Castellanos Sanchez Maria Elena

Castellanos M.
Trabajo Especial de Grado- Facultad Experimental de Ciencias 2008

REPBLICA BOLIVARIANA DE VENEZUELA
LA UNIVERSIDAD DEL ZULIA
FACULTAD EXPERIMENTAL DE CIENCIAS
DIVISIN DE ESTUDIOS PARA GRADUADOS
MAESTRIA EN MICROBIOLOGA

INCIDENCIA DE ADENOVIRUS Y CALICIVIRUS EN NIOS MENORES
DE 5 AOS DE LA COMUNIDAD DE NAZARETH DEL MUNICIPIO
MARA- ESTADO ZULIA.

Trabajo de Grado presentado ante la Divisin de Estudios para Graduados
para optar al grado de Magster Scientiarum en Microbiologa

Autor: Mara Elena Castellanos Snchez
C.I: 14.134.762

Tutora: MgSc. Luciana Costa de Len

Co-Tutora: MgSc. Leticia Porto

Maracaibo, Febrero 2008

Castellanos M. Trabajo Especial de Grado- Facultad Experimental de Ciencias 2008

INCIDENCIA DE ADENOVIRUS, CALICIVIRUS Y ENTEROVIRUS EN
NIOS MENORES DE 5 AOS DE LA COMUNIDAD DE NAZARETH
DEL MUNICIPIO MARA- ESTADO ZULIA.

Autor:

Lic. Castellanos Snchez Mara Elena ___________________________
C.I: V-14.134.762 Firma
Direccin: Urbanizacin San Francisco calle 160
sector 6 casa N 01
Telfono: 0261-7612135 / 0414-0702991
Correo electrnico: mariele_1606@hotmail.com

____________________
MgSc. Luciana Costa de Len.
C.I. 4..517.843
Tutor


El jurado nombrado por el Comit Acadmico de la Maestra en Microbiologa, para
evaluar el Proyecto de Trabajo de Grado, titulado: INCIDENCIA DE
ADENOVIRUS, CALICIVIRUS Y ENTEROVIRUS EN NIOS MENORES
DE 5 AOS DE LA COMUNIDAD DE NAZARETH DEL MUNICIPIO MARA-
ESTADO ZULIA, presentado por la Lic. Mara Elena Castellanos Snchez., C.I:
14.134.762, ante la Divisin de Estudios para Graduados como requisito para optar al
grado de Magster Scientiarum en Microbiologa

Maracaibo, Enero 2007.

J urado Evaluador

____________________________ ______________________
MgSc. Luciana Costa de Len MgSc. Francisca Monsalve
C.I: 4.517.843 C.I: 13.624.773

____________________________
MgSc. Deynis Leon
C.I: 10.405.136


INDICE GENERAL

Resumen
Abstract
Dedicatoria
ndice de Tablas
ndice de Anexos
Introduccin6
Objetivo General..............................................................................................................14
Objetivos Especficos......................................................................................................14
Materiales y Mtodos
1-Poblacin....15
2- Recoleccin de la informacin...15
3- Recoleccin de la muestra::...16
4- Mtodos.....16
4.1- Determinacin de Adenovirus mediante la tcnica de ELISA ..16
- Preparacin de las muestras fecales para la
determinacin de Adenovirus16
- Procedimiento para la determinacin de Adenovirus.17
- Resultados para la determinacin de Adenovirus..........18
4.2- Determinacin de Calicivirus y Enterovirus.......19
- Muestras fecales para la determinacin de
Calivirus y Enterovirus....19
- Extraccin del RNA para Calicivirus y Enterovirus.19
- Trascripcin reversa para la obtencin de ADN complementario


para la determinacin de Calicivirus y Enterovirus....20
- PCR para la determinacin de Calicivirus.20
- Electroforesis...21
4.3- Determinacin de Enterovirus.....22
5- Consideraciones ticas...22
6- Metodologa estadstica aplicada..........................23
Resultados24
Discusin..30
Conclusiones35
Recomendaciones..36
Referencias Bibliogrficas...............................................................................................37
Anexos..41


Castellanos, Mara. INCIDENCIA DE ADENOVIRUS Y CALICIVIRUS EN
NIOS MENORES DE 5 AOS DE LA COMUNIDAD DE NAZARETH DEL
MUNICIPIO MARA- ESTADO ZULIA. Universidad del Zulia. Facultad
Experimental de Ciencias. Divisin de Estudio para Graduados, Maestra de
Microbiologa. Maracaibo, Venezuela. 2008

RESUMEN
Las diarreas virales, constituyen una de las principales causas de morbi-mortalidad en
nios de los pases subdesarrollados. Objetivo: Determinar la incidencia de Adenovirus,
Calicivirus y Enterovirus en nios menores de 5 aos de la comunidad de Nazareth del
Municipio Mara Estado Zulia. Metodologa: Fueron tomadas 46 muestras de heces de
nios menores de 5 aos, a los padres se les realiz una encuesta. La determinacin
de Adenovirus fue realizada por la tcnica de ELISA y para la determinacin de
Calicivirus y Enterovirus fue usada PCR. Resultados: Ausencia de infeccin por los
virus Adenovirus y Calicivirus y 47,63% de positividad para Enterovirus. Conclusiones:
La lactancia materna y la adquisicin de anticuerpos de la madre, pueden ser factores
de proteccin en el caso de Calicivirus. Para Adenovirus, posiblemente la recoleccin
de muestras al azar disminuy la posibilidad de detectar el virus, el mismo ha sido
detectado principalmente en muestras con diarreas. El elevado porcentaje de incidencia
de Enterovirus, indica su presencia en la zona

Palabra Clave: Adenovirus, Calicivirus, Enterovirus, diarreas, nios, PCR.


Castellanos, Mara. INCIDENCE OF ADENOVIRUSES AND CALICIVIRUSES IN
CHLIDRENS MINO OF 5 YEAR IN THE COMUNITI OF NAZAREHT- MUNICIPIO
MARA- ZULIA. Universidad del Zulia. Facultad Experimental de Ciencias. Divisin de
Estudio para Graduados, Maestra de Microbiologa. Maracaibo, Venezuela. 2007.

ABSTRACT
The viral diarrheas constitute one of the principal reasons of morbimortality in the
infantile population of sub developed countries. Objective: Determine the incidence of
Adenoviruses, Caliciviruses and Enteroviruses in the 5 year old minor childrens of
Nazareths community, Municipality Mara, Zulia. Methodology: There took 46 dregs
samples of childrens of 5 year old minor, to the parents was realized a survey. The
determination of Adenoviruses was realized by the ELISA technique and for
determination of Caliciviruses and Enteroviruses, was used PCR. Results: Absence of
positives samples for Adenoviruses and Caliciviruses and a 47,82% of positives
samples of Enteroviruses. Conclusions: The mothers nourishment and the acquisition of
mother antibodies can be protection factors in case of Caliciviruses. For Adenoviruses
possibly the capture of sample at random diminishes the possibility of detecting the virus
since the same one has been detected principally in samples with diarrheas. The high
value of Enteroviruses incidence, indicate the presence in the zone.

Key words: Calicioviruses, Adenoviruses, Enteroviruses, PC


DEDICATORIA

En esta oportunidad me he rodeado de personas invalorables que de una u otra forma
se convirtieron en pilares slidos para la culminacin de una de mis metas
profesionales.

Dios, por su luz que ilumina mis pasos aun en la oscuridad, por guiarme y llevarme de
la mano durante todos estos aos de vida.

Papi, el mejor pap del mundo, que aunque no este a mi lado ahora, me acompaa
todos los das desde ese lugar maravilloso a donde seguro Dios lo gui, si no fuera por
ti que me incentivaste hoy no viera cristalizado este sueo.

Mami, por ser mi apoyo en todo sentido, por ayudarme a rectificar en tantas ocasiones,
por haberse convertido desde hace casi 2 aos en Mam y Pap, gracias por estar
siempre conmigo.

Eugenia, mi hermana, mi amiga, mi confidente, con la que comparto casi todas mis
experiencias en esta vida, gracias hemanita por estar siempre a mi lado.

Antonio, mi hermano al que a pesar de todo quiero como al mejor hermano que pude
haber tenido, si no fuera por ti muchas sonrisas no existiran.

Mi tutora MgSc. Luciana Costa, no pude haber tenido mejor tutora, a lo largo de
aproximadamente 3 aos, se ha convertido en mi ejemplo a seguir como profesional.

Mi cotutora MgSc. Leticia Porto, en mejores manos no pude estar, merece todo mi
respecto como profesional dedicada a su insigne labor.

MgSc Mariangela Bracho, sin su invaluable colaboracin mi tesis no estara completa.


MgSc. Francisca Monsalve y Dr. J ess Estevez, gracias por aportar su granito de
arena.
Yenddy y Raimy, si no fuera por Uds. Los das en el laboratorio seria algo montono,
definitivamente son el toque divertido, sin dejar a un lado su profesionalismo.

Marina, Yaritza, Lourdes, Ricardo, y a todos los integrantes del Laboratorio Regional de
Referencias Virolgicas que formaron parte de mis das durante este largo recorrido.

Angela, porque a pesar de los aos seguimos siendo amigas, siempre he contado con
tu apoyo incondicional.

J essica, compaera de esta historia, con la que compart muchos momentos y que a lo
largo de los das se sumo a i lista de amigos verdaderos.

Angel, que desde hace 1 ao te has convertido en quien me da nimos, en quien borra
mis lagrimas, en quien siempre esta conmigo a pesar de la distancia, te has convertido
en alguien con un significado nico para mi.

A todos muchas gracias, sin la presencia de cada uno de ustedes mi vida no seria igual.

Maria Elena Castellanos S.


INDICE DE TABLAS
Pag.
Tabla 1
Distribucin de los nios menores de 5 aos de la
comunidad de Nazareth por sexo y grupo etario26
Tabla 2
Distribucin de los factores de riesgo relacionados con
el estilo de vida de los nios menores de 5 aos de la
comunidad de Nazareth..27
Tabla 3
Resultados para la determinacin de Enterovirus segn el sexo.28
Tabla 4
Resultados por edad realizado en 46 muestras de nios
menores de 5 aos de la comunidad de Nazareth para
determinar la presencia de Enterovirus28
Tabla 5
Distribucin de casos positivos para Enterovirus segn los
factores involucrados en su aparicin...29


INTRODUCCION


INTRODUCCION

Las enfermedades diarreicas en nios menores de 5 aos, constituyen una de las
principales causas de morbi - mortalidad en pases en vas de desarrollo, reportndose
un elevado nmero de episodios al ao
1- 3

La Organizacin Mundial de la Salud (OMS) asocia las enfermedades diarreicas
frecuentemente al consumo de agua o alimentos contaminados
2
. Los factores
ambientales y sanitarios son considerados importantes, en la aparicin de estas
enfermedades y su propagacin en poblaciones de bajo nivel socioeconmico.
Constituyndose estas comunidades en reservorio considerable de las enfermedades
virales
3
.

Mltiples episodios de diarrea en el primer ao de vida pueden deteriorar el estado
nutricional y causar graves secuelas. Se ha estimado que, en Asia, frica y Amrica
Latina, cada ao mueren alrededor de 3,3 millones de nios menores de 5 aos por
diarrea y ocurren ms de mil millones de episodios
3-5
.

En Venezuela, la diarrea aguda representa uno de los principales problemas de salud
pblica. Constituye el 60% de la morbi - mortalidad de las enfermedades de notificacin
semanal del pas
3,5
.

Su incidencia es considerablemente elevada en la edad peditrica,
especialmente en los nios menores de 1 ao en quienes la letalidad alcanza el 0,95%;
seguido de el grupo de 1 a 5 aos con una letalidad de 0,28%
5,6
.

Para el ao 2000, la mortalidad por diarrea en Venezuela ocup el 12 lugar de las 25
primeras causas de mortalidad general y la 3 en las causas de mortalidad infantil, lo
que demuestra la importancia de esta patologa principalmente en la poblacin menor
de 5 aos
6
.

Para la semana epidemiolgica N 52 (25 de al 31 del Diciembre del ao 2005), en
Venezuela fueron diagnosticados 37.843 casos de diarreas, con 3 defunciones


registradas, encontrndose el mayor nmero de casos en menores de 15 aos, con
24.225 (64%). Los estados con la ms alta incidencia son: Zulia, Carabobo, Bolvar,
Anzotegui, Miranda, Aragua, Falcn y Monagas, en los cuales se concentr el 69,08%
de los casos reportados
7
.

Segn el anuario de mortalidad del 2006, publicado por el Ministerio del Poder Popular
para la Salud; en Venezuela se registraron 1329 muertes producidas por diarreas de
tipo infecciosas en nios menores de 5 aos, de las cuales 231 fueron reportadas en el
estado Zulia, para el grupo etario antes mencionado
8
.

De acuerdo con las estadsticas venezolanas en el 2007, se reportaron ms de
1.815.385 casos de diarrea en todo el pas, de estos 5640, ocurrieron en el Zulia,
siendo este el Estado que present el mayor nmero de casos de sndrome diarreico
durante todo el ao
9
.

La existencia de partculas vricas en muestras de heces de pacientes que sufran de
enfermedades diarreicas agudas fue demostrada en la dcada del ao 1970, con la
microscopa electrnica. Los principales virus productores de gastroenteritis en humano
son los Rotavirus, Calicivirus, Astrovirus y Adenovirus. Otros virus con menor
trascendencia epidemiolgica son: Coronavirus,y Torovirus
10
.

Rowe et al., (1953) describieron por primera vez el Adenovirus; reconocieron que un
agente transmisible estaba destruyendo a las clulas epiteliales mientras intentaban
establecer cultivos celulares de amgdalas y tejido adenoideo, de all deriva su
nombre
11
.

Adenovirus pertenece a la familia Adenoviridae y comprende los gneros
Mastadenovirus y Avianadenovirus que afectan respectivamente, a mamferos y aves.
Describindose hasta 49 serotipos relacionados con la infeccin en los humanos
10
.


Adenovirus es un virus de ADN, sin envoltura. La partcula vrica presenta un tamao
de 70 nm de dimetro
(12)
. La cpside, de naturaleza proteica, se compone de 252
capsmeros que conforman una estructura icosadrica. Dichos capsmeros pueden ser
de 3 tipos morfolgicos: hexones, pentones y unas estructuras que se proyectan al
exterior, llamadas fibras que presentan un ndulo terminal. La longitud de las fibras
difiere de unos subgneros a otros
13
.

Los serotipos 40 y 41, constituyen el 59 % de los Adenovirus encontrados en las heces
causando un 7% de casos de diarrea en nios
(2)
. Las infecciones producidas por
Adenovirus no han demostrado estar asociadas a ciertas pocas del ao, no obstante
se ha descrito una disminucin de los casos de gastroenteritis por Adenovirus en el
verano
(14,15).
La adquisicin de anticuerpos sucede a temprana edad, de los 4 a 5 aos
el 50% de los nios han adquirido anticuerpos contra adenovirus entricos.

El diagnstico de las infecciones por adenovirus entricos se establece habitualmente
por ensayos inmunoenzimticos (ELISA), aglutinacin de ltex o inmunocromatografa.
Otros mtodos de caracterizacin de Adenovirus entricos son el anlisis de
polimorfismo de fragmentos de restriccin (RFLPs), Reaccin en Cadena de la
Polimerasa (PCR) y la hibridacin en dot-blot
10,13
.

Las infecciones por Adenovirus presentan una elevada morbilidad que se acompaa de
una baja mortalidad. Aparecen de forma epidmica por brotes a lo largo de todo el ao,
y estos afectan a numerosos y variados sistemas de nuestro organismo. Los sndromes
ms frecuentes son producidos a nivel respiratorio y gastrointestinal
16
.

Giordano et al. (2001) sealan que los serotipos de Adenovirus productores de diarreas,
son responsables del 4 al 10% de las diarreas nosocomiales al igual que de las
extrahospitalarias a nivel mundial
17
.

Segn Gutierrez et al. (2005) la mayora de los estudios epidemiolgicos sobre las
diarreas agudas en infantes se han realizado en pases en los que a lo largo del ao se


observan las 4 estaciones pero no en pases en los que solo se dan periodos, como lo
es el caso de Colombia y Venezuela, donde las enfermedades diarreicas agudas son
endmicas con repuntes de epidemias
18
.

Los Calicivirus humanos pertenecen a la familia de virus ARN denominado Caliciviridae.
Tras la secuenciacin del genoma del virus Norwalk o Norovirus
19
y de otros virus de la
familia
18
, el Comit Internacional sobre Taxonoma de Virus estableci la existencia de
4 gneros dentro de la familia Caliciviridae, dos de ellos de Calicivirus de animales
(Lagovirus y Vesivirus) y dos de Calicivirus humanos, los virus tipo Norwalk (Norwalk
like viruses =NLVs) y virus tipo Sapporo (Sapporo like viruses =SLVs)
15
.

Hoy en da Calicivirus es considerado uno de los principales agentes virales asociados
a brotes de diarrea no-bacteriana, brotes estos que usualmente ocurren en
comunidades cerradas
20
.
Morales et al. (2007) sealan que los Norovirus representan una de las principales
causas de diarreas endmicas en todos los grupos etarios, a diferencia de los
Saporovirus, los cuales han sido principalmente asociados a diarreas endmicas en
nios
21
. Los Calicivirus son virus altamente resistentes al ambiente y son trasmitidos
por va la fecal- oral a travs del contacto directo entre personas, as como tambin a
travs del agua y alimentos contaminados
21
. En Venezuela, existen reportes de
circulacin de Calicivirus entre adultos y nios sealndolo como causa importante de
diarrea, tal vez la segunda en importancia despus de Rotavirus
22,23
.
Los viriones se componen de una nica protena estructural de la cpside. Las tcnicas
de criomicroscopa electrnica revelan la estructura de simetra icosadrica de la
cpside
24
. La protena estructural, constituida por 180 molculas, se pliega en 90
dmeros formando una cubierta continua con protusiones en forma de arco. Una
caracterstica clave es la existencia de 32 depresiones en forma de copa, situadas en
los ejes del icosaedro, de cuya denominacin latina, calix, deriva su nombre
25
.


El genoma de los Calicivirus humanos consiste en una cadena sencilla de ARN de
polaridad positiva. El genoma de los NLVs se organiza en tres secuencias de lectura
abierta (ORF). La ORF1 codifica una poliprotena precursora de las protenas no
estructurales, la ORF2 codifica la protena de la cpside y la ORF3 codifica una protena
pequea cuya funcin no se conoce
25
. Estudios recientes indican que se trata de una
protena estructural menor
26.

El genoma de los SLVs difiere del anterior, de manera que la ORF1 codifica las
protenas no estructurales y, adems, la protena estructural de la cpside. La ORF2
codifica una protena pequea de funcin desconocida similar a la ORF3 del virus
Norwalk. En los SLVs se ha visto tambin un ORF3 de significado incierto todava. Los
estudios sobre las diferencias entre ambos genomas han llevado a la subdivisin en
gneros dentro de los genogrupos
27,28
.
El virus Norwalk es el prototipo de los Calicivirus humanos, durante mucho tiempo
tambin denominados "pequeos virus redondos estructurados" (small round-structured
viruses, SRSV), y actualmente considerado un miembro del gnero "virus Norwalk-like"
(NLV). Otro gnero lo constituyen los "virus Sapporo-like" (SLV). Los NLV se dividen en
tres genogrupos, GGI, GGII y GGIII. Los genogrupos GGI y GGII infectan a los
humanos, e incluyen 5 y 10 clusters genticos, respectivamente. Los virus del GGIII se
han detectado en ganado bovino y porcino. Al genogrupo GGI pertenecen, por ejemplo,
los virus Norwalk, Southampton y Desert Shield, mientras que en el GGII se incluyen los
virus Hawaii, Mxico, Lordsdale y Grimsby, entre otros. Los Calicivirus humanos no se
han conseguido propagar en cultivos celulares, lo que ha supuesto una importante
limitacin para su estudio. Sin embargo, la expresin de la protena de la cpside vrica
en clulas de insecto mediante el sistema de baculovirus recombinantes ha permitido
producir partculas pseudovricas (virus-like particles o VLP) que se han utilizado como
fuente de antgeno para obtener sueros y anticuerpos monoclonales. El diagnstico de
las infecciones gastrointestinales por Calicivirus humanos se realiza actualmente
mediante la deteccin del cido nucleico por tcnica de RT-PCR, utilizando distintos
pares de oligonucletidos
10,21
.


Aunque determinados enterovirus se asocian con frecuencia a brotes epidmicos,
dando lugar a un sndrome especfico, los mismos serotipos pueden, en otras
ocasiones, ser responsables de infecciones espordicas, con distintas manifestaciones
clnicas, incluso asintomticas. Por otro lado, diferentes virus pueden producir el mismo
sndrome. Por estas razones, las manifestaciones clnicas no son una base satisfactoria
para el diagnstico
29
.
Los Enterovirus pertenecen a la familia Picornaviridae, que consta de cuatro gnero, a
su vez los Enterovitrus se clasifican en: Poliovirus tipos 1, 2, 3; Coxsackievirus A: 23
tipos, A1-A24 (el Coxsackie 23 es conocido como Echovirus 9); Coxsackievirus B: tipos
B1-B6; Echovirus (Enteric Cytopathogenic Human Orphan): 31 tipos; Enterovirus tipos
68-71: previamente clasificados como Echovirus o Coxsackievirus. Los Enterovirus
presentan una cpside de simetra icosadrica, sin envoltura; tienen un tamao
pequeo (20-30 nm), poseen ARN de cadena nica y polaridad positiva. Su genoma se
divide en 4 regiones que codifican protenas estructurales y 2 regiones no codificadoras,
reguladoras. Sus cuatro protenas estructurales: VP1, VP2, VP3 y VP4 se sintetizan
como una poliprotena en la que el extremo 5 est unido covalentemente a una
pequea protena VPg. Dentro de cada grupo, existe un nmero de serotipos definidos
por los eptopos de la cpside que se deben a modificaciones estructurales de la
superficie del virin. Los eptopos antignicos, que definen a cada serotipo, estimulan la
formacin de anticuerpos especficos que se comportan como neutralizantes de la
infeccin, ya que no permiten su unin al receptor celular. La evolucin de los serotipos
sigue un proceso de deriva antignica, en el que durante el proceso de copia del
genoma se producen errores que introducen mutaciones puntuales. Estas mutaciones
son acumulativas y modifican progresivamente la estructura de la cpside
29
.
Debido al ciclo biolgico de los Enterovirus, estos virus penetran por va oral, donde
pueden ser detectados durante largos perodos, y se excretan de forma muy prolongada
en heces. Por este motivo, los aislamientos realizados en estas muestras clnicas son
muy difciles de valorar en cuanto a su significacin clnica, en el caso de los poliovirus,
puede tratarse de un virus vacunal si el paciente ha sido vacunado hace poco o ha
tenido contacto con alguna persona vacunada
30- 32
.


Segn Cinek et al. (2006), las infecciones por Enterovirus son comunes en la infancia,
causando numerosas infecciones asintomticas, sin embargo esas infecciones
asintomticas pueden ser asociadas con el desarrollo de enfermedades crnicas no
infecciosas
(33)
.
La poblacin de Nazareth ha sido considerada una de las mas pobres del Municipio
Mara, la misma se encuentra ubicada a orillas del Lago de Maracaibo del Estado Zulia,
cabe resaltar el estado de contaminacin en que se encuentra el lago, debido a los
mltiples desechos que son vertidos cada da por las industrias y las poblaciones
cercanas, hacindolo reservorio de diferentes agentes productores de diarreas, entre
ellos los virus. Las viviendas se caracterizan por ser de 2 tipos, una corresponde a las
construcciones en tierra construidas con diferentes materiales (bloques, zinc, cartn) y
la otra construida sobre el agua, denominadas palafitos, lo que implica un contacto
directo con aguas contaminadas. No poseen red de aguas negras, el agua de consumo
la obtienen de camiones cisternas o de una tubera comn. Se observa falta de
asfaltado y cmulos de basura. Todas estas caractersticas hacen a esta comunidad
propicia para la aparicin, propagacin y circulacin de numerosos agentes virales ente
ellos Adenovirus, Calicivirus y Enterovirus, que pueden atentar contra la salud de los
nios menores de 5 aos, por ser este grupo etario el de mayor susceptibilidad a
padecer enfermedades virales.

OBJETIVO GENERAL

Determinar la incidencia de Adenovirus, Calicivirus (Sapporo y Normovirus) y
Enterovirus en nios menores de 5 aos en la poblacin de Nazareth del Municipio
Mara del Estado Zulia.


OBJETIVOS ESPECFICOS

Determinar la presencia de Calicivus y Enterovirus mediante la tcnica de: PT-
PCR en nios menores de 5 aos de la poblacin de Nazareth del Municipio Mara del
Estado Zulia.

Determinar la presencia de Adenovirus mediante la tcnica de ELISA en
muestras de nios menores de 5 aos de la poblacin de Nazareth del Municipio Mara
del Estado Zulia.

Determinar los factores de riesgo en la aparicin de Calicivirus, Adenovirus y
Enterovirus en nios menores de 5 aos de la poblacin de Nazareth del Municipio
Mara del Estado Zulia.

Correlacionar de la incidencia de Calicivirus, Adenovirus y Enterovirus con los
factores de riesgo en nios menores de 5 aos de la poblacin de Nazareth del
Municipio Mara del Estado Zulia.


MATERIALES Y METODOS


MATERIALES Y METODOS
1- Poblacin:
La poblacin objeto de estudio estuvo constituida por 46 nios menores de 5 aos de la
comunidad de Nazareth, del Municipio Mara del Estado Zulia; para el ao 2005 la
comunidad estimada era de 276 nios menores de 5 aos
34
.

2- Recoleccin de la informacin:
Se realiz una encuesta a cada representante, la cual incluy: datos personales,
familiares, econmicos y sociales, entre otros, se consideraron adems datos
relacionados con la alimentacin, el agua de consumo, los depsitos de basura, y otros
aspectos relacionados con la vivienda. (Anexo1)

3- Recoleccin de las Muestras:
Se recolectaron muestras de heces, de los nios seleccionados previamente al azar; las
muestras fueron trasladadas en refrigeracin mediante un medio de transporte
adecuado al laboratorio de Referencias Virolgicas de la Facultad de Medicina de La
Universidad del Zulia.

4- Mtodos:
Para el diagnstico de Adenovirus se realiz un Inmunoensayo Enzimtico (ELISA),
cuya sensibilidad es de 95%

Para el diagnstico de Calicivirus y Enterovirus, las muestras fueron sometidas a una
RT-PCR, para determinar los principales serotipos circulantes, que atacan a los nios
de esta comunidad.

4.1- Determinacin de Adenovirus mediante la tcnica de ELISA
El ensayo IDEIA
TM
Adenovirus es un enzimoinmunoenzayo enzimtico cualitativo para
la deteccin de Adenovirus en heces humanas o en cultivos celulares infectados.


- Preparacin de las muestras fecales para la determinacin de Adenovirus
Se aadi 1ml de diluyente de muestra a un recipiente, para preparar una suspensin
de 10% de la muestra fecal aadiendo aproximadamente 0,1 g de heces slidas o
aproximadamente 100ul de heces lquidas. Mezclar y dejar reposar 10 minutos.

Las suspensiones fecales anteriormente preservadas en formalina deben diluirse, en
diluyente de muestras IDEIA
TM
Adenovirus, para preparar una suspensin al 10% antes
de hacer el ensayo.

El ensayo IDEIA
TM
Adenovirus utiliza un anticuerpo monoclonal en un inmunoensayo
enzimtico tipo sndwich de fase slida para detectar un eptopo hexon especficoal
gnero de Adenovirus. Los micropocillos separables se revisten de un anticuerpo
monoclonal especfico para el Adenovirus. Se aade una suspensin fecal o lquido
puro de cultivo celular al micropocillo y se incuba simultneamente con un anticuerpo
monoclonal especfico para el Adenovirus conjugado con peroxidasa de rbano. El
antgeno de Adenovirus que existe en la muestra es capturado entre el anticuerpo en la
fase slida y el anticuerpo conjugado con la enzima. Despus de una incubacin de 60
minutos a temperatura ambiente, se lavan los micropocillos con tampn de lavado
diluido para quitar el exceso de la muestra y cualquier anticuerpo libre que no est
conjugado con enzima. Se aade un cromgeno a los pocillos y se incuba durante 10
minutos a temperatura ambiente.

- Procedimiento para la determinacin de Adenovirus
Se utilizaron suficientes pocillos para muestras y controles. Aadindole 2 gotas (100ul)
de cada muestra fecal diluida, control negativo o control positivo a los micropocillos
individuales.

Se aadi 2 gotas de conjugado a cada pocillo y se mezcl suavemente.


Se incub a temperatura ambiente durante 1 hora.

Se aspir el contenido de los pocillos y se lavaron con solucin tampn, mnimo 5
ciclos.

Se aadi 1 gota de sustrato parte A seguida de 1 gota de sustrato parte B y se mezcl.

Se incub a temperatura ambiente durante 10 minutos.

La reaccin del sustrato fu bloqueada aadiendo 1 gota de solucin de parada a cada
pocillo. Se mezcl y se procedi a la lectura de los resultados.

- Resultados para la determinacin de Adenovirus
Control negativo: Visualmente este control presenta una ausencia de color y en la
determinacin fotomtrica su valor debe ser inferior a 0,150 unidades de absorbancia.

Clculo del cut-off: Se calcul el valor del lmite aadiendo 0.100 de una unidad de
absorbancia al valor del control negativo o al valor medio cuando se incluye ms de un
valor negativo.

Control positivo: En este caso debe observarse un color azul y en la determinacin
fotomtrica su valor debe ser superior a 0,500 unidades de aborbancia.

Muestras
Determinacin visual
Se debe considerar positiva, cualquier muestra que tenga un color azul de mayor
intensidad que el control positivo.

Determinacin fotomtrica
Cualquier muestra clnica que tenga un valor superior al cut-off. El valor debe ser
superior a 0.500 unidades de absorbancia.


4.2- Determinacin de Calicivirus y Enterovirus
- Muestras fecales para la determinacin de Calivirus y Enterovirus:
Se realiz una suspensin de las muestras de heces aproximadamente al 10% con
agua libre de nucleasa se mezcl por vorterizacin y fue clarificada por centrifugacin a
10,000 xg por 10 minutos a 4C. El sobrenadante fue guardado a -20C hasta su
utilizacin.

- Extraccin del RNA de Calicivirus y Enterovirus.
El RNA viral fue extrado mediante la tcnica en columna utilizando el kit Q1Aamp Viral
RNA (QIAGEN, Alemania):

Procedimiento en heces para la extraccin del ARN de Calicivirus y Enterovirus:
1- Se agreg 560 ul del buffer AVL en un tubo de 1,5 ml.
2- Se vorterizaron y centrifugaron las muestras durante 10 segundo a 6000, se
agregaron 140ul de la muestra al tubo que contena el buffer AVL y vorteriz
nuevamente 15 segundos.
3- Se Incubaron las muestras a temperatura ambiente (15- 25 C) durante 10
minutos.
4- Las muestras fueron centrifugadas brevemente a 6000rpm.
5- Se adicion 560ul de etanol (96- 100%) y se vorteriz durante 15 segundos,
luego, se centrifug a 6000rpm.
6- Se agreg 630 ul de la solucin del paso 5 por las paredes del tubo, sin tocar la
columna en tubos de 2 ml, luego se centrifugaron a 8000 rpm durante 1, 30
minutos.
7- Repetir el paso 6 hasta pasar toda la muestra por la membrana.
8- Se traslad cada columna a un tubo limpio de 2 ml y se agreg 500ul de buffer
AW1, se centrifug a 8000 rpm, durante 1 minuto.


9- Se aadi a la membrana 500 ul de AW2 en un tubo nuevo y se centrifug
durante 3 minutos a 13000 rpm, se descart el contenido del tubo y se centrifug
durante 1 minuto a 13000 rpm para eliminar cualquier resto de AW2
10- Se coloc la columna en un tubo nuevo eppendorf con tapa de 1,5ml,
cuidadosamente se abri el tubo que contena la columna y se agregaron 40ul
del buffer AVE a temperatura ambiente, se incub a temperatura ambiente
durante 1 minuto, se centrifug a 8000rpm por 1 minuto.
11- Se repite el paso 10.
12- La muestra extrada fue almacenada a -20C hasta el momento de su
procesamiento.

- Trascripcin reversa para la obtencin de ADN complementario para la
determinacin de Calicivirus y Enterovirus.
Fu realizada con el kit de Promega ImProm- II Reverse Transcription System, segn el
siguiente protocolo: se utiliz 5 ul de la muestra extrada previamente, la cual fue
mezclada con una solucin de reaccin constituida por: 0,01ul de Random primer 0,5
ug/ por reaccin, 4ul de Improm II buffer 5X, 3ul de MgCl2, 1ul de dNTP, 0,5 ul de
Inhibidor de la RNAsa, 1ul de Improm II transcriptasa reversa, 5,49ul de agua libre de
nucleasa, para un volumen de reaccin final de 20ul; luego se procedieron a incubar a
25C durante 5 minutos y se llevaron al termociclador para un ciclo de 1 hora a 42C,
uno de 5 minutos a 99C para finalizar con un enfriamiento inmediato.

- PCR para la determinacin de Calicivirus.
Se utiliz la mezcla de master mix de Promega, con una concentracin final de 1X; a la
cual a 25 ul de mastermix, se le adicionaron, 1ul de los respectivos primer al 10 uM,
18ul de agua libre de nucleasa y 5ul de ADNc, para un total de volumen de reaccin de
50 ul, luego fueron llevados al termociclador para llevarse a cabo los siguientes ciclos:
94C- 3 minutos

94C 30 segundos 35 ciclos



72C 7 minutos
4C infinito

Para la determinacin de Calicivirus, se utilizaron los primers sugeridos por J iang y
col
35
.

Pimers Localizacion Polaridad Secuencia
P290 (23 mer) 45684590 Positiva 5-GATTACTCCAAGTGGGACTCCAC-3
P289 (22 mer) 48654886 Negativa 5-TGACAATGTAATCATCACCATA- 3

Como control interno se utiliz un patrn de peso molecular (durante la visualizacin)
por limitaciones en la adquisicin del control respectivo.

- Electroforesis.
El producto de la PCR, fu sometido a electroforesis en gel de agarosa al 2%, con
Bromuro de etidio (EtBr 0,5 ug/ml) por 1 hora, luego se visualizo bajo luz ultravioleta.

- PCR para la determinacin de Enterovirus
Se utilizo el protocolo descrito anteriormente para Calicivirus a excepcin de los ciclos
utilizados para la amplificacin, y los primers especficos, en este caso; los ciclos
fueron:
42 C- 45 minutos
95C- 3 minutos


72C 5 minutos
4C infinito


Se utilizaron los primers, descritos por Grow y cols
36

Virus Posicion Primer Producto Secuencia
CV B4 (5NTR) Ent 1 540 5-CGGTACCTTTGTACGCCTGT-3
Polio 1 (5NTR) Ent 2 5-ATTGTCACCATAAGCAGCCA-3

Como control positivo se utilizo la vacuna de polio con el virus atenuado, adems de un
patrn de peso molecular Wizard (durante la visualizacin).

5- Consideraciones ticas:
Previo a la recoleccin de la muestra el presente estudio fue aprobado por el
Comit de tica de la Facultad de Medicina de la Universidad del Zulia. A todos los
representantes les fue solicitado el consentimiento por escrito para la inclusin en el
estudio segn los lineamientos de la declaracin de Helsinki (2000)
(37)
par estudio en
humanos. (Anexo 2)

6- Metodologa estadstica aplicada
Se utiliz el test exacto de Fisher y la prueba del Chi
2
(segn el caso) para determinar la
significancia de los resultados obtenidos, utilizando como margen de eficacia el 95% y
alfa menor a 0,05, con el paquete estadstico SPSS 10.0.


RESULTADOS

RESULTADOS


Durante el mes de Febrero del ao 2007, fueron recolectadas 46 muestras al azar de
nios de 0 a 5 aos, de ambos sexos en la comunidad de Nazareth del Municipio Mara
del Estado Zulia, 21 muestras pertenecientes a nios lactantes (2 meses a 2 aos), de
las cuales 13 pertenecan al sexo femenino (28,26%) y 8 al sexo masculino (17,39%);
por otro lado en los nios en edad preescolar(3 aos a 5 aos) fueron estudiadas 25
muestras, 15 (32,60%) representadas por el sexo femenino y 10 (21,73%) por el sexo
masculino (Tabla 1).

En la Tabla N 2 se muestran los diferentes factores (leche materna, disposicin de
excretas, agua de consumo, vacunacin, hacinamiento, presencia de animales
domsticos) que pudieran estar relacionados con la aparicin de Adenovirus,
Calicivirus y Enterovirus.

Se observ ausencia de infeccin por Adenovirus y Calicivirus, en nios menores de 5
aos de la comunidad de Nazareth.

En la tabla 3, se observa el nmero de casos positivos para Enterovirus relacionados
los casos con las variables sexo y edad; en los nios de 2 meses a 2 aos, se muestra
un mayor numero de casos positivos para el sexo femenino, con 7 casos (31,81%), y el
sexo masculino 4 casos (18,18%); en relacin al los nios de 3 aos a 5 aos,
igualmente se muestras que para el sexo femenino la incidencia fue mayor con 8
muestras positivas (36,36%) y en el sexo masculino 3 muestras positivas (13,63%). No
encontrndose diferencia significativa (p>0,05) en las variables estudiadas.

En la tabla 4 se muestran los factores involucrados en la aparicin de Enterovirus.
Segn los resultados obtenidos en la presente investigacin, se observa que en nios
con esquema de vacunacin completa, se encontraron 15/46 muestras positivas
(32,60%) y en aquellos nios con vacunacin incompleta 7/46 fueron positivas
(15,21%). A los nios en lactancia materna para el momento de la recoleccin de las
muestras, 9 (19,46%) resultaron positivas para Enterovirus, mientras que a los nios


que no se les suministraba lactancia materna 13 (28,26%) arrojaron resultados positivos
para la determinacin del antgeno viral.

Otros factores involucrados en la aparicin de Enterovirus, se muestran en la tabla 4:
de 22 casos positivos, 17 (36,95%) viven en condiciones de hacinamiento, los 5
(10,89%) restantes no estn en estas condiciones. En 12 (26,08%) de los casos, los
representantes refirieron, presencia de animales domestico en sus viviendas, los 10
restantes no poseen animales domsticos, encontrndose una diferencia significativa
(p<0,05). Al relacionar la disposicin del agua de consumo con el nmero de muestras
positivas, se encontr que en 19 (41,30%) el agua es obtenida a partir de tanques y 3
(6,52%) provena de camiones cisterna. Segn el tipo de excretas utilizadas, se
observa que la letrina es la ms frecuente con 14 (30,43%) casos positivos, seguido
por las heces lanzadas al agua 4 (8,69%); los pozos sptico 3 (6,52%) y por ultimo las
cloacas 1 (2,17%).
Tabla 1
Distribucin por edad y sexo de los nios menores de 5 aos de la comunidad de
Nazareth Municipio Mara Estado Zulia.

Edad n Sexo Frecuencia (%)

2 meses a 2 aos 21 Femenino 13 (28,26)
Masculino 8 (17,39)

3 aos a 5 aos 25 Femenino 15 (32,60)
Masculino 10 (21,73)


Tabla 2
Distribucin de los factores de riesgo relacionados con el estilo de vida de los nios
menores de 5 aos de la comunidad de Nazareth

Factores de riesgo

n (%)
46 (100) Leche materna Si
No

0 (0)
Si 46 (100) Leche formulada
No

80 (0)
Completa 36 (78,26) Inmunizacin
Incompleta 10 (21,74)

Si

34 (73,91) Hacinamiento
No 12 (26,09)

Si

46 (100) Presencia de vectores
No 0 (0)

Si

32 (69,57) Animales domsticos
No 14 (30,43)

Cloacas

2 (4,35)

Disposicin de excretas
Pozos spticos
Letrina
Directo al agua
Monte
9 (19,56)
26 (56,53)
6 (13,04)
3 (6,52)

Tanque 40 (86,97)
Calle 6 (13,04)
Agua de consumo

Depsitos de basura

Quemada 46 (100)


Tabla 3
Determinacin de Enterovirus en nios menores de 5 aos de la comunidad de
Nazareth Municipio Mara Estado Zulia segn sexo y edad

Casos
Edad n Sexo positivos (%)

2 meses a 2 aos 21 Femenino 7 (15,21)
Masculino 4 (8,51)

3 aos a 5 aos 51 Femenino 8 (17,39)
Masculino 3 (6,52)

Total 46 22 (47,63)
No se observ diferencia significativa


Tabla 4
Distribucin de casos positivos para Enterovirus segn los factores involucrados en su
aparicin
Casos
Factores involucrados positivos (%)

Vacunacin

Completa
Incompleta

15 (32,60)
7 (15,21)

Lactancia materna

Si
No

9 (19,56)
13 (28,26)

Hacinamiento

Si
No

17 (36,95)
5 (10,89)

Animales domsticos

*Si
No

12 (26,08)
10 (21,73)

Agua de consumo

Tanque
Camion cisterna

19 (41,30)
3 (6,52)

Tipo de excretas

Cloacas
Pozos spticos
Letrinas
Al agua

1 (2,17)
3 (6,52)
14 (6,52)
4 (8,69)

* Diferente significativamente (p<0,05) entre los que tenan animales domsticos con
respecto a los que no tenan


DISCUSION

DISCUSION

Las diarreas virales, representan una de las principales causas de muertes en nios,
especialmente en Asia, frica y Amrica Latina, en donde anualmente causan millones
de muertes, principalmente en nios menores de 5 aos. Algunos de los principales


factores de riesgo son: consumo de agua contaminada, un inadecuado saneamiento
ambiental, y una nutricin inadecuada
1-3
.

Los serotipos 40 y 41 de Adenovirus, son comnmente encontrados en las muestras de
heces de nios con gastroenteritis, ubicndose a nivel mundial en el 4 lugar entre los
virus productores de diarreas, con una distribucin global del 10 %
31,32
.
Al comparar los resultados obtenidos en el presente estudio, en relacin a la presencia
de Adenovirus con otras investigaciones realizadas con anterioridad, se observa
claramente la diferencia existente, que aunque en porcentajes relativamente bajos,
indican la presencia de Adenovirus, entre los que se encuentran pases de
Latinoamerica, Europa y frica en donde los niveles de incidencia se ubican entre
1,26% y 14%
17,18,38-40
, hecho este que difiere de los resultados obtenidos en nuestro
estudio, en el que no se detect la presencia del antgeno de Adenovirus.
El hecho de haber seleccionado las muestras al azar de nios con y sin sintomatologa,
pudo contribuir a la ausencia de casos positivos para Adenovirus, ya que estudios
previos reportan la presencia del virus en muestras diarreicas. La diarrea y el vmito
son los sntomas predominantes en infecciones entricas por Adenovirus, y sucede en
el 97% y 79% de los nios respectivamente, con una duracin promedio de 9 a 12 das.
La diarrea persistente se puede encontrar en el 33% de los nios infectados por el
serotipo 40. La adquisicin de anticuerpos en suero sucede a edades temprana de la
vida, a los 4-5 aos el 50% de los nios han adquirido anticuerpos contra Adenovirus
entricos, dado a su mecanismos de transmisin (va oral- fecal y aguas estancadas)
21
.
En la presente investigacin no se tom como parmetro de exclusin la
sintomatologa, a fin de conocer la posible existencia de estos virus en pacientes
asintomticos.
La presencia de Calicivirus, no fue detectada en este estudio, resultados que coinciden
con los reportados en el ao 2004 en la maternidad Concepcin Palacios en Venezuela


por Morales y cols.; sin embargo, otras investigaciones indican incidencia entre 2,3% y
14%
21, 41,42
.

Se considera que la leche materna es importante en la alimentacin del recin nacido y
el nio en edad preescolar. Existen estudios que sealan que la leche materna posee
oligosacridos protectores contra la infeccin causada por virus
43
. La inmunidad
lactognica, se define como la proteccin conferida por la continua presencia de
anticuerpos en el intestino y que dicha proteccin es proporcionada por la continua
secrecin de inmunoglobulina A (IgA) en la leche materna, as como la inmunoglobulina
G (IgG)
4
, La leche materna tambin contiene otros factores capaces de proveer
proteccin a nuevas infecciones, tales como: lactoferrina, lisozimas, complementos,
factores bifidus, peroxidasa, antitripsina e inerferon. La presencia de los inhibidores de
la tripsina presentes en la leche materna y en el intestino, podran ser responsables, de
desencadenar la replicacin viral, y su ausencia implicara la inhibicin de este proceso.
Adems linfocitos y macrfagos podran jugar papel importante en la proporcin de la
inmunidad
44
. En el presente estudio las muestras provenan de nios los cuales fueron
alimentados con leche materna.
Morrow y cols.(2004), determin la asociacin de el contenido de 2-linked fucosylated
oligosacarido en la leche materna y las diarreas producidas por Campilobacter y
Calicivirus, encontrando que los nios cuya leche materna contena altos niveles de
lacto-N-difucohexaose (LDFH-I), y 2-linked fucosyloligosaccharide, la infeccin por
Calicivirus era baja, esto evidencia que los oligosacaridos presentes en la leche
materna son clnicamente relevantes para la proteccin del infante contra este agente
45
.

La alimentacin con leche materna contribuye a la disminucin de las diarreas
producidas por Calicivirus, bien sea por el paso de anticuerpos de la madre al hijo, o por
la relevancia de los oligosacaridos contenidos en la misma.
La ausencia de Adenovirus y Calicivirus en la presente investigacin, pudo ser
consecuencia del desarrollo de tolerancia inmunitaria (proceso activo, dependiente del


reconocimiento antignico), en la cual se produce una ausencia de respuesta
inmunitaria en condiciones normales
46
. Mltiples factores pueden influir la respuesta
inmune tras el primer contacto con el antgeno para el desarrollo de la tolerancia
inmunolgica
47
.
Los factores genticos influyen considerablemente en la tolerancia inmunologiaca,
sobre todo en lo que respecta a los niveles de IL-4 y sntesis de IgE. Otros factores
tambin importantes como la edad a la que se produce la primera exposicin del
antgeno, naturaleza del mismo, dosis, frecuencia y va de exposicin
47
.
En la presente investigacin se obtuvo un 47,80% de positividad para Enterovirus,
hecho que concuerda con los resultados obtenidos por diferentes investigadores en
estudios realizados a nivel mundial, quienes indican una incidencia de 7,4% a 56%
33,48-
50
, sin embargo en su mayora. En Amrica Latina, Enterovirus representa uno de los
principales gneros que afecta la poblacin infantil, con una mayor incidencia en nios
menores de 5 aos, produciendo diferentes patologas y en algunos casos cursando
asintomticamente. En cualquier caso resulta de suma importancia determinar los
factores que pudieran estar relacionados con la presencia de Enterovirus.
En el presente estudio, se podra inferir que muchos de los casos positivos para
Enterovirus, podran ser el resultado de la excrecin de antgenos vacunales en las
heces, ya que estos son excretados durante varias semanas (4 a 6 semanas). La
vacuna (virus atenuado de la polio) en un inicio se dirige a los ganglios linfticos y llega
luego a la corriente sangunea, provocando as una doble respuesta anticuerpos locales
y circulantes en el 98-100% de los vacunados. El antgeno vacunal excretado en heces
interfiere con el poliovirus salvaje y crea barreras epidemiolgicas, evitando su
diseminacin. Por otra parte inmuniza a los contactos no vacunados, esta capacidad de
recirculacin de las cepas atenuadas contribuye a que la cobertura de inmunizacin sea
mucho mayor que el nmero de individuos realmente vacunados
51
.
La replicacin intestinal del virus de la vacuna genera, con mucha frecuencia, mutantes
con capacidad de transmisin y neurovirulencia, la excrecin de los poliovirus vacunales


en heces en los pacientes con deficiencias de clulas B puede prolongarse muchos
meses o aos. Los programas de vacunacin plantean el problema de la circulacin de
los poliovirus vacunales, que pueden dificultar la erradicacin global de la poliomielitis.
La aparicin de casos por contacto con personas que excretan el virus o por exposicin
ambiental, puede ser un peligro cuando se decida detener totalmente la vacunacin
frente a la poliomielitis. Algunos brotes de poliomielitis por poliovirus derivados de la
vacuna ilustran el problema de la circulacin de los virus, as como su capacidad de
transmisin y neurovirulencia. Entre 1988 y 1993 se produjeron en Egipto 32 casos de
poliomielitis por un poliovirus vacunal, no obstante, el problema de la circulacin de los
poliovirus vacunales va ms all de su excrecin por las heces de las personas
vacunadas, el contagio por exposicin ambiental es tericamente posible, ya que se
han aislado poliovirus del agua de los ros
52
.

Los factores anteriormente descritos, pueden estar influyendo en la aparicin de
Enterovirus en la comunidad de Nazareth, bien sea que los antgenos detectados sean
vacunales o por contaminacin del agua que bordea la zona; por lo que se hace
necesario realizar nuevas investigaciones que permitan determinar el o los gneros de
Enterovirus presentes, para tomar las medidas necesarias en el mejoramiento de la
calidad de vida de esta poblacin.


CONCLUSIONES

CONCLUSIONES


- Ausencia de Adenovirus y Calicivirus en nios menores de 5 aos de la comunidad de
Nazareth Municipio Mara Estado Zulia.

-La lactancia materna es un factor protector contra Calicivirus, tanto por sus
componentes como por el paso de anticuerpos de la madre al hijo.

-Se encontr un porcentaje de positividad de 47,63 para el diagnostico de Enterovirus.


RECOMENDACIONES

RECOMENDACIONES


- Realizar charlas dirigidas a explicar como prevenir la aparicin, propagacin y
recirculacin de los agentes virales.

- Crear conciencia en la comunidad sobre la importancia de las normas higinicas y el
saneamiento ambiental.

- Realizar investigaciones dirigidas a determinar el gnero de Enterovirus circulante en
la poblacin de Nazareth.


BIBLIOGRAFIA

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ANEXOS


ANEXO1


DATOS PERSONALES:

Nombre__________________
______________

Edad:_______ Fecha de
nac._________

Lugar de
naciminento:______________

INMUNIZACIONES:
BCG:__________
Triple:___________
Polio:__________
Sarampin:_________

ALIMENTACION:
Leche materna:_______
Leche de formula:________
Hasta que edad tom leche
materna?_________________

VIVIENDA
Rancho:
__________
____
Casa:
__________
_____
Vecindad:
__________
__
TENENCIA
DE LA
VIVIENDA

Propia:
__________
_____
Alquilada:
__________
_____
Cedida:
__________
_____
Compra a
crdito:
__________

HACINAMIENTO:

Total de ambiente:
__________ Ventilacin:
B R M
Para dormir: ___________
Iluminacin: B R M
No. de Camas: _________
Bao: ___________
y/o hamacas: __________
Cocina: _______ Lea:
________

Tipo de cocina: Kerosene
____ Gas- Planta _____

Patio: _____________
ANIMALES:
Perros________
Gatos_________
Otros____________________
_
ABASTECIMIE
NTO DE
AGUA.

Intradomiciliario
Botelln

Pozo:
__________
Pblica:
____________
__
Camin
Cisterna:
__________


ALMACENAMIENTO
DE AGUA PARA TOMAR.

Pipas: _________________
Otras: __________________
Especificar.
Tapada: _______
Limpia: _______
Frecuencia del lavado: _____
Consumo de agua
Directa filtrada o hervida

ANTECEDENTES
FAMILIARES
Cncer:_______
Cardiopatas:_______
Diabetes:______
Hipertensin:_______

Otras:___________________
_________

DISPOSICI
N DE
EXCRETAS:

Cloacas:
__________
_____

Letrina:
__________
______

Pozo
sptico:
__________
__

Se mantiene
limpio:
________

Con que lo
limpia:
_________
suelo
Red de
aguas
blancas:___
___
Red de
aguas
negras:____
_____

RECOLECCIN DE BASURA.
Recipiente con tapa:
______________ Aseo
Urbano: __________
Recipiente sin tapa:
_______________ Frecuencia:
_____________
Otros:
_________________________
Campo raso:
________________
Especificar

ANIMALES DOMESTICOS
Insectos:
____________________
Roedores:
___________________

Animales domsticos:
Perros: _____________
Gatos:_______________
Otros:
_________________________
______________

ESTADO
NUTRICIONAL
OBSERVABLE
:
____________
________

OBSERVACIO
NES:_


ANEXO 2


CONSENTIMIENTO PREVIA INFORMACION.

En el Laboratorio Regional de Referencias Virolgicas de la Escuela de Bioanlisis de la
Facultad de Medicina de La Universidad del Zulia ubicado en el Instituto de Investigaciones
Clnicas, se esta realizando el proyecto de investigacin titulado Incidencia de Adenovirus y
Calicivirus en nios menores de 5 aos de la poblacin de Nazareth del Municipio Mara
del Estado Zulia con el objeto de determinar la presencia de Adenovirus, Rotavirus,
Calicivirus, y Hepatitis A en los nios menores de 5 aos, utilizando las tcnicas de ELISA y
Reaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR), respectivamente, adems de la realizacin de
exmenes parasicolgicos (directo y concentrado) y hematologa completa.
Yo, C.I:____________________
Nacionalidad:________________EstadoCivil:______________________Domiciliado en:
______________________________ siendo mayor de 18 aos en USO pleno mis facultades
mentales y sin que medie coaccin ni violencia alguna en completo conocimiento de la
naturaleza, forma, duracin, propsito, inconveniente y riesgos relacionados con el estudio que
mas abajo indico, en calidad de padre o representante legal del
paciente___________________________, edad: _________, declaro mediante la presente:
1.- Haber sido informado de manera clara y sencilla, por parte del grupo de investigadores del
Laboratorio Regional de Referencias Virolgicas, coordinados por la Magster Lic. Luciana
Costa de todos los aspectos relacionados al proyecto de Investigacin titulado Incidencia de
Adenovirus y Calicivirus en nios menores de 5 aos de la poblacin de Nazareth del
Municipio Mara del Estado Zulia y los exmenes parasicolgicos y hematolgicos.
2.- Tener conocimiento claro de que el objetivo fundamental del trabajo antes sealado es:
Determinar la incidencia de Enterovirus, Adenovirus y Calicivirus en nios menores de 5
aos de la poblacin de Nazareth del Municipio Mara del Estado Zulia
3.- Haber sido informado de que mi participacin en el proyecto consiste en facilitar de manera
voluntaria al Laboratorio Regional de Referencias Virolgicas una muestra de heces.
4.- Que la muestra de heces facilitar as como la informacin que suministre al equipo de
investigadores ser utilizada para determinar: la incidencia de Adenovirus, Rotavirus y
Calicivirus.
5.- Que el equipo de investigadores me ha garantizado absoluta confidencialidad relacionada
tanto a mi identidad como de cualquier informacin relativa a mi persona a la que tenga acceso
por concepto de mi participacin en el proyecto antes mencionado.
6.- Que estoy de acuerdo en el USO, para fines de investigacin, de los resultados obtenidos en el
presente estudio.
7.- Que mi participacin en dicho estudio no implica riesgo ni inconveniente alguno para mi
salud.
8.- Que la participacin en la investigacin no agravara ni causara efectos colaterales en la
patologa ya existente, si no por el contrario esta investigacin ayudara a dilucidar mi diagnostico
permitiendo una mejor teraputica. Que cualquier pregunta o duda que yo tenga en relacin con
este estudio, me ser respondida y aclarada oportunamente por parte del equipo de investigadores
antes mencionado con quienes me puedo comunicar por el telfono (Laboratorio Regional de


Referencia Virolgica): 02617597273 con la Lic: Luciana Costa en el horario de 7:30 a.m. a
5:00 p.m.
9.- Que bajo ningn concepto se me ha ofrecido ni pretendo recibir algn beneficio de tipo
econmico producto de los hallazgos que puedan producirse en el referido proyecto de
investigacin.
10.- Que los resultados de las pruebas me sern entregados oportunamente
DECLARACION DEL VOLUNTARIO:
Luego de haber ledo, comprendido y recibido las respuestas a mis preguntas con respecto a este
formato de consentimiento y por cuanto mi participacin en este estudio es totalmente voluntaria
acuerdo:
A.- Aceptar las condiciones estipuladas en el mismo y a la vez autorizar

__________________________
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Trabajo Especial de Grado- Facultad Experimental de Ciencias 2008

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