MICROBIOLOGIA

Departamento de Biomedicina CBB Prof: Dbora Lemos M. Maia

FISIOLOGIA BACTERIANA O crescimento e diviso celulares necessitam de um ambiente propcio com todos os constituintes qumicos e fsicos necessrios para o seu metabolismo. Essas necessidades especficas so dependentes de informaes genticas para cada espcie bacteriana. Algumas espcies com vasta flexibilidade nutricional so capa es de sinteti ar muitos de seus metab!litos a partir de precursores simples" enquanto" outras espcies so mais exigentes e necessitam de nutrientes complexos para o seu crescimento e reproduo. NUTRIO A anlise das estruturas bacterianas revela que sua arquitetura formada por diferentes macromolculas" em particular" protenas e cidos nuclicos. Os precursores das macromolculas podem ser retirados do meio ambiente ou ser sinteti ado pelas bactrias a partir de compostos mais simples. A alternativa escol#ida vai depender da disponibilidade do composto no meio e da capacidade de sntese do microrganismo. As subst$ncias ou elementos retirados do ambiente e usados para construir novos componentes celulares ou para obter energia so c#amados nutrientes. Os nutrientes podem ser divididos em duas classes% macronutrientes e micronutrientes. Ambos os tipos so imprescindveis" mas os primeiros so requeridos em grandes quantidades por serem os principais constituintes dos compostos org$nicos celulares e & ou serem utili ados como combustvel. MACRONUTRIENTES Carbono: Est presente na maioria das subst$ncias que compem as clulas. As bactrias podem utili ar o carbono inorg$nico existente no ambiente" na forma decarbonatos ou de 'O( como )nica fonte de carbono. *o nestes casos c#amadas de

autotr!ficas.Os microrganismos que obrigatoriamente requerem uma fonte org$nica de carbono so denominados #eterotr!ficos e as principais fontes" so os carboidratos. Oxignio: + requerido na forma molecular como aceptor final na cadeia de transporte de eltrons aer!bia. ,ambm elemento importante em vrias molculas org$nicas e inorg$nicas. Hidrognio: 'omo componente muito freq-ente da matria org$nica e inorg$nica" tambm constitui um elemento comum de todo material celular. Nitrognio: + componente de protenas e cidos nuclicos" alm de vitaminas e outros compostos celulares. Est disponvel na nature a sob a forma de gs ./ (0 ou na forma combinada. *ua utili ao como /( restrita a um grupo de bactrias cu1o principal #abitat o solo. /a forma combinada" o nitrog2nio encontrado como matria inorg$nica ./34 " /O45"etc.0 ou matria org$nica% aminocidos" purinas e pirimidinas. Enxofre: 6a parte de aminocidos .cistena e metionina0" de vitaminas e de vrias protenas importantes em reaes de !xido5reduo. 7a mesma forma que o nitrog2nio" o enxofre pode ser encontrado no ambiente nas formas elementar" oxidada e redu ida8 estas duas )ltimas aparecem como compostos org$nicos e inorg$nicos. ,odas as alternativas citadas podem ser utili adas pelas bactrias" porm so os sulfatos .*O 95(0 inorg$nicos ou os aminocidos as formas preferencialmente assimiladas. /a forma oxidada" tambm pode ser aceptor final de eltrons das cadeias de transporte de eltrons anaer!bias. F foro: + encontrado na clula na forma combinada a molculas importantes como os nucleotdeos .A,:" ',:" ;,:" <,:" ,,:0 e como fosfato inorg$nico8 nesta )ltima forma incorporado atravs de poucas reaes metab!licas" embora uma delas se1a de fundamental import$ncia% a sntese de A,: a partir de A7: e fosfato. As subst$ncias fosforiladas podem estar envolvidas com o arma enamento de energia . como o A,:0 ou atuar como reguladoras de processos metab!licos% muitas en imas tornam5se ativas ao serem fosforiladas. MICRONUTRIENTES Os elementos ferro" magnsio" mangan2s" clcio" inco" potssio" s!dio" cobre" cloro" cobalto" molibd2nio" sel2nio e outros so encontrados sempre na forma inorg$nica" fa endo parte de minerais. *o necessrios ao desenvolvimento microbiano"

mas em quantidades variveis" dependendo do elemento e do microrganismo considerados. Os micronutrientes podem atuar de diferentes maneiras" tendo como funes principais% 5 componentes de protenas" como o ferro que participa da composio de vrias protenas en imticas ou no" de citocromos" etc. 5 cofatores de en imas" como o magnsio" potssio" molibd2nio" etc. 5 'omponentes de estruturas" como o clcio" presente em um dos envolt!rios dos esporos8 5 Osmorreguladores. CON!I"ES !E CU#TI$O :ara se cultivar microrganismos deve5se obedecer a requisitos bsicos obrigat!rios" quais se1am incub5los em meios de cultura adequados e incub5los em condies ambientais igualmente adequadas. <m in!culo uma amostra de material contendo geralmente uma pequena quantidade de microrganismos8 obedecidas as condies citadas" os microrganismos contidos no in!culo multiplicam5se" aumentando em n)mero e massa e" com isto" atingindo o ob1etivo dese1ado. Meio de C%&t%ra =eio de cultura uma mistura de nutrientes necessrios ao crescimento microbiano. >asicamente deve conter a fonte de energia e de todos os elementos imprescindveis ? vida das clulas. A formulao de um meio de cultura deve levar em conta o tipo nutritivo no qual o microrganismo pertence" considerando5se a fonte de energia .lu ou subst$ncia qumica0" o substrato doador de eltrons .org$nico ou inorg$nico0 e a fonte de carbono .org$nica ou inorg$nica0. Estabelecidas as condies gerais" o meio de cultura deve ainda atender as necessidades especficas do grupo" da famlia" do g2nero ou da espcie que se dese1a cultivar. Assim" imprescindvel acrescentar ao meio vitaminas" cofatores" aminocidos" etc." quando estes compostos no so sinteti ados pelos microrganismos que se dese1a cultivar.

Fatore de 're 'i(ento Entre as bactrias #eterotr!ficas # uma imensa variedade de exig2ncias nutritivas. Algumas so capa es de crescer em meio muito simples" constitudo de uma soluo de glicose" sal de am@nio e alguns sais minerais. A partir desses compostos" sinteti am todos os componentes do protoplasma% protenas" polissacardeos" cidos nuclicos" coen imas" etc. Outras" todavia" so incapa es de sinteti ar determinados compostos org$nicos essenciais para o seu metabolismo. :ara que estes microrganismos possam crescer" tais compostos devem ser obtidos do meio natural ou artificial em que vivem. Essas subst$ncias so denominadas fatores de crescimento. =uitos desses fatores so componentes de coen imas" que" para o #omem" so vitaminas. /a realidade" certas vitaminas" como o cido f!lico" foram descobertas por serem necessrias ao crescimento de determinadas bactrias. As composies dos meios de cultura" portanto" podem ser muito variadas. <m meio pode ter uma composio simples" contendo um )nico carboidrato como fonte de energia e carbono e alguns sais minerais8 em outro extremo esto os meios requeridos por microrganismos mais exigentes" apresentando composio complexa" contendo vrias fontes de carbono e energia" vitaminas e aminocidos" podendo ainda ser acrescidos de sangue ou soro de animais. Alm da composio qualitativa" o meio de cultura deve obedecer aos limites de quantidade de cada componente suportveis pelos microrganismos. =uitas ve es o meio de cultura deve conter subst$ncias para neutrali ar a ao de produtos t!xicos lanados pelos pr!prios microrganismos" que sofrem os efeitos de seu ac)mulo. <m exemplo rotineiro adio de tampes para impedir a queda de p3 provocada pelos cidos org$nicos produ idos por fermentao bacteriana.Os meios podem ser lquidos" quando so uma soluo aquosa de nutrientes" ou s!lidos" quando a soluo aquosa gelificada por um polissacardeo extrado de algas" o gar. O meio s!lido obrigatoriamente usado quando se pretende separar clulas. 'ada clula individuali ada ou agrupamento isolado d origem" por multiplicao" a um aglomerado que constitui uma col@nia. 'ol@nias de diferentes espcies geralmente apresentam caractersticas morfol!gicas diferentes. Os meios de cultura podem ser seletivos" quando cont2m uma subst$ncia que inibe o crescimento de um determinado grupo de microrganismos" mas permite o desenvolvimento de outros.

 INF#U)NCIA !E FATORES AM*IENTAIS A tomada de nutrientes e posterior metabolismo so influenciados por fatores fsicos e qumicos do meio ambiente. Os principais fatores so% temperatura" p3" presena de oxig2nio" presso osm!tica e lu . Te(+erat%ra 'ada tipo de bactria apresenta uma temperatura !tima de crescimento" em torno desta temperatura observa5se um intervalo dentro do qual o desenvolvimento tambm ocorre" sem" no entanto" atingir o seu mximo. <ltrapassado o limite superior" rapidamente ocorre desnaturao do material celular e" conseq-entemente" a morte da clula. As temperaturas inferiores ? !tima levam a uma desacelerao das reaes metab!licas" com diminuio da velocidade de multiplicao celular" que em caso extremo" fica impedida. As variaes quanto ao requerimento trmico permite classificar as bactrias segundo a temperatura !tima para o seu crescimento" em% 5 psicr!filas% entre A( e ABC ' 5 mes!filas% entre (D e 4BC' 5 term!filas% EB e DBC' Embora grupos exc2ntricos" que necessitam de altas temperaturas para o seu crescimento" a maioria concentra5se no grupo de mes!filas" principalmente as de interesse mdico" veterinrio e agron@mico. +H Os valores de p3 em torno da neutralidade so os mais adequados para absoro de alimentos para a grande maioria das bactrias. Existem" no entanto" grupos adaptados a viver em ambientes cidos e alcalinos. Oxignio O oxig2nio pode ser indispensvel" letal ou in!cuo para as bactrias" o que permite classific5las em% 5 Aerbia e trita % exigem a presena de oxig2nio" como as do g2nero Acinetobacter. 5 Mi'roaerfi&a % necessitam de baixos teores de oxig2nio" como o Campylobacter jejuni.

5Fa'%&tati,a % apresentam mecanismos que as capacitam a utili ar o oxig2nio quando disponvel" mas desenvolver5se tambm em sua aus2ncia. Escherichia coli e vrias bactrias entricas tem esta caracterstica. 5 Anaerbia oxig2nio. E-OEN.IMAS A seletividade da membrana citoplasmtica impede que macromolculas como protenas" amido" celulose e lipdeos se1am transportados para o interior da clula. :ara essas molculas serem utili adas pelos microrganismos" necessrio compostos menores" aos quais as membranas so permeveis. A quebra das molculas promovida por en imas #idrolticas" denominadas exoen imas por atuarem fora da membrana citoplasmtica. As exoen imas apresentam especificidade pelo substrato" atuando sobre protenas ou amidos" ou determinados lipdeos" e constituem um fator de virul2ncia" uma ve que podem #idrolisar componentes estruturais de tecidos" conferindo ao microrganismo capacidade invasora e de perman2ncia em outros organismos vivos. Alm de estarem associadas ? nutrio dos microrganismos" as exoen imas podem contribuir para a sua sobreviv2ncia" uma ve #idr!lise de subst$ncias que l#es so t!xicas ou mesmo letais. RE/RO!UO *ACTERIANA 5 Cre 'i(ento: Aumento do protoplasma celular pela sntese de cidos nuclicos" protenas" polissacardeos e lipdeos8 e" absoro de gua e eletr!litos. ,ermina na diviso celular. 5 M%&ti+&i'a01o: Fesposta necessria ? presso de crescimento. Modo de re+rod%01o 5 Ci i+aridade: 6ormao de um septo equatorial na regio do mesossomo e diviso da clula5me" em duas clulas fil#as. G'ocosH em qualquer direo" Gbacilos e espirilosH" no sentido transversal. que catalisam a e trita % no toleram o oxig2nio. Ex.% Clostridium tetani, bactria produtora de potente toxina que s! se desenvolve em tecidosnecrosados carentes de

 CUR$A !E CRESCIMENTO *ACTERIANO Embora as bactrias desenvolvam5se bem em meios de cultura s!lidos" os estudos de crescimento so feitos essencialmente em meios lquidos e as consideraes que seguem so vlidas para essas condies. Iuando uma determinada bactria semeada num meio lquido de composio apropriada e incubada em temperatura adequada" o seu crescimento segue uma curva definida e caracterstica.

Fa e &ag 2A3: esta fase de crescimento ocorre quando as clulas so transferidas de um meio para outro ou de um ambiente para outro. Esta a fase de a1uste e representa o perodo necessrio para adaptao das clulas ao novo ambiente. As clulas nesta fase aumentam no volume total em quase duas ou quatro ve es" mas no se dividem. ,ais clulas esto sinteti ando 7/A" novas protenas e en imas" que so um pr5requisito para diviso. Fa e ex+onen'ia& o% &og 2*3: nesta fase" as clulas esto se dividindo a uma taxa geomtrica constante at atingir um mximo de crescimento. Os componentes celulares como F/A" protenas" peso seco e polmeros da parede celular esto tambm aumentando a uma taxa constante. 'omo as clulas na fase exponencial esto se dividindo a uma taxa mxima" elas so muito menores em di$metro que as clulas na fase Jag. A fase de crescimento exponencial normalmente c#ega ao final devido ? depleo de nutrientes essenciais" diminuio de oxig2nio em cultura aer!bia ou ac)mulo de produtos t!xicos.

Fa e e ta'ion4ria 2C3: durante esta fase" # rpido decrscimo na taxa de diviso celular. Eventualmente" o n)mero total de clulas em diviso ser igual ao n)mero de clulas mortas" resultando na verdadeira populao celular estacionria. A energia necessria para manter as clulas na fase estacionria denominada energia de manuteno e obtida a partir da degradao de produtos de arma enamento celular" ou se1a" glicog2nio" amido e lipdeos. Fa e de (orte o% de'&5nio 2!3: quando as condies se tornam fortemente impr!prias para o crescimento" as clulas se reprodu em mais lentamente e as clulas mortas aumentam em n)meros elevados. /esta fase o meio se encontra deficiente em nutrientes e rico em toxinas produ idas pelos pr!prios microrganismos. META*O#ISMO *ACTERIANO <ma ve garantidos pelo ambiente os nutrientes e as condies adequadas para assimil5los" as bactrias vo absorv25los e transform5los para que cumpram suas funes bsicas" quais se1am" o suprimento de energia e de matria prima. 'omo matria5prima" os nutrientes vo ser transformados em estruturas celulares ou em molculas acess!rias ? sua sntese e funcionamento. Obten01o de energia As subst$ncias com alto valor energtico so sempre aquelas com elevado grau de reduo" e grande parte das bactrias .exceo ?s fotossinteti antes0 vai obter toda energia de que necessita por oxidao desses substratos. As subst$ncias preferencialmente oxidadas por microrganismos so os a)cares" seguidos de protenas" peptdios e" mais raramente" as gorduras. As bactrias utili am energia para o transporte de nutrientes" o movimento dos flagelos" mas" sobretudo para as biossnteses. KLEJA/7 .AMA(0" recon#eceu que a maioria das reaes biol!gicas ocorre na aus2ncia de oxig2nio" por desidrogenao. Em biologia" pode5se di er que a perda de um eltron equivale a perda de um #idrog2nio. :ode5se" ento" definir oxidao como o gan#o de um #idrog2nio e reduo como a perda de um #idrog2nio.

Fer(enta01o =etabolismo no qual os compostos org$nicos servem como doadores e receptores de eltrons .#idrog2nio0. A fermentao condu " geralmente" ? ciso parcial de molculas de glicose .glic!lise0. N 'onceito antigo .clssico0% decomposio microbiana de carboidratos na aus2ncia de oxig2nio. 7entre os vrios tipos de fermentao" pode5se citar% N Fer(enta01o 6o(o&4ti'a: produo de cido ltico como produto final. N Fer(enta01o a&'o&i'a: produo de lcool como produto final. N Fer(enta01o (i ta: produo de lcool" cido e gs. N Fer(enta01o b%ti&eno7g&i'&i'a: produo do butileno glicol .no cido0 como produto final. /%trefa01o 7ecomposio de compostos nitrogenados .protenas0" utili ando5se de subst$ncia org$nica como aceptor5doador de eltrons. + um tipo de fermentao que produ produtos finais de odor desagradvel% indol" escatol" cido sulfdrico. Re +ira01o 7ecomposio microbiana de substratos cu1o receptor de #idrog2nio o oxig2nio. /a respirao ocorrem as seguintes etapas% a0 'iclo de Orebs8 b0 'adeia transportadora de eltrons8 c0 6osforilao oxidativa. Re +ira01o anaerbi'a Iuando o oxig2nio substitudo por outro receptor inorg$nico de eltrons. Referncias Bi !io"r#ficas Black JG. Microbiologia Fundamentos e Perspecti as. ! a "d. "ditora Guanabara #oogan$%&&&. Ja'et($ Melnick ) *delberg. Microbiologia Mdica. %+ a "d. "ditora Guanabara #oogan$ %&&&. ,rabulsi -.$ *lt/ert/um F$ Gompert( 0F$ 1andeias J*2. Microbiologia ! a "di34o. "ditora at/eneu$ %&&5.

MICROBIOLOGIA
Departamento de Biomedicina CBB Prof: Oarla 'arval#o =iranda

EST$DO DIRIGIDO

+. 1ite as principais subst6ncias de nature(a f7sica e org6nica necess8rias ao culti o bacteriano. %. De acordo com a temperatura e as necessidades de o9ig:nio como as bactrias podem ser classificadas; <. =uais os mecanismos >ue podem ser utili(ados por uma clula bacteriana para troca de material gentico; "9pli>ue cada mecanismo. !. Descre a as >uatro fases da cur a de crescimento bacteriano. 5. =ual a principal subst6ncia >ue comp?e a parede celular das bactrias$ sua fun34o e como podemos diferenciar a parede celular de bactrias Gram@ das GramA. B. 1omo podemos definir um plasm7dio e >uais as suas principais propriedades; C. 1onceitue e defina a fun34o das e9oen(imas. D. 1omente sobre as principais diferen3as entre as clulas procariEticas e eucariEticas relacionando as fun3?es de cada organela. F. =uais as principais formas de obten34o de energia utili(adas pelas bactrias. +&. Fa3a um >uadro comparati o mostrando as estruturas acessErias e necess8rias >ue comp?em a clula bacteriana e cite a fun34o principal de cada uma. ++. 0 >ue se entende como endEsporo ou esporo bacteriano;