Quim. Nova, Vol. 33, No.

9, 1940-1948, 2010
R
e
v
i
s

o
*e-mail: nandrade@ufv.br
ASPECTOS COLOIDAIS DA ADESO DE MICRO-ORGANISMOS
Emiliane Andrade Arajo, Nlio Jos de Andrade
*
,
Antnio Fernandes de Carvalho, Afonso Mota Ramos e Cleuber
Antnio de S Silva
Departamento de Tecnologia de Alimentos, Universidade Federal de Viosa, Av. PH Rolfs, s/n, Campus Universitrio, 36571-000
Viosa - MG, Brasil
Luis Henrique Mendes da Silva
Departamento de Qumica, Universidade Federal de Viosa, Av. PH Rolfs, s/n, Campus Universitrio, 36571-000 Viosa - MG, Brasil
Recebido em 17/11/09; aceito em 21/4/10; publicado na web em 1/9/10
COLLOIDAL ASPECTS OF BACTERIAL ADHESION. The ability of bacteria to attach to surface and develop into a biolm has
been of considerable interest to food industry. Electrostatic, Lifhistz-van der Waals and Lewis acid-base forces are usually considered
responsible for the interactions at the interface of the bacterial adhesion. The study of microbial adhesion thermodynamic is important
because it represents the reection of microbial surface and food processing surface physicochemical characteristics. This review
examines the most important aspects involved in bacterial attachment to a surface with emphases in thermodynamics of adhesion process.
Keywords: bacterial adhesion; biolm; microbial surface thermodynamics.
INTRODUO
A adeso bacteriana importante em um grande nmero de
processos tecnolgicos, envolvendo desde a microbiologia mdica
e patolgica, passando pela indstria de alimentos e engenharia de
meio ambiente at a rea de cincia de biomateriais.
1
A adeso de micro-organismos a superfcies um fenmeno que
ocorre naturalmente em meios aquosos e depende das propriedades
superciais (tenso supercial, entalpia supercial por unidade de
rea, composio da superfcie, etc.) das interfaces dos suportes
de adeso (ao, polmeros, mrmore, etc.) e das membranas dos
micro-organismos. Alm disso, as propriedades microbiolgicas e
as caractersticas do meio circundante, tais como temperatura, pH,
fora inica e disponibilidade de nutrientes, determinam, em muitos
sistemas, o processo de adsoro.
1
A formao de um biolme inclui muitas etapas, mas um pr-
requisito a adeso das clulas microbianas superfcie. Estudos
recentes das propriedades de adeso de bactrias tm mostrado que,
em alguns casos, as caractersticas fsico-qumicas da superfcie da
clula contribuem determinantemente no processo de adeso.
2
A adeso e a formao de biolmes microbianos podem ser inde-
sejveis, sob diversos aspectos, em vrias reas de aplicao. A pre-
sena do biolme em dispositivos mdicos implantados j foi descrita
em lentes de contato, cateteres venosos centrais, tubos endotraqueais,
dispositivos intrauterinos, vlvulas cardacas mecnicas, marcapassos,
cateteres de dilise peritoneal, prteses articulares, tubos de timpa-
nostomia, cateteres urinrios e de derivao ventrculo-peritoneal.
3
Na inds tria de alimentos, a adeso e a formao de biolme po-
dem tornar o pro cesso de clorao da gua menos eciente;
4
reduzir a
ecincia de transferncia de energia na forma de calor em trocadores
trmicos; diminuir o uxo em tubulaes; desencadear processos
corrosivos e, principalmente, se tornarem fon tes de contaminao
microbiana.
5
Sob o aspecto microbiolgico, a adeso pode constituir-se
de mi cro-organismos alteradores e/ou patognicos, que resultam em
srios problemas de higiene, de sade pblica ou de ordem econmica.
6
Por outro lado, em alguns casos, o processo de adeso ou
biolme pode ser desejvel, a exemplo daqueles existentes em
biorreatores utilizados na produ o de alimentos fermentados.
As bactrias produtoras de cido actico crescem, adsorvendo e
agregando-se em fragmentos de madeira e convertendo diversos
substratos em vi nagre. Esses agregados microbianos so tambm
usados em tratamentos aerbios e anaerbios de guas residurias
para a remoo de matria orgnica e inorgnica. No processo
de potabilizao de gua, as remoes de nitrognio, carbono
biodegra dvel e precursores de tri-halometanos podem ser feitas
por biolmes microbianos submersos.
7
Assim,

esta reviso teve por nalidade analisar o processo de
adeso de micro-organismos em diferentes superfcies, focando
principalmente a termodinmica do processo de adeso.
TERMODINMICA DE ADSORO
Adsoro um processo espontneo onde um componente do
sistema se concentra em maior quantidade na interface do que nas
outras fases em contato. A molcula difunde para a interface devi-
do ao excesso de energia livre de Gibbs que existe na interface e,
tambm, em virtude de interaes energeticamente favorveis que
podem ocorrer entre o slido adsorvente e o soluto, ou interaes
desfavorveis entre soluto e componentes da soluo.
8
A adeso e
formao de biolmes constituem um processo de adsoro. Mate-
maticamente a quantidade de molculas adsorvidas,
i
, na interface
pode ser denida como:
9

(1)
Para melhor entendimento das variveis da Equao 1, considere
o esquema apresentado na Figura 1. O sistema formado pela fase
de volume V

e pela regio associada com a fase de volume V

.
denido um limite -, onde abaixo deste a densidade volumtrica
da energia livre de Gibbs da interface, f
int
= (G/ V)
P,T
, igual a f

,
entretanto, acima de -, f
int
f

. Para regies abaixo de +, f

int
f

,
enquanto acima de +, f
int
= f

. N
i
, N
i

e N
i

referem-se quantidade
de substncia i no sistema e na fase e , respectivamente; A refere-
se entropia do sistema; C
i
, C
i

e C
i

referem-se concentrao da
Aspectos coloidais da adeso de micro-organismos 1941 Vol. 33, No. 9
substncia i no sistema, na fase e na fase , respectivamente, e z
refere-se coordenada perpendicular interface.
Considerando que o componente i no move espontaneamente
para a fase , o termo da segunda integral da Equao 1 igual a zero
e esta equao pode ser reescrita como na Equao 2:
(2)

Aplicando o teorema da integral mdia Equao 2, obtm-se
a Equao 3:
(3)
em que C
i
int
o valor da concentrao de i na interface, e C
i
, a
concentrao de i na fase .
Se C
i
int
muito maior que C
i

, a quantidade de material adsorvido

pode ser denido como na Equao 4:
(4)
A quantidade de material adsorvido no igual concentrao
do componente na interface, mas sim igual concentrao do com-
ponente versus a espessura da interface.
Se a tenso interfacial de um lquido reduzida pela adio de um
soluto, este deve ter adsorvido na interface.
10
A Equao 5 mostra a
equao fundamental de Gibbs para o fenmeno de adsoro ocorrer
em um sistema binrio.
11
(5)
em que G
T
a variao da energia Livre de Gibbs requerida para
ocorrer a adsoro, a tenso interfacial e o termo
1

1
refere-se
variao de energia associada ao trabalho qumico de transferir soluto
da soluo para a interface.
12
Usando a Equao 5 possvel chegar em uma equao que per-
mite calcular a quantidade de molculas adsorvidas em um sistema
(Equaes 6, 7, 8 e 9).
9,13
(6)
(7)
Unindo ambas as Equaes 6 e 7:
(8)
possvel obter:
(9)
em que d
1
pode ser denido nas prximas equaes:
(10)
em que a
i
a atividade. Expressando a Equao 10 em termos de
concentrao tem-se:
(11)
em que
l
o coeciente de atividade e C
1
a concentrao do soluto.
Algumas aproximaes so realizadas para facilitar os clculos,
como pode ser visto nas Equaes 12 e 13.
Para solues muito diludas:
(12)
em que C
1
a concentrao do soluto
Portanto:
(13)
A Equao 13 muito importante, pois permite obter a quantidade
de molculas adsorvidas (
i
) na interface por unidade de rea de uma
maneira mais fcil que a Equao 9. Medindo-se a tenso interfacial
em funo da concentrao do soluto, possvel construir um grco
de tenso interfacial versus a concentrao.
FORMAO DE BIOFILMES: A NATUREZA COLOIDAL
DO PROCESSO DE ADESO
Um sistema coloidal pode ser denido como um sistema hetero-
gneo, em que pelo menos uma das fases est na forma dispersa e a
outra(s) fase(s) encontra(m)-se na forma contnua. Uma vez que as
dimenses da fase dispersa so muito pequenas, o sistema coloidal
apresenta uma rea interfacial muito grande e muitas de suas proprie-
dades termodinmicas so inuenciadas pela natureza da interface.
14,15
Devido ao tamanho da bactria, de aproximadamente 1m, seu
formato e cobertura com biomacromolculas (Figura 2 e Tabela
1), densidade pouco superior da gua e carga global negativa, as
bactrias so consideradas partculas coloidais vivas e, portanto, as
propriedades fsico-qumicas de um sistema formado por muitas
bactrias assemelham-se s dos coloides. Importantes aspectos da
interao bacteriana e da adeso podem ser entendidos baseados
no conhecimento das propriedades fsico-qumicas e coloidais da
bactria.
16
As bactrias podem modicar a composio da superfcie
celular durante a fase de crescimento, ou em funo de mudanas
na composio do meio. Assim, essas alteraes causam mudanas
nas propriedades coloidais.
17
As interaes dos micro-organismos com a interface do substrato,
no processo de adeso, podem ser especcas ou no especcas.
Interaes especcas envolvem o reconhecimento de um determi-
nado stio, de uma molcula receptora que se encontra na interface
do micro-organismo, enquanto a interao no especca dirigida
por propriedades fsico-qumicas das duas interfaces interatuantes:
micro-organismo e superfcie na adeso.
18
A combinao de dois parmetros associados bactria, a hidro-
fobicidade celular e o potencial zeta, considerada de relevncia no
Figura 1. Representao esquemtica da interface de um sistema binrio
Arajo et al. 1942 Quim. Nova
estudo das propriedades da superfcie bacteriana visando o entendi-
mento do processo de adeso no especca da bactria ao substrato.
18

Estes dois parmetros so reexos das inmeras interaes intermo-
leculares (eletrosttica, covalente, de hidrognio e de disperso) que
ocorrem entre as molculas da interface bacteriana e da interface do
substrato, sendo todas estas formas de interao fundamentais para
o processo de adsoro/adeso.
8
Alm dos aspectos termodinmicos, alguns fatores podem afetar
o mecanismo do fenmeno de adsoro. A natureza da superfcie,
por exemplo, determina a rea disponvel para ocorrer a adsoro, e
a natureza qumica dos compostos da interface direciona a interao
que ocorre entre as molculas e a superfcie.
19
Nas bactrias, essencialmente so as biomolculas da parede
celular que determinam as propriedades da superfcie e, consequen-
temente, a termodinmica e a dinmica da adeso bacteriana.
20

Por exemplo, as bactrias so classicadas em Gram-positivas
ou Gram-negativas em funo da diferena na arquitetura da parede
celular. A parede celular Gram-positiva consiste de uma camada
espessa de peptideoglicano (~30 nm), enquanto a parede celular da
Gram-negativa apresenta estrutura e composio da membrana mais
complexa. Na Gram-negativa, a camada de peptideoglicano mais
na (~10 nm) e a superfcie externa da clula possui uma membrana
consistindo de protenas, lipopolissacardeos e fosfolipdeos. O espao
entre o peptideoglicano e a membrana externa conhecido como espao
periplasmtico e, em alguns pontos, atravessado por vrias enzimas
e protenas e desempenha vrias funes siolgicas (Figura 2).
1,21

A superfcie do peptideoglicano de bactria Gram-positiva
coberta, principalmente, por polissacardeos neutros e cidos, grande
nmero de diferentes protenas e cidos teicoicos.
22

Uma caracterstica atpica da membrana externa de Gram-
negativas a distribuio assimtrica dos lipdeos sobre as faces
externa e interna. A face externa contm todos os lipopolissacardeos
(LPS), enquanto a face interna contm a maioria dos fosfolipdeos.
Os LPS contm mais carga por unidade de rea que os fosfolipdeos
e a maioria desta carga aninica em pH neutro, devido exposio
de grupos carboxil e fosforil que podem ser ionizados. A face externa
altamente carregada e altamente interativa com ctions.
23
Evidncias sugerem que a presena de LPS na superfcie celular
de Gram-negativas tende a tornar a clula bacteriana mais hidroflica
e a perda de LPS da superfcie celular torna a superfcie mais hidro-
fbica. J foi relatado que a reduo nos nveis de oxignio do meio
induz modicao estrutural no LPS de algumas bactrias, resultando
em aumento da hidrofobicidade da clula. Isto indica que a bactria
capaz de alterar as caractersticas da superfcie celular, como a
hidrofobicidade, em funo das mudanas no ambiente externo.
24
Os grupos carboxil e fosforil conferem superfcie celular uma
densidade de carga negativa. Uma vez que a superfcie celular est
em contato direto com o ambiente, os grupos carregados dentro da
camada da superfcie so capazes de interagir com os ons ou mo-
lculas carregadas presentes no meio externo. Como resultado, os
ctions podem tornar-se atrados eletrostaticamente e ligarem-se na
superfcie celular.
25
Os locais responsveis pela ligao de metais no
micro-organismo so provavelmente nestes grupos carboxil dentro do
peptideoglicano, assim como nos grupos fosforil de cidos teicoicos
e teicurnicos presentes nas superfcies bacterianas.
26
A carga da superfcie bacteriana varia de acordo com a espcie
e inuenciada pelas caractersticas do meio de crescimento, como
pH e fora inica, idade da bactria e estrutura da superfcie. O nvel
de dissociao de grupos carboxil, amino e fosfato na parede celular
no somente determinado pelo pH, mas tambm pela concentrao
da soluo eletroltica.
27
A magnitude das interaes eletrostticas
diminui com aumento da fora inica devido blindagem das car-
gas da superfcie. As interaes eletrostticas perdem sua inuncia
quando h forte fora inica.
Algumas outras classes de componentes biomoleculares podem
estar presentes na superfcie bacteriana. Os exopolissacardeos
so polissacardeos secretados pelas bactrias e considerados
componentes determinantes das propriedades fsico-qumicas
de biolmes, consistindo no somente de polissacardeos, mas
tambm de quantidades considerveis de protena, cido nucleico
e lipdeos. Os EPS esto envolvidos na formao de agregados
microbianos e oferecem estabilidade ao biolme. Entretanto, esses
processos no so mediados pela formao de ligaes covalentes
C-C entre molculas EPS, mas sim por interaes intermoleculares
fsico-qumicas fracas. Trs tipos de interaes no covalentes
tm sido considerados: foras de disperso de London, interaes
eletrostticas e ligaes de hidrognio.
28
A superfcie celular bacteriana exerce importante funo no est-
gio inicial de adeso das clulas. As condies de crescimento afetam
o sistema de sntese da parede que, por sua vez, afetam os polmeros
aninicos e as enzimas presentes na parede do micro-organismo.
Caractersticas da superfcie dependem do pH da cultura e do estado
energizado da membrana. Mudanas nas propriedades de superfcie
induzidas por diferentes valores de pH do ambiente de crescimento
podem explicar aumento na adeso superfcie.
A adeso de diferentes estirpes de bactrias tambm inuenciada
pelas propriedades fsico-qumicas e termodinmicas do substrato
envolvido, baseado nas anlises das caractersticas da superfcie em
termos de carga eltrica e hidrofobicidade.
29
As superfcies mais comumente utilizadas na indstria de alimentos
so as dos substratos ao inoxidvel e as de polmeros, em funo de
suas excelentes propriedades e baixo custo em relao aos demais
Figura 2. Representao esquemtica de uma clula bacteriana Gram-
positiva (A) e uma Gram-negativa (B)
Aspectos coloidais da adeso de micro-organismos 1943 Vol. 33, No. 9
Tabela 1. Estrutura qumica de diferentes componentes da superfcie celular
microbiana
Componentes da superfcie celular
cido Teicoico
R = acares ou aminocidos
Fosfolipdeos
Esngosina

Esngomielina

Peptideoglicano
N-acetilglucosamina (a)

N-acetilmurmico (b)

Lipopolissacardeo
Antgeno O

Core de polissacardeos

Lipdeo A
materiais. So geralmente empregadas na fabricao de tanques, tu-
bulaes, acessrios e em superfcies de processamento de alimentos.
O ao inoxidvel pode ser produzido em vrios graus de polimen-
to, dependendo da nalidade, o que afeta a adeso bacteriana devido
a suas vrias microtopograas e propriedades fsico-qumicas.
30
A
principal diferena entre os graus de ao disponveis comercial-
mente sua composio relativa de ferro, cromo e nquel e a baixa
porcentagem de carbono. Dentre os vrios tipos de aos inoxidveis
disponveis, os mais utilizados so os do chamado grupo 18 - 8, ou
seja, que apresentam em sua composio aproximadamente 18%
de cromo e 8% de nquel. Deste grupo, as alteraes do grau 300,
por exemplo, 304 e 316, satisfazem maioria das necessidades da
indstria de alimentos. O grau 304 resistente corroso originada
pela maioria dos alimentos e agentes de limpeza. Em problemas de
corroso mais intensos deve ser empregado o grau 316 que apresenta
cerca de 10% de nquel e 3% de molibdnio. O ao inoxidvel difere
tambm no acabamento da superfcie, que pode variar de acordo com
o polimento empregado que se classica de 1, sem polimento, at 8,
cuja superfcie espelhada. Normalmente, a indstria de alimentos
utiliza o ao inoxidvel 304 com polimento 4.
31,32
O teor de molibdnio a principal diferena na composio do
ao inoxidvel e capaz de afetar a natureza da camada de passivao
presente na superfcie do ao inoxidvel. A camada de passivao
consiste de uma mistura de xidos de ferro, cromo e molibdnio e
apresenta participao no processo de adeso de bactrias.
33
Em relao aos polmeros comumente utilizados na indstria de
alimentos, suas propriedades variam bastante, dependendo da matria-
prima utilizada, dos aditivos incorporados e do mtodo de fabricao.
Basicamente, so agrupados em duas categorias: termoplsticos e
termo estveis. Os termoplsticos mais comumente encontrados em
indstrias de ali mentos so: polietileno, polipropileno, poli (cloreto
de vinila) ou PVC e acrlico, entre outros. No grupo dos termoestveis
esto o polister, resinas epxi e poliuretanos, polmeros usados na fa-
bricao de equipamentos en volvidos no processamento de alimentos.
34
Os substratos slidos apresentam caractersticas fsicas e qumi-
cas heterogneas. Essa heterogeneidade devida complexidade da
estrutura cristalina dos slidos e de sua composio qumica variada.
29

A adsoro de espcies diferentes ou de grupos distintos carregados
na superfcie tambm pode contribuir para a heterogeneidade da su-
perfcie.
35
Essas superfcies heterogneas produzem locais altamente
favorveis para adeso bacteriana.
As superfcies de processamento de alimentos adquirem carga
eltrica supercial no meio aquoso, devido ionizao dos grupos
qumicos presentes na superfcie ou por meio de adsoro de ons
na interface.
27
Quando a bactria se aproxima da su perfcie do substrato, ocorre
o incio do desenvolvimento de interaes resultantes da atmosfera
inica, que circunda as duas superfcies. A intensidade dessa fora
depende do potencial eltrico das duas superfcies, da fora inica e
constante dieltrica do meio circundante e, ainda, da distncia entre
a bactria e o substrato.
36
A presena de ons de ferro na superfcie provoca modicaes
nas interaes eletrostticas entre a superfcie slida e as clulas mi-
crobianas. Estes ons carregados positivamente reduzem as interaes
repulsivas eletrostticas entre a clula microbiana e a superfcie sli-
da, carregadas negativamente, conduzindo a um aumento na adeso
bacteriana em um lquido com baixa fora inica.
37
Um fator tambm contribuinte para potencializar os efeitos fsico-
qumicos na adeso a caracterstica topogrca da superfcie. Tem
sido hipotetizado que a bactria adere em superfcies rugosas por
trs razes: maior rea disponvel para adeso, proteo das foras
de cisalhamento e trocas qumicas que causam interaes fsico-
qumicas preferenciais.
38
A microtopograa da superfcie pode aumentar ou diminuir a
associao da bactria superfcie. Superfcies que entram em contato
com alimentos apresentam diferentes microtopograas de superfcie
e podem conter ssuras e fendas com tamanho suciente para alojar
bactrias.
39
O aumento dos nveis de adeso associados rugosidade
da superfcie atribudo proteo das clulas no interior das irre-
gularidades da superfcie, permitindo que a adeso irreversvel seja
Arajo et al. 1944 Quim. Nova
estabelecida mais facilmente, sendo, por isso, locais preferenciais
para a colonizao inicial.
40
Na literatura, as opinies variam em relao ao efeito das carac-
tersticas da superfcie na adeso bacteriana. Alguns pesquisadores
relatam que h uma correlao positiva entre adeso e aumento da
rugosidade, enquanto outros pesquisadores no reportam nenhuma
correlao entre a habilidade da bactria aderir e irregularidades ou
rugosidade das superfcies. Este aparente conito est relacionado
com o nvel de rugosidade estudada, com as espcies bacterianas
estudadas, os parmetros fsico-qumicos da superfcie e o mtodo
usado para detectar a bactria na superfcie.
33
INTERAES INTERMOLECULARES
Interaes eletrostticas
No mundo microscpico dos coloides e interfaces, a presena
ou ausncia de cargas superciais pode ter grande signicncia em
termos de estabilidade, sensibilidade ao ambiente, propriedades ele-
trocinticas e outros fatores. A interao entre dois tomos carregados
ou molculas potencialmente a forma mais forte de interao fsica
a ser considerada na interface e no sistema coloidal.
A superfcie bacteriana pode adquirir cargas por diferentes
mecanismos, tais como ionizao de grupos de tomos presentes na
superfcie, adsoro preferencial de ons e solubilizao preferencial
de molculas presentes na interface do micro-organismo.
41
Estes
mecanismos so geralmente dependentes das propriedades da solu-
o aquosa, principalmente do seu pH. A interface de uma bactria
carregada eletricamente, juntamente com os ons existentes no lquido
prximo interface, e que esto sob a inuncia do campo de fora
causado pelas molculas da superfcie do micro-organismo, formam
uma camada difusa de ons chamada dupla camada eltrica (Figura 3).
A ideia da dupla camada eltrica foi primeiramente proposta por
Helmholtz, que desenvolveu o conceito de um sistema tendo cargas
organizadas em dois planos paralelos. Entretanto, sabe-se que o mode-
lo inadequado, uma vez que esta distribuio paralela e organizada
no existe. Na realidade, o movimento trmico de ons na soluo
introduz certo nvel de caos acarretando o espalhamento dos ons na
regio de superfcie carregada, formando a dupla camada difusa.
42
A distribuio de ons ao redor da interface objetiva reduzir a
energia livre de Gibbs do sistema. Quando o equilbrio termodin-
mico alcanado, o potencial eletroqumico de cada espcie inica
mantido constante, como pode ser observado na Equao 14:
43
(14)
em que
_
i
o potencial eletroqumico Z
i
se refere carga do on, e
carga do eltron, (x) a diferena no potencial eltrico entre a inter-
face e um ponto P localizado numa certa distncia x perpendicular
interface;
I
o potencial qumico, n
i
a quantidade de ions por m
3
,
N
A
a constante de Avogadro, R a constante dos gases e T a tempe-
ratura em Kelvin.
A Equao 14 mostra que h trs principais fatores que coordenam
a congurao do on ao redor da interface. O primeiro, (
_
i
0
), a energia
de interao entre ons e molculas presentes na interface. O segundo,
(RT ln n
i
), a contribuio do trabalho qumico no posicionamento dos
ons ao redor da interface e est associado com a entropia congura-
cional dos ons, determinado principalmente pelo movimento trmico
das espcies carregadas. E, o terceiro (Z
i
e(x)N
A
) refere-se energia
devida s interaes eletrostticas ocorrendo entre um on com carga
Z e a atmosfera inica que gera o potencial eltrico (x).
As interaes intermolecular (
_
i
0
) e eletrosttica (Z
i
e(x)N
A
) iro
determinar, principalmente, a organizao de ons em uma camada
densa, formada por espcies qumicas no solvatadas. Esta camada
est prxima interface e conhecida como camada Stern-Helmholtz.
Mais distante da interface, formada uma camada difusa, denominada
de camada Gouy-Chapman, onde a distribuio do on depende da
entropia (RT ln n
i
) e de interaes eletrostticas (Figura 3).
11
A lei fundamental que rege as interaes entre espcies carregadas
a Lei de Coulomb. A interao entre duas cargas q
1
e q
2
no vcuo
(F
el
) separadas por uma distncia r, segue a Equao 15:
44


(15)
em que
0
representa a permeabilidade do vcuo.
O trabalho necessrio para trazer as duas cargas juntas de innito
para uma distncia r :
45

(16)
Para cargas de mesmo sinal, w (r) ser positivo e a interao ser
repulsiva; se a carga for oposta, a interao ser atrativa.
Se a carga q
1
for isolada no espao, ela produzir um campo
eltrico em um ponto r, tal que o trabalho necessrio para trazer uma
unidade de carga eltrica do innito a uma distncia r de q
1
ser igual:
(17)
A quantidade de trabalho denida como potencial eltrico ()
na distncia r devido carga q
1
.
Para aplicar a Lei de Coulomb para solues de eletrlitos e
coloides, necessrio empregar a Lei de distribuio de Boltzmann,
que relata a probabilidade de uma unidade de tomo, molcula, on
ou partcula estar a certo ponto com uma energia livre especca,
relativa a um estado de referncia especco. A probabilidade ge-
ralmente expressa em termos de uma concentrao mdia, c, no ponto
r relativo a uma concentrao, c
0
, na mesma distncia referncia que
a energia tomada como zero. Na temperatura, T, a distribuio de
Boltzmann dada como:
42


(18)
A Equao 19 prediz que se existe potencial eltrico negativo,
, em algum ponto na soluo eletroltica, ento na regio daquele
ponto a concentrao de cargas positivas, c+, pode ser dada por:
(19)
Figura 3. Representao esquemtica da dupla camada eltrica da super-
fcie celular
Aspectos coloidais da adeso de micro-organismos 1945 Vol. 33, No. 9
em que z
+
a valncia do on positivo e c
0
a concentrao do on
positivo na regio onde

=0. Uma expresso similar pode ser escrita
para ons negativos na soluo:
(20)
Embora a soluo como um todo seja eletricamente neutra, na
vizinhana do potencial eltrico existe um desequilbrio de cargas
eltricas. Portanto, para um negativo, haver mais ons positivos na
regio que ons negativos. Para o caso, em que z
-
=

z
+
= 1, o excesso
dado por:
(21)
O potencial eletrocintico ou potencial zeta de macromolculas,
partculas, ou superfcies a diferena de potencial em um meio
uniforme entre um ponto a uma distncia da superfcie e um ponto
no plano de cisalhamento e medido por mtodos eletrocinticos,
tais como eletroforese, diferena de potencial osmtico e diferena
de potencial de sedimentao.
46
O potencial zeta importante nos estudos de qumica de super-
fcie, visto que pode ser usado para prever e controlar a estabilidade
de sistemas coloidais. O potencial zeta de clula bacteriana , em
geral, negativo e uniforme na superfcie celular, uma vez que a carga
na parede bacteriana homognea.
24
Em geral, o potencial zeta de
bactrias varia de -10 a -90 mV.
Uma correlao entre carga da superfcie e adeso no fcil.
A diculdade est nas caractersticas da superfcie celular, que varia
entre as espcies bacterianas. Em geral, h heterogeneidade nas
superfcies celulares, em que muitos componentes podem diferir
entre as espcies.
Interao Lifshitz-van der Waals (LW)
As foras de van der Waals governam as interaes envolvendo
uma variedade de molculas e so responsveis pela estabilidade de
complexos intermoleculares e adsoro de diferentes elementos na
superfcie.
Durante a adeso microbiana, alm da interao eletrosttica,
existem trs principais tipos de foras agindo entre tomos e molcu-
las em nveis moleculares. Essas foras so comumente denominadas
de van der Waals. Dentre as trs, duas envolvem dipolos induzidos
e permanentes, e a terceira considerada a fora mais fundamental
e universal, sendo a mais importante contribuio da interao total
de van der Waals.
47
Esta fora a chamada London-van der Waals,
primeiramente postulada por van der Waals em 1873 e depois explica-
da por London em 1930.
48
Deste modo, a interao de van der Waals
entre tomos e molculas podem ser de trs tipos: dipolo-dipolo,
dipolo-dipolo induzido e interao de London.
As foras indutoras ocorrem na interao entre uma molcula com
momento de dipolo permanente e uma molcula no polar. O campo
eltrico da molcula dipolar distorce a distribuio de carga eltrica da
outra molcula, produzindo um momento de dipolo induzido dentro da
molcula. A energia resultante desta interao chamada de segunda
ordem. Esta contribuio est simultaneamente presente com a contri-
buio eletrosttica no caso da interao de duas molculas polares.
49
As foras dispersivas ocorrem entre duas molculas que no
possuem momentos de dipolos permanentes. Embora a molcula
no possua momento de dipolo permanente, seus eltrons esto em
constante movimento com sua densidade oscilando continuamente no
tempo e espao. Deste modo, em qualquer instante, qualquer molcula
possui um dipolo eltrico instantneo que utua como a densidade
eletrnica utua. O dipolo instantneo numa molcula induz um
dipolo instantneo numa segunda molcula. O dipolo induzido na
segunda molcula interage com o dipolo induzido na primeira para
produzir uma energia atrativa chamada de energia de disperso. A
energia de disperso o resultado de correlaes entre utuaes da
densidade de eltrons nas duas molculas.
50
Interao cido-base de Lewis (AB)
Alm das interaes de van der Waals e das interaes eletrostti-
cas, vericou-se a existncia de outras foras de interao que tambm
podem ter um papel importante na interao entre coloides. Estas
foras de interao apresentam um carter polar e podem ser atrativas
ou repulsivas.
2
As interaes cido-base constituem o balano das
interaes que so responsveis pela tenso interfacial. As interaes
do tipo AB ocorrem entre as molculas que esto muito prximas. Na
gua e, provavelmente, em outros lquidos polares, as interaes podem
ser induzidas por mudanas na orientao das molculas do lquido.
51

Em meios aquosos, as foras de interao polares devem-se
principalmente a interaes entre doadores e receptores de eltrons
que representam interaes do tipo cido-base de Lewis, que so
geralmente designadas por AB.
52
As interaes interfaciais so relevantes para a denio de hidro-
fobicidade e hidrolicidade. A diferena bsica entre hidrofobicidade e
hidrolicidade a competio entre a energia livre interfacial de coeso
do slido, imerso na gua, e a energia livre de coeso do lquido.
53
A tendncia das molculas de gua de evitar interaes desfavo-
rveis com solutos apolares constitui uma fora dirigida para a agre-
gao destes solutos. Cada molcula de gua fortemente inclinada
a no sacricar nenhuma de suas ligaes de hidrognio, conduzindo
a uma reorientao signicante das molculas de gua na superfcie
da molcula do soluto no polar. Ocorre uma mudana na intensidade
de energia das molculas de gua na superfcie do soluto. As ligaes
de hidrognio so quebradas quando as molculas de gua esto em
contato com o ar ou superfcies apolares.
54
A importncia do carter hidrofbico da superfcie das clulas na
adeso explicada pelo estabelecimento de uma adeso efetiva entre
duas superfcies em meio aquoso, o lme de gua que as separa tem
que ser removido e a hidrofobicidade das superfcies interatuantes
contribui para a facilidade dessa remoo. Portanto, a interface bac-
tria/lquido e a interface superfcie de adeso/lquido tero que ser
substitudas pela interface bactria/superfcie de adeso. Segundo a
teoria termodinmica, a adeso s se verica se o processo conduzir
a uma reduo da energia livre global.
55
O parmetro G
tot

expressa a variao da energia livre associada
atrao polar entre as molculas das duas superfcies. Quando a
energia livre de interao repulsiva, isto , o G
tot
positivo, as
superfcies so ditas hidroflicas. Quanto mais negativo o valor de
G
tot
mais hidrofbicas so as superfcies, por outro lado, quanto mais
positivo o valor de G
tot

mais hidroflica a superfcie.
56
A energia livre da interao interfacial entre as molculas do
material imersos na gua a mais apropriada medida da hidrofo-
bicidade. A tenso interfacial determinada pelo somatrio entre a
componente apolar e polar da respectiva superfcie (Equao 22).
52
(22)
em que
L
a tenso supercial total do lquido;
L
LW
e
S
LW
so as
tenses superciais das foras de interao Lifshitz-van der Waals;

L
+
e
S
+
so as componentes aceptoras de eltrons do componente
cido-base da tenso supercial; e
S
-
e
S
-
so as componentes do-
adoras de eltrons do componente cido-base da tenso supercial,
Arajo et al. 1946 Quim. Nova
considerando-se que so as tenses para os lquidos (l) e para a
superfcie (s) analisados.
Existem relatos demonstrando que
-
sempre maior do que
-
em
superfcies bacterianas de E. coli, P. uorescens, B. subtillis e P. aerugino-
sa. Isto comprova a teoria de que as clulas tm carter doador de eltrons
(-) predominante. Todas as biossuperfcies so predominantemente
doadoras de eltrons como consequncia da presena do oxignio na
atmosfera da Terra e da hidratao da superfcie da clula microbiana.
20
Somente o ngulo e a
L

podem ser determinadas experimental-
mente. Os termos restantes so estimados baseados em consideraes
tericas que so divididas em dois grupos: teoria macroscpica e
microscpica. Na teoria macroscpica, o equilbrio do ngulo de
contato entre o lquido diagnosticado e a superfcie determinado
pela tenso total da superfcie de slidos e lquidos
sl
.

J a teoria
microscpica, considera a natureza qumica do lquido, uma vez que
as contribuies de diferentes tipos de interaes intermoleculares na
energia livre de uma superfcie so determinadas individualmente.
57
Os trs modelos principais para a converso de valores de n-
gulos de contato em parmetros fsico-qumicos da superfcie so: a
equao de estado (ES), a mdia geomtrica (GME) e a Lifshitz-van
der Waals cido-base (LWAB). Os modelos ES e GME tm sido
criticados por suposies equivocadas em relao natureza das
interaes interfaciais. Deste modo, a abordagem LWAB a mais
indicada, pois proporciona informaes detalhadas da qumica da
superfcie, sendo capaz de determinar valores para os componentes
cido e base em adio aos componentes de disperso da energia
livre da superfcie.
58,59
Para converter os valores de ngulos de contato em parmetros
fsico-qumicos da superfcie preciso determinar as trs componen-
tes da tenso interfacial (
L
LW
,
s
+
e
s
-
) das superfcies. Essa determina-
o feita por meio do ngulo de contato formado por trs lquidos
de polaridades diferentes cujos componentes da tenso interfacial
so conhecidos (Tabela 2). Os componentes da tenso interfacial
so obtidos aps resolver simultaneamente as trs equaes obtidas
quando valores dos ngulos de contato formados sobre a superfcie
so substitudos na Equao 22.
A medida do ngulo de contato o mtodo mais exato para
determinar a energia de interao entre um lquido (L) e um slido
(S) a uma distncia de equilbrio mnima (l
0
) entre S e L. O cosseno
(cos) do ngulo de contato a medida do equilbrio entre as energias
de coeso entre as molculas do lquido (
l
) e as foras de adeso
entre lquido e slido, expressa como G
SL
. ngulos de contato so
obtidos somente quando a energia de coeso do lquido maior que
a energia de adeso entre lquido e slido.
48
A energia livre de interao hidrofbica G
sws
TOT
entre as mol-
culas da superfcie (s) imersa em gua (w) calculada pelo somatrio
das componentes apolar e polar da energia livre de interao, G
sws
LW

e G
sws
AB
, respectivamente.
60
(23)
Aplicando as Equaes 24 e 25, possvel chegar ao valor de
G
sws
tot
ou G
bwb
tot
e predizer em relao hidrofobicidade de um
substrato (s) ou de uma superfcie celular (b):
(24)
(25)
A partir dos valores das componentes da tenso interfacial pos-
svel determinar a G
adeso
entre as duas superfcies: clula microbiana
(b) e superfcies de processamento (s):
(26)
(27)
(28)
em que
bs
a tenso interfacial entre as superfcies bactria/superfcie
de adeso;
bs
LW
a componente apolar, interao de Lifshitz-van der
Waals entre bactria e superfcie;
s
AB
a componente polar (interao
de cido-base de Lewis) entre bactria e superfcie.
As mesmas equaes (26, 27 e 28) devem ser empregadas no
clculo da tenso interfacial entre as superfcies bactria/lquido (
bl
)
e tenso interfacial entre a superfcie de adeso/lquido
sl
.
Como a energia livre est diretamente relacionada tenso inter-
facial, G
adeso
pode ser representado

da seguinte forma:

(29)
(30)
(31)
O valor de G
adeso
permite fazer uma avaliao termodinmica
do processo de adeso, sendo esta termodinamicamente favorvel
quando G
adeso
<0 e, ao contrrio, desfavorvel quando G
adeso
>0.
Teoria do processo de adeso celular
A adeso de micro-organismos a superfcies pode ser interpretada
de acordo com a teoria geral de estabilidade de coloides, conhecida
como teoria DLVO, por combinao das iniciais dos autores Derja-
guin e Landau, Verwey e Overbeek.
61
A clssica teoria DLVO parte
da denio de que os micro-organismos seriam partculas quimica-
mente inertes,
62
ou seja, seriam como coloides liofbicos. Essa teoria
arma que a energia potencial total de interao entre dois corpos
resultante da ao combinada entre as foras atrativas de Lifshitz-
van der Waals e as foras de dupla camada eltrica, que geralmente
so repulsivas, uma vez que a maioria das superfcies adquire carga
negativa em soluo.
A contribuio das interaes consideradas pela teoria DLVO
resulta num perl de energia potencial que muito dependente da
fora inica do meio. Assim, se a fora inica do meio baixa, o
perl de energia potencial de interao entre os dois corpos de sinal
igual apresenta um mximo de energia, que representa uma barreira
para a aproximao dos corpos, e um mnimo de energia, designado
mnimo primrio, que se localiza a uma distncia inferior a 2 nm da
superfcie. Quando se aumenta a fora inica do meio, a barreira de
energia diminui, devido reduo da energia da dupla camada eltrica.
Assim, para valores intermdios da fora inica do meio, o mximo
de energia diminui e cria-se um mnimo secundrio. Este, quando os
micro-organismos interatuantes so bactrias, situa-se a 5-20 nm da
superfcie. Uma vez ultrapassado o mximo de energia e atingido o
mnimo primrio, a ligao entre os dois corpos interatuantes torna-se
irreversvel. Para valores elevados da fora inica do meio, a energia
potencial de interao sempre negativa e neste caso todas as partcu-
Tabela 2. Componentes das tenses interfaciais das substncias a 25
o
C
Substncias Tenso Interfacial ( mJ/m
2
)

l
tot

l
LW

l
+

l
-
-bromonaftaleno 44.4 44.4 0.0 0.0
gua 72.8 21.8 25.5 25.5
Formamida 58.0 39.0 2.28 39.6
Aspectos coloidais da adeso de micro-organismos 1947 Vol. 33, No. 9
las podem atingir o mnimo primrio. A existncia de dois mnimos
de energia permite distinguir entre a adeso reversvel e irreversvel.
2
A teoria DLVO explica a adeso de micro-organismos com base na
interao entre partculas coloidais. Alm disso, as foras de interao
contabilizadas por esta teoria so apenas as foras de longo alcance
(foras de van der Waals e foras resultantes da dupla camada eltrica).
Deste modo, esta teoria s permite prever se os micro-organismos se
aproximam a certa distncia da superfcie, no permitindo quanticar
a energia potencial dessa interao. Quando uma partcula atinge o
mnimo primrio, um conjunto de foras de curto alcance passa a
dominar a interao e a determinar as foras de adeso.
47,63
A teoria DLVO estendida surgiu para complementar a teoria
DVLO e adiciona teoria clssica foras cido-base de Lewis, para
considerar os aspectos relacionados aos micro-organismos no pro-
cesso de adeso. Assim, a energia livre das interaes totais numa
superfcie resultante do somatrio das energias livres das interaes
de Lifshitz-van der Waals, interaes cido-base de Lewis e foras
eletrostticas de dupla camada eltrica.
64,65
Aplicaes da teoria termodinmica no processo de adeso
A hidrofobicidade de diferentes espcies de bactrias, representa-
tivas dos principais gneros, isoladas de uma ordenhadeira mecnica
foi estudada assim como a hidrofobicidade dos seguintes materiais:
borracha, ao inoxidvel (SS) 316 e (SS) 304, vidro e polimetilme-
tacrilato. A determinao da hidrofobicidade da superfcie foi obtida
pela medida do ngulo de contato de trs lquidos de polaridades
diferentes com os cupons (3,0 x 2,0 cm) de cada material avaliado.
Os valores dos ngulos de contatos medidos, com auxlio de um
aparelho gonimetro, foram adicionados nas equaes anteriormente
demonstradas e, por meio dos valores dos componentes de tenso das
superfcies, foi obtida a energia livre de interao (G
iwi
) entre duas
molculas do material (i) quando imersos em gua (w). Quando a
interao entre duas entidades foi maior que a interao de cada en-
tidade com a gua, o material foi considerado hidrofbico. O mesmo
procedimento foi adotado para clulas bacterianas, sendo o ngulo de
contato formado sobre uma camada de clulas depositadas em uma
membrana aps processo de ltrao de um concentrado de clulas.
Em relao hidrofobicidade das bactrias, todas as estirpes de
Lactobacillus lactis lactis bem como de Enterococcus faecalis foram
consideradas hidrofbicas. As estirpes de Pseudomonas aeruginosa e
Staphylococcus sciuri tiveram valores variados para a hidrofobicida-
de, tendo estirpes da mesma espcie classicada como hidrofbicas,
enquanto outras foram hidroflicas (Tabela 3). Todos os materiais
avaliados foram hidrofbicos, sendo a borracha, ao inoxidvel SS
316 e SS 304 as superfcies mais hidrofbicas e o vidro a superfcie
mais hidroflica. A energia livre de adeso entre a bactria e os mate-
riais em meio aquoso foi calculada a m de predizer qual superfcie
possui maior habilidade para a formao de biolmes. Para todas as
situaes estudadas, a adeso foi termodinamicamente favorvel ao
ao inoxidvel SS 316, SS 304 e borracha e menos favorvel nas
superfcies de polimetilmetacrilato e vidro.
66
A implantao dos ons N
+
, O
+
, SiF
3
+
na superfcie do ao inoxi-
dvel 316 foi investigada, uma vez que os ons implantados tornam
a superfcie menos atrativa para a bactria afetando o processo de
adeso. Uma das razes que a implantao do on reduz a energia
livre da superfcie, inuencia a molhabilidade e diminui a rugosidade
da superfcie. Neste estudo, a dose e a energia de implantao dos
ons foram de 10
16
ons/cm
2
e 30 KeV, respectivamente. Todas as
superfcies avaliadas apresentaram-se lisas e com morfologia uni-
forme. A rugosidade das superfcies R
a

para os ons implantados N
+
,
O
+
, SiF
3
+
foi 200, 129 e 36 angstrons, respectivamente. Com relao
energia da superfcie, no houve diferena bvia no componente
apolar da superfcie, entretanto, o componente polar para SiF
3
+
foi o
menor componente entre as superfcies avaliadas. Como resultado, a
energia total da superfcie de ao inoxidvel com SiF
3
+
implantado foi
a menor (48,30 mN/m), enquanto para os outros sistemas foi 56,10
para N
+
implantado e 54,23 mN/m para O
+
implantado. Os autores
tambm observaram que a superfcie com a presena do on SiF
3
+

apresentou a melhor reduo da adeso bacteriana. Neste estudo, a
adeso bacteriana reduziu com a diminuio da energia da super-
fcie. As superfcies com ons implantados apresentaram melhores
resultados que as superfcies controle, quanto adeso. Os autores
concluram que a superfcie de ao inoxidvel com SiF
3
+
pode exercer
importante funo na reduo de clulas aderidas.
67
A inuncia das propriedades fsico-qumicas da superfcie na
adeso de Pseudomonas aeruginosa foi estudada em polmeros mo-
deradamente hidrofbicos e em superfcies hidroflicas obtidas por
irradiao de 50 keV Ar
+
e por tratamento de plasma-O
2
. Os polmeros
utilizados no tratamento foram poli-hidroximetilsiloxano (PHMS)
e polietilenotereftalato (PET). O PET foi utilizado, pois seu carter
hidrofbico no afetado aps aplicao de ambos os tratamentos.
Os autores observaram rpida produo de exopolissacardeos nas
superfcies de alta polaridade e formao de estrutura de multicamadas
complexas aps 2 h de incubao. As modicaes qumicas induzidas
pela irradiao mudaram drasticamente a energia livre das superfcies. A
superfcie PHMS antes do tratamento apresentava alta hidrofobicidade,
em virtude da orientao dos grupos metil na superfcie. Esta superfcie
tornou-se moderadamente hidroflica aps a irradiao e muita hidro-
flica aps tratamento com plasma. Por outro lado, a molhabilidade do
PET no teve mudanas signicativas aps a irradiao e aumentou
levemente aps o tratamento com plasma. Em ambos os tratamentos
para PHMS, a energia livre da superfcie aumentou. Este efeito devido
ao aumento das foras dispersivas Lifshitz-van der Waals e polar de
Lewis. No caso da superfcie de PET, as modicaes da energia livre
foram menos pronunciadas, no entanto os componentes dispersivos e
polares tiveram pequenas variaes. Quanto s medidas de rugosidade,
no houve diferena signicativa aps os tratamentos, com exceo da
superfcie PHMS tratada com plasma.
68
CONCLUSO
O fenmeno da adeso bacteriana depende de interaes fsico-
qumicas que ocorrem entre a superfcie celular e um substrato. A
Tabela 3. Energia livre (mJ/m
2
) de interao entre micro-organismos (i)
imersos em gua (w) e de diferentes materiais (i) imersos em gua (w)
Micro-organismos ou materiais G
iwi
Pseudomonas aeruginosa 1 6,1
Pseudomonas aeruginosa 4 -60,7
Pseudomonas aeruginosa 6 19,6
Pseudomonas aeruginosa 14 -27,9
Pseudomonas aeruginosa 63 84,7
Lactobacillus lactis lactis 8 -24,6
Lactobacillus lactis lactis 62 -12,9
Lactobacillus lactis lactis 73 -18,7
Staphylococcus sciuri 45 -13,3
Staphylococcus sciuriI 50 -27,5
Staphylococcus sciuri 55 12,5
Staphylococcus sciuri 60 13,9
Enterococcus faecalis 70 -21,9
Enterococcus faecalis 76 -24,4
Enterococcus faecalis 77 -12,7
Borracha -57,8
SS 316 -58,1
SS 304 -54,4
Vidro -14,8
Polimetilmetacrilato -18,9
Arajo et al. 1948 Quim. Nova
estabilidade de um biolme bacteriano obtida por meio de intera-
es Lifshitz-van der Waals, eletrostticas e cido-base de Lewis.
As caractersticas das duas superfcies interatuantes, tais como a
hidrofobicidade, carga eltrica e condies ambientais, inuenciam
o processo de adeso e consequente formao do biolme.
O entendimento da termodinmica da adeso microbiana
importante, uma vez que possibilita predizer se a adeso de uma
determinada bactria favorvel ou no em diferentes superfcies.
Com o conhecimento dos parmetros fsico-qumicos da superfcie
possvel desenvolver novas estratgias, que tornem a superfcie
menos atrativa para os micro-organismos.
AGRADECIMENTOS
Ao apoio nanceiro dos rgos CNPq e FAPEMIG.
REFERNCIAS

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