som de alta freqL+ncia, para visualizar os folculos ovarianos a serem puncionados! P@( a @$ horas aps a injeo de horm#nioQ! &om o au3lio de um estereomicroscpio sob flu3o laminar Pespcie de capela onde flui ar estril de dentro para fora, evitando a contaminao do materialQ, o conte4do lquido destes folculos obtidos no centro cir4rgico, transferido para uma placa de meio de cultura Pmeio que imita ao m 3imo o ambiente das tubasQ e e3aminado I procura do vulo! >ma vez identificado, o vulo transferido para outra placa contendo apenas meio de cultura, onde ser classificado! "s vulos so classificados como imaturos ou em prfase, met fase / e met fase // ou maduros! Apenas os vulos na fase met fase // apresentam estado de maturao suficiente para ser fertilizado! <este intervalo de tempo, ocorre a coleta da amostra de s+men, de maneira natural PmasturbaoQ! Aps a coleta os espermatozides sero preparados atravs da lavagem com meio de cultura de clulas e centrifugao, fazendo com que haja uma separao do plasma seminal, resultando em um preparo de espermatozides com maior motilidade e capacidade para fertilizao! :ste processo importante porque remove substMncias qumicas e bactrias que podem causar rea*es adversas ou contra*es uterinas intensas! "s vulos maduros e espermatozides so preparados e mantidos em incubadora I @9\& com ?N de &"( que simula o ambiente das tubas, por um perodo de 7( a 78 horas! Aps este perodo, so e3aminados ao microscpio, quando se busca o sinal de fertilizao Ppresena dos ( pr)n4cleosQ! Antes da transfer+ncia embrion ria, os pr)embri*es em fase de clivagem P@ dias aps a fertilizaoQ ou em est gio de blastocisto P$ dias aps a fertilizaoQ so classificados morfologicamente, levando em considerao a velocidade de diviso celular, o n4mero de blast#meros, a simetria e a forma dos blast#meros, a presena ou aus+ncia de fragmentao! A transfer+ncia embrion ria deve ser feita com a paciente em posio ginecolgica, em rea fsica pr3ima ao laboratrio onde se encontram os embri*es! "s embri*es so transferidos para o 4tero atravs de cateter especial com monitoramento ultra)sonografia transabdominal para correto posicionamento do cateter! Aps a transfer+ncia a paciente deve fica em repouso por cerca de uma hora! A verificao da gravidez pode ser feita 7? dias aps a transfer+ncia dos pr)embri*es, dosando)se a concentrao de h&E Phorm#nioQ no sangue!

=ertili*ao in >i&o

A diferena entre a 5ertilizao in .itro e /n .ivo que a fertilizao Jin vivoK acontece dentro do corpo da mulher, causando uma gravidez chamada JnaturalK! Oambm se d atravs da fertilizao artificial intra)uterina, em que o processo aceleradoD os espermatozides mais bem formados do s+men do parceiro so

selecionados e colocados, atravs de uma seringa, dentro do 4tero! 6ara isso, a mulher tem de tomar horm#nios para induzir a ovulao! >oc? aprendeu@ 7Q Biferencie Inseminao artificial Intra.cer(ical de Inseminao artificial Intra. uterina/ (Q &ite ? vantagens da Inseminao artificial aplicada em animais @Q A 5/. P,ertili ao in VitroQ uma tcnica de reproduo assistida, muitas vezes denominada JBeb+ de 6rovetaK! " que consiste esse mtodo e quais as suas indica*es =Q Biferencia ,ertili ao In Vitro de ,ertili ao in Vi(o ?Q Tual a diferena entre Inseminao artificial e ,ertili ao in Vitro

Semana /

9arcador 9olecular

'arcadores moleculares so quaisquer caractersticas, processos bioqumicos ou fragmentos de B<A, os quais permitem a distino de indivduos geneticamente diferentes! ,uas principais aplica*es so emD ) ]rea da ,audeD a tcnica do 6&U esta sendo amplamente utilizada para diagnsticos de doenas como Yepatite, A/B,, etc! ) ]rea da EenticaD construo de mapas genticos, caracterizao da variabilidade gentica, monitoramento, fingerprinting, mapeamento gentico de TO0^,, seleo assistida por marcadores P'A,Q, clonagem de genes de interesse agron#mico, estudo de crescimento e desenvolvimento de plantas, modificao na organizao do genoma Princi&ais ti&os de marcadores 7Q 'AU&AB"U:, '"U5"0_E/&", At os meados da dcada de $%, os marcadores utilizados em estudos de gentica e melhoramento eram controlados por genes associados a caracteres morfolgicos, em geral, caractersticas fenotpicas de variao discreta so utilizadas como marcadores morfolgicos desde os tempos de 'endel, como fentipos de f cil

identificao visual, e3!D nanismo, defici+ncia cloroftica, cor de ptala ou morfologia foliar! >m n4mero vari vel de marcadores morfolgicos e3istem para as diferentes espcies de plantas, contudo insuficientes para mapeamento gentico ou outras aplica*es! Alm disso, esses marcadores freqLentemente so afetados pela ao g+nica de dominMncia, efeito ambiental, pleiotropia e epistasia! 'arcadores morfolgicos apresentam a desvantagem de serem somente identificados em sua maioria, ao nvel de planta inteira ou adulta! 6or outro lado, marcadores bioqumicos ou fragmentos de B<A, podem ser utilizados a partir de amostras de clulas ou de tecidos de partes da planta Pfolhas, embri*es, cotildones, plen, etc!Q e tambm em qualquer est gio de desenvolvimento da planta! :ntretanto, o princpio b sico envolvidos na obteno e deteco de cada classe de marcador bioqumico ou de B<A reside no uso de eletroforese! A eletroforese visa a separao de molculas em funo de suas cargas eltricas, de seus pesos moleculares e de suas conforma*es, em suportes porosos PgisQ e solu*es tamp*es Pestabilizam o pY do meio e permitem o flu3o de corrente eltricaQ, ou seja, a eletroforese consiste da e3trao de amostras, seja de protenas, enzimas ou B<A obtido de um tecido vegetal e da migrao destas num gel Pamido, agarose, etcQ submetido a uma corrente eltrica continua! " sentido e a velocidade de migrao determinado pelo tamanho e carga das protenas! Tuanto mais a carga eltrica, mais r pido ser a sua migrao no gele em direo ao eletrodo de carga contraria! (Q 'AU&AB"U:, B/"T>/'/&", "s marcadores bioqumicos so enzimas bioqumicas especificas da clula que ser analisada! >m bom e3emplo de marcador bioqumico so as isoenzimas! As isoenzimas forma definidas como diferentes formas moleculares PvariantesQ de uma mesma enzima, apresentando funo id+ntica ou similar, presente em um mesmo individuo! ,ua principal aplicao nos estudos de diversidade gentica e evoluo, que tem sido de e3trema importMncia nos estudos de variao intra)especificas, gentica de popula*es, evoluo e mapeamento gentico, realizados em diversas espcies de plantas! A determinao genotpica dos locos em qualquer parte da planta, ocorr+ncia de um numero razo vel de alelos, a aus+ncia de efeitos deletrios associados com alelos isoenzimicos, a herana 'endeliana simples com codominancia entre alelos na maioria dos locos e a aus+ncia de efeitos epist ticos,pleiotropicos e ambientais so as principais vantagens das isoenzimas em relao aos marcadores morfolgicos!

@Q 'AU&AB"U:, B<A

B=:P 1 Bestriction =ragment :engt( PolAmorp(ismC

:3amina a diferena em tamanho de fragmentos de restrio de B<A especficos, 6olimorfismo deriva de mutao pontual, insero, deleo! >tiliza)se B<A celular total e requer B<A puro de alto peso molecular! " 6olimorfismo evidenciado pela fragmentao do B<A com enzimas de restrio observado pela hibridizao de sondas marcadas de B<A P,outhern blotsQ com radioatividade ou compostos que desencadeiam uma reao luminesc+ncia! 6ara que o polimorfismo seja detectado, necess rio que as seqL+ncias de nucleotdeos nas fitas de B<A de dois ou mais indivduos comparados sejam distintas! A 'etodologia de U506 consiste emD 7 ! Bigerir B<A em fragmentos pequenos (! ,eparao dos fragmentos por gel eletroforese @! Oransfer+ncia de fragmentos de B<A para 5iltro

=! .isualizao dos fragmentos de B<AD sondas marcadas P@(6Q ou a frio ?! An lise dos resultadosD bandas analisadas para alelos e[ou presena[aus+ncia, diferenas em padro de bandas reflete diferenas genticas A escolha de sonda[enzima de restrio crucial!

=Q 'AU&AB"U:, BA,:AB", :' 6&U

B P6 1 Bandom PolAmorp(ic 67 Polimr,ico)

mpli,icao Band+mica de 67

>tiliza um 4nico primer ao invs de um par de primers! " primer 4nico tem seqL+ncia arbitr ria, e portanto sua seqL+ncia alvo desconhecida! >ma caracterstica fundamental dos marcadores UA6B o fato deles se comportarem como marcadores dominantes! BominMncia do ponto de vista da interpretao relativa entre gentipo e fentipo de um indivduo! :mbora a grande maioria dos marcadores UA6B possuem comportamento ZdominanteZ, e3iste a possibilidade de se amplificar marcadores co)dominantes, ou seja, amplificar ambos os alelos de um loco! As principais caractersticas do UA6B soD obteno de Zfingerprinters` Pimpress*es digitaisQ, gen#micos de indivduos, variedades e popula*es, An lise estrutural e diversidade gentica em popula*es de melhoramento e bancos de germoplasma, estabelecimento de relacionamentos filogenticos entre diferentes

espcies, construo de mapas genticos de alta cobertura gen#mica e a localizao de genes de interesse econ#mico!

>7TB 1 >aria$le 7um$er o, Tandem Bepeats%7<mero &ari3&el de repetiDes seriadas)

As principais caractersticas do .<OU so as seqL+ncias repetitivas agrupadas ou espalhadas ao longo do genoma, so constitudas por blocos cujo n4mero de unidades repetitivas vari vel, gerando polimorfismos, possuem blocos de unidades repetitivas formadas por 7 a = pb no locus hipervari vel so conhecidas como microssatlites! "utras caractersticas do .<OU so observadas atravs de digest*es do B<A gen#mico seguidas de ensaios de ,outhern blot com sondas homlogas Is regi*es do minissatlite, obtm)se um padro de m4ltiplas bandas devido ao car ter multilocus! "s padr*es de m4ltiplas bandas constituem os chamados JB<A fingerprintsK e permitem discriminar indivduos e estabelecer graus de parentesco e consangLinidade!

,o obtidos atravs de 6&U de loci especficos! &ada ZilhaZ microssatlite, independente do elemento repetido P&A, OE, AOE etc!Q constitui um loco gentico altamente vari vel, multiallico, de grande conte4do informativo! A an lise de v rios loci permite estabelecer rela*es de paternidade e identificao personalizada, atravs dos alelos encontrados nos indivduos! <o requerem ,outhern blots! A an lise consiste no 6&U de v rios loci, eletroforese em gel e interpretao! As vantagens e limita*es dos marcadores microssatlites soD V A e3presso co)dominante e o multialeslismo, os marcadores ,,U PseqL+ncias simples repetidas a microssatlitesQ so os que possuem o mais elevado conte4do de informa*es de polimorfismo na terminologia de marcadores moleculares! "s ,,U so muito mais freqLentes e distribudos ao acaso, permitindo a mais completa cobertura de qualquer genoma eucarioto! A maior limitao da tecnologia microssatlite a grande quantidade de trabalho necess rio para o desenvolvimento prvio dos marcadores!

V V

P#B

:m 7;$%, bornberg isolou e caracterizou a B<A polimerase! " isolamento desta enzima possibilitou o desenvolvimento da sntese Jin vitroK de cadeias de B<A! :m poucos anos, o seqLenciamento e a sntese de oligonucleotdeos tornaram)se rotina nos laboratrios de pesquisa! R em 7;8@,barl 'ullis criou a Ocnica de 6&U W polCmerase chain reaction W que possibilita a amplificao Jin vitroK de cidos nuclicos! " advento da 6&U acelerou os estudos de genomas de v rios organismos, pois possibilitou a clonagem e o seqLenciamento de B<A! barl 'ullis em 7;89, patenteou a tcnica e vendeu para a empresa Yoffmann)0a Uoche em 7;;7! "s princpios da tcnica de 6&U soD V V ,ntese enzim tica Jin vitroK de cpias de B<A a partir da seqL+ncia alvoF A especificidade dada pelo uso de primers PiniciadoresQ especficos para o gene ou regio do B<A de interesseF

A utilizao de dois primers delimitam o alvo e a repetio dos ciclos da 6&U d origem a bilh*es de cpias do alvo! As etapas b sicas da 6&U soD

7Q Besnaturao W abertura da dupla fita do B<A P;=c &[7%%c &Q (Q Anelamento PhibridizaoQ dos primers em Oc & mais bai3a @Q Ueao de polimerizao PsnteseQ da fita complementar pela Oaq B<A polimerase com repetio por @% a =% ciclos

>oc? aprendeu@ 7Q " que so marcadores molecularesS (Q Biferencie os tipos de 'arcadores 'oleculares P 'orfolgicos, Bioqumicos, B<A e baseados em 6&U @Q Tuais so as principais aplica*es de 'arcadores 'olecularesS B+ e3emplos =Q " que a Ocnica 6&US "nde pode ser aplicadaS ?Q 5aa uma pesquisa sobre as vantagens e desvantagens dos 'arcadores 'oleculares e entregue na pr3ima aula!

Semana !

Transgenia
<os dias de hoje muito comum ouvir falar de transg+nicos, alimentos geneticamente modificados e manipulao gentica, e com isso a populao acaba tendo diversas duvidas, opini*es arbitrarias e diversas polemicas acabam por aparecer! H necess rio que as pessoas entendam como so criados, como funcionam e o que pode haver de bom e de ruim em relao aos transg+nicos para que possam adotar uma posio em relao a isso! " organismo geneticamente modificado P"E'Q ou transg+nico pode ser definido comoD Jqualquer organismo, com e3ceo do ser humano, cujo material gentico tenha sido modificado de uma forma que no ocorre naturalmente por meio de cruzamentos e[ou recombinao naturalK PArtigo (c da Biretiva (%%7[78[&: do 6arlamento :uropeu e do &onselho da >nio :uropia de 7( de maro de (%%7Q! &om o avano da engenharia gentica, utilizando principalmente tcnicas de B<A recombinante, permitiu que os genes respons veis por uma determinada caracterstica favor vel fossem identificados, modificados e incorporados a outro organismo de espcie igual ou diferente, com isso houve um enorme avano nos processos naturais de melhoramento de plantas, animais e microorganismos! 6ara obter um transg+nico tanto vegetal quanto animal, deve)se e3trair o B<A do organismo que possui o gene de interesse, em seguida, isola)se o gene de interesse e o mesmo inserido em bactrias para a obteno de varias copias desse gene! :sse gene de interesse, antes de ser inserido no genoma da clula hospedeira, sofre transformao, com a associao de um promotor, de uma seqL+ncia terminadora e ainda de um gene marcado com seu respectivo promotor, originando o transgene! A insero do transgene na clula pode ser realizada por v rios mtodos, entre elesD

Sistema gro$acterium tume,aciens ) mtodo pelo qual inserido um gene de caracterstica desejada no gentipo de uma bactria que ao se associar a uma planta retransmite a mesma caractersticaF Bom$ardeamento com micropartculas re&estidas de 67 ) sistema pelo qual o B<A revestido em micro esferas de tungst+nio e transferidos para dentro do tecido da planta!

Trans,er?ncia por electroporao ) introduo de B<A em clulas e3postas a um campo eltricoF 9icroin'eo de 67 ) consiste numa injeo de B<A na clula em questo atravs de uma micropipeta!

&ada um desses mtodos tem como objetivo, introduzir o transgene no n4cleo da clula, local onde se encontra o material gentico, sem lesionar a clula hospedeira! >m processo de avaliao rigoroso deve estar aliado Is tcnicas de produo de transg+nicos para verificar se o gene inserido est incorporado com estabilidade para no causar efeitos deletrios a outras fun*es da planta, I qualidade do produto ou ao ecossistema! A avaliao inicial do processo incluiD verificao da atividade do gene, da estabilidade do gene nas gera*es seguintes e no e3ercer efeitos no crescimento, produo e qualidade da planta! " pr3imo passo do processo realizar avalia*es e3perimentais a campo e em estufa, em v rios locais e durante v rios anos, para analisar os efeitos do transgene e o seu desempenho por completo! :sta fase inclui tambm avaliao dos efeitos no ambiente e da segurana alimentar!

"s alimentos convencionais Pno transg+nicosQ tambm sofrem altera*es genticas, mas estas ocorrem atravs de tcnicas de melhoramento gentico denominadas de naturais ou cl ssicas, onde h mais de 7% mil anos, desde que o homem iniciou)se na arte da agricultura, estas tcnicas so realizadas! <o melhoramento

gentico natural ou cl ssico, o organismo sofre cruzamento com outro da mesma espcie, que tenha uma ou mais caractersticas de interesse e desta nova gerao selecionam)se as plantas com as caractersticas de interesse! 0ogo aps esse procedimento, o organismo cruzado novamente com as espcies iniciais at obter uma gerao de organismos com todas as caractersticas desejadas! <este caso, ocorre a troca tanto dos genes de interesse quanto dos genes que no so! 6odemos dizer que a diferena entre os alimentos convencionais e os transg+nicos est relacionada com a forma em que so obtidos estes produtos e, tambm, as tcnicas de :ngenharia Eentica que permitem que a troca de genes ocorra entre seres, que so de espcies diferentes e que possuem informa*es genticas diferentes, possam gerar um organismo com uma ou mais caractersticas de interesse para a sociedade! Atualmente, o Brasil hoje o segundo maior semeador de transg+nicos do mundo, perdendo apenas para os :stados >nidos W onde, em (%77[(%7(, os transg+nicos ocupavam 9% milh*es de hectares! <as suas estatsticas comparativas mais recentes W reunindo dados de (%7% ) a 5A", a ag+ncia da "<> para Alimentos e ,egurana Alimentar estima que Zquase 7?% milh*es de hectares no mundoZ so plantados com cultivares geneticamente modificados! " grosso dessa rea dedicado a planta*es de soja, milho, canola Pusado em forragem[raoQ e algodo nas Amricas, e de algodo na ]sia e na ]frica! "s maiores produtores entre os pases em desenvolvimento so Brasil, Argentina, dndia e &hina! Z.ariedades de algodo resistente a insetos so os cultivares transg+nicos comercialmente mais importantes na ]sia e na ]fricaZ, diz a 5A"! <a Amrica 0atina, so a soja resistente a herbicidas seguida pelo milho resistentes a insetos!

"s objetivos da transgenia soD melhorar a produo de alimentos, atender I demanda dos consumidores por produtos mais seguros, naturais, frescos, saborosos e convenientes, resistir a um determinado agrot3icoFterem propriedades inseticidas! As principais vantagens da Oransgenia soD aumento da produtividadeF maior resist+ncia Is doenas e Is pragas, decrscimo no tempo necess rio para produzir e distribuir novos cultivares de plantas, menor uso de inseticidas, alterao na composio de nutrientes! "utras vantagens podem ser observadas quando h utilizao desse mtodoD batata com gene do Amaranthus hipochondriacus, aumentar o conte4do de ferro em plantas pela introduo de cido ascrbico, hemoglobina e peptdeos contendo cistena no tecido vegetal, produo de sunos com maior teor de cidos, gra3os monoinsaturados e polinsaturados, produo de pei3es de maior tamanho, animais com maior teor de m4sculo na carcaa e leite com menor teor de lactoseF <o futuro poderemos ter lactoferrina e lisozima podem ser produzidas em plantas, produo de vacinas comestveis ou medicamentos em leite, ovos, frutas, facilitando a preveno de doenas!

<em s de 6U_, vivem os transg+nicos, podemos tambm enumerar seus &"<OUA,, entre elesD

" lugar em que o gene inserido no pode ser controlado completamente, o que pode causar resultados inesperados uma vez que os genes de outras partes do organismo podem ser afetados! Y um consider vel aumento do n4mero de casos de pessoas alrgicas a determinados alimentos em virtude das novas protenas que so produzidas pela alterao gentica dos alimentos! Alm dos riscos I sa4de, tambm h os riscos ambientais como o aumento consider vel de resduos de pesticidas, pois alguns dos produtos transg+nicos adquirem resist+ncia aos efeitos dos agrot3icos, necessitando de um uso mais intenso do agrot3ico, e os restos podero escoar para os rios e solos, contaminando o lenol fre tico e diminuindo a potabilidade da gua! >m e3emplo a soja transg+nica JUoundup UeadCK, resistente ao herbicida Uoundup PglifosatoQ! A uniformidade gentica leva a uma maior vulnerabilidade do cultivo porque a invaso de pestes, doenas e ervas daninha sempre maior em reas que plantam o mesmo tipo de cultivo PmonoculturaQ! Tuanto maior for a variedade gentica no sistema da agricultura, mais este sistema estar adaptado para enfrentar pestes, doenas e mudanas clim ticas que tendem a afetar apenas algumas variedades!

6ragas e doenas podero tornar)se resistentes se houver a transfer+ncia do gene resistente para eles! Alguns organismos que eram antes cultivados para serem usados na alimentao esto sendo modificados para produzirem produtos farmac+uticos e qumicos! :ssas plantas modificadas poderiam fazer uma polinizao cruzada com espcies semelhantes e, deste modo, contaminar plantas utilizadas e3clusivamente na alimentao!

"s transg+nicos podem ser classificados em tr+s gera*es, segundo a ordem cronolgica de aparecimento das culturas e a caracterstica apresentada por cada geraoD e 1E Ferao) esto reunidas as plantas geneticamente modificadas com caractersticas agron#micas resistentes a herbicida, a pestes e a vrus! /ncluem tambm as plantas que possuem tolerMncia a metais t3icos do solo, ao frio e outros stress abiticos! 5ormam o primeiro grupo de plantas modificadas! 5oram disseminadas nos campos na dcada de 8% e at hoje comp*em o grupo de sementes E's mais comercializadas no mundo! A alta ta3a de adoo das culturas com tais caractersticas reflete a satisfao dos produtores com produtos que oferecem benefcios como manejo mais fle3vel, menos trabalho e mais alta produtividade! :3emplos dessa geraoD mamo papaia, milho, soja, algodo que so fortalecidos contra insetos que devoram planta*es, batata que resiste a pragas e reduz a absoro de leo durante o processo de fritura! e 2E Ferao) <esse grupo esto includas as plantas cujas caractersticas nutricionais foram melhoradas tanto quantitativamente como qualitativamente! &ompreende um grupo de plantas pouco difundido no mundo, porm, os campos e3perimentais j so significativos! :3emplos dessa geraoD cenoura mais doce com doses e3tras de betacaroteno, arroz com mais protenas, batata com retardo de escurecimento, soja com genes de castanha do 6ar que aumenta seu valor nutritivo! e 3E Ferao) Uepresentado por um grupo de plantas destinadas I sntese de produtos especiais, como vacinas, horm#nios, anticorpos e pl sticos! :stes vegetais esto em fase de e3perimentao e brevemente estaro no mercado! :3emplos dessa geraoD vacinas comestveis, animais transg+nicos e protenas recombinantes! Biversas polticas p4blicas e legisla*es foram criados para alimentos transg+nicos, como por e3emploD V V Comisso T cnica !acional de Biossegurana P&O<BioQ! "ecreto n# $%&'(, de novembro de 7;;?D disp*e sobre a vinculao, compet+ncia e composio de alimentos, permitindo o desenvolvimento de novos medicamentos, vacinas e insumos! C!B) P&onselho <acional de Biossegurana Q

Becreto n\ @!897, de 78 de julho de (%%7D obrigatoriedade de rotulagem especfica para alimentos que contiver transg+nicos numa proporo superior a =N da composio 0otulagem1 "ecreto n*+,-. de (+ de Abril de (../ D produtos com presena de "E' acima do limite de 7N do devero ser rotulados! 0esoluo ) UB& n\ (7=, de @% de julho de (%%(D :stabelece condi*es para importao, comercializao, e e3posio ao consumo dos produtos includos na UB& n\ (7@ de @% de julho de (%%(! "EC0ET1 <c =!$8%, B: (= B: ABU/0 B: (%%@D Art! 7c :ste Becreto regulamenta o direito I informao, assegurado pela 0ei nc 8!%98, de 77 de setembro de 7;;%, quanto aos alimentos e ingredientes alimentares destinados ao consumo humano ou animal que contenham ou sejam produzidos a partir de organismos geneticamente modificados, sem prejuzo do cumprimento das demais normas aplic veis! Art! (\ Alimentos destinados ao consumo humano, produzidos a partir de "E's com presena acima do limite de 7N do produto geneticamente modificado, devero ser informados ao consumidor!

V V V

Instruo normativa <\ 7, de 7\ de abril de (%%=D Uegulamento tcnico sobre rotulagem de alimentos e ingredientes alimentares que contenham, ou seja, produzidos a partir de organismos geneticamente modificados! 1B)2 Todos os alimentos 3ue so transgnicos ou 3ue possuem ingredientes transgnicos em sua composio devem apresentar este s4mbolo em seu rotulo2

V #uriosidades so$re os transg?nicos

" primeiro organismo geneticamente modificado P"E'Q ou transg+nico criado foi a bactria Esc2eric2ia coli, que sofreu adio de genes humanos para a produo de insulina na dcada de 7;8%! :m 7;87 alguns cientistas produziram, na >niversidade de "hio, o primeiro animal transg+nico, transferindo genes de outros animais para um rato!

:m 7;8@ foi obtida a primeira planta transg+nicaD uma planta de tabaco resistente a um tipo de antibitico! A primeira vacina geneticamente modificada criada foi contra a hepatite B, em 7;8=! As plantas geneticamente modificadas resistentes a insetos, vrus e bactrias foram testadas em campo pela primeira vez em 7;8?! :m 7;89, no Ueino >nido, foram adicionados genes em plantas de batata para que estas produzissem mais protenas e aumentassem o seu valor nutricional! :m 7;;% foi criada a primeira vaca transg+nica para produzir leite com protenas do leite humano para crianas! " primeiro e3perimento bem)sucedido em campo ocorreu em 7;;% pela empresa &algene com plantas de algodo geneticamente modificadas resistentes ao herbicida Bromo3Cnil! :m 7;;= foi aprovado para a comercializao o primeiro produto destinado a alimentao proveniente da biotecnologia vegetalD o tomate transg+nico 5lavr ,avr O', que tem seu amadurecimento retardado! 5oi aprovada em 7;;= a primeira planta transg+nica, desenvolvida pela 'onsanto, uma variedade de soja designada Uoundup UeadCO', resistente a um herbicida PglifosatoQ! " arroz dourado, enriquecido com betacaroteno, foi desenvolvido na Alemanha em (%%%!

Gstudo de casosC

54rus da AI") transgnico pode a6udar a tratar doenas gen ticas graves Tuem imaginaria que um dia o vrus do Y/. poderia ser usado no tratamento de doenas genticasS :m 7;;$, o cientista italiano 0uigi <aldini levantou essa hiptese, mas somente agora ela tornou)se possvel! Bois estudos recentes publicados na revista 'cience e liderados por <aldini revelam que o vrus da imunodefici+ncia humana pode ser usado para tratar doenas genticas graves, como a leucodistrofia

metacrom tica e a sndrome de Ais2ott)Aldrich, que causam a morte prematura de crianas! 6ara transformar o Y/. em um Jvetor do bemK, os cientistas italianos modificaram geneticamente o vrus para que apresentasse o gene que corrige a mutao gentica dos pacientes! Bepois, inseriram o vrus transg+nico nas clulas doentes, onde eles se fi3aram na membrana e introduziram suas informa*es genticas no interior celular! :m seguida, as clulas modificadas foram recolocadas nos pacientes e eles passaram a produzir os genes corretos! 5oram mais de 7? anos de pesquisas e testes at que os primeiros pacientes dessas duas enfermidades respondessem positivamente ao tratamento! :m crianas com a sndrome de Ais2ott)Aldrich, que age diretamente nas clulas do sangue e enfraquece o sistema imunolgico, dei3ando)o muito suscetvel a infec*es e doenas autoimunes, a produo de plaquetas e linfcitos no sangue foi normalizada! :m portadores de leucodistrofia metacrom tica, dist4rbio metablico que causa o ac4mulo de lipdios no corpo, as clulas modificadas viajaram pela corrente sangunea at o crebro, onde liberaram os genes corretos! 0 , a quantidade de protenas produzidas por clulas saud veis superou as defeituosas, o que evitou o processo neurodegenerativo caracterstico da doena! Agora, os pesquisadores precisam esperar at que a terapia g+nica com o Y/. geneticamente modificado se mostre 7%%N segura, mas a e3pectativa que essa tcnica seja usada para tratar ainda mais doenas genticas no futuro!
5onteD Oelethon W Rulho de (%7@

Transg?nicos matam mais e causam at tr?s &e*es mais cHncer em ratos4 di* estudo 6ara fazer a pesquisa de dois anos, (%% ratos foram divididos em grupos e alimentados de maneiras diferentes! :les seguiram propor*es equivalentes ao regime alimentar nos :stados >nidos! " primeiro grupo teve 77N de sua dieta composta pelo milho "E' <b$%@F o segundo comeu tambm 77N do milho "E' <b$%@ tratado com Uoundup, o herbicida mais usado no mundoF e o terceiro foi alimentado com milho no alterado geneticamente, mas tomava gua com doses de Uoundup usadas nas planta*es! " milho transg+nico P<b$%@Q e o herbicida so produtos do grupo americano 'onsanto, comercializados em v rios pases! <o Brasil, amostras foram aprovadas em setembro de (%%8 pela &O<Bio P&omisso Ocnica <acional de BiosseguranaQ, rgo ligado ao 'inistrio da &i+ncia e Oecnologia e, no comeo de (%%;, o 'inistrio da Agricultura aprovou o registro de doze hbridos de milho com a tecnologia Uoundup! " certificado de biossegurana foi aprovado pela comisso em novembro de (%7%! ,egundo o estudo franc+s, ?%N dos machos e 9%N das f+meas dos tr+s grupos morreram prematuramente, contra @%N e (%N, respectivamente, do grupo de controle! "s tumores na pele e nos rins aparecem at $%% dias antes nos machos do que no grupo de controle! <o caso das f+meas, os tumores nas glMndulas mam rias aparecem uma mdia de ;= dias antes naquelas alimentadas com transg+nicos! A hipfise foi o segundo rgo que mais sofreu altera*es prejudiciais no perodo de testes W ela quem produz horm#nios importantes para o organismo, o que a torna a glMndula principal do sistema nervoso! Z"s resultados revelam uma mortalidade muito mais r pida e importante durante o consumo dos produtosZ, afirmou ,eralini, cientista que integra comiss*es oficiais sobre os alimentos transg+nicos em diversos pases! Z" primeiro rato macho alimentado com "E' morreu um ano antes do rato indicador Pque no se alimenta com "E'Q! A primeira f+mea oito meses antes! <o 79\ m+s foram observados cinco vezes mais machos mortos alimentados com milho "E'Z, e3plica o cientista! Z6ela primeira vez no mundo, um transg+nico e um pesticida foram estudados por seu impacto na sa4de a mais longo prazo do que haviam feito at agora as ag+ncias de sa4de, os governos e as ind4striasZ, disse o coordenador do estudo! ,ralini faz parte de um grupo, o &riigen, que faz uma srie de pesquisa sobre segurana de alimentos! :m dezembro de (%%;, ele publicou um estudo com ratos alimentados com os tr+s principais tipos de milhos transg+nicos, tanto administrados em ra*es de animais quanto vendidos para humanos! As amostras dos milhos <b$%@, '"<87%, '"<8$@, da 'onsanto, causaram danos srios nos rins e nos fgados das cobaias, alm de outros efeitos notados no corao, em glMndulas supra)renais e no bao! P&om informa*es de ag+ncias internacionaisQ
=onteC 8I:4 em So Paulo 12J02J2012

>oc? aprendeu@ 3) "s &rodutos transgnicos tem 4ual &arte alterada5 aQ B<A bQ :ndoplasma cQ Ueticulo :ndoplasm tico 6) 7ual a maior limitao desse &rocesso biotecnolgico5 aQ :3trao do B<A bQ Associao de um gene de uma espcie ao genoma de outra cQ /dentificao e localizao de genes 8) 7ual o m)todo mais utili ado de insero de um gene de caracterstica dese9ada no genoma de outra es&)cie5 aQ 'icroinjeo de B<A bQ Oransfer+ncia por electroporao cQ ,istema agrobacterium tumefaciens :) 7ual a diferena dos transgnicos &ara as &lantas com mel2oramento gen)tico5 aQ <os transg+nicos possvel cruzar varias espcies bQ <os transg+nicos, possvel obter informa*es de outras espcies cQ "s transg+nicos so melhoramentos genticos feitos em laboratrio ;) <efina Transgenia/

Semana .

#lonagem
&lonagem um processo de reproduo asse3uada, onde so obtidos indivduos geneticamente iguais a partir de uma clula me, podendo tanto ser utilizada em vegetais quanto em animais! A grande vantagem da clonagem que possvel a partir dessa tcnica, produzir plantas e animais geneticamente superiores em larga escala! A grande desvantagem dessa tcnica que possvel a perda da variabilidade gentica, no aspecto de resist+ncia a doenas e fatores clim ticos!

Histrico 1-25 W " zologo alemo Yans Breisch trabalhando com ourios)do)mar pegou um embrio de duas clulas e sacudindo dentro de um bquer cheio de gua do mar fez com que as clulas se separassem, dando origem a dois ourios adultos! 1202 W " embriologista Yans ,pemman usou um fio de cabelo de seu filho como uma faca para separar um embrio de salamandra, tambm dando origem a dois indivduos! 12/2 W Uobert Briggs e Ohomas bing realizaram a primeira clonagem de sapos a partir de clulas embrion rias! 12.0 W 5eitas pesquisas em embri*es de ratos e, nove anos depois, com ovelhas 12-1 W &lones de ratos a partir de clulas embrion rias! 12-! W &lonagem de cordeiros a partir de clulas embrion rias do mesmo animal

1223 W A e3presso Zclonagem humanaZ comeou a ser divulgada com maior intensidade 122/ W &lonagem de duas ovelhas a partir de clulas embrion rias de ; dias chamadas de Z'eganZ e Z'oragZ 23 de ,e&ereiro de 122. ) " /nstituto Uoslin, na :sccia, revela ao mundo o primeiro clone de um mamfero adulto! A ovelha BollC tinha sete meses! 25 de maio de 122. ) "s escoceses apresentam um novo clone de ovelha que demonstra mais claramente como a tcnica pode ser usada para beneficiar a sa4de humana! 6ollC tinha um gene humano, o que a fazia produzir uma protena usada no combate da fribrose cstica! / de 'ul(o de 122- ) 6esquisadores japoneses apresentam os primeiros clones de vacas adultas! :les nasceram no /nstituto de 6esquisa do Eado de /shi2a1a! 22 de 'ul(o de 122- ) A >niversidade do Yava anuncia a realizao de Zclonagem em srieZD clones de clones de camundongos, criando tr+s gera*es id+nticas! 12 de no&em$ro de 122- ) A empresa americana Advanced &ell OechnologC d seu primeiro susto na comunidade cientfica ao anunciar que, em 7;;$, introduzira B<A humano em um vulo de vaca sem n4cleo! " embrio resultante foi destrudo! 2! de a$ril de 1222 ) H anunciado nos :>A o nascimento dos primeiros clones de cabras adultas ) e j com um gene humano para produo de uma protena especfica no leite! 2! de maio de 1222 ) "s criadores de BollC anunciam que ela tem sinais de envelhecimento precoce! At hoje, no foi possvel vincular com preciso o fen#meno I clonagem, mas o episdio lanou enormes d4vidas sobre a segurana da tcnica! 15 de maro de 2000 ) &inco porquinhos nascidos nos :>A so apresentados como o primeiro passo para a criao de sunos capazes de fornecer rgos para transplantes! 'illie, &hrista, Ale3is, &arrel e Botccom eram clones de porcas adultas! - de 'aneiro de 2001 ) <asce o primeiro clone de um animal ameaado de e3tino, um gauro, tipo de gado asi tico, que morreu dias depois! 1. de maro de 2001 ) A bezerra .itria coloca o Brasil na linha de frente da pesquisa de clonagem! &lone de um embrio, a vaca nasceu em um laboratrio da :mbrapa! <enhum outro pas em desenvolvimento havia feito tal avano desde ento! . de agosto de 2001 ) A Academia <acional de &i+ncias dos :>A promove uma audi+ncia com os tr+s mais notrios defensores da clonagem humana para fins reprodutivosD os mdicos ,everino Antinori e 6anos favos e a qumica Brigitte Boisselier, diretora da &lonaid, dizem que o primeiro clone humano no vai demorar muito a nascer! 2- de setem$ro de 2001 ) A /t lia anuncia a primeira clonagem bem)sucedida de um

animal

ameaado

de

e3tinoD

uma

ovelha

mouflon!

2/ de no&em$ro de 2001 ) A empresa Advanced &ell OechnologC desencadeia uma gigantesca pol+mica ao anunciar que produzira embri*es humanos a partir de clonagem! A empresa diz que no tem inteno de usar a tcnica para fins reprodutivos e, sim, para cura de doenas! 5 de 'aneiro de 2002 ) " /nstituto Uoslin comunica que BollC tem artrite, mais um possvel sinal de envelhecimento precoce! 2 de ,e&ereiro de 2002 ) A 660 Oherapeutics, empresa fundada nos :>A pelos criadores de BollC, apresenta novos clones de porcos! Besta vez, sem um gene respons vel pela rejeio de rgos sunos quando transplantados para pessoas! >m dia depois, a >niversidade do 'issouri, diz ter obtido o mesmo avano! 15 de ,e&ereiro 2002 ) A >niversidade A g ' do Oe3as apresenta a gatinha &c, o primeiro clone de um animal de estimao! :la nascera em dezembro de (%%7, aps 788 tentativas! 2. de ,e&ereiro de 2002 ) &ientistas da >niversidade de &incinnati anunciam da descoberta que clones de camundongos apresentam tend+ncia a engordar, como BollC! ! de maro de 2002 ) " ZAall ,treet RournalZ publica uma reportagem em que uma pesquisadora chinesa respeitada ) 0u Euang3iu, :scola de 'edicina de -iangCa ) diz ter produzido dezenas de embri*es humanos por clonagem desde 7;;;! 31 de maro de 2002 ) 5ranceses aproveitam a 6 scoa para contar que conseguiram criar clones de coelhos a partir de clulas de animais adultos! $ril de 2002 ) ,everino Antinori diz em uma confer+ncia mdica em Bubai, nos :mirados ]rabes, que uma mulher estava na oitava semana de gestao de um clone! 11 de a$ril de 2002 ) :m uma reao ao an4ncio de Antinori, a empresa &lonaid diz j ter implantado no 4tero v rias mulheres embri*es produzidos a partir de clonagem! 2- de maio de 2002 ) &ientistas do 'useu Australiano anunciam um projeto para criao do primeiro clone de um animal e3tinto ) o tigre da OasmMnia ) e dizem j ter B<A de um e3emplar em boas condi*es para lanar a empreitada! 11 de 'ul(o de 2002 ) <asce a bezerra 6enta, o primeiro clone de um animal adulto produzido no Brasil! :la morreu de infeco generalizada, cinco semanas depois! ! de no&em$ro de 2002 ) 6esquisadores americanos dizem ter produzido embri*es de camundongos a partir de clulas de tumores malignos! "s embri*es no apresentaram trao da doena! 2! de no&em$ro de 2002 ) ,everino Antinori vem a p4blico anunciar para janeiro de (%%@ o nascimento de um clone humano! ,e a promessa se cumpriu, Antinori no contou!

2. de de*em$ro ) A empresa &lonaid, ligada I seita 'ovimento Uaeliano, anuncia o nascimento ) at hoje no comprovado ) de uma menina chamada :va, o primeiro clone humano! "utros clones dos raelianos teriam nascido depois disso, segundo a empresa! 15 de ,e&ereiro de 2003 ) A ovelha BollC, primeiro clone de um mamfero adulto e marco da ci+ncia, morreu nesta se3ta)feira, aos $ anos, anunciaram seus criadores no /nstituto Uoslin, em :dimburgo, na :sccia! .eterin rios deram I ovelha mais famosa do mundo uma injeo letal, depois de descobrir sinais de uma doena pulmonar progressiva! A necropsia revelou que BollC teve cMncer! 9aio de 2003 ) &ientistas da >niversidade de /daho apresentam o primeiro clone de um eqLilo, a mula /daho Eem! 12 de maio de 2003 ) <asce o primeiro clone de um clone no Brasil! A bezerra .itria ,egunda morreu @$ horas depois de seu nascimento, em uma fazenda da :mbrapa, em Braslia! :la havia aspirado lquido na hora do parto e acabou tendo pneumonia! ! de agosto de 2003 ) &ientistas italianos anunciam a criao do primeiro clone de um cavalo adulto! 6rometea, que nasceu com @$ quilos e muita sa4de no dia (8 de maio, aps uma gestao normal, uma cpia da gua que a deu I luz! 5 de setem$ro de 2003 ) <asce a bezerra 0enda, da :mbrapa, clone de uma vaca valiosa, que morrera meses antes! 11 de de*em$ro de 2003 ) A &Mmara Bai3a do 6arlamento franc+s aprova um projeto de lei que torna a clonagem reprodutiva humana um crime contra a humanidade, suscetvel de punio com @% anos de priso e multa de 9,? milh*es de euros! 1! de de*em$ro de 2003 ) &ientistas da Advanced &ell OechnologC anunciam que conseguiram repetir a produo de embri*es humanos por clonagem e que eles alcanaram o est gio de 7$ clulas! 1. de 'aneiro de 2005 ) " especialista em fertilizao 6anos favos anuncia que implantou um embrio humano produzido por clonagem no 4tero de uma mulher! A e3peri+ncia no resultou em gravidez! / de ,e&ereiro de 2005 ) <asce a bezerra .itoriosa, cpia da vaca .itria, primeiro clone do Brasil! " nascimento foi anunciado duas semanas depois! 12 de ,e&ereiro de 2005 ) &ientistas sul)coreanos anunciam que produziram uma linhagem de clulas)tronco pluripotentes a partir de dezenas de embri*es produzidos a partir de clonagem! 30 de maio de 2005 ) 'orre a bezerra .itoriosa! A hiptese mais prov vel foi um ataque do corao! 6e*em$ro de 2005 ) A empresa americana Eenetic ,avings g &lone apresenta o primeiro clone de estimao feito por encomenda, o gato 0ittle <ic2, que custou >,h ?% mil!

2! de ,e&ereiro de 200/ ) <asce 6ieraz)&rCozootech),tallion, primeiro clone de um cavalo campeo castrado! 12 de maio de 200/ ) &ientistas da >niversidade <acional de ,eul anunciam a obteno de v rias linhagens de clulas)tronco, a partir de clonagem! As linhagens pertencem a nove pacientes ) homens, mulheres e crianas! 3 de agosto de 200/ ) " grupo da >niversidade <acional de ,eul volta a fazer histria, apresentando o primeiro clone de um co! 200! W <ascimento dos clones do Oouro Bandido a partir da transfer+ncia nuclear de celulas som ticas PfibroblastosQ P /n .itro Brasila W 'ogi 'irim, ,6Q 2011 W <ascimento dos clones da raa Brahman a partir da transfer+ncia nuclear da matriz 'iss Atina 9$7U?? P&enatte :mbrioes, com sede em 'atosinhos['EQ Uecentemente, os cientistas esto sendo capazes de clonar plantas, utilizando partes de razes especializadas, e3traindo as clulas da raiz e cultivando)as em uma cultura rica em nutrientes! <essa cultura, as clulas especializadas se tornam no especializadas PdesdiferenciadasQ em calos! "s calos podem ento ser estimulados com os horm#nios de planta adequados para crescerem e se tornarem novas plantas, que so id+nticas I planta original de onde as partes da raiz foram retiradas!

Diagrama da clonagem de plantas atravs da propagao de cultura de tecidos

:ste procedimento, chamado propagao de cultura de tecidos, tem sido amplamente usada por horticultores para cultivar valiosas orqudeas e outras flores raras! As plantas no so os 4nicos organismos que podem ser clonados naturalmente! "s ovos no fertilizados de alguns animais Pgeralmente pequenos invertebrados,

vermes, algumas espcies de pei3e, lagartos e saposQ podem se desenvolver em adultos plenamente crescidos sob determinadas condi*es ambientais, este processo denominado de partenog+nese e a prole so clones das f+meas que depositaram seus ovos! "utro e3emplo de clonagem natural so os g+meos id+nticos que apesar de serem geneticamente diferentes dos pais, os g+meos id+nticos so clones entre si e que ocorrem naturalmente! <os anos 9%, um cientista chamado Rohn Eurdon clonou girinos com sucesso! :le transplantou o n4cleo de uma clula especializada de um sapo PBQ em um ovo no fertilizado de outro sapo PAQ no qual o n4cleo foi destrudo por luz ultravioleta! " ovo com o n4cleo transplantado se desenvolveu em um girino que era geneticamente id+ntico ao sapo B!

E7perimento de clonagem de sapo de 8urdon Apesar de os girinos de Eurdon no terem sobrevivido at se tornarem sapos adultos, o seu e3perimento pode mostrar que o processo de especializao em clulas animais era reversvel e sua tcnica de transfer+ncia nuclear abriu caminho para sucessos posteriores em clonagem! As principais aplica*es da &lonagem so a multiplicao de copias de animais e plantas com caractersticas genticas desej veis, preservao de raas ou espcies ameaadas de e3tino, produo de animais transg+nicos PBiorreatores, 'odelos :3perimentais, 3enotransplantesQ 6ara obteno de um clone, o vulo enucleado para o qual foi transferido o n4cleo da clula som tica foi inserido no 4tero de outra ovelha! <o caso da clonagem humana reprodutiva, a proposta seria retirar)se o n4cleo de uma clula som tica, que teoricamente poderia ser de qualquer tecido de uma criana ou de um adulto, inserir esse n4cleo em um vulo e implant )lo num 4tero Pque funcionaria como barriga de aluguelQ! ,e esse vulo conseguir desenvolver)se, teremos um novo ser com as mesmas caractersticas fsicas da criana ou do adulto de quem foi retirada a clula som tica! ,eria como um g+meo id+ntico nascido posteriormente! As principais dificuldades na &lonagem soD tipo celular, seleo de oocitos receptores, estagio do ciclo do n4cleo transplantado, problemas de viabilidade embrion ria, fetal ou neonatal, a maioria dos clones morre no incio da gestao, os

animais clonados t+m defeitos e anormalidades semelhantes independentemente da clula doadora ou da espcie, essas anormalidades provavelmente ocorrem por falhas na reprogramao do genoma, a efici+ncia da clonagem depende do est gio de diferenciao da clula doadora!

tcnica de clonagem terap?utica para o$teno de clulas K tronco

,e utilizarmos o vulo cujo n4cleo foi substitudo pelo n4cleo de uma clula som tica e, em vez de inseri)lo em um 4tero, dei3armos que ele se divida no laboratrio, teremos a possibilidade de usar essas clulas que, na fase de blastocisto, so pluripotentes, para fabricar diferentes tecidos! /sso abrir perspectivas fant sticas para futuros tratamentos, porque hoje s se consegue cultivar em laboratrio clulas com as mesmas caractersticas do tecido de onde foram retiradas! H importante que as pessoas entendam que, na clonagem para fins terap+uticos, sero gerados apenas tecidos, em laboratrio, sem implantao do vulo no 4tero! <o se trata de clonar um feto at alguns meses dentro do 4tero para depois retirar)lhe os

rgos, como alguns acreditam! Oambm no h por que chamar esse vulo, aps a transfer+ncia de n4cleo, de embrio porque ele nunca ter esse destino! 6esquisa publicada na revista 'cience, por um grupo de cientistas coreanos PY1ang e col, (%%=Q confirmou a possibilidade de obter clulas)tronco pluripotentes a partir da tcnica de clonagem terap+utica ou transfer+ncia de n4cleos PO<Q! " trabalho foi feito graas I participao de 7$ mulheres volunt rias que doaram ao todo (=( vulos e clulas cumulus Pclulas que ficam ao redor dos vulosQ para contribuir com pesquisas visando I clonagem terap+utica! As clulas cumulus, que j so diferenciadas, foram transferidas para os vulos dos quais haviam sido retirados os n4cleos! Be todos eles, (?N conseguiram dividir)se e chegar ao est gio de blastocisto, portanto capazes de produzir linhagens de clulas)tronco pluripotentes! A clonagem terap+utica teria a vantagem de evitar rejeio se o doador fosse a prpria pessoa! ,eria o caso, por e3emplo, de reconstituir a medula em algum que se tornou paraplgico aps um acidente ou para substituir o tecido cardaco comprometido por um infarto! :ntretanto, essa tcnica tem limita*es! <o caso dos afetados por doenas genticas, o doador no poderia ser a prpria pessoa, pois a mutao patog+nica causadora da doena est presente em todas as clulas! >sar linhagens de clulas)tronco embrion rias de outra pessoa pode provocar o problema da compatibilidade entre o doador e o receptor! ,eria o caso, por e3emplo, de um indivduo afetado por distrofia muscular progressiva que necessita substituir tecido muscular! :le no poderia utilizar)se de suas prprias clulas)tronco, mas teria de recorrer a um doador compatvel, eventualmente, um parente pr3imo! Alm disso, no sabemos se as clulas obtidas de uma pessoa idosa com doena de Alzheimer, por e3emplo, uma vez clonadas, teriam a mesma idade do doador ou seriam clulas jovens! "utra questo em aberto seria a reprogramao dos genes que poderiam inviabilizar o processo, dependendo do tecido ou do rgo a ser substitudo!

Tera&ia celular com outras fontes de clulas tronco

a9 Indiv4duos adultos

:3istem clulas)tronco em v rios tecidos Pmedula ssea, sangue, fgadoQ de crianas e adultos! :ntretanto, a quantidade pequena e ainda no se sabe ainda em que tecidos so capazes de diferenciar)se! 6esquisas recentes mostraram que clulas)tronco retiradas da medula de indivduos com problemas cardacos foram capazes de reconstituir o m4sculo do seu corao, o que abre perspectivas fant sticas para o tratamento de problemas cardacos! A maior limitao dessa tcnica W autotransplante ), porm, no servir para portadores de doenas genticas! b9 Cordo umbilical e placenta 6esquisas recentes v+m mostrando que o sangue do cordo umbilical e da placenta so ricos em clulas)tronco! :ntretanto, tambm no sabemos ainda qual o potencial de diferenciao dessas clulas em diferentes tecidos! ,e as pesquisas com clulas)tronco de cordo umbilical derem os resultados esperados, isto , se as clulas)tronco forem realmente capazes de regenerar tecidos ou rgos, essa ser certamente uma notcia fant stica, porque no envolve quest*es ticas! Ainda assim, porm, teremos de resolver o problema de compatibilidade entre as clulas)tronco do cordo doador e o receptor! 6ara tanto, ser necess rio criar, com a maior urg+ncia, bancos de cordo p4blicos I semelhana dos bancos de sangue, porque se sabe que quanto maior o n4mero de amostras de cordo em um banco, maior a chance de achar um doador compatvel! c9 C lulas embrion:rias ,e as clulas)tronco de cordo tiverem a potencialidade desejada, a alternativa ser o uso de clulas)tronco embrion rias obtidas de embri*es no utilizados e que so descartados em clnicas de fertilizao! Estudo de Caso #aso 6ollA 1 Primeiro mam,ero clonado A ovelha BollC foi o primeiro mamfero clonado por transfer+ncia nuclear de clulas som ticas! " 6rof! /an Ailnut, do /nstituto Uoslin, da :sccia, foi o pesquisador respons vel por este e3perimento! " estudo foi publicado em 7;;9, mas foi realizado ao longo de 7;;? e 7;;$! A ovelha BollC nasceu em %? de julho de 7;;$! " nome BollC foi uma refer+ncia a cantora norte)americana BollC 6arton! " n4cleo utilizado no processo de clonagem foi oriundo de uma clula da glMndula mam ria de uma ovelha de seis anos denominada Bellinda, da raa 5inn Borset! >ma outra ovelha, chamada 5luffC, da raa ,cottish Blac2face, foi a doadora do vulo utilizado para receber este n4cleo, 5inalmente, uma terceira ovelha, 0assie, da raa ,cottish Blac2face foi quem gestou a ovelha BollC! 6ara evitar que pudessem ser misturadas caractersticas destas tr+s f+meas, elas eram de raas com caractersticas fenotpicas diferentes entre si! .ale lembrar que foram feitas (9$ tentativas para ser obtido um animal clonado vi vel!

A comunicao do nascimento da BollC gerou in4meras rea*es contr rias e favor veis I sua realizao! 'uitas pessoas se posicionaram imediatamente contra, pois viam neste procedimento uma ameaa contra a dignidade humana! /n4meros pases, inclusive o Brasil, estabeleceram medidas jurdicas para impedir que este processo fosse utilizado em seres humanos! "utros achavam que isto era inerente ao progresso da ci+ncia e que no havia problema algum! >m terceiro grupo, dentre os quais inclui)se o 6rof! Roaquim &lotet, reconheceu que este procedimento tinha riscos, mas que no deveria ser simplesmente banido! ,egundo esta linha de pensamento, o 6rincpio da 6recauo deveria ser utilizado neste caso! "utra controvrsia surgida, no em termos de adequao tica, mas sim cientfica, foi a possibilidade da BollC no ser efetivamente um clone de clula som tica! Bellinda, a ovelha que doou o vulo estava gr vida no momento da coleta das clulas som ticas e j havia morrido tr+s anos antes! " material utilizado estava congelado! <o incio de 7;;8, o prprio 6rof! Ailnut admitiu a possibilidade de que tenha havido um ZenganoZ e que a ovelha BollC no seja de fato um clone de clulas tpicas de um animal adulto! Alguns propuseram que poderia ter havido uma clonagem a partir de clulas embrion rias, que no seria uma inovao! /sto foi esclarecido apenas em junho de 7;;8 com a publicao de uma correspond+ncia cientfica publicada na revista <ature sobre as caractersticas genticas da BollC! :m 7@ de abril de 7;;8 a BollC teve um filhote, a ovelha Bonnie, em um cruzamento habitual com o carneiro mont+s da raa Aelch, chamado Bavid! :sta situao permitiu verificar que ela era frtil e capaz de reproduzir! :m 7;;; a BollC gerou mais tr+s filhotes em uma 4nica gestao, que tiveram problemas! :m janeiro de (%%( outra importante questo surgiu com o diagnstico de uma forma rara de artrite em BollC! :sta doena no habitual em ovelhas com cinco anos de idade! 'uitos interpretaram esta doena como um sinal de envelhecimento precoce! A rigor no se tem certeza de como ocorre o processo de envelhecimento em um mamfero clonado! 5oi constatado que os tel#meros da BollC eram (%N menores que o previsto para animais de sua idade! A BollC teria cinco anos ou onze anosS &inco de vida prpria ou onze cumulativamente com a idade de Bellinda P?i$Q! Be acordo com estudos realizados em outros animais clonados, a ovelha BollC pode ser uma e3ceo, pois a maioria destes animais tem uma vida mais curta que o esperado para a sua espcie! Alguns pesquisadores levantaram a hiptese de que poderiam haver fatores ambientais que tivessem facilitado o aparecimento da doena, tais como o confinamento que o animal estava sendo submetido e o sobrepeso dele decorrente! A obesidade tambm foi verificada como sendo um problema em outros animais clonados! " surgimento de uma infeco pulmonar no control vel, comum em animais velhos mantidos em confinamento, fez com que os pesquisadores do /nstituto Uoslin optassem por fazer a eutan sia de BollC, as 7? horas do dia 7= de janeiro de (%%@, com o objetivo de minorar o seu sofrimento! :ste final da vida de BollC acrescentou mais d4vidas I utilizao de processos de clonagem seja para fins reprodutivos ou no! ,e a BollC teve envelhecimento precoce, como indicam os sinais da reduo dos tel#meros, tambm j comprovados em outros clones, ou se a artrite e a doena pulmonar foram devidos ao estilo de vida a ela imposto uma d4vida que ainda persistir ! " mais prov vel que seja uma interao

entre ambos! " que importa que no se pode assegurar que este processo 4til e seguro, seja para o indivduo gerado em uma clonagem reprodutiva ou para as linhagens de clulas embrion rias que sero utilizadas terapeuticamente! "s riscos ainda esto situados no campo das incertezas, mas j do indcios de que o processo no seja to promissor quanto parecia no incio de sua proposta!
;onte2 <os 0oberto 8oldim = http2>>???%bioetica%ufrgs%br>doll@ca%htm

>oc? aprendeu@ 7Q Befina &lonagem (Q :m que consiste a &lonagem Oerap+uticaS @Q Tuais doenas podem ser tratadas por meio da &lonagem Oerap+uticaS =Q A &lonagem sempre imoralS ?Q .oc+ contra ou a favor a &lonagemS Rustifique

Bibliografia utiliAada e recomendada

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