Centro de Sade e Tecnologia Rural Unidade Acadmica de Cincias Biolgicas Disciplina: Microbiologia Professora: Cyntia Helena

Relatrio de aula Pratica

Patos PB Julho de 2013

Diego dos Santos Alves Edneide Leite Lopes Elza Almeida Francione Gomes Silva Giselly Campos da Silva Havane Estefane Almeida Natlia Fernandes Arajo

Relatrio da Aula Prtica

Patos PB Julho de 2013

Introduo

As bactrias so os microorganismos mais simples morfologicamente, extremamente resistentes e com uma incrvel capacidade reprodutora. Ocorrendo no solo, na gua, em material em decomposio, em objetos e no interior e exterior de quase todos os seres vivos. Esses microorganismos so capazes de estabelecer com os seres vivos diversos tipos de relaes, sejam elas benficas ou malficas, vivendo em relao mutualista ou parasita, tornando-se patgeno ou no. As bactrias so diferenciadas pela sua morfologia, composio qumica, pelas suas necessidades nutricionais, por suas atividades bioqumicas e pela fonte de energia que utilizam. Apresentando-se de forma isolada ou em colnias globosas e filamentosas. Para se conhecer a diversidade de formas das bactrias, mtodos de coletas e de identificao das mesmas, realizou-se uma aula prtica nos dias 26 de junho e 03 de julhos de 2013, ministrada pela professora Cyntia Helena, no laboratrio de microbiologia da Unidade Acadmica de Cincias Biolgicas, Centro de Sade e Tecnologia Rural/ UFCG, Campus de Patos PB.

Material e Mtodos

A coleta foi realizada na torneira do banheiro masculino na central de aulas I, pelo horrio da noite. Para isto utilizou-se e swab embebido de gua destilada para facilitar a coleta dos microorganismos. Em seguida o material foi levado para o laboratrio de microbiologia da UFCG, para transferncia do material para uma placa de petri com Agar gelatinoso. Anotando na mesma o local da coleta. Para a transferncia a placa de petri deve ser aberta prxima a uma chama (Nosso caso uma lamparina), para evitar a contaminao do experimento pelo meio. Deve-se fazer uso da tcnica do esgotamento por estriaes (Figura 1), a fim de se ter colnias separadas. Aps isto a placa foi colocada na estufa numa temperatura entre 36 37 C para que os organismos pudessem crescer, o que leva cerca de 48 horas. No segundo momento da aula realizado no dia 03 de julho de 2013, destinado a identificao dos microorganismos coletados, Atravs de testes como o da Catalase e o da Colorao de Gram.

Para realizar os testes, foi utilizada a ala de platina para pegar as colnias que cresceram na placa de petri. Com o auxilio da lamparina esquenta a ala de platina a fim de esteriliz-la evitando a contaminao da amostra, em seguida esfriamos a ala de platina em um local do Agar que no tenha crescimento de colnias de bactrias, depois escolhe uma colnia que esteja mais separada das outras. O Primeiro Teste realizado foi o da catalase, onde em uma lamina foi colocado Perxido de Hidrognio (gua oxigenada) e em seguida uma amostra dos microorganismos. O segundo teste realizado foi o da colorao de Gram, para isso utilizou os seguintes corantes: Violeta Genciana Fenicada, Lugol de Gram, lcool Cetona de Gram, Fucsina Fenicada. Usou-se tambm pipetas, lamparina, laminas, ala de platina. Em uma lamina coloca-se uma gota de gua destilada, em seguida com o auxilio da ala de platina coleta-se uma colnia da placa de petri para realizar o esfregao, que ser posteriormente utilizado para o teste de colorao de Gram. J realizado o esfregao seca-se a lamina na lamparina, em seguida coloca-se a lamina em um suporte e seguimos as quatro etapas de colorao. Primeiramente banha-se a lamina com Violeta Genciana e deixa agir por um minuto, retirasse a substncia em gua corrente, logo aps aplicasse o Lugol que reage com o Violeta formando cristais. Em seguida o lcool Cetona aplicado por trinta segundos para romper a parede celular, por fim aplicasse a Fucsina por quarenta segundos para corar as bactrias que no foram coradas, novamente retirasse o excesso da Fucsina em gua corrente. Secasse a lamina na lamparina e a leva para o microscpio para visualizao e identificao da bactria tendo como auxilio o leo de imerso.

Resultados e discusses

A partir dos testes realizados e da observao da forma da bactria no microscpio, descobrimos que se tratava de um bacilo Gram negativo, catalase negativa, o teste da catalase utilizado para diferenciar estafilococos de estreptococos no influenciando muito em nossos resultados. Com o teste da Colorao de Gram, confirmamos que a bactria coletada trata-se de uma gram negativa, que apresentam uma parede celular com poucos peptidoglicanos, corando-se com o contra corante.

Ao consultarmos a literatura buscando conhecer os bacilos Gran negativos que podem ser encontrados em banheiros nos deparamos com uma diversidade enorme desses microorganismos, em um trabalho de PEIXOTO que analisou torneiras de banheiros de 10 shoppings na cidade de Curitiba encontrou em cerca de 43% delas a presena de bacilos Gram negativos, bactrias pertencentes ao grupos da enterobactrias. As enterobactrias podem possuir flagelos (peritrqueos- flagelos ao redor de toda a clula bacteriana). So anaerbios facultativos (crescem bem na ausncia de O2, mas crescem melhor na sua presena). Com algumas excees so catalase positivos e oxidase negativos (testes bioqumicos enzimticos). Fazem parte desse grupo de bactrias presentes nas fezes ou coliifformes fecais e que incluem as Escherichias, as Klebsiellas, as Critrobcter e Enterobacter . Embora a maioria tem uma boa adaptao para o meio externo de modo que uma contaminao, com por elas pode ter tido outra origem que no fecal. Sendo causadas principalmente as seguintes doenas por esses microorganismos Microrganismo Klebsiella pneumoniae Sndromes Pneumonia. Alm disso, infeces extrapulmonares, incluindo enterite e meningite (em lactentes), infeces urinrias (em crianas e adultos) e septicemia. Enterobacter Citrobacter Infeces urinrias, septicemia e bacteremias. Infeces do trato urinrio, meningite neonatal e abscessos cerebrais. Escherichia coli Diarria, infeco urinria, doena respiratria, pneumonia.

Muitas das enterobactrias fazem parte da flora normal do trato digestivo. Apresentam algumas espcies de vida livre, ocorrendo no solo e na gua. Sendo muitas de suas espcies patognicas.

Concluses

As endobacterias fazem parte da flora gastrointestinal de diversos animais sendo consideras em sua maioria patgenos causadores de doenas em seres humanos, como diarrias e outros tipos de infeces intestinais alem de infeces extra-intestinais e h bacilos que causaram episdios de peste. A presena de bacilos Gram Negativos na torneira do banheiro revela falha na higienizao do local, Indicando a necessidade de uma melhor higienizao do mesmo uma vez que tais microorganismos so patognicos causadores de doenas relacionadas ao trato intestinal.

Referencias

Enterobactrias. disponvel em: <http://www.caalunicamp.com.br/site/wpcontent/uploads/Resumos/Microbiologia/Bact erias/Felipe%20Franco%20XLVIII/Enterobacterias%20%20Felipe%20Franco%20XLVIII.pdf> acesso em 10/07/2012 as 13:00h

PEIXOTO, Janaina Carpelli; FONTORA-DA-SILVA, Srgio Eduardo. Contaminao por coliformes totais e fecais em torneira e vlvulas de descarga de banheiros pblicos localizados em shoppings centers de Curitiba, Estado do Paran, Brasil . Estud. Biol. 2007 jul/dez;29(68/69):307-312.

Anexos

Figura 1- local da coleta

Figura 2 Placas cultivadas

Figura 3 material usado no laboratrio