PRCTICA 3

DETERMINACIN DE COLIFORMES TOTALES POR CUENTA EN PLACA

INTRODUCCIN
La definicin generalmente aceptada para el trmino coliformes describe a
estos microorganismos como bacilos Gram negativos, no esporulados, aerobios o
anaerobios facultativos que fermentan la lactosa con produccin de cido y gas,
aunque algunos pueden ser fermentadores tardos o no fermentadores, como
itrobacter y Serratia, respectivamente.
La mayora de los coliformes pueden encontrarse en la flora normal del tracto
digestivo del hombre o animales, por lo cual son expulsados especialmente en las
heces, por ejemplo Escherichia coli. Por esta razn, su presencia constante en la
materia fecal, los coliformes son el grupo ms ampliamente utilizado en la
microbiologa de alimentos como indicador de prcticas higinicas inadecuadas.
Como los coliformes tambin pueden vivir en otros ambientes, se distingue
entre coliformes totales y coliformes fecales. Esta prctica se refiere a coliformes
totales.
El uso de los coliformes como indicador sanitario puede aplicarse para:
La deteccin de prcticas sanitarias deficientes en el manejo y en la
fabricacin de los alimentos.
La evaluacin de la calidad microbiolgica de un producto, aunque su
presencia no necesariamente implica un riesgo sanitario, cuando los
coliformes son de origen no-fecal.
Evaluacin de la eficiencia de prcticas sanitarias e higinicas en el equipo.
La calidad sanitaria del hielo y los distintos tipos de agua utilizados en las
diferentes reas del procesamiento de alimentos.
La demostracin y la cuenta de microorganismos coliformes, puede realizarse
mediante el empleo de medios de cultivos lquidos o slidos con caractersticas
selectivas o diferenciales. Para la cuenta en placa se usar el agar Eosina y Azul de
Metileno, el cual contiene colorantes de azul de metileno y eosina que inhiben las
bacterias gram-positivas en cierto grado. Los colorantes tambin actan como
indicadores diferenciales en respuesta a la fermentacin de la lactosa o la sacarosa
por parte de los microorganismos. Los coliformes producen colonias de color negro
azulado, mientras que las colonias de Salmonella y Shigella son incoloras o de color
mbar transparente. Las colonias de Escherichia coli pueden exhibir un brillo verde
metlico caracterstico debido a la rpida fermentacin de la lactosa.


MATERIAL Y EQUIPO

Agar EMB estril
Tubos con 9 mL de SSI estril
Mechero Bunsen
Cajas de Petri estriles
Pipetas de 10 mL estriles.
Tijeras o pinzas estriles.
Muestra de alimento.
Incubadora
Balanza analtica.

PROCEDIMIENTO