e desenvolvimento sustentvel

ANa CLaRa GUERRINI ScHENBERg

Biotecnologia

Introduo

S PRINCPIOS inicialmente denidos em 1987, no Relatrio Brundtland da Comisso Mundial sobre Meio Ambiente e Desenvolvimento do Programa das Naes Unidas para o Meio Ambiente (Naes Unidas, 1987) e rearmados durante a Conferncia das Naes Unidas sobre Meio Ambiente e Desenvolvimento (Rio 92), no programa de ao da Agenda 21 (Naes Unidas, 1992) e, mais recentemente, nas Metas do Milnio, estabelecidas em 2000 (Naes Unidas, 2000), identicaram como prioritria para o futuro da humanidade a adoo de um novo paradigma de desenvolvimento, dito sustentvel, de modo a garantir o progresso e ao mesmo tempo a preservao do meio ambiente. Para atingir as metas de desenvolvimento sustentvel, indispensvel o manejo racional dos recursos naturais, o que exigir o emprego de novas tecnologias. Entre as tecnologias que apresentam potencial para contribuir para o desenvolvimento sustentvel, a biotecnologia tem muito a oferecer, especialmente nos campos da produo de alimentos, gerao de energia, preveno da poluio ambiental e biorremediao. Neste artigo, descreveremos algumas das possveis rotas biotecnolgicas relevantes para o desenvolvimento sustentvel, com exemplos de trabalhos realizados pelo nosso grupo de pesquisas.

Gerao de energia: aumento da produtividade de etanol por meio do melhoramento gentico da levedura
Atualmente, os combustveis fsseis (carvo, petrleo, gs natural) suprem aproximadamente 80% das necessidades mundiais de energia primria. A projeo que se faz, porm, de que a demanda mundial de energia aumente 49% at 2035, ao mesmo tempo que a produo de petrleo, embora seja um produto no renovvel, ainda tenda a aumentar nos prximos 25-30 anos (Energy, 2010). Mesmo que o consumo futuro de combustveis fsseis que limitado s reservas comprovadas hoje, a queima desses combustveis resultaria na liberao de mais do dobro do carbono que j foi emitido na atmosfera at hoje, agravando o efeito estufa. De fato, o uso de combustveis fsseis uma das principais causas de liberao de gases do efeito estufa, principais responsveis pelas mudanas climticas que estamos vivendo. Assim, a substituio da gasolina por biocombustveis, como o etanol, apresenta-se como uma soluo biotecnolgica para evitar futuros problemas de carncia de energia e de graves alteraes ambientais (Um futuro..., 2010).
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A produo de etanol por via fermentativa , por denio, um processo biotecnolgico, uma vez que o responsvel pela transformao do acar em lcool um ser vivo, a levedura Saccharomyces cerevisiae. Essa levedura vem sendo utilizada pelo homem, h pelo menos oito mil anos, para a produo de alimentos e bebidas, entre outros produtos de considervel importncia econmica. At hoje, S. cerevisiae continua sendo o micro-organismo mais empregado para a produo industrial de etanol, pois apresenta alta seletividade na produo de lcool, elevada velocidade de crescimento e fermentao, elevado rendimento na converso a etanol, elevada tolerncia a glicose, a etanol, a presso osmtica e a condies estressantes, baixo pH timo de fermentao e alta temperatura tima de fermentao (Amorim & Leo, 2005). Entre os diferentes fatores que inuem sobre o desempenho da levedura no processo de produo de etanol, destaca-se a contaminao do meio de fermentao por bactrias, responsvel por perdas importantes na produtividade das destilarias. Alm de competir com a levedura pela sacarose e outros nutrientes do mosto, as bactrias introduzem produtos indesejveis do seu metabolismo, que causam alteraes prejudiciais ao processo de fermentao da levedura (Andrietta et al., 2007). As medidas atualmente utilizadas para o controle dessas contaminaes consistem na acidicao do mosto e no emprego de antibiticos. Para a acidicao, adiciona-se cido sulfrico no preparo do mosto, o que reduz consideravelmente as contaminaes bacterianas, porm o uso repetido da acidicao ocasiona uma diminuio da viabilidade da levedura. Outra prtica, bastante difundida nas usinas alcooleiras, consiste em adicionar antibiticos ao mosto, o que, entretanto, onera signicativamente o processo, alm de impactar negativamente o meio ambiente. A utilizao contnua de antibiticos, contudo, acarreta a seleo de bactrias resistentes, com o consequente surgimento de nova populao de contaminantes, fazendo que seja necessrio empregar novos antibiticos ou at misturas de vrios antibiticos (Amorim & Leo, 2005). Visando encontrar uma soluo alternativa para o combate s contaminaes bacterianas do processo industrial de produo de etanol, foi iniciada h vrios anos no nosso laboratrio uma linha de pesquisa para desenvolver uma linhagem da levedura Saccharomyces que, conservando todas as suas timas qualidades fermentativas, fosse capaz, ao mesmo tempo, de produzir e excretar para o meio de fermentao uma substncia bactericida. Dentre as protenas com ao bactericida, destaca-se a lisozima, para a qual no h relatos de desenvolvimento de mecanismo de resistncia entre as espcies de bactrias isoladas do processo de fermentao. Assim, se a prpria levedura pudesse excretar lisozima para o meio de fermentao, obter-se-ia uma nova maneira de combater a contaminao bacteriana no processo industrial, mais simples, menos onerosa e menos prejudicial ao meio ambiente. A lisozima (EC 3.2.1.17) uma enzima que catalisa especicamente a hiESTUDOS AVANADOS

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drlise da ligao -(1,4)-glicosdica entre o cido N-acetilmurmico e a Nacetilglicosamina do peptidoglicano, principal constituinte da parede das clulas bacterianas. Trata-se de uma enzima amplamente distribuda entre os seres vivos (porm ausente na levedura), sendo extremamente eciente na defesa contra infeces bacterianas (Kirby, 2001). Essa enzima particularmente eciente contra bactrias gram-positivas, que predominam nas destilarias do Brasil, representando 98,5% dos contaminantes (Gallo, 1989). Por sua vez, a lisozima D, produzida por Drosophila melanogaster (a mosca-da-fruta), apresenta caractersticas que permitem o seu pleno funcionamento durante o processo da fermentao, quais sejam, tima atividade enzimtica em ambiente cido (o seu pH timo 3,5), resistncia a protelise e termorresistncia (Kylsten, 1992). Tomando por base essas informaes, foi construdo no nosso laboratrio um cassete de expresso-excreo do cDNA da lisozima D de D. melanogaster, sob o comando do promotor do gene da lcool-desidrogenase I de S. cerevisiae (Grael, 1998, 2010). A seguir, esse cassete de expresso-excreo foi integrado no cromossomo V de S. cerevisiae, o que conferiu total estabilidade da informao clonada na levedura, sem perda de produtividade. Essa metodologia possibilitou a transformao de linhagens de laboratrio e tambm de linhagens utilizadas na indstria. As linhagens transformantes produzem lisozima ativa, que excretada para o meio desde o incio da fermentao, sendo capazes de hidrolisar parede de Micrococcus lysodeikticus e inibir o crescimento de Bacillus coagulans e de Lactobacillus fermentum, principais bactrias contaminantes da fermentao alcolica (Gallo, 1989). Alm disso, os transformantes apresentam 100% de estabilidade, o que um aspecto altamente relevante para o processo industrial (Silveira, 2003; Silveira et al., 2003). Uma vantagem adicional do sistema que desenvolvemos de que a lisozima produzida durante o processo fermentativo pode ser puricada do sobrenadante, para utilizao na preservao de alimentos e na composio de medicamentos (Proctor & Cunningham, 1988), o que agregaria valor ao processo de produo de etanol. Essa linha de pesquisas originou dois pedidos de patente, uma das quais j outorgada (Grael, 2010).

Preveno da poluio ambiental: produo de biopolmeros a partir de recursos renovveis

Para resolver a questo do lixo urbano e industrial, a substituio de plsticos de origem petroqumica por plsticos produzidos por micro-organismos seria altamente desejvel, uma vez que os biopolmeros so materiais biocompatveis e totalmente biodegradveis. A estimativa de que os rejeitos plsticos lanados em aterros aumentam em 404% o peso total do lixo, e o problema agravado pelo fato de que os materiais plsticos atualmente produzidos so de difcil decomposio, permanecendo no meio ambiente por vrias centenas de anos. Entretanto, o preo dos biopolmeros ainda no capaz de competir com
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o dos plsticos convencionais, sendo necessrio otimizar as linhagens microbianas, bem como os processos de recuperao e extrao, mas, especialmente, reduzir os custos com a matria-prima (Choi & Lee, 1999). possvel, entretanto, prever que a situao atual se modique, medida que o petrleo se torne escasso, tornando os produtos obtidos a partir de matrias-primas renovveis de menor custo que os produtos da indstria petroqumica.

Construo de novas bactrias para a produo de biopolmeros a partir de sacarose Poli-hidroxialcanoatos (PHA) so polmeros produzidos por muitas bactrias como material de reserva, sob a forma de grnulos, quando h abundncia de fonte de carbono. Os PHA apresentam propriedades termoplsticas comparveis s dos plsticos de origem petroqumica, alm de serem totalmente biodegradveis (Madison & Huisman, 1999). Essa propriedade confere aos PHA grande relevncia no que concerne preservao ambiental, e, alm disso, a utilizao de PHA contribuiria para o desenvolvimento sustentvel, considerando que so produzidos pelos micro-organismos a partir de recursos naturais renovveis. Entretanto, para que a utilizao de PHA em substituio aos plsticos de origem petroqumica seja economicamente vivel, necessria uma matriaprima abundante e de baixo custo, sobre a qual possam ser cultivadas as bactrias produtoras de PHA. No Brasil, a cana-de-acar preenche esses requisitos para ser empregada como matria-prima. Entretanto, a bactria Cupriavidus necator (anteriormente denominada Alcaligenes eutrophus, Ralstonia eutropha, Wautersia eutropha), uma excelente produtora de PHA (Reinecke & Steinbchel, 2009), incapaz de aproveitar a sacarose presente no caldo da cana. O trabalho realizado no nosso grupo de pesquisas consistiu no melhoramento gentico de C. necator DSMZ 545, visando capacit-la a crescer em sacarose como nica fonte de carbono. Para atingir esse objetivo, foi adicionado ao genoma dessa linhagem um peron de cinco genes proveniente do plasmdeo pUR400 de Salmonella typhimurium, que codica todas as enzimas necessrias para a assimilao da sacarose (Fava, 1997; Vicente et al., 2009). Essa linhagem geneticamente modicada de C. necator foi a seguir mutagenizada para aumentar a sua ecincia em converter o precursor propionato em unidades de hidroxivalerato no copolmero poli-hidroxibutirato-poli-hidroxivalerato (Sartori, 1998; Vicente et al., 1998). De fato, esse copolmero de grande importncia tecnolgica por apresentar maior exibilidade do que o homopolmero, o que aumenta o seu espectro de aplicao na indstria de plsticos (Madison & Huisman, 1999). Esse trabalho deu origem a dois pedidos de patente junto ao Instituto Nacional de Propriedade Industrial (Inpi) (Vicente et al., 2009; Vicente, 1998), que j foram licenciados para utilizao industrial.

Biorremediao de guas contaminadas por metais txicos

Chama-se de biorremediao a utilizao de seres vivos para descontaminar ou reduzir o teor de poluentes no meio ambiente. Com efeito, diversas
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plantas e micro-organismos so capazes de acumular e transformar diferentes poluentes em substncias com toxicidade reduzida (Atlas & Unterman, 1999). Considerando que as tecnologias convencionais de remediao ambiental so em geral inadequadas para reduzir a nveis aceitveis as concentraes de metais pesados em euentes contaminados, a biorremediao se apresenta como uma soluo alternativa de grande interesse. Alm disso, os mtodos biotecnolgicos para a detoxicao de euentes so menos onerosos que as tecnologias convencionais. De fato, no caso de contaminao de guas de superfcie por metais pesados, a imobilizao in situ dos ons metlicos por ao microbiana, impedindo que eles sejam transferidos para o lenol fretico, se apresenta como uma soluo economicamente interessante (Gravilescu, 2004). Ultimamente, a ao dos micro-organismos sobre os metais tem sido objeto de numerosos estudos, em virtude do seu potencial de aplicao, tanto para a destoxicao quanto para a recuperao de metais nas atividades da indstria de minerao (biolixiviao). Alm de uma certa concentrao, os metais pesados so extremamente txicos aos seres vivos, que, consequentemente, desenvolveram, ao longo da evoluo, diferentes mecanismos biolgicos de defesa. Entre esses mecanismos, alguns podem ser teis para aproveitamento em processos de biorremediao. Existem micro-organismos que excretam substncias que provocam a precipitao dos metais sob uma forma insolvel (biomineralizao); outros internalizam os ons metlicos por meio de processos de transporte ativo (bioacumulao); outros ainda adsorvem passivamente os ons metlicos sobre a superfcie celular (biossoro) (Barkay & Schaefer, 2001). Esses diferentes processos so vlidos para a descontaminao de guas poludas por metais pesados, embora, nos dias de hoje, a biossoro constitua a abordagem mais largamente utilizada. A biossoro particularmente ecaz para o tratamento de euentes, sendo mais limitado o seu uso para a biorremediao de solos (ibidem). Por sua vez, os metais adsorvidos podem ser recuperados por tratamento cido, com agentes quelantes, ou, ainda, por incinerao dos micro-organismos. De fato, bactrias, fungos e leveduras, que constituem rejeitos de fermentaes industriais, podem em princpio servir como um material barato para a biorremediao de guas contaminadas por metais. H tambm vrias plantas que concentram os metais pesados em propores importantes de seu peso seco, como Brassica juncea, que capaz de concentrar mais de 40%. A torremediao constitui, portanto, uma alternativa interessante para a limpeza de guas contaminadas por metais e radionucldeos, e essa estratgia foi empregada para descontaminar a gua de Chernobyl, Rssia, aps o acidente nuclear. Entretanto, as plantas hiperacumuladoras apresentam crescimento lento e o controle gentico dos mecanismos de acumulao ainda no est sucientemente esclarecido (Lasat, 2002). Uma vez que os mecanismos de resistncia vegetal aos metais pesados so diferentes daqueles das bactrias, possvel, por meio de tcnicas de engenharia gentica, empregar genes de
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plantas para construir novas linhagens bacterianas com capacidades superiores de biorremediao. Com efeito, a clonagem, na bactria Escherichia coli, de um gene da planta Arabidopsis thaliana, envolvido na resistncia aos metais, forneceu resultados muito promissores para melhorar a capacidade da bactria em acumular cdmio, cobre e tambm arsnico (Sauge-Merle et al., 2003). Para responderem presena de altas concentraes de metais pesados que lhes so txicos, os organismos eucariticos produzem peptdeos ricos em cistena, como a glutationa (Singhal et al., 1997), as metalotionenas (MT) (Stillman et al., 1992) e as toquelatinas (PC) (Rauser, 1995). Tais molculas ligam-se aos ons metlicos e os sequestram sob uma forma biologicamente inativa. As toquelatinas so peptdeos curtos, cuja estrutura geral corresponde a (Glu-Cys)n Gly (n=2-11) (ibidem). As PC apresentam vantagens sobre as MT em razo de suas caractersticas estruturais, particularmente a repetio das unidades Glu-Cys. As PC so mais estveis e tm maior capacidade de ligao aos metais do que as MT. Alm disso, as PC podem incorporar altos nveis de sulfeto inorgnico, o que resulta num forte aumento da sua capacidade de ligao aos ons Cd2+ (Bae et al., 2000). Entretanto, a produo de PC por engenharia gentica ainda no possvel por falta de conhecimento suciente sobre as enzimas envolvidas na sntese e elongao de tais peptdeos. Foram sintetizados anlogos de PC que apresentam, em vez da ligao , uma ligao -peptdica entre Glu e Cys, de tal modo que esses anlogos (EC) podem ser produzidos pela maquinaria ribossomal da clula. Alm disso, EC de diferentes comprimentos de cadeia (mais longos do que aqueles encontrados nas plantas) podem ser produzidos, apresentando diferentes capacidades de ligao aos metais (Bae & Mehra, 1997). Bae et al. (2000) clonaram em E. coli genes sintticos que codicam EC. Esses autores construram fuses entre EC de diferentes comprimentos e LppOmpA, uma protena de superfcie de E. coli, tendo vericado que uma cadeia de apenas 20 unidades polimricas de EC apresenta uma capacidade de ligao aos ons Cd2+ 40% maior que as metalotionenas de mamferos. Uma outra abordagem interessante consiste em melhorar geneticamente certos micro-organismos que apresentam alta tolerncia natural aos metais pesados. Tal o caso da bactria Cupriavidus metallidurans, que capaz de crescer em presena de concentraes milimolares de metais txicos. A C. metallidurans encontrada em guas e solos com alto teor de metais pesados e apresenta mltiplas resistncias (Zn, Cd, Co, Pb, Cu, Hg, Ni e Cr), graas presena de dois megaplasmdeos, que contm os genes envolvidos num mecanismo muito eciente de euxo de ctions (Von Rozycki & Nies, 2009). Esse mecanismo de resistncia detoxica o citoplasma da bactria, mas no se presta para ser empregado em biorremediao. Entretanto, seria possvel tirar proveito da alta resistncia aos metais que essa bactria apresenta e fornecer-lhe os genes necessrios para a imobilizao dos ons metlicos. De fato, foi

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descrito um aumento de trs vezes da capacidade de ligao ao cdmio de R. metallidurans, por meio da clonagem do gene que codica a metalotionena I de camundongo, de modo a alvejar essa MT para a superfcie da bactria (Valls et al., 2000). Esses autores mostraram ainda que a inoculao dessa linhagem geneticamente modicada de R. metallidurans em solos contaminados por ons Cd2+ diminui signicativamente os efeitos txicos do cdmio sobre o crescimento de plantas de tabaco (ibidem). Considerando a ubiquidade dos micro-organismos capazes de imobilizar metais na natureza e que a sua frequncia se encontra geralmente aumentada em solos e guas contaminados, a estimulao da microora indgena dos locais contaminados um enfoque que tambm pode dar bons resultados. Por sua vez, a utilizao de micro-organismos com atividades metablicas especiais, capazes de complementar a microora indgena, tambm deve ser considerada. Em qualquer caso, as tcnicas de engenharia gentica podem ser empregadas para aumentar a ecincia dos micro-organismos para a biorremediao, embora medidas de biossegurana sejam necessrias para a liberao dos organismos recombinantes para processos de biorremediao in situ (Urgun-Demirtas et al., 2006). No nosso laboratrio, est em andamento um projeto cujo objetivo a construo de diversos micro-organismos recombinantes (bactrias e leveduras), que apresentem capacidade aumentada de acumular metais pesados. Para atingir esse objetivo, optou-se pela estratgia de adicionar ao genoma das diferentes linhagens o gene que codica uma toquelatina sinttica, utilizando cassetes de expresso-secreo especcos. Visando mxima proteo ambiental, ser tambm incorporado a essas linhagens geneticamente melhoradas um gene fortemente regulado, cuja expresso promover a sua morte, aps terem desempenhado as funes de biorremediao. Em contrapartida, esto sendo construdas linhagens para serem utilizadas como biossensores de diversos ons metlicos. Um dos subprojetos, j concludo, teve por objetivo capacitar a bactria Cupriavidus metallidurans CH34 a adsorver ons metlicos na sua superfcie. A C. metallidurans CH34 (previamente denominada Alcaligenes eutrophus, Ralstonia eutropha, Ralstonia metallidurans e Wautersia metallidurans) o organismo mais resistente a ons de metais pesados conhecido at hoje. Trata-se de uma -proteobactria, gram-negativa, no patognica, capaz de crescer em elevadas concentraes de, pelo menos, treze diferentes ons de metais pesados (Von Rozycki & Nies, 2009). Essa linhagem foi isolada em sedimentos de tanques de decantao de zinco em Lige, Blgica (Mergeay et al., 1978), e possui alta resistncia a Ag+2, Bi+3, Cd+2, Co+2, CrO4-2, Cu+2, Hg+2, Mn+2, Ni+2, Pb+2, SeO4-3, Tl+1 e Zn+2, conferida por pelo menos 150 genes de resistncia, presentes em seus quatro replicons: o cromossomo (3,9 Mb), um megaplasmdeo (2,6 Mb), alm de dois plasmdeos, pMOL30 (234 Kb) e pMOL28 (171Kb) (Von Rozycki & Nies, 2009).
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O principal mecanismo de resistncia de C. metallidurans CH34 consiste, entretanto, num sistema de euxo dos ctions, que detoxica ecientemente o citoplasma da bactria, porm no o ambiente, e, portanto, essa bactria no adequada para biorremediao. Para que essa bactria pudesse desenvolver plenamente o seu potencial biotecnolgico, seria necessrio submet-la a manipulaes genticas que lhe conferissem a capacidade de imobilizar os ons de metais pesados na sua superfcie celular, facultando linhagem a capacidade de servir como agente biorremediador, alm de colonizar ambientes contendo metais. Por meio da utilizao de um promotor forte induzido por metais desenvolvido no nosso laboratrio (Ribeiro-dos-Santos et al., 2010), construmos uma nova linhagem de C. metallidurans CH34, capaz de remover sete diferentes ons metlicos (Pb+2, Zn+2, Cu+2, Cd+2, Ni+2, Mn+2, Co+2) do meio em que colocada, em nveis signicativamente superiores aos apresentados pela linhagem selvagem, como se pode observar pelos resultados apresentados na Tabela 1.
Tabela 1 Biossoro de metais utilizando-se a bactria recombinante C. metallidurans CH34 portadora do plasmdeo pCM2. Os testes foram realizados com a bactria recombinante antes e depois da induo da sntese da toquelatina EC20. A bactria selvagem foi utilizada como controle negativo (espectrometria de massas de alta resoluo com fonte de plasma indutivamente ativado ICP-MS). A porcentagem indica o aumento de adsoro em relao linhagem selvagem
M de Cd2+ mg ps C. metallidurans CH34 C. metallidurans CH34/ pCM2 C. metallidurans CH34/ pCM2 induzida 11,1 12,6 17,6 (40%) M de Co2+ mg ps 4,5 5,0 5,1 (13%) M de Cu2+ mg ps 24,29 25,72 42,65 (76%) M de Hg2+ mg ps 0,05 0,05 0,05 M de Mn2+ mg os 4,73 5,06 6,2 (31%) M de Ni2+ mg os 5,84 6,46 8,46 (45%) M de Zn2+ mg os 16,00 18,82 51,07 (219%) M de Pb2+ mg ps 17,62 25,14 54,75 (210%)

Para alcanar esse objetivo, foram acrescentadas ao genoma da linhagem original as sequncias gnico necessrias para que a bactria expressasse, ancorada na sua superfcie, uma protena sinttica com alta capacidade de se ligar a metais (toquelatina EC20). A nova bactria funciona como um verdadeiro m para metais, cando totalmente recoberta pelos ons metlicos, alm de se manter perfeitamente saudvel durante o processo. Assim, ao mesmo tempo que pode ser utilizada para a descontaminao de qualquer euente contendo metais (biorremediao), essa bactria pode servir para concentrar e recuperar os metais perdidos durante o processo de extrao de minrios (biolixiviao). As vantagens desse tipo de tratamento so os baixos custos e a alta ecincia em comparao aos mtodos fsico-qumicos atualmente empregados. A nova bac-

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tria particularmente interessante para a indstria de minerao, j que capaz de aumentar a produtividade de extrao de minrios, bem como de reduzir os impactos ambientais dessas atividades e esse projeto foi nanciado pela Cia. Vale, com o intuito de utilizar a bactria em biorreator, para o tratamento de euentes de minerao. Esse trabalho originou dois depsitos de patente (Schenberg et al., 2008; Biondo et al., 2008).

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RESUMO A biotecnologia pode desempenhar um papel importante para atingir as metas da sustentabilidade. No presente trabalho, so descritos diferentes exemplos bemsucedidos de micro-organismos especialmente desenhados para otimizar a produo de etanol, a produo de plsticos biodegradveis a partir de recursos renovveis e a biorremediao de metais txicos. Esses processos biotecnolgicos contribuem signicantemente para promover o desenvolvimento sustentvel, embora possam, por enquanto, no ser ainda competitivos em relao s tecnologias convencionais. PALAVRAS-CHAVE: Biotecnologia, Desenvolvimento sustentvel, Biocombustveis, Biopolmeros, Biorremediao.

Biotechnology can play an important role to reach the goals of sustainability. In the present work, we describe successful examples of microorganisms especially designed for optimizing ethanol production, biodegradable plastics production from renewable resources, and toxic metals bioremediation. These biotechnological processes signicantly contribute to promote sustainable development, although they may, at present, not be competitive with the conventional technologies.
ABSTRACT KEYWORDS:

Biotechnology, Sustainable development, Biofuels, Biopolymers, Bioreme-

diation.

Ana Clara Guerrini Schenberg professora no NAP-Biotecnologia, Instituto de Cincias Biomdicas, USP. @ acgschen@usp.br Recebido em 5.10.2010 e aceito em 8.10.2010.

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