UNIVERSIDADE FEDERAL DE VIOSA DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA FLORESTAL ROTEIRO DIDTICO TCNICAS EM ANATOMIA DA MADEIRA1 Wescley Viana Evangelista2 Embora

a muitos aspectos anatmicos da madeira possam ser constatados macroscopicamente, a olho nu ou com auxilio de uma lupa, determinadas peculiaridades da madeira s podero ser visualizadas com o auxilio de microscpio. A microtcnica trata dos recursos, mtodos e procedimentos de preparao da madeira para futuras observaes microscpicas, atravs das tcnicas de macerao e microtomia. Atravs dessas tcnicas, a madeira transformada num ob eto transparente, possibilitando sua observao no microscpio e permitindo a visualizao das v!rias clulas "ue compe a madeira. #a primeira parte deste material ser! abordada a tcnica de macerao, os principais mtodos utilizados, bem como sua finalidade pr!tica nos estudos de anatomia e tecnolo$ia da madeira. PARTE 1 - MACERAO As sees de caules, ra%zes, cascas ou outros r$os ve$etais raramente oferecem uma idia precisa da natureza de suas clulas, "uando vistas sob l&minas tempor!rias ou permanentes. A dissociao dos tecidos o 'nico mtodo "ue revela as particularidades das clulas. A macerao a forma artificial de separao das clulas de um tecido, atravs da dissoluo da lamela mdia, "ue composta, "uase em sua totalidade, por li$nina. Atravs da macerao bem poss%vel a observao tridimensional das clulas, facilitando o estudo das caracter%sticas anatmicas da madeira. Embora se acredite "ue a natureza das li$aes "u%micas entre os polissacar%deos e a li$nina se a mais complexa "ue a simples impre$nao da lamela mdia pela li$nina, os solventes "u%micos so capazes de dissolver a subst&ncia intercelular e promover a separao das clulas ve$etais. A madeira, assim preparada, usada para medies de lar$ura, di&metro do lume e comprimento das fibras, espessamento de parede e pontuaes ()i$ura *+. ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,
* - .aterial did!tico referente ao curso de anatomia da madeira ministrado aos estudantes de En$enharia )lorestal da /niversidade )ederal do 0ecncavo da 1ahia. 2 3 En$enheiro )lorestal .4c., 5outorando em 6i7ncia )lorestal 3 /)8

)i$ura * 3 .acerado de material apresentando fibras e vasos. )onte9 :omide et al (2;;<+.

=s rea$entes utilizados para se remover a li$nina esto assim a$rupados9 a+ solventes or$&nicos espec%ficos - !lcoois, fenis, dioxano, dimetilsulfxido etc. b+ solues a"uosas ou b!sicas - #a=>, #a=> ? #a24, >#=@ , 6l=2 etc. c+ solues oxidantes - >2=2 , A.n=< etc. =s compostos or$&nicos e as solues oxidantes alteram o m%nimo poss%vel, a estrutura da li$nina, en"uanto os compostos do se$undo $rupo se caracterizam por reaes dr!sticas, alterando a estrutura da li$nina. A preparao do material consiste em cortar o material fresco ou seco em fatias ou pedacinhos, o mais fino poss%vel, no sentido das fibras e coloc!3los num tubo de ensaio com rea$entes. A se$uir so apresentados os principais mtodos de macerao. .todos de macerao 3 in'meras solues macerantes so preconizadas e a escolha de um determinado mtodo depender! do tipo de estudo "ue se realiza. Al$uns mtodos so mais dr!sticos e podem dilacerar os elementos de madeiras mais maciasB outros mtodos so mais suaves e no so suficientes para individualizar os elementos de madeiras mais densas. =s principais mtodos de macerao so os se$uintes9 *+ Mtodo d ! ""# $ 2+ Mtodo d N%&'o(() D*d)+ (( ,Mtodo -)*do . *-(* /#0t%&*1 2+ Mtodo 2%t#o-*&t%&o @+ Mtodo d S/ *#%2 I) .3 #4 = mtodo nitro3actico e o .todo de #icholls e 5adsCell so os mtodos mais utilizados e sero descritos a se$uir. Mtodo 2%t#o-*&t%&o - o mtodo considerado dos mais eficazes pela combinao de dois !cidos "ue atuam sobre a li$nina. As principais etapas so9 3retirar pe"uenos fra$mentos de madeira e coloc!3los em !$ua antes da macerao, a fim de facilitar a difuso dos a$entes macerantesB 3preparar a soluo macerante, "ue consiste numa mistura de !cido n%trico concentrado e !cido actico $lacial na proporo de *9D volumesB 3colocar as part%culas de madeira num tubo de ensaio e um volume da mistura macerante, a ponto de mer$ulhar todas as part%culas na misturaB 3levar o tubo de ensaio para o banho3maria em ebulio, num per%odo "ue varia de uma a tr7s horas, at o material se apresentar esbran"uiadoB

3retirar o excesso da soluo macerante e lavar o material com !$ua corrente, a fim de eliminar os res%duos "u%micosB 3dissociar os tecidos por meio de um estilete ou por a$itao manual do tubo de ensaioB 3colorir com azul de astraB 3fazer a monta$em de l&minas, como observado em aulas pr!ticas. 6uidado especial deve ser tomado com a ao do !cido n%trico, "ue provoca reaes fortes, podendo atacar at as paredes celulares. = !cido n%trico pode provocar hidrlise, nitrao e oxidao da li$ninaB para se obter o resultado esperado preciso interromper a reao a tempo, para no causar danos ao material. Em funo da toxidez dos vapores !cidos, no ponto de ebulio, necess!rio o uso da capela, com exaustor, "uando utiliza3se desse mtodo de macerao. Mtodo d N%&'o(() D*d)+ (( - utiliza3se soluo de !cido actico $lacial e perxido de hidro$7nio como soluo macerante. Esse mtodo muito utilizado para madeiras mais macias, por"ue no a$ressivo e no de$rada muito o material. As etapas para realizao desse mtodo so as se$uintes9 3 0etirar pe"uenos fra$mentos de madeiraB 3 Ereparar a soluo macerante, "ue consiste de soluo de !cido actico $lacial e perxido de hidro$7nio, na proporo de *9*B 3 colocar os fra$mentos de madeira num tubo de ensaio adicionadas a um volume da soluo macerante, volume esse o suficiente para recobrir todas as part%culasB 3 Fevar o tudo de ensaio a uma estufa a"uecida G temperatura de H; o6 por aproximadamente <I horasB 3 Em se$uida, lavar o material em !$ua corrente, a fim de eliminar os res%duos "u%micosB 3 6olorir com azul de astraB 3 .ontar as l&minas. I./o#t52&%* P#0t%&* d* R *(%6*78o d* M*& #*78o A partir da macerao, poss%vel a individualizao das diferentes clulas lenhosas "ue compem a madeira. A partir das clulas individualizadas, pode3se visualizar principalmente, pelos mtodos discutidos em aula pr!tica, as fibras e elementos de vasos nas folhosas e os tra"ueides nas con%feras. Al$uns detalhes espec%ficos da madeira, al$umas vezes, no so poss%veis de serem observados nos tr7s planos anatmicos, tais como as placas de perfurao dos elementos de vasos e as pontoaes de fibras. #este caso a macerao passa a ser uma ferramenta importante na avaliao "ualitativa das diferentes clulas lenhosas "ue compem a madeira. /ma outra import&ncia de ser fazer a macerao a possibilidade de mensurar as dimenses de fibras e tra"ueides, "ue so9 comprimento, lar$ura e di&metro do lume. A espessura da parede no mensurada e sim estimada, atravs da se$uinte frmula9
EP = L DL 2

em "ue9 EEJ espessura da parede (Km+B

FJ lar$ura (Km+B 5F J di&metro do lume (Km+. #os tr7s planos anatmicos de corte no poss%vel realizar essas medies com preciso. #os estudos de caracterizao da madeira, essas dimenses podem apresentar correlaes com outras propriedades da madeira, tais como a densidade. Essas correlaes podem ser v!lidas para al$umas espcies e para outras no. Eor exemplo, 5A8L54=# (*MN2+, estudando a madeira de Eucalyptus deglupta, encontrou correlao positiva entre o comprimento da fibra e densidade, en"uanto 5LA4 e 6FAO5L=35A3 4LF8A P0. (*MID+ verificaram "ue no h! relao entre os dois par&metros em E. grandis. =utra caracter%stica anatmica associada a densidade a espessura da parede, onde tem3se re$istrado na literatura, muitas relaes positivas desses dois par&metros em estudos com madeiras de con%feras e folhosas. #o entanto o "ue merece real desta"ue so as correlaes das dimenses das fibras e tra"ueides com as propriedades do papel, caracter%sticas estas "ue definem a "ualidade da madeira para a produo do papel. 4e$undo 4antos (2;;D+, o comprimento da fibra afeta al$umas propriedades do papel, em particular, resist7ncia ao ras$o e resist7ncia a dobras. =utra caracter%stica muito importante para as propriedades do papel a lar$ura da fibra. )ibras mais lar$as produziro papis com menor resist7ncia ao ar, maior volume espec%fico aparente e maior resist7ncia ao ras$o. Eor outro lado, pre udicaro a formao da folha uma vez "ue tem maior tend7ncia a flocular na caixa de entrada. A espessura da parede uma caracter%stica anatmica to importante "uanto a lar$ura da fibra e $eralmente est! relacionada com a ri$idez da fibra. 4antos (2;;D+ tambm cita "ue, a partir das dimenses de fibras e tra"ueides, tambm poss%vel estabelecer %ndices de "ualidade da madeira para a produo de papel. Al$uns desses itens so apresentados a se$uir9 a+ 6oeficiente de flexibilidade (6)+
dimetro , do , lume l ar$ ura

CF =

Quanto maior o coeficiente de flexibilidade, mais flex%veis so as fibras ou tra"ueides, maior a possibilidade de li$ao entre elas. Em $eral, um aumento no n'mero de li$aes resulta em aumento nas propriedades de resist7ncia, embora sob certas condies. b+ )rao parede ()E+9
2 espessura , da , parede l ar$ ura

FP =

Quanto maior a frao parede, maior a ri$idez das fibras ou tra"ueides e menor a possibilidade de li$ao entre elas. Em $eral admite3se "ue "uando a frao parede maior "ue <;R, as fibras sero extremamente r%$idas, pouco flex%veis e haver!

dificuldades na interli$ao das mesmas. Esta relao mantm maior proporcionalidade com resist7ncia ao ras$o e menor com trao, ao arrebentamento e peso espec%fico aparente ()oelSel T 1arrichelo, *MND+. c+ Undice de 0unSel (L5+9

ID =

2 espessura , da , parede dimetro , do , lume

0unSel observou "ue as fibras de madeira, com o %ndice por ele desenvolvido menor "ue *,;, produziam polpas de boa "ualidade, com boa capacidade de interli$ao. Quando este %ndice era maior "ue *,; as madeiras no eram satisfatrias para a produo de polpa de boa "ualidade. Ln'meras pes"uisas mostraram "ue este %ndice $uarda o mesmo tipo de relao com a "ualidade da polpa "ue a espessura da parede celular e a frao parede.

PARTE 2 MICROTOMIA E MONTAGEM DE L9MINAS PERMANENTES Existem basicamente duas tcnicas para "ue a madeira possa ser observada a n%vel microscpico. /ma delas a macerao, onde poss%vel observar as clulas lenhosas "ue compem a madeira, atravs do uso de rea$entes espec%ficos "ue individualizam essas clulas atravs da dissoluo da lamela mdia.. =utra tcnica atravs da microtomia e monta$em de l&minas, onde poss%vel visualizar os tr7s planos anatmicos de corte, identificando3se os v!rios tecidos "ue compem a madeira, tais como fibras, par7n"uima axial e radial, tra"ueides e vasos. A microtomia o processo "ue consiste em transformar a madeira em sees muito finas, transformando3a num ob eto del$ado e "uase transparente, para ser observado com o aux%lio de um microscpio. Aps a obteno dessas finas sees poss%vel montar l&minas permanentes ou semi3permanentes, a partir de procedimentos espec%ficos. #o entanto, antes de iniciar o processo de microtomia, recomend!vel "ue, essas finas sees as serem obtidas, se am oriundas de amostras de madeiras representativas das !rvores da "ual se "ueira estudar. #esse caso recomendada uma amostra$em da madeira. 5ependendo do ob etivo do trabalho, essa amostra$em pode ser feita de v!rias maneiras. Em $eral, realizada em pontos espec%ficos da !rvore, se am no sentido radial (sentido medula3casca+ ou axial (sentido base3topo+, as amostras so retiradas de indiv%duos representativos de uma floresta natural ("uando h! essa possibilidade+ ou de plantio florestal. #o 1rasil, a maior parte dos estudos anatmicos de madeiras realizada se$uindo3se normas da 6=EA#V, publicada em *MN<, e da LAWA 6ommittee, publicada em *MIM para a madeira de folhosas e em 2;;< para a madeira de con%feras. #o 1rasil, em *MM2, o Faboratrio de Erodutos )lorestais (FE)+ do Lnstituto 1rasileiro do .eio Ambiente e dos 0ecursos #aturais 0enov!veis (L1A.A+ publicou um documento com base nas normas da 6=EA#V e LAWA 6ommittee, para normatizar os estudos de anatomia do lenho no Ea%s. = documento, apesar de ainda no ser

normatizado pela A1#V ou L#.EV0=, pode ser se$uido para fins de orientao de amostra$em e descrio anatmica macro e microscpica da madeira. A se$uir discutido mtodos de amostra$em da madeira, preparo do material para microscopia, monta$em de l&minas e al$uns exemplos de mensurao de vasos e raios, conforme discutido em aula pr!tica. A.o)t#*4 . do M*d %#* /*#* M%&#oto.%* 6om relao G amostra$em, o documento do Faboratrio de Erodutos )lorestais (FE)+ do L1A.A, faz as se$uintes orientaes9 (*+ 6orpos3de3prova 6orrespondem as amostras de madeiras de onde sero retiradas as finas sees para a monta$em de l&minas. Essa etapa envolve os procedimentos de coleta do material, identificao e re$istro. Eara fins de descrio dos caracteres $erais e anatmicos, as amostras devem ser provenientes de material bot&nico, devidamente identificado, de acordo com as tcnicas usuais. As exsicatas devero ser incorporadas a um herb!rio e a madeira, a uma xiloteca. Ereferencialmente, ambas devem ser re$istradas no Lndex >erbarium e no Lndex XYlarium, respectivamente. Em caso de no se dispor de material ve$etativo, eZou reprodutivo, a descrio deve ser citada na metodolo$ia. Vodo material dever! estar acompanhado de uma ficha, com anotaes de local, data de coleta, nome ou n'mero do coletor e informaes bot&nicas e ecol$icas. (2+ Focalizao das amostras [ importante especificar a ori$em da localizao da amostra9 tronco ou ramo. #o caso de !rvores, as amostras devem ser coletadas, preferencialmente, a *,@;m do solo, G altura do 5AE (*,@; metros do solo+. Em arbustos com menos de @ metros de altura ou !rvores "ue se es$alham G pe"uena altura, a amostra dever! ser retirada num ponto abaixo da primeira bifurcao, no caso das An$iospermas. #a ocorr7ncia de ra%zes tubulares, conhecidas como sapopemas, a amostra no tronco deve ser coletada num ponto acima do ponto de insero dessas ra%zes (An$iospermas+. Em :imnospermas, $eralmente poss%vel a retirada de amostras na re$io do 5AE. [ importante "ue as amostras se am completas, contendo casca, alburno e cerne. Eara estudos em "ue as !rvores no possam ser derrubadas, as amostras devem ser retiradas com o aux%lio de um trado ou e"uipamento similar, com di&metros ade"uados para "ue as mensuraes se am representativas. =14 *9 Eara estudos de caracterizao da madeira, recomenda3se retirar uma amostra do cerne perifrico, por essa poro ser representativa da seo transversal como um todo. Em estudos de n%vel cient%fico, recomenda3se adotar repeties, onde cada repetio deve consistir de um indiv%duo da mesma espcie. #esse caso, v!rias amostras de um mesmo indiv%duo sero analisadas e depois o resultado final ter! uma an!lise estat%stica. (@+ 5imenses dos corpos de provas As amostras devero ter tamanho suficiente para o estudo a "ue se destinam. =s corpos3de3prova para as an!lises macro e microscpica devero ter dimenses ade"uadas ao ponto de apoio do micrtomo. Em $eral o tamanho dos corpos de prova vari!vel, dependendo do tcnico ou pes"uisador "ue far! o processo de microtomia e monta$em das l&minas. = documento do FE) su$ere as se$uintes dimenses9 *,D cm na direo tan$encialB 2,; cm na direo radial e @,; cm na direo lon$itudinal.

=14 2.9 As dimenses dos corpos de provas so, em $eral, su$eridas, como aconteceu com o documento do FE). #o Faboratrio de Eropriedades da .adeira adotam3se dimenses similares G"uelas recomendadas pelo FE), em $eral com cerca de 2,; cm na direo tan$encialB 2,; cm na direo radial e @,; cm na direo lon$itudinal, ob etivando sees finas da madeira de maior tamanho para a confeco das l&minas. Aps a amostra$em e preparo dos corpos de provas, estes devero ser tratados, "uando necess!rio, por um mtodo apropriado de amolecimento, antes de serem levados ao micrtomo, conforme ser! descrito a se$uir. T&2%&*) d A.o( &%. 2to d* M*d %#* Aps o preparo dos corpos de prova (amostra de madeira a ser preparada para microtomia+, estes devem ser preparados para uma seo de amolecimento, para facilitar a retirada das finas sees. Eara tal situao, a madeira pode apresentar3se em duas situaes9 a+ .adeira verde 3 esta a condio ideal, pois o lenho se apresenta no estado natural, oferecendo maior facilidade de corte. Eara preservar este material nessa condio, deve3 se lavar a madeira em !$ua corrente e embeb73la em uma soluo especial de )AA (D partes de formol, D partes de !cido actico $lacial e M; partes de !lcool, a N;R+. Eara madeiras muito duras, mesmo estando no seu estado verde, ela pode ainda estar dura ao corte no micrtomo. Eara o amolecimento dessas madeiras 3 verdes e duras 3 conveniente colocar essas amostras em solues de $licerina a @;R, D;R e *;;R, em srie, G temperatura ambiente. b+ .adeira seca 3 normalmente a madeira seca dever! ser submetida a um processo de amolecimento e de retirada do arB para tanto, a amostra pode ser colocada em v!rias solues ou rea$entes afim de promover o ser amolecimento. #o Faboratrio de Eropriedades da .adeira (FE.+ $eralmente os corpos de prova so amolecimentos somente em !$ua "uente. #esse processo, dependendo da espcie, o cozimento pode variar de horas a al$uns dias. Em $eral as madeiras de $imnospermas so mais f!ceis de ser amolecidas. =utros procedimentos podem ser adotados. Eor exemplo, usar soluo de !lcool, !$ua e $licerina, em partes i$uais, para amolecimento dos corpos de prova e submeter a v!cuo at permanecer totalmente imersa ou no fundo do recipiente ou atin$ir o $rau de amolecimento dese ado. Esse mtodo pode ser adotado facilmente em laboratrio. >! caso em "ue as solues descritas acima no so suficientes para amolecer a madeira, devido G madeira apresentar alta densidade. #esse caso a madeira pode ser amolecida atravs de tratamento "u%mico, a ponto de dissolver a li$nina da parede celular. Al$uns mtodos so descritos a se$uir9 * 3 6olocar os corpos de prova em um preparado alcolico fraco de !$ua oxi$enada, a DR, e mant73los a N;\6, por 2< horas, "uando a madeira ficar! amolecida, mas haver! um descoramento da madeira. 2 3 )erver os corpos de prova numa soluo de acido actico e !$ua oxi$enada, numa proporo de *92, durante tr7s horas num frasco com condensador de refluxo e lavar rapidamente a amostra em !$ua corrente, por *D minutos.

@ 3 )erver os corpos de prova numa soluo de !cido n%trico (*;R+, com pe"uena "uantidade de cloreto de pot!ssio (;,D $ramas+, durante @ horas. < - Aplicar tratamento !cido (!cido hidrofluor%drico, !cido actico etc.+. Antes de ser levada ao micrtomo, a madeira deve ser previamente armazenada em !$ua. D - /so de etilenodiamina G concentrao de D ou *;R. [ indicado para madeiras duras ou muito duras, tornando os corte, em micrtomo, vi!veis num prazo de um a tr7s dias, dependendo do $rau de li$nificao da madeira. = a"uecimento da soluo em capela 3 os vapores so txicos 3 acelera o amolecimento. [ preciso tomar cuidado na diluio do etilenodiamina, produto corrosivo e fume$ante em contato com o ar, podendo causar srias "ueimaduras. = uso de e"uipamentos de proteo individual (EEL]s+ recomend!vel, alm de "ue deve ser manipulado em capela. = produto, mesmo depois de dilu%do, oferece riscos ()onte desse procedimento9 http9ZZCCC.herbario.com.brZcieZfotnatZtecmicro.htm^lo$+. Eara o amolecimento de madeiras duras deve3se sempre tomar cuidado com o uso dos rea$entes espec%ficos de cada mtodo, principalmente os !cidos fortes. Em al$uns casos necess!rio o uso de EEL]s. U)o do M%&#:to.o = micrtomo o e"uipamento destinado a retirar pe"uenas sees de madeira para serem visualizadas num microscpio. = seu manuseio re"uer pr!tica e muita habilidade, utilizando3se de navalhas bem afiadas. = micrtomo permite a obteno de sees finas, de espessuras prefixadas, "ue podem variar de * a H; Km, como o caso do micrtomo pertencente ao FE., conforme pode ser visto na )i$ura 2

)i$ura 2 - .icrtomo utilizado para obteno de finas sees da madeira.

Eara a obteno das finas sees da madeira no micrtomo a espessura ideal est! entre *<32; micrmetros. 6om relao ao uso do micrtomo, o corpo de prova deve estar bem fixo nas $arras do micrtomo para no movimentar3se durante o momento de atrito com a navalha. 5eve3se a ustar o &n$ulo para "ue a superf%cie transversal do corpo de prova este a paralela G face inferior da navalha. = &n$ulo de penetrao da navalha no corpo

de prova tambm deve ser a ustado. Escolhe3se a espessura das finas sees a serem obtidas (*< a 2; micrmetros+ e faz3se com "ue a navalha passe sobre a superf%cie do corpo sem hesitao. As sees devem ser colhidas com aux%lio de um pincel e depositadas em placa de Eetri com !$ua destilada.. As sees obtidas do micrtomo so removidas da superf%cie da navalha com o aux%lio de um pincel molhado e mantido abertas em placas de Eetri, umedecidas. Aliado ao uso do micrtomo, tambm utilizado nos laboratrios de anatomia da madeira, um afiador de navalha, para manter as navalhas sempre em boas condies de uso, afim de obter3se tambm, as finas sees de madeira. /m exemplo de um afiador de navalha, de uso manual, pode ser visto na )i$ura @.

)i$ura @ 3 Afiador manual de navalhas.

Mo2t*4 . d L5.%2*) P #.*2 2t ) Aps a obteno das finas sees de madeira, nos tr7s planos de observao, pode3se realizar a etapa se$uinte9 a monta$em de l&minas, "ue pode ser permanente ou tempor!ria. A monta$em de l&minas permanentes de madeira se$ue os se$uintes passos9 (*+ 5escolorao9 a descolorao do material utilizada para madeiras naturalmente muito escuras ou com muitas incrustaesB no entanto essa etapa recomendada mesmo para madeiras mais claras, para melhor resultado da colorao. Eara a descolorao da madeira utiliza3se uma soluo de !$ua sanit!ria (hipoclorito de sdio+ a H;R ou soluo de perxido de hidro$7nio. Eara obter uma reao mais r!pida de descolorao da madeira com o uso da !$ua sanit!ria, pode3se a"uecer a soluo por um curto per%odo de tempo. 5ecorrido o tempo da descolorao, as finas sees da madeira devem ser lavadas em !$ua destilada. (2+ 6olorao9 a fim de se obter uma melhor observao da madeira comum tin$ir as sees artificialmente. =s corantes t7m a funo de aumentar o contraste entre as diferentes estruturas celulares a fim de obter uma melhor observao da madeira a n%vel microscpico. Atualmente os corantes mais utilizados em anatomia de madeira so a safranina e o azul de Astra, devido esses dois corantes apresentarem maior afinidade com os principais componentes "u%micos da parede celular9 a celulose e a li$nina. 4e$undo 1ur$er e 0ichter (*MM*+, esses corantes podem ser preparados da se$uinte maneira,9

4afranina (soluo a"uosa a *R+9 * $ de safranina em *;; mF de !$ua destilada. A$itar bem. Azul de Astra (soluo a"uosa a *R+9 * $ de azul de Astra em *;; mF de !$ua destilada e mais tr7s $otas de !cido actico $lacial. A$itar bem.

=14 @9 =utro corante tambm pode ser utilizado em anatomia de madeira9 o safrablau, "ue consiste de uma soluo de N;R de azul de Astra e @;R de safranina. = tempo de colorao vari!vel, dependendo da madeira, variando de minutos a horas. 5ecorrido o tempo de colorao, as finas sees da madeira devem ser novamente lavadas em !$ua destilada. (@+ 5esidratao9 as finas sees devero sofrer desidratao, em se$uidas passa$ens, em !lcool et%lico a @;R, D;R, N;R, MDR e 2 vezes em !lcool absoluto, a cerca de *;;R. = tempo de passa$em deve ser de no m%nimo D minutos, afim de promover melhor desidratao da madeira. (<+ Eassa$em pelo acetato de butila9 aps a etapa de desidratao, as sees de madeira devem passar por uma soluo de acetato de butila, para a monta$em de l&minas permanentes. = acetato de butila mantm as finas sees de madeira desidratadas e estendidas, da mesma maneira "ue estavam durante o processo de desidratao, alm de ser um rea$ente compat%vel "uimicamente com os meios de monta$em mais utilizados. = acetato de butila utilizado atualmente nos procedimentos de monta$em de l&minas permanentes em substituio ao xilol, "ue nocivo a sa'de. (D+ .onta$em da l&mina permanente9 5epois da passa$em pelo acetato de butila, com o aux%lio de uma pina, cada corte de cada uma das tr7s sees dever! ser colocado sobre uma l&mina de vidro. As finas sees da madeira devero ser colocadas na l&mina de vidro, a partir do cdi$o de identificao, nesse sentido9 transversal, lon$itudinal tan$encial e por ultimo o lon$itudinal radial. Em se$uida, adicionar uma $ota do meio de monta$em (b!lsamo3do36anad!, Euparal, Entellan, permount etc.+ e colocar uma lam%nula sobre eles, de modo a evitar o sur$imento de bolhas de arB em se$uida, deixar secar e eti"uetar as l&minasB lo$o, estaro prontas para serem observadas ao microscpio. = meio de monta$em tem a funo de fixar as finas sees da madeira na l&mina de vidro, alm de dar a lon$evidade G l&mina permanente produzida. /m exemplo dos tr7s cortes corados da madeira pode ser vistos na )i$ura <.

)i$ura <3 Lma$ens dos planos anatmicos da seo transversal (A+, lon$itudinal tan$encial (1+ e lon$itudinal radial (6+ da madeira de Eucalyptus camaldulensis.

=14 <9 /ma l&mina permanente pode ser produzida com sees coradas e no coradas. Quando a l&mina feita com sees no coradas, se devem desconsiderar as etapas descolorao e colorao, iniciando3se a monta$em de l&minas permanentes a partir da etapa (@+ desidratao, se$uindo3se todas as etapas posteriores a monta$em de l&minas permanentes. Mo2t*4 . d L5.%2*) S .%-/ #.*2 2t ) 5ependendo do ob etivo do trabalho, pode3se montar uma l&mina semi3 permanente. #esse tipo de l&minas, caso se utilize sees coradas da madeira, devem3se fazer os procedimentos (*+ e (2+, descritos para a monta$em de l&minas permanentes. Aps a colorao do material, as l&minas so podem ser montadas, utilizando3se !$ua e $licerina na proporo *9* como meio de monta$em. #este tipo de l&mina, a lam%nula deve ser fixada sobre a l&mina de vidro atravs de um adesivo espec%fico. Essa l&mina tem durao mdia de dois meses a at al$uns anos. A l&mina semi3permanente tem as se$uintes vanta$ens em relao Gs l&minas permanentes9 menor consumo de rea$entes durante a sua produo, pois no se faz a desidratao da material e a passa$em do acetato de butilaB e tambm so l&minas de monta$em mais r!pida. 6omo desvanta$em no apresenta vida 'til to $rande "uanto Gs l&minas permanentes. A;*(%*78o <-*2t%t*t%;* d V*)o) R*%o) ,Co2"o#. ;%)to . *-(* /#0t%&*1= Al$umas medies anatmicas podem ser realizadas nos planos de observao da madeira, dentre elas o di&metro do lume e a fre"_7ncia de vasos, no plano transversal e a lar$ura e altura dos raios, no plano lon$itudinal tan$encial. Abaixo so mostradas al$umas dessas medies, conforme visto em aula pr!tica. *1 D%5. t#o do) V*)o) A medio realizada somente no lume dos vasos, sendo uma medida do seu di&metro tan$encial, conforme pode ser visto na )i$ura <. A LAWA 6ommittee (*MIM+ recomenda3se "ue devem ser medidos pelo menos 2D di&metros do lume dos vasos. /m exemplo de medio do di&metro do lume dos vasos pode ser visto na )i$ura D.

)i$ura D 3 Elano transversal da madeira de Eucalypus sp., onde se mediu o di&metro do lume de al$uns vasos. 1arra branca J *;; Km

31 F# >?@2&%* d V*)o) A fre"_7ncia de vasos $eralmente expressa em mil%metros "uadrados, sendo realizada a partir da conta$em de vasos presentes em uma ima$em de !rea conhecida. Abaixo se tem um exemplo9 As ima$ens visualizadas dos planos anatmicos da madeira observadas no softCare Axiovision, na ob etiva de DX, possuem uma !rea de cerca de <,N mm 2. )oram contados <2 vasos nessa ima$em, ento "uantos vasos tero em um mil%metro "uadrado` 4oluo9 )oram contados <2 vasos em uma ima$em "ue contem <,N mm 2, ento por re$ra de tr7s, obt7m o n'mero de vasos por mil%metro "uadrado. <2 vasos ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, <,N mm2 X vasos ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, *,; mm2
X = <2 * = I,Mvasos Z mm 2 <,N

Em * mil%metro "uadrado ter3se3! I,M vasosZmm2. &1 L*#4-#* A(t-#* do) R*%o)= [ realizada no plano lon$itudinal tan$encial, onde se pode medir a sua lar$ura ()i$ura H+ e a sua altura ()i$ura N+. =s resultados de lar$ura devem ser expressos em micrmetros e os de altura devem ser expressos em mil%metros.

)i$ura H 3 Elano lon$itudinal tan$encial da madeira de Eucalypus sp., onde se mediu o a lar$ura de al$uns raios. 1arra branca J D; Km

)i$ura N9 Elano lon$itudinal tan$encial da madeira de EucalYpus sp., onde se mediu o a altura de al$uns raios. 1arra branca J D; Km

=s resultados finais podem ser apresentados conforme modelo da Vabela *. Vabela *9 .odelo de apresentao das medies anatmicas de vasos e raios 8asos 0aios Estat%stica 5i&metro )re"_7ncia Far$ura Altura 32 do lume (Km+ (mm + (Km+ (mm+ .dia .aior valor observado .enor valor observado #'mero de observaes 5esvio padro 6oeficiente de variao

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