CUESTIONARIO Que otros mtodos indirectos tenemos para hacer el recuento de microorganismos? todo de reducci!

n con A"ul de etileno#$ Este mtodo, a menudo llamado la prueba de la reductasa, esta basado en el hecho de que el color impartido en la leche mediante una pequea cantidad de azul de metileno, desaparecer mas o menos rpidamente, dependiendo casi por completo del numero de bacterias que se encuentren en ella. El valor del mtodo consiste en que se puede probar la calidad de una gran cantidad de muestras de leche en un tiempo relativamente corto y con muy poco equipo. A causa de que es exacto, la prueba de las reductasa se utiliza por las compaas lecheras y los uncionarios de control para me!orar un abasto de leche relativamente malo. Seg%n otra tcnica, se colocan en un tubo con tapa atornillada "en las pruebas de reductasa todo el material usado debe ser estril# $% ml de leche y $ ml de una soluci&n de $ tableta con '.' mg de tiocianato de azul de metileno en (%% ml de agua destilada estril. El tubo llevado a )*+,, se tapa y se invierte ) veces. -i despus de )% minutos de incubaci&n a )*+, la mezcla sigue azul, se sigue $, ( o mas horas hasta que ./0 del volumen estn descolorados. &rue'a de la Resa"urina#$ 1epresenta una modi icaci&n de la prueba de la reductasa, en que se substituye el azul de metileno por la resazurina, colorante derivado de la oxazina. En un tubo esterilizado se mezclan $% ml de la leche con $ ml de la soluci&n colorante al %.( por mil en agua destilada estril. 2espus de mantener la mezcla durante $% minutos a )3+, se compara el color resultante con una escala cuyos colores tienen los siguientes valores comparativos4 Color Azul; Calificacin muy buena = Reductasa: 5 HORAS O MS Color Azul!"ioleta; Calificacin buena= Reductasa: # a 5 HORAS Color Ro$o!"ioleta; Calificacin suficiente= Reductasa: #% M&'()OS a # HORAS Color Ro$o; Calificacin insuficiente=Reductasa: *asta #% M&'()OS +rueba de la Alde*ido!Reductasa !5a enzima causante es la xantino6o6aldehdo6 deshidrogenasa, que cataliza la oxidaci&n de xantina y de diversos aldehdos a acido 7rico y los respectivos cidos carb&nicos8 se trata de una lavoproteina con molibdeno. 5a reacci&n se basa en que la deshidrogenasa, en presencia de 9,9:, descolora el azul de metileno como aceptor de 9(, $% ml de leche se adicionan de $ml del reactivo constituido por una mezcla de 0 ml de soluci&n alcoh&lica saturada "(;# de azul de metileno "exento de zinc#, 0ml de soluci&n de ormalina al .%; y $<% ml de agua destilada. -e agita y se lleva a 00+,, sin agitar mas, midiendo el tiempo en que se produce la descoloraci&n. 5a leche cruda se descolora en menos de 3minutos, la pasteurizada entre 3 y (% minutos y la cocida en ms de

)% minutos. Esta enzima solo se encuentra en la leche de vaca, de manera que permite reconocer su adici&n a la leche humana.

=Qu otros colorantes se utili"a para un -e utilizan4

todo de Reducci!n?

Resa"urina#$ tiene lugar en ( ases, desde color rosa hasta pasar a incoloro. Sales de cloruro de tri(enil tetrasodio#6 incoloro a color intenso. A"ul de metileno#6 que va desde azul a incoloro. Trimetil tetra"olium acetato de t)lio *TTC+# Nitroa"ul de tetra"olio *NT+ Indo(enil nitro(enol de tetra"olio *INT+#

=&ara ,ue otros alimentos se pueden utili"ar el mtodo de reducci!n de A"ul de metileno? -e utiliza la prueba de reductasa para muestras de4 >iel ?ugo de caa @ogurt 5eche ,remas de leche Ai er Batas

=-ormula de A"ul de metileno. -undamento?

A/U0 1E

ETI0ENO2

Es un colorante bsico, es electropositivo, tiene alta concentraci&n de grupos hidroxilos ":9#, este colorante tiene carga positiva y se une a compuestos cargados negativamente, estos compuestos se llaman baso ilos, por tener a inidad con colorantes bsicos. Es una sal cuya base es coloreada y el acido es incoloro. Es un colorante nuclear.

-UN1A ENTO2 Esta prueba se basa en la ganancia de electrones, debido al metabolismo bacteriano al liberar 9C y metabolizar el :( disuelto. El colorante en estado oxidado es de color azul y al ser reducido se vuelve incoloro. 5a prueba de reductasa depende de la capacidad que el microorganismo o rece al alterar el potencial de :xido D 1educci&n de un medio ya que los colorantes se reducen dependiendo bsicamente de la bacteria y de su actividad, puesto que a mayor microorganismos en la muestra menor es el tiempo en que la materia tiene que reducirse.

RE-ERENCIAS 3I30IO4R5-ICAS2 Adams >. 1. y >. :. >oss8 $<<08 E>icrobiologa de los AlimentosF8 Editorial Acribia8 Garagoza8 Espaa8 Hg. )'' D )<$. 2oyle I.8 $<<38 E>icrobiologa de los AlimentosF8 Editorial Acribia8 Garagoza8 Espaa.

9arrigan I. J.8 $<<08 E>todos de 5aboratorio en >icrobiologa de los Alimentos y Hroductos 5cteosF8 )ra edici&n8 Editorial Acribia8 Garagoza, Espaa.