ADN Mitocondrial

Cundo se debe elegir el test del ADN mitocondrial? Este anlisis es el que debe elegirse cuando se quiere verificar un parentesco por va materna. Por ejemplo, puede utilizarse para comprobar si dos hermanos/as comparten la misma madre. Igualmente, tambin es til para verificar parentescos ms alejados (siempre que sean por va materna) y, en algunos casos, tambin puede utilizarse en las pruebas entre abuelas y nietos/as. Le recomendamos que contacte con nuestro equipo para asegurarse de que esta prueba es la adecuada en su caso. Qu es el ADN mitocondrial? Las clulas de todo ser humano contienen dos tipos de ADN: 1. 2. ADN nuclear ADN mitocondrial

El ADN nuclear se encuentra en el ncleo de las clulas y contiene todos los genes que nos hacen ser quienes somos. El ADN nuclear es el que utiliza la polica para obtener el perfil de una persona, y es tambin el que utilizan los laboratorios para realizar las pruebas de paternidad. El ADN mitocondrial es una cadena circular de ADN que se encuentra dentro de un orgnulo de la clula llamado mitocondria, que es el encargado de producir la energa para la clula. Los espermatozoides tienen mitocondrias en el flagelo o cola, pero no en la cabeza. En la fecundacin, es slo la cabeza del espermatozoide la que penetra en el vulo, mientras que el flagelo se separa y cae. Por tanto, el embrin slo recibe ADN mitocondrial de la madre, ya que los vulos s tienen mitocondrias. Por tanto, el anlisis del ADN mitocondrial sirve para verificar parentescos por va materna. Por ejemplo, si analizamos el ADN mitocondrial de dos supuestos hermanos/as, podremos concluir si comparten la misma lnea materna. Cmo se hereda el ADN mitocondrial? Ya que en todo vulo fecundado slo se encuentra el ADN mitocondrial de la madre, todos los hijos/as de una misma madre tendrn esta misma secuencia de ADN en sus clulas. Las hijas de una misma madre pasarn ese mismo ADN mitocondrial a sus descendientes, mientras que los hijos varones nunca pasarn su ADN mitocondrial a sus hijos/as.

En consecuencia, el anlisis del ADN mitocondrial es una manera muy precisa de verificar lazos biolgicos por lnea materna. El anlisis del ADN mitocondrial es tambin utilizado en la actualidad por laboratorios forenses para verificar la relacin biolgica de restos seos encontrados en zonas de conflictos blicos con posibles parientes an vivos.

REACCIN EN CADENA DE LA POLIMERASA "PCR"

El desarrollo de la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) en 1985 (SAIKI et al. 1985; MULLIS y FALOONA 1987) supuso una autntica revolucin dentro del campo del ADN antiguo, al posibilitar la obtencin de millones de copias a partir de cantidades nfimas y muy fragmentadas de DNA original. Podramos decir que la tcnica de la PCR permite seleccionar la regin del genoma que se desea estudiar y realizar mltiples copias de la misma. Para ello, se prepara una reaccin (mezcla de PCR o "mix") que contiene todos los elementos necesarios para producir una sntesis "in vitro" de ADN: - Tampn de PCR (PCR buffer). Contiene sales que estabilizan el pH de la reaccin. - Cloruro de Magnesio (MgCl2).Forma complejos solubles con los dNTPs para producir un substrato reconocible por la polimerasa. - Desoxinucletidos trifosfato (dNTPs: dATP, dTTP/dUTP, dCTP,dGTP). Constituyen el sustrato con el que la ADN polimerasa construye la nueva cadena de ADN. - Una pareja de cebadores ("primers"). Secuencias cortas de ADN complementarias a ambos extremos de la regin de ADN que se desea copiar. - Taq polimerasa. Enzima encargada del copiado de las cadenas a partir de los cebadores. Se trata de una DNA polimerasa purificada de la bacteria termfila "Thermus aquaticus", y que por lo tanto es estable a temperaturas superiores a los 90C. Una vez preparada la reaccin de PCR y aadido el ADN que se desea copiar, sta se somete a varios ciclos en los que se vara la temperatura. Cada uno de dichos ciclos consta normalmente de tres pasos a diferentes temperaturas: 94C- Fase de desnaturalizacin. Se produce la separacin de las dos hebras del ADN. 50-60C- Fase de anillamiento (annealing). Se produce la unin de los cebadores a la hebra correspondiente de ADN. 72C- Fase de extensin. La ADN polimerasa comienza a aadir nucletidos por el extremo 3' de cada uno de los cebadores de amplificacin, reproduciendo la secuencia del ADN molde.

MARCADORES M0LECULARES

ADN mitocondrial El ADN mitocondrial (mtDNA) es un material gentico circular cerrado de doble cadena que se localiza en el interior de las mitocondrias celulares.

El ADN mitocondrial se hereda por va materna, es decir, aunque tanto hombres como mujeres tienen ADN mitocondrial, nicamente stas ltimas lo transmiten a su descendencia. Ello se debe a que durante la fecundacin es el vulo el que aporta el citoplasma al zigoto, y es en el citoplasma dnde se localizan las

mitocondrias. El genoma mitocondrial consta de aproximadamente 16500 pares de bases (p.b.), y codifica para una pequea fraccin de las protenas mitocondriales. El mtDNA contiene informacin de 38 genes: 2rRNA (12S y 16S), 22tRNA y 13 genes estructurales, los cuales codifican diferentes subunidades de los complejos enzimticos del sistema de fosforilacin oxidativa. La regin mayor no codificante, conocida como regin control o D-Loop, ocupa 1122 pares de bases. Esta regin destaca por su elevada tasa de mutacin y por ser muy variable entre las diferentes poblaciones. La variabilidad en la regin control se concentra bsicamente en tres regiones o segmentos hipervariables: - HVSI (posiciones 16024-16365) - HVSII (posiciones 73-340) - HVSIII (posiciones 438-574) De las tres, la ms polimrfica es la HVSI, por lo que es la que se analiza principalmente en estudios de Antropologa, Gentica de Poblaciones y Medicina Forense. El estudio del ADN mitocondrial resulta especialmente recomendado cuando se trabaja con muestras muy degradadas, como es de esperar en ADN antiguo. Se calcula que una clula puede contener hasta un centenar de mitocondrias, y que dentro de cada mitocondria coexisten entre 1000 y 10000 copias de ADN mitocondrial. Este elevado nmero de molculas de ADN mitocondrial en la clula hace que su recuperacin en aquellos casos en los que el ADN de partida es muy escaso o est muy degradado, sea mucho ms eficiente que, por ejemplo, la de ADN nuclear o autosmico.

Cromosoma Y En la especie humana, el sexo viene determinado por el tipo de cromosomas sexuales presentes en las clulas (cromosomas X e Y). As, el sexo femenino viene definido por dos cromosomas X (XX) y el masculino por un cromosoma X y un cromosoma Y (XY). A excepcin de dos pequeas regiones situadas en los extremos en las que existe cierto grado de recombinacin con el cromosoma X, el cromosoma Y se transmite como una unidad ntegra de padres a hijos varones. Esta caracterstica hace que, al igual que el ADN mitocondrial para las mujeres, pueda seguirse una determinada variante o haplotipo en sucesivas generaciones. El Cromosoma Y se analiza de forma rutinaria en el campo de la Gentica de Poblaciones y la Gentica Forense. Sin embargo, su empleo en estudios de ADN antiguo es todava muy restringido por motivos tcnicos que tienen que ver con su escasez, dado que nicamente existe una copia de cromosoma Y por clula.

Marcadores autosmicos Como autosomas se conocen todos los cromosomas excepto los cromosomas sexuales: X e Y. El estudio de marcadores autosmicos se emplea esencialmente en el campo de la Gentica Forense con fines identificativos, dada su elevada variabilidad. En el caso del ADN antiguo, tal y como suceda con el Cromosoma Y, la escasez de este tipo de material gentico hace en muchos casos inviable su anlisis. Sin embargo existen excepciones, y en algunos casos ha sido posible recuperar informacin de este tipo de restos antiguos procedentes de entornos fros.