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3 milhes de mortes/ano
No existe vacina ou cura
Transmisso
Contato sexual Sangue e hemoderivados Vertical: gestao, parto e aleitamento Transplante de rgos
Perodo de incubao: fase aguda, soroconverso
no h consenso
Estrutura do HIV
Capsdeo p24 Matriz p17 RNA
Transcriptase reversa
Integrase
Camada bilipdica
Protease
gp41
gp120
gp160
HIV
Ciclo do HIV
Partcula viral
Receptor de quimiocina
gp120
CD4
Liberao de RNA Transcrio reversa Integrao ao DNA Protenas virais
RNA viral
1000 900
Clulas T CD4
Resultado: grande aumento da suscetibilidade a infeces oportunistas, incidncia aumentada de tumores e encefalopatias
Adenomegalia
Doenas oportunistas
Pneumocystis carinii Toxoplasma gondii Cryptosporidio / Microsporidio / Isosporidio Candida sp Coccidioides imitis Cryptococcus neoformans Histoplasma capsulatum Herpes simplex virus Varicela-zoster virus Citomegalovirus Mycobacterium tuberculosis Outras micobactrias Sarcoma de Kaposi (HHV-8)
Diagnstico laboratorial
Testes de triagem: Pesquisa de anticorpos
(ELISA - 3a gerao, MEIA, quimioluminescncia, teste rpido, teste simples) Antgenos: peptdeos sintticos como gp41 e p24
Estreptoavidina peroxidase
Anticorpo de deteco biotinilado
Anticorpo de captura
Estreptoavidina peroxidase
Anti-anticorpo biotinilado
Western-Blot / Imuno-Blot
Anticorpo primrio
p31
p24
P17
Positivo
Negativo
Duvidoso
Fluxograma para deteco de anticorpos anti-HIV em indivduos com idade acima de 2 anos Ministrio da Sade portaria No 59, 28 de janeiro de 2003
Amostra (soro ou plasma) EIA 1 (-) (+ / Ic)
Etapa 1
Amostra negativa para HIV EIA 2 ( - ) e IFI ( - ) ou IB ( - ) Amostra negativa para HIV EIA 2 ( - ) / (Ic) e IFI ( + ) / (I) ou IB ( + ) / (I)
EIA 2 e IFI ou IB
EIA 2 ( + ) e IFI ( + ) ou IB ( + ) Amostra positiva para HIV-1 / Coletar nova amostra repetir a etapa 1
Etapa 2
Western Blot (-) Amostra negativa para HIV-1 (I) Amostra indeterminada para HIV-1 (+) Amostra positiva para HIV-1
Etapa 3
Laudo da sorologia
O diagnstico sorolgico de infeco pelo HIV somente poder ser confirmado aps anlise de no
Preo acessvel
Segurana no perodo da janela
Infeco Primria
Linfcitos T CD4+
Latncia Clnica
Sintomas
Semanas
Anos
Carga viral
Introduzida em 1996-1997 Mede a quantidade de HIV-RNA no sangue Correlao com o nmero de vrus (cpias/ml) Mtodos: RT-PCR, bDNA, NASBA
Roche
RT-PCR
Bayer
b-DNA
Organon
NASBA HIV QT
Mtodo Sensibilidade
100 500.000
40 10.000.000
Comparao Vantagens
50% PCR
PCR
cDNA
cDNA
5 Desnaturao 3 Desnaturao
Primer
Sntese
Anelamento
DNA novo
Ciclo 1
Primer
Ciclo 2
Extenso
etc
Transcrio Reversa
Transcrio Reversa
Transcriptase reversa
RNA mensageiro
dNTP
Transcrio Reversa
Transcrio Reversa
Transcrio Reversa
Transcrio Reversa
Transcrio Reversa
Transcrio Reversa
Transcrio Reversa
Transcrio Reversa
DNA complementar
Reao de PCR
PCR
Taq DNA polimerase Primer anti-sense
5
DNA complementar
Primer sense
dNTP
PCR
PCR
DESNATURAO
PCR
ANELAMENTO
PCR
PCR
EXTENSO
PCR
PCR
PCR
PCR
PCR
PCR
PCR
PCR
PCR
PCR
PCR
Real-time PCR
Quantificao na fase exponencial
Efeito Plat Fase exponencial
Real-time PCR
Sondas fluorescentes: seqncias de nucleotdeos marcados
Reporter
R Q
Quencher
R Q
Fluorescncia
Comprimento de onda
Fluorescncia
Comprimento de onda
Real-time PCR
Sondas fluorescentes: - propriedade de 5 exonuclease da Taq polimerase
Primer
3 5
Real-time PCR
Sondas fluorescentes: - propriedade de 5 exonuclease da Taq polimerase
5
Q R
Real-time PCR
Sondas fluorescentes: - propriedade de 5 exonuclease da Taq polimerase
5
Q R
Real-time PCR
Sondas fluorescentes: - propriedade de 5 exonuclease da Taq polimerase
5
Q R Q
Real-time PCR
Sondas fluorescentes: - propriedade de 5 exonuclease da Taq polimerase
Real-time PCR
Curva de amplificao
Real-time PCR
Quantificao:
- utilizao de curva de referncia
bDNA
Vrus
bDNA
bDNA
Reao da enzima com substrato (dioxetano)
Marcao dos Amplificadores amplificadores com fosfatase alcalina Pr-amplificador Pontas adesivas (iso C ou G) Sondas alvo
NASBA
5 3
RNA
Promotor T7
Primer 1 5 RNA-DNA
DNA 3 5
DNA-DNA
T7 RNA polimerase
AMV-RT
AMV-RT
Rnase H
Infeco Primria
Linfcitos T CD4+
Latncia Clnica
Sintomas
Semanas
Anos
Controle Isotpico
Citometria de fluxo
Laser
Detector
CD8 (PE)
42,7%
CD4 (FITC)
Inibidor de entrada
HIV
Inibidor de integrase
Inibidor de protease
Inibidor de TR
Staduvina
Abacavir (ZiagenTM)
Nevirapina (ViramuneTM), Delavirdina (RescriptorTM),
Efavirenz (SustivaTM) Inibidores de protease: Saquinavir (FortovaseTM/InviraseTM), Ritonavir (NorvirTM), Indinavir (CrixivanTM), Nelfinavir (ViraceptTM), Amprenavir (AgeneraseTM)
Clulas T CD4+
Valores relativos
Apoptose de linfcitos
Carga viral
Ativao imune
3
Meses
120
180
Vrus da rubola
Togavrus Vrus simples Um nico tipo antignico Inativado por agentes
membrana bilipdica ssRNA
RNA
de
fita
glicoprotena
nucleocapsdio
Patognese
Transmisso respiratria Replicao na nasofaringe e linfonodos regionais Viremia aps 5-7 dias aps exposio com disseminao para os tecidos
Aspectos clnicos
Perodo incubao: 12 a 23 dias
Linfadenomegalia 2a semana Exantema maculopapular: 14 - 17 dias aps exposio
Complicaes
Artralgia ou artrite:
Criana raro
Orquite raro
Rubola congnita
Surdez
Catarata
Alteraes cardacas
Microcefalia Retardo mental Alteraes sseas Alteraes hepticas e esplnicas
Diagnstico laboratorial
Isolamento do vrus de material clnico (orofaringe, urina)
Teste de inibio da hemaglutinao viral
classe IgG
Avidez de IgG Deteco de anticorpos especficos da classe IgM (fator reumatide interfere, persistncia de IgM)
Inibio da hemaglutinao
Negativo
Positivo
Hemlise radial
Complemento Anticorpo da amostra
Complemento
Antgeno Hemcia
Antgeno Hemcia
Positivo
Negativo
Hemlise radial
positivo
controle
Ttulo
64
IgM Fetal 32
IgM
3
Nasci-mento
Trimestre
Idade / Meses
Idade / Anos
Definio de caso
Aspectos clnicos Aparecimento do exantema maculopapular generalizado Temperatura >37.2o C Artralgias/Artrites ou linfadenomegalia ou conjuntivite] Critrios para diagnstico laboratorial Isolamento do vrus, ou Aumento significante ttulo de IgG especfica fase aguda
Casos confirmados
300
200
100
0 1984
1985
1986
1987
1988
1989
1990
1991
1992
1993
1994
1995
Contra-indicaes e precaues
Imunossupresso
Doena aguda severa ou moderada
Citomegalovrus
Vrus de DNA - famlia Herpesviridae
60% da populao infectada eventualmente 95% da populao em pases subdesenvolvidos Infeco primria geralmente assintomtica Latncia (integrao no cromossoma da clula
hospedeira) e reativao
Transmisso via saliva, contato sexual, sangue,
Citomegalovrus
Diagnstico laboratorial
Hemograma: atpicos linfocitose relativa, linfcitos
Estreptoavidina peroxidase
Antgeno
IgM da Amostra
Anticorpo de captura
Substrato Cromgeno
Substrato Cromgeno
Substrato Cromgeno
Estreptoavidina peroxidase
Anticorpo de deteco biotinilado
Controle
Alta avidez
Baixa avidez
Infeco congnita
Infeco assintomtica at formas graves Segunda causa mais comum de deficincia mental
Infeco congnita
SNC: microcefalia, periventricular retardo mental, epilepsia, calcificao Olhos: coriorretinite, atrofia tica
Vir
DNA
Positivo
IEmRNA
Deteco de IgM Avidez de IgG IgM positivo IgM indefinido IA baixo Infeco primria IA intermedirio
IA alto
Diagnstico
No definido
Infeco antiga
Presena de Ac. NT
Ausncia de Ac NT
No auxilia
Diagnstico
Tentar NT
NT
PCR
Deteco DNA viral (leuccitos, soro, plasma, urina,
LCR, bipsias)
Diagnstico rpido
infeco 1aria
A
No-A / No B
Transmisso fecal-oral
E C
Hepatites virais
Transmisso parenteral
Outras
Soro
A 43%
Elevao bilirrubina
Sintomas
Perodo de incubao
Prictrico
Fase Ictrica
Convalescncia
dsDNA
DNA polimerase
HBcAg
Formas circulantes
Famlia Hepadnaviridae
HBV - genoma
Vrus da hepatite B
HBsAg Prevalence Prevalncia HBsAg >8% 8% - Alta - High 2-7% - Intermediate 2 7% - Intermediria <2% - Low < 2% - Baixa
Hepatite B
Transmisso: sangue ou hemoderivados (agulhas,
carcinoma hepatocelular
HBV
HBV Ciclo
Reciclagem
Entrada do HBV
Core + HBsAg
Core
Montagem
Traduo
Transcrio
cccDNA
Reparo
Hepatite B - Imunopatologia
HBV
DNA do HBV
RNA do HBV
T CD8+
CD8
do HBV HBsAg
cores do HBV
Hepatcito infectado
Hepatite B - Imunopatologia
Aspectos clnicos
Perodo de incubao 60-90 dias (45-180) Ictercia: < 5 anos <10% > 5 anos 30 - 50% Casos agudos fatais 0.5 - 1% Infeco crnica < 5 anos 30 - 90% > 5 anos 2 - 10% Mortalidade da infeco crnica 15 - 25%
Hepatite B
Marcadores sorolgicos:
HBsAg e anti-HBs
anti-HBc IgM e anti-HBc total
HBeAg e anti-Hbe
Testes laboratoriais:
ELISA (IgG e IgM)
PCR deteco de genoma viral (DNA)
Dosagem de ALT
Recuperao Anos
Janela Imunolgica
Sintomas
Anti-HBc- Total
Concentrao Relativa
Tempo
Concentrao Relativa
Anti-HBc- Total
HBeAg Anti-HBc IgM HBsAg
Tempo
Anti-HBc- Total
Concentrao Relativa HBeAg Anti-HBe HBsAg
Anti-HBc IgM
Tempo
Hepatite B - Preveno
Triagem banco de sangue
Vacina para hepatite B: Protena recombinante (HBsAg) 3 doses Produo de anti-HBs (acima de 100 mU/ml)
Imunoglobulina (ps-exposio)
Hepatite C
Hepatite no-A no-B associada transfuso
Choo et al, 1989: isolamento HCV
Vrus da hepatite C
Protena E1 Protena E2
Protena C (Capsdio)
Genoma (RNA) Famlia Flaviviridae
Vrus da hepatite C
Genoma do HCV
estrutural no estrutural
5NC
E1
E2/NS1
NS2
NS3
NS4
b a
NS5
b
3NC
5-1-1
NS5
c33c
c100-3
Gentipos HCV
Fgado normal
Infeco aguda
Hepatite crnica
< 20 anos
Diagnstico laboratorial
Testes sorolgicos
ELISA Imunoblot: RIBA
Bipsia heptica
Dosagem peridica de ALT
ELISA
estrutural no estrutural
5NC
E1
E2/NS1
NS2
NS3
NS4
b a
NS5
b
3NC
Teste 1a gerao
ano 1990
soroconverso 16 sem
2a gerao
1992
Ag core + NS3
10 sem
3a gerao
1995
7-8 sem
ALT
Anti-HCV
12
Sintomas
Anti-HCV
Bipsia: cirrose
Utiliza mesmos Ags do ELISA Mais especfico, menos sensvel que o ELISA
Testes moleculares
Deteco do genoma viral (RT-PCR)
Confirmao diagnstica
padro
ouro
(discrimina
entre
infeco
passada e atual)
Testes moleculares
Carga viral Avalia atividade da doena, Prognstico de resposta teraputica, Tipo de abordagem teraputica preconizada
Transcrio Reversa
5 3
3 5
Transcriptase reversa
5 3
3
5
cDNA
cDNA
5 Desnaturao 3 Desnaturao
Primer
Sntese
Anelamento
DNA novo
Ciclo 1
Primer
Ciclo 2
Extenso
etc
bDNA
Reao da enzima com substrato (dioxetano)
Marcao dos Amplificadores amplificadores com fosfatase alcalina Pr-amplificador Pontas adesivas (iso C ou G) Sondas alvo
NASBA
5 3
RNA
Promotor T7
Primer 1 5 RNA-DNA
DNA 3 5
DNA-DNA
T7 RNA polimerase
AMV-RT
AMV-RT
Rnase H
Testes moleculares
Determinao do gentipo
cDNA
cDNA
5 3 Desnaturao
biotina
Desnaturao
Sntese
Anelamento
Ciclo 1
Ciclo 2
Extenso
etc
Hibridizao reversa
Cromgeno (NBT/BCIP)
Fosfatase alcalina
Estreptoavidina Biotina
Alvo amplificado
Sondas de DNA
Tira de nitrocelulose
Reativo
Confirmao AntiHCV (RIBA)
1. Dosagem ALT
Se elevado considerar bipsia de fgado
Reativo
Indeterminado HCV-RNA
No-reativo
Hepatite C crnica
Genotipagem do HCV Genotipo 2 ou 3 Genotipo 1 (e 4, 5 ou 6) Bipsia do fgado >A2F2 Peginterferon + 1000-1200mg ribavirina 48 semanas Quantificao do RNA-HCV no incio e na semana 12 (genotipo 1) <A1F1 Seguimento sem tratamento
Diminuio < 2 log na quantidade de RNA do HCV na 12 semana Parada do tratamento Incluso em testes com outras terapias
Preo acessvel
Diminui a janela de 59 para 10-30 dias
Suspeita de hepatite aguda baseado em: Histria, exame fsico, epidemiologia Atividade de aminotransferase elevada (ALT/AST) Fazer sorologia: - Anti-HAV (igM) - HBsAg e anti-HBc (igM) - Anti-HCV (ELISA e RIBA) IgM Anti-HBc + c/ ou s/ HBsAg Diagnstico: Hepatite B aguda
IgM anti-HAV
Sorologias negativas Considerar outras etiologias no virais: isquemia, toxinas; ou outras etiologias: CMV, EBV
Suspeita de co-infeco por HDV baseada em: Fatores de risco (usurio de drogas) Sinais clnicos de hepatite severa Checar Anti-HDV Anti-HDV positivo Diagnstico: Co-infeco HBV/HDV
Considerar possibilidade de infeco por HEV em pessoas com procedncia recente a regies endmicas Testar novamente para anti-HCV em 3-6 meses
Anticorpos
Modo de transmisso Rotas de transmisso Incubao Infeco aguda (Ictercia) Evoluo para estado crnico Tratamento Profilaxia Testes diagnsticos mais comuns
ELISA, ALT
* Anteriormente HEV classificado na famlia Caliciviridae, DI: drogas injetveis, IG: imunoglobulina
Rotavrus
Famlia Reoviridae Rotavrus infantil. So responsveis por cerca de 50% de todos os causam gastroenterite humana
Rotavrus ME
Rotavrus - Estrutura
Morfologia icosadrica, com capsdeo de protena de dupla
Rotavrus Estrutura
Manifestaes clnicas
Responsvel pela grande proporo de casos de doena
(desidrataoacidosechoquemorte)
Ocorre infeces assintomticas, com soroconverso.
Epidemiologia e imunidade
Causa isolada mais importante no mundo de
gastroenterite em crianas de pouca idade.
50-60% dos casos de gastroenterite aguda de
Epidemiologia e imunidade
Aos 3 anos de idade 90% apresentam anticorpos sricos contra
um ou mais tipos.
Infeces sintomticas so mais comuns entre 6 meses e 2 anos
de idade
Lactentes c/ menos de 6 meses so protegidos por anticorpos maternos IgA (leite materno)
Patogenia
Infectam as clulas das microvilosidades do I.D.
Codifica uma protena (NSP4) enterotoxina.
Diagnstico laboratorial
Demonstrao do vrus em amostra de fezes colhidas no
Tratamento e controle
Reposio de lquido e restaurao do equilbrio
eletroltico por via intravenosa ou oral
Tratamento e controle
Vacinas orais de vrus vivos atenuados esto disponveis para
aplicao -1 dose: - Deve ser aplicada aos 2 meses de idade 1 ms e 15 dias a 3 meses e 7
dias de vida)
- 2 dose: - Deve ser aplicada aos 4 meses de idade 3 meses e 7 dias de vida a 5
meses e 15 dias de vida