PRUEBA DE CATALASA La catalasa es una enzima que poseen la mayora de las bacterias aerobias.

Descomponen el perxido de hidrogeno en agua y oxigeno, desprendiendo burbujas procedentes del oxgeno. Entre las bacterias con catalasa positiva tenemos: Staphylococcus, Escherichia coli, Pseudomonas. Materiales y Reactivos H2O2 Cultivos. Asas e hilos de siembra. Pipetas Pasteur.

Mtodo 1. Colocar una gota de agua oxigenada sobre un portaobjetos con ayuda de una pipeta Pasteur. 2. Suspender la bacteria. 3. Detectar la formacin de burbujas. Catalasa positivo: Se produce la aparicin de burbujas que corresponde a la liberacin de oxgeno, lo que indica que la bacteria tiene la enzima catalasa. Catalasa negativo: No se producen burbujas por tanto la bacteria no posee dicho enzima. Streptococcus. PRUEBA DE LA COAGULASA Introduccin El gnero Staphylococcus son cocos gran positivos en forma de racimo. Estos crecen fcilmente en casi todos los medios bacteriolgicos, son anaerobios facultativos, este producen catalasa, lo que los diferencia de los estreptococos. Tiene importancia mdica principalmente el S. aureus que produce endocarditis bacteriana por lo que es de gran importancia la prueba de la coagulasa para su diferenciacin. Materiales Portaobjetos Aplicadores de madera Tubos de ensayo Pipetas pasteur Reactivos

Asa bacteriolgica Perxido de hidrgeno Agua destilada Solucin salina Plasma humano Cultivo de S. Mechero Bunsen

Marco terico La coagulasa es una protena producida por varios microorganismos, esta reacciona con la protrombina en la sangre. El complejo resultante se llama estafilotrombina, y permite que la enzima proteasa convierta el fibringeno en fibrina lo que da como resultado la formacin del coagulo. La prueba de la coagulasa se usa para diferenciar el Staphylococcus aureus de otros coagulase-negative. S.aureus produce 2 formas de coagualasa (por ejemplo, coagulasa ligada y coagulasa libre). La coagulasa ligada tambin conocida como "factor de Clumping " se puede detectar mediante la realizacin de una prueba de portaobjetos y la coagulasa libre con una prueba de coagulasa de tubo La coagulasa se puede encontrar en dos formas: libre y unida (ligada a la pared bacteriana). Coagulasa ligada se detecta por la Prueba en portaobjetos. Se encuentra en la superficie de las paredes celulares. Los hilos de fibrina formados entre las clulas bacterianas suspendidas en el plasma, son los que provocan su aglutinacin en forma de grumos visibles. Coagulasa libre se detecta por la Prueba en tubo. La coagulasa libre extracelular reacciona con el factor de reaccin de la coagulasa (CRF) para formar un complejo de coagulasa-CFR, una sustancia similar pero no idntica a la trombina este complejo que reacciona con el fibringeno para producir el coagulo de fibrina Bacterias dan positivo a la prueba Staphylococcus aureus: Positiva a coagulasa Componentes del reactivo : Plasma o fibringeno Plasma: recomendado de humano o conejo, alternativas: equino u ovino Fibringeno estril y fresco Procedimiento Prueba en portaobjetos (coagulasa fija):

1.- Coloca una gota de agua destilada o solucin salina sobre un portaobjetos. 2.- Emulsionar una pequea cantidad de colonias de un cultivo en placa utilizando un asa o una varilla. 3.- Coloca una gota del plasma junto a la gota de la suspensin bacteriana. Mezclarlas bien. 4.- Rotar el portaobjetos, observar la aglutinacin en suspensin. Prueba en tubos (coagulasa libre): 1.- Colocar 0.5 ml de plasma en el fondo de un tubo estril 2.- Aadir una pequea cantidad de colonias del cultivo. 3.- Mezclar por rotacin suave del tubo, evitando remover o agitar el contenido 4.- Incubar el tubo a 35C durante 4 horas y observar la formacin de un coagulo visible. Interpretacin Prueba en portaobjetos (coagulasa fija): Una reaccin positiva se detecta usualmente en 15 a 20segundos por la aparicin de un precipitado granular o la formacin de grumos blancos. La prueba se considera negativa si no se observa aglutinacin en 2 o 3minutos. Prueba en tubos (coagulasa libre): La reaccin se considera positiva ante cualquier grado de coagulacin visible dentro del tubo. La reaccin se observa mejor inclinando el tubo. Los tubos se leen hasta 4 horas pero no se da un resultado como negativo hasta que no haya transcurrido las 24 horas Referencias bibliogrficas Jean F. MacFaddin. PRUEBAS BIOQUMICAS PARA LA IDENTIFICACIN DE BACTERIAS DE IMPORTANCIA CLNICA. Editorial Panamericana. Tercera Edicin. Ao 2003. Pg. 98 112 Bailey & Scott DIAGNOSTICO MICROBIOLGICO. . Editorial Panamericana 12a Edicin. Ao 2009. Pg. 223 PESANTES ALMEIDA, Carmen. MDULO DE BACTERIOLOGA. Universidad de Guayaquil / Instituto Nacional de Higiene / Programa Microbiologa Avanzada. Ao 2010. http://es.scribd.com/doc/20703864/16/Prueba-en-portaobjetos-coagulasa-fija