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BIOQUMICA EXPERIMENTAL PRTICA 1: PROPRIEDADES CIDO-BASE DE AMINOCIDOS

GRUPO 20 NOMES: ************* ****************

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TITULAO POTENCIOMTRICA Os aminocidos esto presentes em todos os seres-vivos e podem ser ligados para formar polmeros muito grandes, as protenas, que possuem papel essencial em nosso organismo. Por isso, de grande importncia que estudemos os aminocidos. Uma propriedade que todo aminocido possui de ser anfotrico, ou seja, eles so ionizados tanto em meio cido quanto em meio bsico, caracterstica que vem da presena de um grupo amino e um grupo carboxila. Com isso, sabemos que todo aminocido tem pelo menos dois valores de pKa, mas pode possuir mais caso sua cadeia possua mais algum grupo ionizvel alm dos caractersticos de aminocidos. Quando se trata de valores de pKa, podemos utilizar a titulao potenciomtrica para realizar experimentos simples e eficientes para estuda-los. Essa tcnica se baseia em uma paulatina adio de uma base forte ou um cido forte numa soluo contendo nosso analito, no caso, um aminocido. Com isso, obtemos valores de pH e seus respectivos volumes de adio; os pHs nos do uma ideia do comportamento cido base do aminocido, enquanto que o volume nos indica quantos mols de cido/base foram adicionados, desde que se conhea a sua concentrao exata. Numa titulao potenciomtrica, usa-se uma bureta para se saber o volume adicionado e um eletrodo para se saber a quantidade de certa espcie em soluo. No caso de nosso experimento, a espcie observada foi o hidrnio (H+), portanto o eletrodo usado foi um pH-metro. Com os dados, fomos capazes de construir um grfico de titulao, que foram comparados com a literatura. Nosso grfico e o comparativo da literatura esto em anexo. A titulao que fizemos foi de cido glutmico com cido clordrico e com hidrxido de sdio. Observando os dois grficos lado a lado, pode-se perceber a semelhana em praticamente todos os pontos, menos nos extremos. Em nossa titulao, a partir de 6 mols de HCl adicionados (-6 no grfico) o valor tende a se estabilizar em pH quase 2, da mesma forma que acontece a partir 3 mols de NaOH (+3 no grfico) se estabilizando em pH 12. Isso ocorre devido sensibilidade do aparelho, que comea a ficar imprecisa, e ao pH das solues adicionadas, que podem no ser suficientes para alterar a partir de certo ponto. A segunda derivada de nosso grfico indica os pontos de inflexio, sendo que quando a segunda derivada vai de negativa para positiva, tem-se uma inflexio cuja concavidade muda de baixo para cima, o que caracteriza os pontos de pKa. Com uma analise dos grficos, pode-se observar que isso ocorre prximo aos valores de pKa pesquisados na literatura: pKa pK1 pK2 pK3 Literatura 2,19 4,25 9,67 Experimental 2,27 4,11 9,79 Erro relativo percentual 3,7 % 3,3 % 1,2 %

Os dados experimentais foram obtidos com o auxlio do programa OriginLab 8.6.

O experimento tambm permitiu a observao do carter tamponante do cido glutmico. Os aminocidos possuem esse carter ter grupos cidos/bsicos fracos, evitando que o pH se altere drasticamente quando se est prximos de algum de seus pKas. O grfico ilustra o tamponamento; nele, nota-se que os pontos prximos dos pKas (marcados com um + vermelho) so os que sofrem menos variao no eixo Y, ou seja, menos alterao em seu pH, seja para maior ou para menor (as extremidades no contam pois so devidas a erros de equipamento). Isso ocorre devido ao equilbrio cido/base de cada um dos grupos ionizveis do cido glutmico (esquema mostrado em anexo); a adio de cido, por exemplo, no protonar todos os stios de todas as molculas do aminocido, haver um equilbrio. Numa soluo sem o cido glutmico, a quantidade base, por exemplo, adicionada seria totalmente refletida no pH, porm, com o cido fraco, chegar um certo pH (o prximo a seu pKa) que a base adicionada comear a ser parcialmente neutralizada pelo cido, e isso causar uma resposta menor no pH. Resumidamente, nosso experimento foi muito satisfatrio, obtivemos resultados prximos da literatura com apenas um experimento, sem duplicata ou triplicata. Conseguimos perceber a caracterstica tamponante do cido glutmico e observar isso na curva de titulao. Para melhorar os resultados, poderamos adicionar mais lentamente, principalmente na rea de interesse, sendo essa a dos pKas ou a do ponto de equivalncia. Alm disso, com um equipamento melhor e cidos e bases diferentes poderamos obter resultados experimentais excelentes. Questes: 1234Escrever a mo, baseado no da literatura. Lembrar de setas no grficos para por a mo. No texto 2,2 2,7; 4,0 4,6; 9,7 10,5. Olhando para o grfico, pode se ver que essas regies so as de menor variao do pH (excluindo as extremidades que esto fora da realidade), o que justifica a possibilidade de utilizar como tampo.

CROMATOGRAFIA EM PAPEL A cromatografia em papel consiste em uma tcnica de separao baseada na diferena de solubilidade entre as amostras e as molculas de gua de hidratao no entorno das fibras de celulose do papel de filtro que constitui a fase estacionria, enquanto arrastadas durante a passagem de um solvente que age como fase mvel. Ao colocar o papel sobre o solvente de Partridge, o solvente absorvido pelo papel e percorre lentamente sua superfcie. Em nvel microscpico podemos entender esse fenmeno pela constante realocao das molculas do solvente na regio na sua regio perifrica devido tenso superficial resultante nesta regio, como resultado o solvente percorre toda a superfcie do papel.

No decorrer do movimento da fase mvel as molculas de aminocidos presentes nas amostras so impulsionadas na direo de movimento da fase mvel, porm sua interao com a fase estacionria retarda esse movimento em maior ou menor grau de acordo com a fora de interao entre o aminocido em questo e a fase estacionria. Dessa forma, aminocidos com estruturas qumicas diferentes (diferentes propriedades fsico-qumicas) so separados nesta tcnica. Cabe lembrar que na separao de aminocidos deve-se utilizar uma fase mvel adequada, na qual eles so pouco solveis, caso contrrio a separao no ocorreria, pois todas as amostras percorreriam a mesma distncia juntamente com a fase mvel. Segue abaixo a tabela com os resultados obtidos. AMINOCIDO Rf esperado Rf medido Erro relativo percentual Glu 0,30 0,28 6% Ala 0,38 0,40 6% Arg 0,20 0,22 6% Leu 0,80 0,77 4% Pro 0,43 0,40 7% Tyr 0,45 0,45 0

http://www2.iq.usp.br/docente/henning/Disciplinas/Bioquimica%20QBQ230N/Apo stila_2010.pdf Podemos notar que os resultados obtidos no experimento esto de acordo com os dados presentes na literatura e apresentam erros relativos percentuais entre 4 e 7%. A diferena entre os valores encontrados com os dados da literatura podem ser devido a diversos fatores como, por exemplo, a espessura no uniforme do papel, umidade do ar (maior umidade do ar implica em um maior nmero de molculas de gua fase mvel- na superfcie do papel) e pH das solues de amostras. Analisando os valores de deslocamento das amostras de aminocidos podemos notar que a arginina possui o menor valor de Rf. Sua estrutura molecular polar e positivamente carregada favorece a interao com as molculas de gua que constituem a fase estacionria permitindo uma maior reteno e conseqentemente um deslocamento menor. Em contrapartida a leucina, com uma estrutura molecular apolar e hidrofbica possui menor interao com a fase estacionria e mais facilmente carregada pela fase mvel, o que contribui para seu maior deslocamento.

RESPOSTAS DAS QUESTES 1. Desenho ok

2. Reao com ninidrina : http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0003267009008198 R. Jellya, E.L.T. Pattona, C. Lennardb, S. W. Lewisa, K. F. Lim. The detection of latent fingermarks on porous surfaces using amino acid sensitive reagents: A review. Analytica Chimica Acta.V 652, 2009, p 128142.

3. J respondido na discusso 4. J respondido na discusso

https://www3.nd.edu/~aseriann/titrate.html http://www.ebah.com.br/content/ABAAABlKAAF/curva-titulacao-aminoacidos