Evaluacin de Resistencia de Genotipos de Pltano y Banano a la Sigatoka Negra (Mycosphaerella fijiensis Morelet.

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Evaluation of Resistance of Plantain and Banana Genotypes to Black Sigatoka (Myscosphaerella fijiensis Morelet.) Alejandra Cullar Quintero1; Elizabeth lvarez Cabrera2 y Jairo Castao Zapata3
Resumen. Con el objetivo de evaluar bajo condiciones de invernadero genotipos de pltano y banano frente a poblaciones de Mycosphaerella fijiensis Morelet de diferente virulencia y origen, se estableci una coleccin de 125 aislamientos monospricos obtenidos en 10 departamentos de Colombia. Se seleccionaron 50 aislamientos por rea geogrfica y genotipo hospedante, para la caracterizacin morfolgica y patognica del hongo en Dominico Hartn. En las pruebas de patogenicidad y resistencia se realizaron inoculaciones de una suspensin acuosa de 5.000 conidias mL-1, la respuesta de las plntulas a la enfermedad se determin mediante las variables periodo de incubacin (PI), tiempo de evolucin de los sntomas (TES), rea bajo la curva del desarrollo de la enfermedad (ABCDE) y tasa de desarrollo de la enfermedad (r). La inoculacin de los 50 aislamientos en plntulas de Dominico Hartn, permiti establecer cinco niveles de virulencia (muy alta, alta, media, baja y muy baja). La virulencia de los aislamientos no se relacion con su origen geogrfico ni con el genotipo del cual se obtuvieron; encontrndose en una misma zona y en un mismo genotipo, aislamientos de diferente virulencia. Los genotipos de pltano y banano mostraron un comportamiento diferencial frente a cinco aislamientos de diferente virulencia y origen, resultados que permitieron establecer tres niveles de reaccin de los genotipos frente a los aislamientos (resistente, intermedio y susceptible), destacndose los genotipos Topocho, Maqueo, FHIA 20, FHIA 21 de pltano y los genotipos Sedita y FHIA 23 de banano por presentar un mayor nivel de resistencia, expresada como un progreso lento y menos severo de la enfermedad.
Palabras clave: Musceas, patogenicidad, virulencia, resistencia.

Abstract. A study was conducted to evaluate plantain and banana genotypes with Mycosphaerella fijiensis Morelet isolates of different virulence and geographic origin. The pathogenicity test and morphological characterization of the M. fijiensis populations were performed with a group of fifty monosporic isolates representative of the geographic growing areas in Colombia. For the pathogenicity and resistance assays an aqueous spore suspension of 5.000 conidias mL-1 was used to inoculate seedlings of plantain and banana genotypes, disease response of genotypes was rated by measuring the variables incubation period (IP), time of evolution of symptoms (TES), area under disease progress curve (AUDPC) and rate of disease development (r).The inoculation of fifty isolates on Dominico Harton cultivar allowed to establish five levels of virulence (very high, high, medium, low and very low), which were not related to their geographic origin nor to genotype of the isolates. Isolates with different virulence level were present in the same zone and in the same genotype. The resistance assay showed that plantain and banana genotypes can present a differential behavior to the M. fijiensis isolates. The disease severity measured in the genotypes allowed to classify the in three disease reactions levels, resistance, intermediate and susceptible genotypes The plantain genotypes Topocho, Maqueno, FHIA 20 and FHIA 21, and the banana genotype Sedita and FHIA 23 were characterized for having a higher level of resistance, that was expressed as a lower disease severity and slower disease progress as compared with the other genotypes.
Palabras clave: Musaceous, pathogenicity, virulence, resistance.

La Sigatoka negra ocasionada por el hongo Mycosphaerella fijiensis Morelet [anamorfo Paracercospora fijiensis (Morelet) Deigthon], es considerada hasta el momento, la enfermedad foliar de mayor importancia que afecta a los cultivos de pltano y banano en todo el mundo, produciendo prdidas en rendimiento de hasta 100%, si no se implementan medidas para su manejo (Orozco y Aristizbal, 2006).

La enfermedad provoca desrdenes significativos en el crecimiento vegetativo de la planta, la cual sufre un severo deterioro del rea foliar y de la productividad del cultivo, al disminuir su capacidad fotosinttica. De presentarse esta condicin, la planta no logra extraer de las hojas los elementos nutritivos para llevarlos al racimo y llenarlo; ste puede presentar madurez prematura y la fruta no sirve para la exportacin (Herrera, 2007).

Ingeniera Agrnoma. Programa Patologa de Yuca y Frutas Tropicales. Centro Internacional de Agricultura Tropical (CIAT). Va Cali Palmira km 17. Valle del Cauca, Colombia. <alejata05@hotmail.com> 2 Fitopatloga. Jefe del Programa de Patologa de Yuca y Frutas Tropicales. Centro Internacional de Agricultura Tropical (CIAT). Va Cali Palmira km 17. Valle del Cauca, Colombia. <e.alvarez@cgiar.org> 3 Fitopatlogo. Profesor Titular. Universidad de Caldas. Calle 65 No. 26-10. Manizales, Colombia. <jairo.castano_z@udecaldas.edu.co>
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Recibido: Mayo 27 de 2010; aceptado: Noviembe 28 de 2010.

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Las medidas de manejo de la enfermedad se han basado en el uso de productos qumicos que aunque permiten enfrentar de forma eficaz la enfermedad, presenta desventajas por sus efectos sobre el medio ambiente, sumado a la resistencia de las poblaciones del patgeno, adquirida por la aplicacin de ciertos fungicidas sistmicos muy utilizados como los benzimidazoles y ms recientemente los triazoles (Vega, 2002). La problemtica de la Sigatoka negra va mas all de las prdidas que ocasiona y de las consecuencias de su manejo; hay que tener en cuenta que el xito de la enfermedad tambin es debido a la alta variabilidad gentica y patognica de las poblaciones del hongo (Carlier et al., 1996; Fullerton y Olsen, 1995), como a la plantacin de variedades susceptibles. Es claro que el esfuerzo para el manejo ptimo de la enfermedad debe ser idealmente preventivo, en tal sentido la plantacin de genotipos resistentes se constituye en la estrategia preventiva y econmica para el productor en el control eficiente de la enfermedad. Dadas las consideraciones anteriores, se hace necesario realizar investigaciones como la del presente trabajo, cuyo objetivo principal fue evaluar bajo condiciones de invernadero genotipos de pltano y banano mediante el uso de aislamientos de M. fijiensis de diferente nivel de virulencia y origen, esto con el fin de identificar genotipos resistentes a las cepas colombianas del patgeno y conocer los que sirvan como fuentes de resistencia a la enfermedad, que puedan ser utilizados en futuros programas de mejoramiento gentico. MATERIALES Y MTODOS La investigacin se llev a cabo en el laboratorio e invernadero del Programa de Patologa de Yuca y Frutas Tropicales del Centro Internacional de Agricultura Tropical (CIAT), Palmira, bajo condiciones controladas de temperatura y humedad relativa.

descarga de ascosporas y siembra directa de tejido afectado. Cada metodologa se llev a cabo en cmara de flujo laminar y bajo condiciones aspticas utilizando material estril. La metodologa de descarga de ascosporas (Stover, 1963), consisti en tomar la muestra que presentaba los sntomas ms avanzados de la enfermedad e incubarla en cajas plsticas transparentes con papel toalla humedecida. Pasado el tiempo de incubacin del tejido y con ayuda de un estereoscopio, se seleccionaron y cortaron zonas de aproximadamente 2 cm2 que presentaban buen nmero de peritecios. Cuatro fragmentos de hoja fueron adheridos por disco de papel filtro de 9 cm de dimetro. Posteriormente, cada papel filtro con los fragmentos de tejido se sumergieron en agua destilada estril durante 5 min. Los discos de papel filtro se colocaron en tapas de cajas Petri que contenan PDA (papa-dextrosa-agar, 39 g/L de agua), de modo que el envs de las hojas quedara hacia el agar, ya que es el lugar donde se encuentran los peritecios y de esta manera promover mayor descarga de ascosporas sobre el medio de cultivo. Despus de 15 h de descarga, los discos de papel filtro con los fragmentos de tejido fueron retirados y con ayuda de un microscopio compuesto, se identificaron las ascosporas. stas eran elpticas, de 14 a 20 m de largo y 4 a 6 m de ancho, hialinas y usualmente con dos clulas (Belalczar et al., 1991). Posteriormente en el estereoscopio y con una aguja de diseccin, se tomaron ascosporas individuales y se pasaron a cajas Petri con medio PDA. Los aislamientos se incubaron a 27 C durante 20 d en oscuridad para la produccin de micelio. Una vez obtenido el micelio, con un bistur se retir parte de ste y se coloc en un vial para microcentrfuga con 1 mL de agua destilada estril y se macer hasta obtener una suspensin homognea. Se tomaron 250 L de la suspensin y se distribuyeron uniformemente en cajas Petri con medio agar V-8 modificado (100 mL de jugo V-8, 0,2 g de CaCO3 y 20 g de agar por litro de agua, pH 6). Los cultivos se incubaron a 20 C bajo luz blanca continua, durante 2 semanas para la produccin de conidias. La metodologa de siembra directa de tejido afectado, consisti en cortar fragmentos de tejido de aproximadamente 15 mm2 de tal manera que incluyeran tejido enfermo como tejido sano. Los fragmentos fueron lavados con agua deionizada
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Coleccin de aislamientos. Con el objetivo de conformar un banco de aislamientos de M. fijiensis se tomaron muestras de tejido foliar de cultivos establecidos y plantas individuales con sntomas de la enfermedad de la Sigatoka negra, procedentes de 10 departamentos de Colombia y diferentes genotipos de pltano y banano.
De las muestras colectadas se procedi a realizar el aislamiento del patgeno, siguiendo dos metodologas:
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durante 45 min, y se desinfectaron en hipoclorito de sodio al 1% por 1 min y etanol al 70% por el mismo tiempo, finalmente se lavaron con agua destilada estril (Castao y del Rio Mendoza, 1997). Los fragmentos secos se transfirieron a cajas Petri con PDA y se incubaron a 24 C durante 25 d. Una vez esporulado el hongo, se tomaron conidias individuales que se transfirieron una por cada caja Petri con el mismo medio. Finalmente los aislamientos monospricos se incubarn a 24 C en oscuridad durante 25 das para la produccin de conidias. Para la identificacin de Paracercospora fijiensis (anamorfo de M. fijiensis), se observaron conidias en azul de lactofenol, el cual produce una coloracin ms intensa en la cicatriz (hilio) o punto de insercin de las conidias en el conidiforo, presente en P. fijiensis y ausente en Pseudocercospora musae, anamorfo de M. musicola, causante de la Sigatoka amarilla (Aguirre et al., 1998). Los aislamientos monospricos se conservaron en papel filtro colonizado por el hongo a 4 y -20 C (Aricapa y Correa, 1994) y en glicerol al 15% a -80 C (Abadie et al., 2008).

asperjando uniformemente una suspensin conidial de una concentracin de 5.000 conidias mL-1, sobre el envs de las dos hojas ms jvenes abiertas en plntulas de Dominico Hartn (genotipo susceptible a la Sigatoka negra) con 3 meses de edad. Se evaluaron las variables: periodo de incubacin (PI), definido como el tiempo (das) desde el momento de la inoculacin hasta la aparicin de los primeros sntomas; tiempo de evolucin de los sntomas (TES), registrado como el tiempo (das) desde la aparicin de los primeros sntomas hasta el estado de mancha con centro necrosado, rea bajo la curva del desarrollo de la enfermedad (ABCDE) y tasa de desarrollo (r) del progreso de la enfermedad. Las variables PI y TES se determinaron con base en la escala de estadios de sntomas de la Sigatoka negra establecida por Arnzazu et al. (2002), y las variables ABCDE y la r se determinaron con base en el uso de los diagramas estndares de Stover modificados por Gauhl en 1990 para Sigatokas (citado por Carlier et al., 2002), donde: grado 0=sin sntomas, 1=menos de un 1% de rea foliar afectada, 2=1 a 5% de rea foliar afectada, 3=6 a 15% de rea foliar afectada, 4=16 a 33% de rea foliar afectada, 5=34 a 50% de rea foliar afectada y 6=51 a 100% de rea foliar afectada. Se utiliz un diseo de bloques completos al azar, con 50 aislamientos (tratamientos) y cinco repeticiones, y con una plntula como unidad experimental. Para cada una de las variables se hizo un anlisis de varianza y mediante un anlisis de componentes principales se caracterizaron los aislamientos en trminos de las variables evaluadas. Para determinar grupos de aislamientos de caractersticas similares, se hizo un anlisis de clster con el mtodo de UPGMA (group average, unweighted pair-group method using arithmetic averages) y el criterio R2.

Caracterizacin morfolgica y patognica de aislamientos. De la coleccin de aislamientos colombianos de M. fijiensis se seleccionaron 50 procedentes de diferente zona geogrfica y genotipo hospedante, los cuales se caracterizaron morfolgica y patognicamente. Caracterizacin morfolgica. Para cada aislamiento se tomaron datos morfolgicos de longitud, ancho, y nmero de septas de 30 conidias. Para dichas variables se realiz un anlisis de varianza con un modelo de bloques complemente al azar. Por su parte, la caracterizacin morfolgica de la colonia se hizo a los 35 d de crecimiento en medio de cultivo PDA, donde se evalu el dimetro, la textura y el color de la colonia, y se utiliz un diseo de bloques completos al azar, con un disco de 3 mm de dimetro del aislamiento por caja Petri y tres repeticiones por aislamiento. Caracterizacin patognica. Para la produccin de inculo, los fragmentos de papel filtro colonizados por el hongo fueron reactivados mediante su siembra en cajas Petri con medio PDA. Las cajas fueron incubadas en oscuridad a 24 C por 25 d para la produccin de conidias. La inoculacin del hongo se hizo
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Evaluacin de resistencia. Cinco aislamientos de diferente virulencia y origen fueron inoculados en 10 genotipos de pltano y nueve de banano. Las cepas a su vez, fueron elegidas teniendo en cuenta el departamento (zona de mayor produccin) y genotipo (pltano y banano) del cual fueron aisladas.
Para la produccin de inculo se utiliz la misma metodologa anteriormente mencionada en la prueba de patogenicidad. As mismo, se evaluaron las variables PI, TES, ABCDE y r.
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Se utiliz un diseo de parcelas divididas con tres repeticiones por tratamiento, como factor parcela principal, los aislamientos y como subparcela, los genotipos en un diseo completamente al azar. Se hizo un anlisis de varianza para las variables PI, TES, ABCDE y r. Mediante el anlisis de componentes principales se caracterizaron las interacciones (genotipo-aislamiento) en trminos de las variables evaluadas. Para determinar grupos de interacciones de caractersticas similares, se hizo un anlisis de clster con el mtodo de UPGMA y el criterio R2. Todos los datos fueron procesados mediante el programa estadstico Statistical Analysis System (SAS, versin 9). RESULTADOS

inicialmente fue verde grisceo oscuro, luego verde grisceo, verde grisceo claro y finalmente blanco. Para el da 35, el 12% de los aislamientos tenan color verde grisceo oscuro, el 48% verde grisceo, el 22% verde grisceo claro y el 16% blanco. En cuanto a la textura, en general las colonias pasaron de tener una textura aterciopelada a algodonosa para el da 35, el 76% de los aislamientos fueron aterciopelados y el 24% fueron algodonosos. Se pudo observar que la textura de las colonias guarda relacin directa con el color de las mismas, ya que cuando las colonias tenan un aspecto aterciopelado su color era verde grisceo o con las diferentes tonalidades ya mencionadas para el mismo color y cuando las colonias tomaban un aspecto algodonoso su color se tornaba blanco (Tabla 2).

Coleccin y caracterizacin morfolgica de aislamientos de M. fijiensis. Del procesamiento de las muestras foliares afectadas con sntomas tpicos de la enfermedad de la Sigatoka negra, se conform una coleccin de 125 aislamientos monospricos de M. fijiensis (Tabla 1).
El anlisis de varianza detect diferencias altamente significativas (P<0,001) para las variables longitud, ancho y nmero de septas de las conidias para los 50 aislamientos seleccionados. La longitud de las conidias fluctu entre 20 y 110 m (CV 29,57%), el ancho entre 2,5 y 5 m (CV 16,85%) y el nmero de septas entre 2 y 10 por conidia (CV 24,80%) (Tabla 2). En la caracterizacin morfolgica de la colonia a los 35 das de crecimiento en medio de cultivo PDA, se obtuvieron diferencias altamente significativas (P<0,001) para la variable dimetro. Mediante el criterio del valor crtico de Duncan (1,926) y el valor de la media general (12,72 mm) se conformaron tres grupos de aislamientos de acuerdo a su tamao de colonia: Grupo A: aislamientos de colonias con dimetro entre 13,83 - 16,33 mm (media del grupo 14,68 mm). Grupo B: aislamientos de colonias con dimetro entre 12,00 - 13,82 mm (media del grupo 12,81 mm). Grupo C: aislamientos de colonias con dimetro entre 9,50 - 11,99 mm (media del grupo 10,74 mm). Segn esta agrupacin, los 50 aislamientos se distribuyen en un 24% en el grupo A, 50% en el grupo B y 26% en el grupo C (Tabla 2). Con respecto al color de la colonia, es de anotar que en general para todos los aislamientos el color vari a travs de los 35 das del experimento, el cual
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Caracterizacin patognica de aislamientos de M. fijiensis. El anlisis de varianza para cada una de las variables evaluadas (PI, TES, ABCDE y r) mostr diferencias altamente significativas (P<0,001) entre los aislamientos, lo que indica que hubo diferencias en el progreso de la enfermedad.
Mediante el anlisis de componentes principales (ACP) se obtuvo la recodificacin de los aislamientos en un nuevo sistema ortogonal. Con dicha informacin traducida y con el mtodo UPGMA y el criterio de R2 se determinaron 8 grupos o clster, cada uno de los cuales agrup los aislamientos de caractersticas ms similares entre s. Para cada grupo constituido se calcul el promedio de cada variable, el cual se calific dentro de una escala diseada con base en los rangos obtenidos de PI, TES, ABCDE y r de todos los aislamientos (Tabla 3). Las calificaciones de cada una de las variables dentro y entre los grupos conformados, permiti su distribucin en cinco niveles de virulencia (muy alta, alta, media, baja y muy baja) (Tabla 4). Los aislamientos pertenecientes a los grupos I y II se consideran de muy baja virulencia, los aislamientos del grupo III de baja, los aislamientos del grupo V de media y los aislamientos del grupo VIII se consideran de muy alta virulencia. Los aislamientos que conformaron los grupos IV, VI y VII aunque estadsticamente difieren de los dems, presentaron tendencia a una virulencia baja, media y alta respectivamente.
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Tabla 1. Coleccin de aislamientos colombianos de Mycosphaerella fijiensis Morelet segn su origen.

No. Aislamiento Departamento Genotipo No. Aislamiento Departamento Genotipo No. Aislamiento Departamento Genotipo

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41

MAS 1-1 MAS 1-2 MAS 1-3 MAU 1-1 MAU 1-2 MAU 1-3 MAU 1-4 MCP 1-1 MCP 1-2 MCP 1-3 MCP 2-1 MCP 2-2 MCP 2-3 MCP 2-4 MCP 3-1 MCP 3-2 MCP 3-3 MCP 4-1 MCP 4-2 MCP 4-3 MCP 5-1 MCP 5-2 MCP 5-3 MCqF 1-1 MCqF 1-2 MCqF 1-3 MCqF 2-1 MCqF 2-2 MCqF 2-3 MCqF 3-1 MCqF 3-2 MCqF 3-3 MCqF 4-1 MCqF 4-2 MCqF 4-3 MCuP 1-1 MCuP 1-2 MCuP 2-1 MCuP 2-2 MCuS 1-1 MCuS 1-2

Antioquia Antioquia Antioquia Antioquia Antioquia Antioquia Antioquia Caldas Caldas Caldas Caldas Caldas Caldas Caldas Caldas Caldas Caldas Caldas Caldas Caldas Caldas Caldas Caldas Caquet Caquet Caquet Caquet Caquet Caquet Caquet Caquet Caquet Caquet Caquet Caquet Cauca Cauca Cauca Cauca Cauca Cauca

Hartn Hartn Hartn Cavendish Cavendish Cavendish Cavendish frica frica frica D. Hartn D. Hartn D. Hartn D. Hartn FHIA 20 FHIA 20 FHIA 20 FHIA 21 FHIA 21 FHIA 21 FHIA 25 FHIA 25 FHIA 25 G. Michel G. Michel G. Michel Guineo Guineo Guineo Maqueo Maqueo Maqueo Guayabo Guayabo Guayabo a a a a D. 500 D. 500

42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83

MCuS 2-1 MCuS 2-2 MCuS 3-1 MCuS 3-2 MCuS 4-1 MCuS 4-2 MCuS 5-1 MCuS 5-2 MCuS 6-1 MCuS 6-2 MCuV 1-2 MCuV 2-1 MCuV 2-2 MCuV 3-1 MCuV 3-2 MCoP 1-1 MCoP 1-2 MCoP 1-3 MCoP 2-1 MCoP 2-2 MCoP 2-3 MCoP 3-1 MCoP 3-2 MCoP 3-3 MCoP 4-1 MCoP 4-2 MCoP 4-3 MHP 1-1 MHP 1-2 MHP 2-1 MHP 3-1 MHP 3-2 MMS 1-1 MMS 1-2 MMS 1-3 MMP 1-1 MMP 1-2 MMV 1-1 MMV 1-2 MMV 2-1 MMV 2-2

Cauca Cauca Cauca Cauca Cauca Cauca Cauca Cauca Cauca Cauca Cauca Cauca Cauca Cauca Cauca Crdoba Crdoba Crdoba Crdoba Crdoba Crdoba Crdoba Crdoba Crdoba Crdoba Crdoba Crdoba Huila Huila Huila Huila Huila Magdalena Magdalena Magdalena Meta Meta Meta Meta Meta Meta

Hartn Hartn Hartn Hartn G. Michel G. Michel Sedita Sedita Hartn Hartn G. Michel Topocho Topocho Hartn Hartn Hartn Hartn Hartn Hartn Hartn Hartn a a a Topocho Topocho Topocho

84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110

MMV 3-1 MMV 3-2 MMV 4-1 MMV 4-2 MMV 5-1 MMV 5-2 MMV 6-1 MMV 6-2 MQA 1-1 MQA 1-2 MQA 1-3 MQT 1-1 MQT 1-2 MQT 1-3 MQM 1-1 MQM 1-2 MQM 1-3 MQM 2-1 MQM 2-2 MQM 2-3 MQQ 1-1 MQQ 1-2 MQQ 1-3 MVC 1-1 MVC 1-2 MVC 2-1 MVC 2-2 MVC 3-1 MVC 3-2 MVP 1-1 MVP 1-2 MVP 2-1 MVP 2-2 MVP 3-1 MVP 3-2 MVP 4-1 MVP 4-2 MVR 1-1 MVR 1-2 MVV 1-1 MVV 1-2

Meta Meta Meta Meta Meta Meta Meta Meta Quindo Quindo Quindo Quindo Quindo Quindo Quindo Quindo Quindo Quindo Quindo Quindo Quindo Quindo Quindo Valle Valle Valle Valle Valle Valle Valle Valle Valle Valle Valle Valle Valle Valle Valle Valle Valle Valle

Hartn Hartn Hartn Hartn Topocho Topocho G. Michel G. Michel D. Hartn D. Hartn D. Hartn FHIA 17 FHIA 17 FHIA 17 Hartn Hartn Hartn Guayabo Guayabo Guayabo D. Hartn D. Hartn D. Hartn a A A A A A D. Hartn D. Hartn frica frica Topocho Topocho G. Michel G. Michel Sedita Sedita a a

H. Blanco 111 H. Blanco 112 G. Michel 113 Guineo Guineo 114 116

Cavendish 117 Cavendish 118 Cavendish 119 Topocho Topocho 120 121

G. Michel 122 G. Michel 123 G. Michel 124 G. Michel 125

a: Datos faltantes; D. Hartn: Dominico Hartn; G. Michel: Gros Michel.

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Cullar, A.; lvarez, E.; Castao, J.

Tabla 2. Caracterizacin morfolgica de 50 aislamientos de Mycosphaerella fijiensis Morelet.

Coonidias* No. Aislamiento min 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 MAS 1-1 MAS 1-2 MAU 1-1 MAU 1-2 MAU 1-3 MAU 1-4 MCP 1-3 MCP 2-4 MCP 3-2 MCP 4-1 MCP 4-2 MCP 5-1 MCP 5-2 MCP 5-3 MCqF 1-1 MCqF 3-1 MCqF 4-3 MCuP 1-2 MCuP 2-1 MCuS 1-1 MCuS 2-2 MCuS 4-1 MCuS 5-1 MCuS 6-2 MCuV 2-2 MCuV 3-2 MCoP 1-1 MCoP 2-1 MCoP 3-1 MCoP 4-1 MHP 1-1 MHP 3-1 MMP 1-1 MMS 1-1 MMS 1-2 MMS 1-3 MMV 2-1 MMV 2-2 MMV 3-1 MMV 4-1 MMV 5-1 MQA 1-1 MQM 1-1 MQM 2-1 MQQ 1-1 MQT 1-2 MVC 2-1 MVC 3-2 MVP 3-2 MVV 1-2 25,0 25,0 30,0 32,5 32,5 35,0 22,5 30,0 32,5 37,5 35,0 27,5 27,5 32,5 30,0 35.0 40,0 30,0 27,5 25,0 30,0 27,5 30,0 30,0 30,0 20,0 25,0 25,0 30,0 25,0 32,5 27,5 25,0 45,0 37,5 27,5 20,0 32,5 30,0 32,5 30,0 25,0 32,5 27,5 30,0 25,0 25,0 37,5 25,0 35,0 Largo (m) max 825 82.,5 100,0 92,5 100,0 95,0 75,0 95,0 87,5 90,0 92,5 800 80,0 80,0 105,0 95,0 77,5 87,5 87,5 97,5 108,0 85,0 87,5 100,0 92,5 87,5 87,5 57,5 92,5 77,5 87,5 92,5 97,5 100,0 100,0 82,5 100,0 85,0 82,5 82,5 95,0 75,0 87,5 75,0 87,5 110,0 87,5 90,0 92,5 92,5 std 17,0 16,8 19,3 16,3 18,3 19,5 17,2 19,2 16,8 14,5 15,2 14,0 16,8 13,3 20,4 15,5 10,7 16,9 18,7 23,1 24,2 16,7 14,7 20,0 18,0 16,6 16,0 8,3 17,5 14,8 12,5 17,6 22,5 12,5 14,4 17,0 16,4 15,4 12,7 15,3 17,0 14,1 14,5 15,7 19,1 20,3 18,8 14,6 17,7 17,7 3,8 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 3,8 3,8 2,5 3,8 3,8 3,8 2,5 3,8 2,5 3,8 2,5 3,8 2,5 3,8 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 3,8 2,5 2,5 3,8 2,5 2,5 2,5 2,5 3,8 2,5 3,8 2,5 2,5 2,5 2,5 Ancho (m) min max 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 6,3 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 6,3 5,0 5,0 5,0 3,8 std 0,5 0,6 0,7 0,7 0,6 0,9 0,7 1,0 0,9 0,7 0,9 0,6 0,6 0,7 0,7 0,5 0,5 0,6 0,8 0,6 0,6 0,5 0,8 0,6 0,7 0,4 0,6 0,5 0,9 0,6 0,5 0,7 1,0 0,8 0,5 0,6 0,6 0,7 0,5 0,5 0,6 0,7 0,8 0,6 0,7 0,5 0,9 0,6 0,7 0,5 min 3 2 3 4 3 4 4 4 4 4 4 4 3 4 4 4 4 3 2 3 4 3 3 3 3 2 4 3 3 2 2 3 2 5 3 3 4 3 3 3 3 2 4 3 3 2 2 4 4 4 Septas max 8 8 9 8 8 7 9 8 8 8 8 8 8 8 8 7 8 8 8 8 9 7 8 9 9 8 9 7 8 8 9 8 8 9 8 7 8 8 8 8 8 8 9 8 9 10 8 8 9 10 std 1,5 1,5 1,5 1,3 1,5 1,0 1,5 1,3 1,4 1,1 1,4 1,3 1,7 1,2 1,3 1,0 0,9 1,4 1,7 1,7 1,7 1,4 1,2 1,7 1,7 1,5 1,4 1,1 1,2 1,3 1,4 1,5 1,6 1,2 1,3 1,4 1,2 1,1 1,2 1,2 1,2 1,3 1,5 1,5 1,6 1,8 1,6 1,4 1,7 1,8 Dimetro (mm) 15,2 12,8 14,2 10,8 14,5 12,8 12,3 9,5 11,2 13,3 14,2 13,2 12,8 14,7 12,5 12,3 10,7 10,0 13,3 12,8 12,3 10,7 14,8 12,0 11,2 13,7 12,3 11,3 13,3 13,0 12,3 15,0 13,8 13,8 10,8 11,3 12,5 13,0 12,0 13,3 10,0 16,3 14,2 13,3 12,2 10,7 15,5 11,5 13,2 13,3 Textura Algodonosa Aterciopelada Aterciopelada Aterciopelada Algodonosa Algodonosa Aterciopelada Aterciopelada Aterciopelada Aterciopelada Aterciopelada Aterciopelada Aterciopelada Aterciopelada Aterciopelada Aterciopelada Aterciopelada Aterciopelada Aterciiopelada Aterciopelada Algodonosa Algodonosa Aterciopelada Aterciopelada Aterciopelada Algodonosa Aterciopelada Aterciopelada Aterciopelada Aterciopelada Aterciopelada Aterciopelada Aterciopelada Algodonosa Aterciopelada Aterciopelada Aterciopelada Aterciopelada Aterciopelada Aterciopelada Aterciopelada Aterciopelada Aterciopelada Algodonosa Aterciopelada Algodonosa Algodonosa Algodonosa Algodonosa Aterciopelada Color Blanco Verde grisceo Verde grisceo Verde grisceo Verde grisceo claro Blanco Verde grisceo Verde grisceo oscuro Verde grisceo oscuro Verde grisceo claro Verde grisceo claro Verde grisceo Verde grisceo oscuro Verde grisceo Verde grisceo claro Verde grisceo Verde grisceo Verde grisceo Verde grisceo Verde grisceo Blanco Blanco Verde grisceo Verde grisceo oscuro Verde grisceo Verde grisceo claro Verde grisceo Verde grisceo Verde grisceo Verde grisceo Verde grisceo Verde grisceo Verde grisceo oscuro Blanco Verde grisceo Verde grisceo claro Verde grisceo Verde grisceo claro Verde grisceo Verde grisceo Verde grisceo Verde grisceo Verde grisceo Verde grisceo Verde grisceo Blanco Blanco Verde grisceo Blanco Verde grisceo oscuro claro Colonias**

claro claro

claro

Conidias*: min.: Mnimo, max: Mximo, std: Desviacin estndar. Colonias**: Morfologa de la colonia a los 35 das de crecimiento en medio de cultivo PDA.

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Evaluacin de resistencia de genotipos de pltano...

Tabla 3. Calificacin de las variables PI, TES, ABCDE y r, para los grupos de aislamientos de Mycosphaerella fijiensis Morelet conformados del anlisis de componentes principales (ACP) y anlisis de clster con el mtodo UPGMA. Grupo I II III Calificacin IV V VI VII VIII Criterio Aislamientos No. 1 1 5 4 13 11 9 6 ALTA (A) MEDIA (M) BAJA (B) PI 39,8 28,3 30,0 33,7 26,6 28,4 23,3 22,3 B M B B M M A A TES 21,0 30,5 17,6 10,2 11,8 9,6 14,9 10,6 7-11 11-15 15-30 B B B A M A M A ABCDE 0,9 0,2 4,2 3,8 8,5 9,3 11,1 15,4 B B B B M M A A 11-16 6-11 0-6 r 0,13 0,10 0,32 0,42 0,53 0,67 0,49 0,67 B B B B M A M A 0,65-0,85 0,45-0,65 0-0,45

21-25 25-30 30-40

PI: Periodo de incubacin, TES: Tiempo de evolucin de sntomas, ABCDE: rea bajo la curva del desarrollo de la enfermedad y r: Tasa de desarrollo.

Es de mencionar que todos los aislamientos mostraron diferentes niveles de virulencia y que ninguno fue avirulento o no produjo enfermedad en Dominico Hartn. A su vez, no se pudo establecer ninguna relacin entre las caractersticas morfolgicas y la virulencia de los aislamientos, ni relacin entre el origen geogrfico o varietal (pltano o banano) de los mismos con su virulencia.

el cual se calific dentro de una escala diseada con base en los rangos obtenidos de PI, TES, ABCDE y r (Tabla 5). Las calificaciones dentro y entre los grupos de interacciones conformados permitieron su distribucin en tres niveles de reaccin (resistente - intermedio susceptible). Los grupos de interaccin I y II mostraron reaccin resistente, III y IV reaccin intermedia, y V y VI reaccin susceptible. Es de mencionar que los grupos de interacciones que conformaron cada nivel de reaccin difirieren entre s por el valor del PI, lo cual indica que dicha variable no es determinante para el progreso de la enfermedad, ya que las plantas pueden expresar los sntomas tempranamente pero la enfermedad puede evolucionar de forma lenta. Las variables ABCDE y r, si explican bien la conformacin de los grupos de interaccin genotipo aislamiento (Tabla 5). A razn de que los grupos conformados son de interacciones y no de genotipos, un mismo genotipo puede estar presente en varios grupos debido a su diferente reaccin, ante el conjunto de aislamientos utilizados.
5859

Evaluacin de resistencia en genotipos de pltano y banano. El anlisis de varianza para las variables evaluadas mostr en todos los casos, interacciones altamente significativas (P<0,001) entre los aislamientos y los genotipos; lo cual indica el comportamiento diferencial de los genotipos frente a cada uno de los aislamientos inoculados.
Mediante el anlisis de componentes principales se obtuvo la recodificacin de las interacciones (genotipoaislamiento) en un nuevo sistema ortogonal; con dicha informacin traducida y con el mtodo UPGMA y el criterio de R2 se determinaron seis grupos o clster, cada uno de los cuales agrup las interacciones de caractersticas ms similares. Para cada grupo constituido se calcul el promedio de cada variable,
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Cullar, A.; lvarez, E.; Castao, J.

Tabla 4. Virulencia de 50 aislamientos de Mycoshaerella fijiensis Morelet inoculados en plntulas de pltano Dominico Hartn en invernadero.
No. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 Aislamiento PI MAS 1-1 MAS 1-2 MAU 1-2 MAU 1-1 MAU 1-3 MAU 1-4 MCP 1-3 MCP 2-4 MCP 3-2 MCP 4-1 MCP 4-2 MCP 5-1 MCP 5-2 MCP 5-3 MCqF 1-1 MCqF 3-1 MCqF 4-3 MCuP 1-2 MCuP 2-1 MCuS 1-1 MCuS 2-2 MCuS 4-1 MCuS 5-1 MCuS 6-2 MCuV 2-2 MCuV 3-2 MCoP 1-1 MCoP 2-1 MCoP 3-1 MCoP 4-1 MHP 1-1 MHP 3-1 MMS 1-1 MMS 1-2 MMS 1-3 MMP 1-1 MMV 2-1 MMV 2-2 MMV 3-1 MMV 4-1 MMV 5-1 MQA 1-1 MQM 1-1 MQM 2-1 MQQ 1-1 MQT 1-2 MVC 2-1 MVC 3-2 MVP 3-2 MVV 1-2 27 26 28 28 22 24 27 25 40 26 26 25 34 29 33 26 27 34 23 29 23 33 23 31 21 23 29 29 26 31 26 22 24 26 22 24 30 23 28 29 26 34 22 29 31 22 26 24 28 29 Variables* TES 9 13 31 9 12 16 17 19 21 10 10 8 22 16 10 11 13 12 13 16 12 10 15 10 9 10 15 7 8 12 10 10 15 13 15 11 13 14 10 13 12 9 12 17 11 14 8 11 12 11 ABCDE 9,4 7,9 0,2 10,8 16,4 8,7 4,7 8,1 1 9,8 9,2 11,7 3,2 5,7 5 8,5 5,1 2,5 12,1 4,3 12,7 4 11,5 6,9 16,7 14,8 4,9 11,3 14,6 6,3 11,3 16,8 10,1 10,7 13 13,9 5,7 10,6 8,4 6,4 8,5 3,8 13,7 3,4 6,1 13,3 12,7 10,7 7,8 8,1 r 0,6 0,5 0,1 0,7 0,6 0,5 0,4 0,5 0,1 0,6 0,6 0,6 0,4 0,3 0,6 0,6 0,4 0,3 0,5 0,3 0,5 0,4 0,5 0,6 0,7 0,7 0,5 0,8 0,8 0,7 0,7 0,7 0,5 0,6 0,5 0,7 0,5 0,5 0,7 0,5 0,5 0,4 0,6 0,3 0,5 0,5 0,7 0,6 0,7 0,7 P1 0,79 -0,22 -4,69 1,26 2,16 -0,25 -1,64 -0,8 -4,75 0,83 0,48 1,39 -3,12 -1,71 -0,89 0,32 -0,77 -2,18 0,67 -2,14 0,9 -1,64 0,59 -0,12 2,63 2,16 -1,31 1,6 2,38 -0,06 1,25 2,46 0,01 0,56 0,94 1,77 -1 0,37 0,67 -0,79 -0,14 -1,43 1,72 -2,2 -0,7 1,08 1,82 1,03 0,31 0,41 CP** P2 0,63 -0,35 -2,78 1,01 -0,98 -1,11 -0,62 -1,36 0,59 0,26 0,3 0,26 -0,26 -0,37 1,74 0,23 0 1,42 -1,06 -0,36 -0,97 1,41 -1,12 1,37 -0,67 -0,41 0 1,45 0,7 1,32 0,3 -0,56 -1,1 -0,22 -1,33 -0,34 0,45 -1 0,89 0,43 -0,2 1,85 -0,74 -0,36 0,99 -1,31 0,6 -0,22 0,65 0,95 Clster UPGMA VI V III VI VIII VII III VII I V V V III III IV V V IV VII III VII IV VII VI VIII VIII V VI VI VI V VIII VII V VII VIII V VII VI V V IV VIII III VI VII VI V VI VI Virulencia*** VM VM VMB VM VMA VA VB VA VMB VM VM VM VB VB VB VM VM VB VA VB VA VB VA VM VMA VMA VM VM VM VM VM VMA VA VM VA VMA VM VA VM VM VM VB VMA VB VM VA VM VM VM VM

Variables*: PI: Periodo de incubacin (das), TES: Tiempo evolucin de sntomas (das), ABCDE: rea bajo la curva del desarrollo de la enfermedad y r: Tasa desarrollo de la enfermedad. CP**: Componentes principales. Virulencia***: VMA: Virulencia muy alta; VA: Virulencia alta; VM: Virulencia media; VB: Virulencia baja; VMB: Virulencia muy baja.

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Evaluacin de resistencia de genotipos de pltano...

Tabla 5. Calificacin de las variables PI, TES, ABCDE y r para grupos de interacciones (genotipo-aislamiento), conformados del anlisis de componentes principales (ACP) y anlisis de clster con el mtodo UPGMA.

Grupo I Calificacin II III IV V VI Criterio

Interacciones Genotipo-aislamiento 12 13 18 5 20 32 ALTA (A) MEDIA (M) BAJA (B)

PI 31,6 20,0 23,6 17,6 22,8 18,0 16-22 22-28 28-35 B A M A M A

TES 25,7 31,6 17,6 22,2 11,7 14,7 10-19 19-28 28-38 M B A M A A

ABCDE 1,2 2,2 6,1 7,9 12,7 14,4 6-12 0-6 B B M M A A

r 0,12 0,10 0,25 0,24 0,45 0,43 0,33-0,5 0,16-0,33 0-0,16 B B M M A A

12-19

PI: Periodo de incubacin, TES: Tiempo de evolucin de sntomas, ABCDE: rea bajo la curva del desarrollo de la enfermedad y r: Tasa de desarrollo.

Reaccin de los genotipos Musa spp. frente a los aislamientos de M. fijiensis. La Tabla 6 muestra la susceptibilidad de muchos de los genotipos a la mayora de los aislamientos, en ese sentido los genotipos de pltano frica y los bananos Gross Michel, Giant y Valery Cavendish se comportaron de manera susceptibles a todos los aislamientos evaluados; otros genotipos de pltano como FHIA 20, Topocho, Maqueo, Dominico y Cubano negro, se comportaron de manera diferencial ante los aislamientos, presentando resistencia para al menos a uno de ellos, mientras que en banano este mismo comportamiento solo se observ en tres genotipos FHIA 23, Sedita y Gran Enano. El nico genotipo en presentar resistencia a todos los aislamientos fue el pltano FHIA 21, el cual an conserva su alta resistencia a la Sigatoka negra bajo condiciones de campo.
Por otra parte, la comparacin de las reacciones de cada uno los aislamientos ante el conjunto de genotipos evaluados (comparacin de filas Tabla 6) muestra un comportamiento diferencial de la virulencia del patgeno. Los aislamientos MQM2-1, MCP4-2 y MCoP3-1 presentaron la mayor virulencia debido a que afectaron la mayor cantidad de genotipos (13, 12 y 11 respectivamente); esto a diferencia del aislamiento MAU1-3 que evidenci una menor virulencia ya que
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slo 5 genotipos expresaron susceptibilidad a esta cepa. El aislamiento MMP1-1 presenta una virulencia media debido a que 9 genotipos fueron susceptibles a este aislamiento. Esto es importante ya que si se observa la reaccin de virulencia de stos aislamientos en Dominico Hartn (Ensayo de patogenicidad), es claro que el comportamiento de alta o baja virulencia de una cepa especfica frente a un solo genotipo, no indica que dicho comportamiento sea el mismo frente a cualquier otro genotipo donde se evale, esto queda claramente confirmado con el aislamiento MQM2-1 quien present una baja virulencia en Dominico Hartn pero que al evaluarlo frente a una mayor gama de genotipos, result ser el de mayor virulencia, y a su vez, con el aislamiento MAU1-3 quien present una alta virulencia en Dominico Hartn y fue el menos virulento ante los diferentes genotipos de estudio. DISCUSIN

Coleccin y caracterizacin de aislamientos de M. fijiensis. La ausencia de contaminacin en todos los aislamientos a partir del mtodo de siembra directa de tejido afectado, en comparacin con el mtodo de descarga de ascosporas, en el cual se tuvo grandes contaminaciones en el momento de la obtencin de los monoascospricos; muestra que la siembra directa de tejido afectado es una
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Cullar, A.; lvarez, E.; Castao, J.

metodologa sencilla y efectiva para el aislamiento del hongo. Este resultado conlleva a reducir la dificultad previamente reportada para aislar M. fijiensis, presentndose como una mejor alternativa

a la metodologa que tradicionalmente se utiliza para el aislamiento del patgeno, consistente en la descarga de ascosporas (Du Pont, 1982; Abadie et al., 2008; Jimnez, 2008).

Tabla 6. Reaccin de 19 genotipos Musa spp. frente a cinco aislamientos de Mycosphaerella fijiensis Morelet de diferente virulencia y origen.
Genotipos de pltano* F21 MQM2-1 MCP4-2 MCoP3-1 MMP1-1 MAU1-3 Reaccin campo R R R R R R1 F20 I R R R R I1 TP R S R R R MQ I I R I R DM CBN S I I S R S S S I R GY S I S S I HT S S S I I CB S S S S I AF S S S S S S1 F23 I R I R R R2 SD R I R R R Genoma AAAB AAAB ABB AAB AAB AAB AAB AAB AAB AAB AAAB AA Genotipos de banano** WC S S S I I GN S S S I I S3 GMC GM S S I S S S3 S S S S S S2 GC S S S S S S4 GEC VC S S S S R S4 S S S S S S4 AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA

Reaccin: R: Resistente, I: Intermedio, S: Susceptible. Aislamientos: Virulencia en Dominico Hartn MQM2-1 (Baja virulencia), MCP4-2 y MCoP3-1(Media virulencia), MMP1-1 y MAU1-3 (Alta virulencia). Genotipos de pltano*: F21: FHIA 21, F20: FHIA 20, TP: Topocho, MQ: Maqueo, DMH: D. Hartn, DM: Dominico, CBN: Cubano Negro, GY: Guayabo, HT: Hartn, CB: Cubano Blanco, AF: frica. Genotipos de banano**: F23: FHIA23, SD: Sedita, WC: Williams Cavendish GN: Guineo, GMC: Gross Michel Coco GM: Gross Michel, GC: Giant Cavendish, GEC: Gran Enano Cavendish y VC: Valery Cavendish. Reaccin campo: 1: Torrado y Castao, 2008; 2: Guzmn y Castao, 2009; 3: Aguirre y Castao, 2005; 4: IDIAF, 2004.

La conservacin del hongo en papel filtro a temperaturas bajas result ser un mtodo eficiente para el almacenamiento y para la posterior induccin de esporulacin. En la literatura no se encuentran estudios previos de conservacin del hongo mediante esta metodologa, lo que hace que esta investigacin se constituya en la primera referencia de conservacin de M. fijiensis en papel filtro y en una metodologa efectiva de almacenamiento y produccin de inculo. Los resultados de la caracterizacin morfolgica de los aislamientos, mostraron rangos en longitud, ancho y nmero de septas de las conidias que concuerdan con los indicados en la literatura para la identificacin del hongo (Ploetz et al., 1994; Aguirre et al., 1998; Jimnez, 2008). En cuanto a las caractersticas de dimetro, color y textura de las colonias, coinciden con los informes previos de Manzo et al. (2001) y Jimnez (2008) para aislamientos de M. fijiensis.

genotipo no posee genes de resistencia a las poblaciones colombianas de M. fijiensis. Esto se correlaciona con la reaccin de susceptibilidad de este genotipo en campo observada por Hoyos y Castao (2007) en Colombia y por Hernndez et al. (2006) en Venezuela. Este estudio, a su vez muestra que la estructura poblacional del hongo es muy variable ya que la virulencia de las cepas de M. fijiensis en Dominico Hartn no tiene ninguna asociacin con su origen geogrfico, ni con la especie de la cual fueron aisladas. Encontrndose en una misma zona geogrfica, aislamientos de alta y baja virulencia, y a su vez, encontrando aislamientos de diferente agresividad provenientes de un mismo genotipo. Lo que se correlaciona con la alta diversidad gentica encontrada en aislamientos de M. fijiensis obtenidos en una misma plantacin e incluso entre aislamientos de una misma planta (Rivas et al., 2004). Esto se asocia con la reproduccin sexual y ciclo de vida corto del patgeno, que provoca un elevado ndice de recombinacin gentica (Manzo et al., 2005), y conlleva a una rpida aparicin de poblaciones del hongo con nuevos genes de virulencia. La alta variabilidad patognica del M. fijiensis en Dominico Hartn demuestra la necesidad de evaluar a
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Caracterizacin patognica de aislamientos. La reaccin observada de Dominico Hartn ante los 50 aislamientos evaluados (Tabla 4), infiere que todas la interacciones planta-patgeno son de carcter compatible, el 78% de los aislamientos tuvieron una compatibilidad entre media, alta y muy alta, lo que demuestra que este
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nivel de invernadero diferentes genotipos de Musa spp. frente a una diversa y amplia gama de aislamientos del hongo que representen su variacin patognica y gentica real, que permita reconocer genotipos resistentes a las cepas del colombianas del patgeno, y a su vez, facilite la identificacin de fuentes de resistencia confiables a la Sigatoka negra.

Evaluacin de resistencia en genotipos de pltano y banano. Las interacciones planta-patgeno observadas en el complejo Musa spp. y M. fijiensis se manifestaron de acuerdo a la hiptesis del gen x gen de Flor (1971), donde la resistencia result de la interaccin gentica entre los genes de resistencia de la planta y los genes de avirulencia del patgeno; la ausencia, mutacin o prdida de uno de estos genes en cualquiera de los dos organismos (planta o patgeno) es determinante para que la interaccin deje de ser de resistencia y se manifieste como susceptible. En ese sentido, la susceptibilidad o interaccin de compatibilidad observada en los genotipos frica, Gross Michel, Giant y Valery Cavendish a todas las cepas utilizadas, demuestra que ninguno de estos genotipos posee los genes de resistencia asociados a los genes de virulencia de los aislamientos utilizados. El comportamiento de estos genotipos tambin explica la reaccin de susceptibilidad en campo observada en los genotipos frica y Gross Michel en Colombia (Hoyos y Castao, 2007), y de Giant y Valery Cavendish en Repblica Dominicana (IDIAF, 2004; Galvn y Rengifo, 2004), e indica su condicin de susceptibilidad a la enfermedad en cualquier zona de Colombia donde se cultiven o deseen cultivar.
Por otra parte, el comportamiento diferencial de los genotipos Musa spp. a las diferentes cepas del hongo, muestra mayores reacciones de resistencia en los genotipos de pltano que en los bananos, esto confirma lo mencionado por Tezenas (1990) y Belalczar et al. (1991), quienes afirman que la resistencia a enfermedades en Musaceas es mayor en aquellos materiales con genoma B (Balbisiana Pltanos) que aquellos cultivares con genoma A (Acuminata Bananos); no obstante, tambin declaran que los cultivares diploides con genoma AA a pesar de no poseer genoma B, presentan caractersticas de alta resistencia al patgeno; y que aquellos genotipos con alta frecuencia de genoma B, es decir ABB expresan mayor resistencia que cultivares con genoma AAB. Esto es importante, ya que si se observa la Tabla 6, se identifican mayores reacciones de resistencia en las variedades de pltano Topocho con genoma ABB
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y banano Sedita con genoma AA que en los dems genotipos con genoma AAA y AAB. Sin embargo, aunque Maqueo presenta genoma AAB result ser un material interesante debido a que no exterioriza reaccin de susceptibilidad ante ninguno los aislamientos evaluados. Este comportamiento lo convierte al igual que a Topocho y Sedita en un material promisorio tanto para el manejo preventivo de la enfermedad como para estudios de mejoramiento gentico. Por otro lado, las mayores reacciones de resistencia de los genotipos FHIA (Tabla 6) en comparacin con las respuestas de los dems genotipos ante el conjunto de aislamientos del patgeno evaluados, confirman su resistencia de carcter horizontal (FHIA, 2008), la cual se adapta a la variabilidad patognica de los aislamientos colombianos de M. fijiensis. Las mayores reacciones de resistencia de FHIA 21 que en FHIA 20, concuerdan con la resistencia en campo observada por Torrado y Castao (2008). Las reacciones de resistencia en FHIA 23 a las cepas colombianas del patgeno aqu detectadas, son tambin importantes a razn de que este banano ha demostrado ser resistente a las Sigatokas negra y amarilla en condiciones de campo (Guzmn y Castao, 2009). Las reacciones observadas de los distintos genotipos a las diferentes cepas del patgeno, indican la alta diversidad gentica de los genotipos de Musa spp. y evidencian la alta variabilidad en la virulencia de M. fijiensis, ya que todos los aislamientos presentaron comportamiento diferencial ante el conjunto de genotipos evaluados. Esto coincide con lo planteado por Fullerton y Olsen (1995) quienes utilizaron 63 aislamientos del patgeno, obtenidos de diferentes hospedantes de pltanos y bananos procedentes de pases productores de Asa y Amrica; en donde una vez inoculados los aislamientos, se demostraron diferencias en su virulencia y en el progreso de la enfermedad en los 20 genotipos estudiados. Los genotipos Topocho, Maqueo y Sedita, y los hbridos FHIA 20, FHIA 21 y FHIA 23 que presentaron mayores reacciones de resistencia a las cepas colombianas de M. fijiensis podran constituirse en fuentes de resistencia en programas de mejoramiento gentico o en materiales promisorios para control de la enfermedad; teniendo en cuenta que antes de introducir genotipos resistentes identificados en este y otros estudios de detencin temprana, se deberan evaluar ante un mayor nmero de aislamientos y bajo condiciones naturales como validacin final de dicho comportamiento, e igualmente evaluarlos frente a
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otras caractersticas como produccin y respuesta a otros problemas fitosanitarios, que tambin deben ser consideradas al momento de realizar un eleccin del material a cultivar. CONCLUSIONES La siembra directa de tejido afectado en medio de cultivo PDA, result ser un mtodo muy til y efectivo para el aislamiento del patgeno y para la obtencin de cultivos monospricos en comparacin con el mtodo de descarga de ascosporas. El mtodo de conservacin en papel filtro mostr ser una herramienta eficiente para el almacenamiento del hongo por largos periodos de tiempo, adems de ser importante porque mantiene la esporulacin de los aislamientos y conserva las caractersticas de crecimiento y virulencia de los mismos. Se encontraron diferencias en la morfologa y virulencia de 50 aislamientos de Mycophaerella fijiensis inoculados en plntulas de pltano Domino Hartn. La virulencia de los aislamientos M. fijiensis no se relacion con su origen geogrfico ni con el genotipo del cual se obtuvieron. Los genotipos de pltano y banano mostraron un comportamiento diferencial frente a cinco aislamientos, lo cual indica la presencia de razas del patgeno. Los genotipos Topocho, Maqueo, FHIA 20, FHIA 21 de pltano, y los genotipos Sedita y FHIA 23 de banano presentaron un mayor nivel de resistencia. El mtodo de evaluacin temprana de resistencia a M. fijiensis en cultivares de pltano y banano, es confiable y reproducible, ya que permite evaluar respuestas marcadas segn el nivel de resistencia y susceptibilidad del cultivar; esto representa un ahorro en tiempo y recursos en comparacin con las pruebas hechas a nivel de campo. AGRADECIMIENTOS Se agradece a Germn Alberto Llano, Girlena Aricapa y Myriam Cristina Duque, por su valioso conocimiento brindado y orientacin. A Silverio Gonzlez Director de FEDEPLATANO, Luis Alfredo Rivera, Vicente Rey, Pedro Zapata, Carlos Jara, entre otros, por apoyar esta investigacin, por medio de la obtencin de muestras, germoplasma y sobre todo por la ayuda desinteresada y conocimientos. BIBLIOGRAFA Abadie, C., M. Zapater, L. Pignolet, J. Carlier and X. Mourichon. 2008. Artificial inoculation on plants and banana leaf pieces with Mycosphaerella spp., responsible
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for Sigatoka leaf spot diseases. Fruits 63(5): 319323. Aguirre, M., J. Castao y L. Zuluaga. 1998. Mtodo rpido de diagnstico de Mycosphaerella musicola Leach y M. fijiensis Morelet agentes de la Sigatoka amarilla y Sigatoka negra en Musceas. Fitopatologa Colombiana 23(1): 45-47. Aguirre, M. y J. Castao. 2005. Epidemiologa de Mycosphaerella fjiensis Morelet y Mycosphaerella musicola Leach, en siete genotipos de musceas. Fitopatologa Colombiana 29(1): 7-11. Arnzazu, F., J. Valencia, M. Arcila, C. Castrilln, M. Bolaos, P. Castellanos, J. Prez, y J. Rodrguez. 2002. El cultivo de pltano. Corporacin Colombiana de Investigacin Agropecuaria (CORPOICA), Litoas, Manizales, Colombia. 114 p. (Manual Tcnico). Aricapa, M. y F. Correa. 1994. Almacenamiento de hongos sobre papel filtro. Programa Patologa de Arroz. CIAT. Ascolfi Informa, Boletn bimestral 20(3): 29-30. Belalczar, S., J. Toro y R. Jaramillo. 1991. El cultivo del pltano (Musa AAB Simmonds) en el trpico. Instituto Colombiano Agropecuario (ICA), Subgerencia de Investigacin; Centro Internacional de Investigaciones para el Desarrollo (CIID). Red Internacional para el Mejoramiento del Banano y el Pltano (INIBAP), Cali, Colombia. 376 p. Carlier J., M. Lebrun, M. Zapater, C. Dubois and X. Mourichon. 1996. Genetic structure of the global population of banana black leaf streak fungus Mycosphaerella fijiensis. Molecular Ecology 5(4): 499-510. Carlier, J., D. De Waele and J. Escalant. 2002. Global evaluation of Musa germplasm for resistance to Fusarium wilt, Mycosphaerella leaf spot diseases and nematodes. (A. Vzina and C. Picq, eds). INIBAP Technical Guidelines 6. The International Network for the Improvement of Banana and Plantain, Montpellier, France. 68 p. Castao, J. y L. Del Ro Mendoza. 1997. Manual para el diagnstico de hongos, bacterias, viru s y nematodos fitopatgenos. Zamorano Academic Press, Universidad de Caldas, Facultad de Ciencias Agropecuarias, Manizales, Colombia. 210 p. Du Pont. 1982. Black and yellow sigatoka. Improyed identification and management. Du Pont Latin Amrica, Coral Gables, Florida. 17 p.
Rev.Fac.Nal.Agr.Medelln 64(1): 5853-5865. 2011

Evaluacin de resistencia de genotipos de pltano...

Flor, H.H. 1971. Currents status of the gene-for-gene concept. Annual Review of Phytopathology 9: 275-296. Fundacin Hondurea de Investigacin Agrcola (FHIA). 2008. Programas de Investigacin. En: Banano y pltano, http://www.honduras.com/fhia/default-esp. htm 1p.; consulta: agosto 2009. Fullerton, R.A. and T.L. Olsen. 1995. Pathogenic variability in Mycosphaerella fijiensis Morelet cause of black Sigatoka in banana and plantain. New Zealand Journal of Crop and Horticultural Science 23(1): 39-48. Galvn, E. y D. Rengifo. 2004. Evaluacin de bananos locales e introducidos en condiciones de produccin orgnica. pp. 19-26. En: Instituto Dominicano de Investigaciones Agropecuarias y Forestales (IDIAF). (ed.). Musceas, resultados de investigacin. Santo Domingo, Repblica Dominicana. 117 p. Guzmn, O.A. y J. Castao. 2009. Reaccin de los hbridos de pltano FHIA-20 y de banano FHIA-23 a las Sigatokas negra (Mycosphaerella fijiensis Morelet) y amarilla (Mycospaherella musicola Leach). Agronoma 17(1):35-43. Hernndez, Y., F. Portillo, M. Portillo, C. Navarro, M. Rodrguez y J. Velazco. 2006. Densidad estomtica en materiales de pltano (Musa AAB, AAAB y ABB) susceptibles y resistentes a Sigatoka negra (Mycosphaerella fijiensis Morelet). Revista de la Facultad de Agronoma 23(3): 292-297. Herrera, M. 2007. Manejo y control de la Sigatoka negra en pltano y banano. Asociacin de Ingenieros Agrnomos del Valle de Cauca. Revista ASIAVA 77: 12-15. Hoyos, J.E. y J. Castao. 2007. Evaluacin de resistencia de Mbouroukou (frica 1) y FHIA 03 a la Sigatoka negra (Mycosphaerella fijiensis Morelet) y Sigatoka amarilla (Mycosphaerella musicola Leach). Agronoma 15(2): 67-76. Instituto Dominicano de Investigaciones Agropecuarias y Forestales (IDIAF). 2004. Musceas, resultados de investigacin. Santo Domingo, Repblica Dominicana. 117 p. Jimnez, I. 2008. Effect of the nutritional status of banana (Musa spp.) on leaf disease infestation by Mycosphaerella fijiensis Morelet in Ecuador. Tesis postgrado. Katholieke Universiteit Leuven, Division of Crop Biotechnics, Blgica. 149 p.
Rev.Fac.Nal.Agr.Medelln 64(1): 5853-5865. 2011

Manzo, G., M. Santos y G. Guzmn. 2001. Caracterizacin morfolgica de Mycosphaerella fijiensis Morelet de la regin del Pacfico centro de Mxico y su desarrollo en medios de cultivo. Revista Mexicana de Fitopatologa 19(1): 66-71. Manzo, G., G. Guzmn, C. Rodrguez y A. James. 2005. Biologa de Mycosphaerella fijiensis Morelet y su interaccin con Musa spp. Revista Mexicana de Fitopatologa 23(1): 87-96. Orozco, M.L. y M. Aristizbal. 2006. Manejo de las sigatokas del pltano (Musa AAB) y su relacin con el clima. Universidad de Caldas. Departamento de Fitotecnia. Resumen de investigacin. Boletn Fitotecnia No. 110. Ploetz, R.C., G.A. Zentmyer, W.T. Nishijima, K.G. Rohrbach and H.D. Ohr. 1994. Part I. Banana. pp. 2-22. In: Compendium of Tropical Fruit Diseases. APS Press. The American Phytopathological Society, St. Paul, MN, USA. 88 p. Rivas, G., M. Zapater, C. Abadie and J. Carlier. 2004. Founder effects and stochastic dispersal at the continental scale of the fungal pathogen of bananas Mycosphaerella fijiensis. Molecular Ecology 13(2): 471-482. Statistical Analysis System (SAS) Institute Inc. 2004. SAS Online Doc, Versin 9, Cary, NC. Stover, R.H. 1963. Leaf spot of bananas caused by Mycosphaerella musicola: Associated ascomycetous fungi. Canadian Journal of Botany 41(10): 1481-1485. Tezenas du Montcel, H. 1990: Susceptibility of various cultivated bananas to Sigatoka diseases. pp. 272-289 In: Fullerton, R. and R. Stover (ed.). Sigatoka leaf diseases of bananas. Proceedings of an international workshop held at San Jose, Costa Rica, March 28-April 1 1989. International Network for the Improvement of Banana and Plantain, Montpellier, France. Torrado, M. y J. Castao. 2008. Incidencia y severidad de las sigatokas negra (Mycosphaerella fijiensis Morelet) y amarilla (Mycosphaerella musicola Leach et Mulder) del pltano segn los estados fenolgicos. Agronoma Colombiana 26(3): 435-442. Vega, G. 2002. La Sigatoka negra (Mycosphaerella fijiensis Morelet) en el pltano. Instituto de Investigaciones Agropecuarias Jorge Dimitrov, Granma. Cuba.
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