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HIDRLISIS ENZIMTICA DE TRIACILGLICRIDOS POR ACCIN DE LA LIPASA

PANCRETICA

INTRODUCCIN:

Los lpidos con excepcin de las vitaminas liposoluble y los cidos grasos insaturados, son aparentemente no
esenciales en la dieta de la mayora de los animales, sin embargo, estos constituyen la fuente mas concentrada de
energa del organismo, produciendo dos veces ms kilojoule por gramo que los carbohidratos y las protenas.
Los lpidos son esencialmente insolubles en agua, por lo que su hidrlisis enzimtica ocurrir solo en interfase
lpido agua y la velocidad de hidrlisis aumentar al aumentar el rea de interfase. En los mamferos la bilis
permite la formacin de esta emulsin, actuando como agentes emulsificantes principalmente los cidos
tauroclico y glicoclico , los cuales se encuentran ionizados al pH alcalino del jugo pancretico, facilitando
por tato la liplisis. En la prctica como agente emulsionante se utilizar el colato de sodio.

La enzima ms importante en el proceso de liplisis en los mamferos es la lipasa pancretica, cuya accin
estudiaremos, utiliza como sustrato los triacilglicridos emulsificados, los cuales hidrolizan principalmente las
posiciones y dando lugar a diacilglicridos, que son a su vez hidrolizados principalmente a -
monoacilglicridos y cidos grasos. La reaccin catalizada se presenta en la figura 25.

La actividad de la enzima se ve incrementada en un rango de pH de 8-9. los triacilglicridos hidrolizados por la
enzima pueden contener cidos grasos entre 12 y 18 tomos de carbono.

El Ca
+2
aumenta la velocidad de reaccin, principalmente debido a que forma jabones insolubles en los cidos
grasos liberados, lo que evita su accin inhibitoria sobre la enzima, desplazando el equilibrio de la reaccin en
sentido de la hidrlisis, impidiendo la resntesis de los acilglicridos.

El objetivo de la prctica es comprobar la accin enzimtica de la lipasa pancretica sobre los triacilglicridos,
analizando los productos de la accin de la enzima a travs del tiempo por medio de una cromatografa sobre
silica gel, aprovechando las diferencias en polaridad de los diferentes acilglicridos y los cidos grasos.

EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS:

Reactivos
Emulsin de triacilglicridos (48 mL de Tris-HCl 1M pH 8; 12 mL de bilis; 4,8 mL de CaCl2 al 25% y 6 g. de
aceite vegetal o animal).
Solucin de fenolftalena al 1%
Solucin de pancreatina.(5 g. de pancreatina en 5 mL de solucin Tris-HCl 1M pH 8 y aada 100 ml de agua
destilada).
Solvente cromatogrfico (ter de petrleo, ter etlico, cido actico glacial) 89:10:1
HCl 2 M
NaOH 4 M
Cloroformo
Na
2
SO
4
anhidro
Solucin reveladora de cido fosfomolbdico al 10% en etanol de 95%

Materiales
Micropipetas
Cmara cromatogrfica
Placa fina de slica gel G (20 x 20 cm)
Erlenmeyer con tapas
Pipetas
Agitador de vidrio
Tubos de ensayo
2
Probetas
Pipetas Pasteur
Atomizador

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:

1. En un Erlenmeyer con tapa de 100 mL, coloque 10 mL de emulsin de triacilglicridos y aada dos o tres
gotas de fenolftalena al 1%, agite continuamente y equilibre en el bao mara a 40 C.
2. Prepare 5 tubos de ensayo con 1 mL de HCl 2 M cada uno y rotlelo del 1 al 5 para los tiempos 0; 10; 20; 40
y 60 min.
3. Aada a la emulsin 3 mL de la solucin de pancreatina y extraiga inmediatamente una alcuota de 1 mL
aadindola al tubo nmero 1 con HCl 2 M.
4. Contine agitando ininterrumpidamente, si el pH baja, aada NaOH 4 M hasta que la emulsin de nuevo est
roja magenta. Tenga cuidado durante la agitacin en el bao no se rompan los erlenmyers.
5. Extraiga alcuotas de 1 mL a los tiempos 10; 20; 40 y 60 min y colquelos en los correspondientes tubos de
ensayo con HCl 2 M.
6. Una vez terminado este proceso aada a cada alcuota 2 mL de ter etlico, agite, separe la capa etrea a otro
tubo de ensayo, aada la punta de una esptula de Na
2
SO
4
anhidro y evapore a sequedad el residuo etreo.
7. Disuelva el residuo seco en 0,5 mL de cloroformo y aplique 20 L del extracto clorofrmico de cada
alcuota en una placa activada de slica gel. Coloque la placa en la cmara cromatogrfica y deje correr el
solvente hasta unos 16 cm.
8. Seque la placa cromatogrfica y revele con la solucin de cido fosfomolbdico al 10% en etanol.

Presentacin de los resultados

1. Haga un esquema de los resultados obtenidos en la cromatografa, analice y discuta estos.