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IDENTIFICACION Y RECONOCIMIENTO DE LAS CARACTERISTICAS

PRESENTES EN AMINOACIDOS Y PROTEINAS POR MEDIO PRUEBAS CON


DIFERENTES REACTIVOS
Cristina Erazo
1
Jorge Garzn
2
Lorena Matabanchoy
1

1
Estudiante de tercer semestre del programa de ingeniera Agroindustrial de la universidad de
Nario, pasto (Colombia)
2
Estudiante de quinto semestre del programa de ingeniera Agroindustrial de la universidad de
Nario, pasto (Colombia)

RESUMEN: la prctica realizada en laboratorio es con el fin de reconocer y
diferenciar caractersticas de protenas y aminocidos, para lo cual se llevaron a
cabo diferentes pruebas. La primera reaccin fue la de la ninhidrina prueba
utilizada en el reconocimiento de aminocidos y protenas, da negativa en la
prolina por ser un iminoacido. Una segunda reaccin xantoproteica, ayuda a
identificar las sustancias que presentan un anillo aromtico. Se realiz la reaccin
de biuret llevada a cabo para identificacin de la sustancias con presencia de
enlaces peptdicos, positiva para las protenas dando una coloracin violeta-
rosado en la solucin. Otra de la reaccin realizada de aminocidos azufrados
muy til para reconocer aminocidos y protenas que tengan azufre en su
composicin, la prueba fue positiva con la presencia de un precipitado de color
caf. Reaccin del milln, fue una reaccin que dio positiva para la tirosina, ya que
la prueba es til para la identificacin de la presencia del grupo fenlico en la
tirosina. Se llev acabo la reaccin de Hopkins Cole con la que se puede distinguir
protenas donde se encuentre presente el triptfano, observndose luego de la
reaccin la formacin de un anillo violeta en la interface de la solucin. Una ltima
prueba fue la desnaturalizacin de protenas realizada para la protena albumina

INTRODUCCIN
Todos los aminocidos comparten
una estructura qumica comn. Un
grupo de amino (representado
qumicamente como NH2) est unido
a un tomo de carbono (el carbono
central o alfa) que despus se une a
otro tomo de carbono. ste se
encuentra en la forma de cido
carboxlico (abreviatura qumica
COOH). El grupo de amino y el grupo
de cido carboxlico tienen una
participacin crucial en los enlaces
que se forman entre los aminocidos
cuando se sintetizan las protenas.
[1]

Las protenas estn constituidas por
diferentes grupos de aminocidos con
la presencia de diferentes grupos R,
lo que les confiere la capacidad de
reaccin con determinados agentes,
esto es significativo para el
reconocimiento de aminocidos
presentes en las protenas de
determinadas muestras a analizar,
para ello se utilizan reacciones o
pruebas de caracterizacin (pruebas
coloreadas) como la ninhidrina
,reacciona con los aminocidos y
protenas, dando la coloracin azul
violeta o amarillo como es el caso de
la prolina e hidroxiprolina. Otra
reaccin utilizada es la Reaccin
Xantoproteica, emplea el cido
ntrico concentrado. La prueba da
resultado positivo en aquellas
protenas
con aminocidos portadores de
grupos aromticos, especialmente en
presencia de tirosina. Si una vez
realizada la prueba se neutraliza con
un lcali, se torna color amarillo
oscuro.
[2]

Reaccin de Biuret reaccin
coloreada para identificar enlaces
tripeptidos en adelante. Las
protenas por sus uniones peptdicas
reaccionan con los iones cpricos del
reactivo en medio alcalino formando
un complejo de color violeta. Un
color violeta resulta cuando los
iones cpricos en medio alcalino se
compleja con los electrones no
saturados de los tomos de nitrgeno
y oxgeno de los enlaces de todas las
protenas. La cantidad de color
producido es proporcional a la
concentracin de protenas.
Reaccin de los aminocidos
azufrados: evidenciada en la
formacin de un precipitado negro
correspondiente al sulfuro de plomo.
La reaccin del milln concerniente
a la presencia de grupos fenlicos
que dan lugar a una coloracin
rosada. La reaccin de Hopkins
Cole, para las protenas que
contienen triptfano la formacin de
Un anillo entre violeta y rojo indica
que la reaccin es positiva. Por
ltimo se analiza La
desnaturalizacin de protenas o
prdida de las estructuras de orden
superior se debe a factores que
modifican la interaccin la protena
con el disolvente, disminuyendo su
estabilidad en disolucin provocando
la precipitacin y perdida de su
funcin biolgica (cuando estn
desnaturalizadas).
METODOLOGIA:
En el laboratorio de reconocimiento
de aminocidos y protenas, todas las
reacciones trabajadas se
desarrollaron en tubos de ensayo.
Reaccin de la ninhidrina, para
dicha tare fueron utilizadas las
sustancias aminocidos y protenas:
glicina, metionina, prolina, albumina y
muestra biolgica, que fue utiliza la
leche, esta fue para todas las
pruebas escogida por su alto
contenido en protenas (Casena,
Beta-lactoglobulina Alfa-
lactoalbmina Lactoferrina,
Lactoperoxidasa, Inmunoglobulinas,
Lisozima
[5])

El proceso de la reaccin con la
ninhidrina con cada sustancia se llev
acabo conforme se estipulaba en la
gua de laboratorio. Finalmente se
procedi a observar y detallar las
coloraciones presentadas y se
registraron los resultados.

La siguiente reaccin a realizar fue la
de la Xantoproteica, utilizando
solucin albumina, leche, glicina,
triptfano, fenilalanina y tirosina;
como reactivo se utiliz HNO3
concentrado, se desarroll la prctica
conforme a lo dicho en la gua. Por
ltimo se procedi a observar los
resultados.

Para la Reaccin de Biuret se
utilizaron albmina de huevo, glicina,
alanina y leche como reactivo se
aadi solucin de hidrxido sdico al
20%, posteriormente se aadi gotas
de solucin de sulfato cprico diluida
al 1%. Esperando obtener una
coloracin violeta-roscea
caracterstica.

Reaccin de los aminocidos
azufrados los aminocidos y
protenas utilizadas fueron: albmina
de huevo, glicina, cistena,
metionina y leche. El reactivo
utilizado fue solucin de hidrxido
sdico al 20%, gotas de solucin de
acetato de plomo al 5%. Luego se
calent el tubo hasta la ebullicin.
Se esper a que se forme un
precipitado de color negruzco lo que
indico que se form sulfuro de plomo,
utilizando el azufre de los
aminocidos, lo que es til para
identificar protenas que tienen en su
composicin aminocidos con azufre.

En la Reaccin de Milln se trabaj
con las soluciones albmina de
huevo, glicina, tirosina y leche. Y se
realiz los pasos descritos en la gua
de laboratorio. Por ltimo se debe
observar una coloracin roja lo cual
indica la presencia de tirosina.


En cuanto a la Reaccin de Hopkins
Cole, las sustancias utilizadas fueron:
albmina, huevo, triptfano, glicina y
leche. A las soluciones se adiciono el
reactivo de Hopkins Cole, despus se
adiciono a cada tubo por las paredes
cuidadosamente, sin mezclar 1 mL de
cido sulfrico concentrado. Al
formarse un anillo violeta en la
interfase da como resultado que es
prueba positiva con presencia del
triptfano en las protenas o
aminoacidos.

Y finalmente el ltimo procedimiento
a realizar fue la Desnaturalizacin
de Protenas, para el cual se utiliz
la protena albumina presente en la
clara de huevo. Se desarroll lo
estipulado en la gua.

ANALISIS Y RESULTADOS:
1. Reaccin ninhidrina.
Esta prctica realizada es usualmente
utilizada para la determinacin de la
presencia de aminocidos y
protenas.
Se obtuvieron como resultados al
adicionar ninhidrina a cinco diferentes
sustancias (aminocidos y protenas)
la presencia de una coloracin en las
sustancias, siendo los siguientes:
Albumina: color azul oscuro.
Glicina: azul oscuro.
Metionina: azul oscuro.
Muestra orgnica (leche): azul oscuro
coagulado.
Prolina: amarillo.
La ninhidrina reacciona con los
aminocidos y protenas, dando la
coloracin azul violeta; con la prolina
fue diferente dando una coloracin
amarilla, ya que la prolina no es un
aminocido como tal sino un
iminoacido.
la ninhidrina es un agente oxidante
poderoso y lleva acabo la
deaminacion oxidativa de los grupos
alfa-mino, liberando amoniaco,
bixido de carbono, y el
correspondiente aldehdo, as como
la forma reducida de ninihdrina. El
amoniaco entonces reacciona con un
mol adicional de ninhidrina oxidada y
un mol de ninihidrina reducida para
dar una coloracin azul violeta.
[3]

La reaccin general de la ninhidrina
con aminocidos es la siguiente:


2. Reaccin xantoproteica.
Esta prueba es utilizada para la
identificacin de la presencia de
grupos bencnicos, en aminocidos
como en las protenas. Su presencia
es identificada por que luego de
llevarse a cabo la reaccin de
xantoproteica se observa la solucin
de color anaranjado.
Los resultados obtenidos en las
soluciones luego de la reaccin:
Albumina: color anaranjado.
Glicina: no hay coloracin es una
solucin trasparente.
Triptfano: color anaranjado oscuro.
Fenilalanina: en el momento de
realizarse la reaccin xantoproteica
no hay coloracin en la solucin, se
adiciono cido sulfrico con el cual si
se observa un cambio de coloracin a
un color amarillento-anaranjado.
Tirosina: coloracin verde amarillenta
Leche: color anaranjado amarillento.
La prueba es positiva en la albumina,
triptfano, tirosina y leche se debe a
que esos aminocidos y protenas
llevan en su estructura grupos
bencnicos. En la fenilalanina
tambin hay una prueba positiva pero
en condiciones ms fuertes, con la
adicin de un cido ms fuerte como
el cido sulfrico.

Fenilalanina

Tirosina

Triptfano
La reaccin con glicina no se observa
el precipitado de color naranja, ya
que no presenta en su estructura
grupos bencnicos.

Glicina
La reaccin xantoproteica cosiste en
la reaccin de aminocidos o
protenas, con cido ntrico
concentrado para identificar que
estn presenten en su estructura
grupos bencnicos. El anillo es el
que reacciona con el cido ntrico y
produce un sedimento de color
amarillo intenso, a esta reaccin se le
conoce como prueba
xantocromica. La adicin de base
fuerte hace que el color se torne ms
oscuro hacia anaranjado. La reaccin
llevada a cabo es la siguiente:



La reaccin xantoproteica se puede
considerar como una sustitucin
electrofilia aromtica de los residuos
de aminocidos de las protenas por
el cido ntrico dando un compuesto
coloreado amarillo a pH acido.
[4]


3. Reaccin de Biuret.
En esta prueba se realiz con cuatro
sustancias, entre ellas aminocidos y
protenas. En ella se pretenda
determinar la presencia del enlace
peptdico (-CO-NH-) que se destruye
al liberarse los aminocidos. Da
positiva esta reaccin en todos los
compuestos que tengan dos o ms
enlaces peptdicos consecutivos en
sus molculas, que al momento de
reaccin presentan una coloracin
violeta, esto se da para las protenas.
En los aminocidos la prueba es
negativa debido a la no presencia de
enlaces peptdicos, y en ellos se
observa precipitado de color amarillo.
Las sustancias trabajadas en
laboratorio fueron:
Glicina y alanina: dan prueba
negativa presentando un precipitado
amarillo, por lo que son aminocidos.
Albumina y leche: dan la coloracin
violeta indicando una prueba positiva,
ya que la albumina es una protena
(presente en los huevos), y la leche
est compuesta de diferentes
protenas (Caseina, Beta-
lactoglobulina Alfa-lactoalbmina
Lactoferrina, Lactoperoxidasa,
Inmunoglobulinas, Lisozima
[5])

En los aminocidos la prueba es
negativa como en el caso de la glicina
y la alanina, debido a que ellos no
presentan enlaces peptdicos,
mientras que las protenas son
conformaciones de aminocidos o
restos de ellos; que estn unidos por
medio de enlaces
peptdicos(albumina y leche).
En soluciones alcalinas Cu
+2
se
compleja con las uniones de pptidos
de protenas resultando en la
formacin de un color morado. La
intensidad del color es proporcin a la
concentracin de protenas. Este
mtodo es generalmente aplicable
porque el nmero de enlaces
peptdicos por unidad de peso para
todas las protenas es casi el mismo.
Las sustancias que dan el color
violeta tienen dos grupos -CONH2
unidos directamente o por un carbono
o nitrgeno. Los compuestos que
contienen -CH2NH2, -C(NH)NH2 Y -
CSNH2 en lugar de los grupos -
CONHH2. Las estructuras peptdicas
se encuentran en protenas y sus
derivados contienen enlaces
peptdicos tambin dan positivo para
la prueba de Buiret.
[6]


la reaccion general es:


4. Reaccin de los
aminocidos azufrados
En la reaccin se obtuvieron los
siguientes resultados:
Sustancia Precipitado
de sulfato
de plomo
Albmina de
huevo
Si
Cistena Si
Metionina Si
Muestra biolgica Si
(leche)
Glicina No

La reaccin de los aminocidos
azufrados se evidencia en la
formacin de un precipitado negro,
sulfuro de plomo, correspondiente a
la reaccion entre azufre de la
protena (separado mediante un
lcali) y la solucin de acetato de
plomo.

Los resultados obtenidos para cada
uno de los tubos de ensayo fue la
presencia de un precipitado de sulfato
de plomo lo que evidencia la
presencia de protenas que contienen
aminocidos con azufre en su
estructura, la albumina de huevo es
rica en cistena, contienen azufre en
los aminocidos. Para la cistena al
ser un aminocido con el grupo tiol,
contiene azufre el que puede
reaccionar y formar el precipitado
negro de sulfuro de plomo. En la
muestra biolgica se utiliz la leche la
cual presenta lacto albmina. Es
una protena soluble, rica
en aminocidos azufrados. La
metionina es un aminocido que
contiene azufre en medio de la
cadena carbonada Glicina no
presenta una prueba positiva por lo
que no tiene presencia de azufre en
su estructura

5. Reactivo del milln:
En la prueba realizada se obtuvieron
los siguientes resultados:
Sustancia Color Prueba
del
milln
Tirosina Rojo Positivo
Albumina
de huevo
Tono blanco
con
Cogulos
amarillos
Negativo
Glicina Transparente Negativo
Muestra
biolgica
Tono caf
claro y
presencia de
costras
Negativo

El reactivo de Milln se prepara
disolviendo una parte
de mercurio (Hg) en una parte
de cido ntrico (HNO
3
). De esta
forma, la presencia de cantidades
relativamente altas de mercurio
conduce a la formacin de Nitrato de
mercurio (I) Hg
2
(NO
3
)
2
el cual en un
medio fuertemente cido reacciona
con el grupo -OH de la tirosina
produciendo una coloracin roja
caracterstica.
[7]

La reaccin del milln se debe a la
presencia de grupos fenlicos, la
tirosina presente en algunas
protenas tiene el grupo fenlico, de
esta manera solo las protenas que
tienen este aminocido entregan
resultados positivos (un color rosado).
El resultados obtenido para la
albumina fue un color amarillo, el
reactivo del milln no actu sobre la
albumina por lo cual el resultado fue
negativo. El resultado para la glicina
tambin fue negativo debido a que no
tiene grupos fenoles en su estructura
para reaccionar. En la muestra
biolgica se utiliz leche, aunque esta
presenta una pequea cantidad del
aminocido tirosina (143mg de
tirosina por 100g de leche entera)
[8]
,
el color obtenido en la reaccin fue
caf muy claro por lo que la prueba
fue negativa. De la tirosina se obtiene
una prueba positiva, lo cual indica
que contiene aminocidos con grupos
fenoles es su estructura.

Imagen
(http://www.scuolaitaliana.edu.uy/imgscuola/reaccio
nes.pdf)



6. Reaccin de Hopkins Cole:

La reaccin de Hopkins Cole, es una
prueba estndar para el triptfano y
para las protenas que contienen
triptfano. La solucin que se va a
examinar se mezcla con cido
glioxlico y se agrega cido
sulfrico concentrado. Un anillo entre
violeta y rojo en la unin de los dos
lquidos indica que la reaccin es
positiva.
[9]


Sustancia Reaccin de
Hopkins cole
Triptfano Prueba
positiva.
Sustancia
orgnica
(leche )
Prueba
positiva.
Albumina Prueba
positiva.
Glicina Prueba
negativa.

La reaccin para el triptfano exhibe
la forma de un anillo violeta al fondo
del tubo representando una prueba
positiva, para la sustancia orgnica
(leche) se observa la formacin de un
anillo violeta en la parte intermedia lo
que representa una prueba positiva,
ocasionado por las protenas con
triptfano de la leche. La prueba para
la albumina tambin resulto positiva a
diferencia de la glicina que arroja
resultados negativos al ser un
aminocido deferente al triptfano.


Reaccin de la prueba de Hopkins-Cole

http://webdelprofesor.ula.ve/farmacia/gmendez/manu
ales%20PDF/EXPERIMENTO%202%20IDENT%20AA%
2006-04.pdf



7. Desnaturalizacin de
Protenas

Luego de realizar el procedimiento de
desnaturalizacin se observa la
formacin de cogulos blancos
El cido actico es capaz de producir
la desnaturalizacin de las protenas

Las cadenas de protenas que hay en
la clara de huevo se encuentran
enrolladas adoptando forma esfrica,
se denominan protenas globulares al
agregar el cido actico las cadenas
de las protenas se desenrollan y
formen enlaces que unen unas
cadenas con otras. El cido actico
es capaz de producir la
desnaturalizacin de las protenas.

Desnaturalizacin. Es la prdida o
destruccin de la estructura terciaria
de una protena, en la que la protena
pasa de una forma plegada o
enroscada a una forma desenroscada
o desplegada. La hlice alfa se estira
o despliega, por rompimiento de
enlaces de hidrgeno. En la protena
desnaturalizada ocurren cambios
estructurales que afectan sus
propiedades biolgicas, como la
hormonal, enzimticas y la actividad
inmunolgica. Se produce una
prdida de solubilidad, ya que se
exponen grupos hidrofbicos que
hacen insoluble la protena. La
desnaturalizacin es generalmente un
proceso irreversible, fuertemente
endotrmico, que produce un
aumento de la entropa o desorden
del sistema.
Los principales agentes
desnaturalizantes son: Altas
temperaturas, provocan la
coagulacin, y Cambios bruscos de
pH.
[10]








CONCLUCIONES
- Las pruebas realizadas en el
laboratorio de reconocimiento
de protenas y aminocidos,
permiten reconocer a los
anteriores en laboratorio por
pruebas que los caracterizan
especficamente a ellos. Por lo
cual estas pruebas ayudan en
la identificacin de
aminocidos o protenas con
ciertas caractersticas, en
muestras biolgicas.

- Las protenas son
conformaciones de
aminocidos unidos por
enlaces peptdicos, lo que
hace que entre aminocidos y
protenas hallan semejanzas
como diferencias, estas se
pueden observar en las
reacciones realizadas en
laboratorio. Como en la prueba
de observar la presencia de
enlaces peptdicos solo es
positiva en las protenas;
mientras que en la prueba de
detectar los grupos bencnicos
se pueden encontrar pruebas
positivas y negativas en
protenas como en
aminocidos.



REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
[1]http://proteinas.org.es/proteinas-
aminoacidos
[2]http://es.wikipedia.org/wiki/Reacci
%C3%B3n_xantoproteica

[3]Prcticas de Bioqumica
Descriptiva
Escrito por Eva Irma Vjar Rivera
pg 166-167
[4]http://quimicadesexto2012.blogspot
.com/2012/06/informe-de-la-
experiencia.html
[5]http://www.pulevasalud.com/ps/con
tenido.jsp?ID=12706&TIPO_CONTE
NIDO=Articulo&ID_CATEGORIA=59&
ABRIR_SECCION=2&RUTA=1-2-45-
59
[6]http://es.scribd.com/doc/62055042/
Reaccion-de-Biuret
[7]http://es.wikipedia.org/wiki/Reactivo
_de_Millon
[8]http://alimentos.org.es/aminoacidos
-leche-entera-vaca
[9]https://www.google.com.co/search?
q=prueba+de+hopkins-
cole&oq=prueba+de++hop&aqs=chro
me.1.69i57j0l5.11705j0j7&sourceid=c
hrome&espv=210&es_sm=122&ie=U
TF-8
[10]http://www.forest.ula.ve/~rubenhg/
proteinas/

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