Hablemos

de
hemos
Metabolismo
de
porfirinas y hemos
Ej: Hemo b
Grupo hemo
Ion de hierro con una porfirina sustituida como
ligando.
Grupo prosttico de la hemoglobina, de los
citocromos redox y de las enzimas con
citocromo P450.
Funciones de las hemoprotenas
Catlisis (peroxidasas, monooxigenasas)
Transporte de electrones (citocromos)
Transporte de oxgeno (hemoglobina)
Sensores
CooA, sensor de CO en Rhodospirillum rubrum
Fix L, sensor de oxgeno en Rhizobium
Guanilato ciclasa, sensor de
.
NO
Las hemoproteins consiguen su sorprendente
diversidad funcional modificando el entorno del
hemo en la matriz proteica.
Protoporfirina IX
Orden de los
sustituyentes:
MVMVMPPM
Porfirinas:
compuestos
cclicos formados
por cuatro anillos
pirrlicos unidos
por puentes
metenilo.
Buenos ligandos de
iones metlicos,
resonancia.
Metilo
Vinilo
Propilo
Su nombre proviene de la palabra
griega para prpura.
Sntesis de hemo
Sntesis de hemo
Las reacciones iniciales en la sntesis de hemo
son comunes a la sntesis de otros tetrapirroles
como la clorofila en plantas y la coenzima B12 en
bacterias
En el hombre, la sntesis de hemo ocurre en
todos los tejidos, sobretodo en la mdula sea
(hemoglobina) y en el hgado (citocromos P450)
En 1974, Shemin y
Rittenberg demostraron
que los nitrgenos del
hemo derivan de la
glicina, y que los
carbonos derivan de
glicina y acetato (con
succinil-CoA como
precursor inmediato)
Myself as a Guinea Pig
. . . in 1944, I undertook, together with David Rittenberg, an
investigation on the turnover of blood proteins of man. To this
end I synthesized 66 g of glycine labeled with 35 percent
15
N
at a cost of $1000 for the
15
N. On 12 February 1945, I started
the ingestion of the labeled glycine. Since we did not know the
effect of relatively large doses of the stable isotope of nitrogen
and since we believed that the maximum incorporation into
the proteins could be achieved by the administration of
glycine in some continual manner, I ingested 1 g samples of
glycine at hourly intervals for the next 66 hours. . .. At stated
intervals, blood was withdrawn and after proper preparation
the
15
N concentrations of different blood proteins were
determined.
David Shemin
Yo, conejillo de indias
...en 1944 comenc, junto con David Rittenberg, una
investigacin acerca del recambio de protenas en la sangre de
la especie humana. Con este fin, sintetic 66 g de glicina
marcada con 35 % de
15
N a un costo de $ 1000 pr el
15
N. El 12
de febrero de 1945, comenc a ingerir la glicina marcada.
Como no sabamos el efecto de dosis relativamente grandes
del istopo estable de nitrgeno, y como creamos que la
mxima incorporacin en las protenas se alcanzara con la
administracin de glicina en forma continua, comenc a
ingerir muestras de 1 g de glicina a intervalos de una hora
durante 66 horas....A intervalos establecidos, sacbamos
sangre y, luego de preparar las muestras, se meda la
concentracin de
15
N en diferentes protenas sanguneas.
David Shemin
Sntesis de -aminolevulinato (ALA)
primera reaccin de la sntesis de hemo
paso determinante y limitante de la velocidad
sitio ms regulado
-aminolevulinato sintasa (ALA sintasa)
PLP (deficiencias en B6 estn asociadas a anemia)
mitocondria
el ALA (-aminolevulinato) se transporta al
citosol
PLP
Sntesis de -aminolevulinato (ALA)
2 molculas de ALA
condensan para formar el
porfobilingeno
la enzima se denomina
porfobilingeno sintasa o -
aminolevulinato deshidratasa
la enzima contiene zinc(II) y
es inhibible por plomo
en casos de intoxicacin por
plomo, se acumula ALA, el cual tiene
similitud estructural con el
neurotrasmisor GABA y podra
mediar algunos efectos neurolgicos
de la intoxicacin por plomo.
2
2
2
Cuatro molculas de porfobilingeno
condensan para formar un tetrapirrol
lineal, el hidroximetilbilano, con la
enzima hidroximetilbilano sintasa o
porfobilingeno desaminasa (cofactor
dipirrometano).
ste se cicla generando el
uroporfiringeno III, con la
uroporfiringeno III sintasa (llamada
tambin cosintasa).
La uroporfiringeno III sintasa realiza la ciclacin
del tetrapirrol lineal hidroximetilbilano para formar
uroporfiringeno III, asimtrico. Ocurre a travs de la
formacin de un intermediario spiro a nivel de la enzima, un compuesto
bicclico con un carbono comn a ambos anillos.
En ausencia de uroporfiringeno III sintasa, el
hidroximetilbilano cicla espontneamente
formando uroporfiringeno I, simtrico.
Conversin de
hidroximetilbilano (HMB) a
uroporfiringeno I (no
enzimtico) y a
uroporfiringeno III
(enzimtico).
El tetrapirrol lineal se cicla
con inversin de uno de
los anillos para formar el
producto asimtrico con la
enzima uroporfiringeno 3
sintasa (U3S, tambin
llamada cosintasa). El
intermediario spiro se
propuso como un
intermediario del ciclo
cataltico.
El uroporfiringeno III se convierte en protoporfirina IX
descarboxilacin de los acetilos a metilos (uroporfiringeno
decarboxilasa) citosol
descarboxilacin oxidativa de dos propionatos de cadenas
laterales a vinilos (coproporfiringeno oxidasa) mitocondria
oxidacin de los metilenos que unen los diferentes pirroles a
metenilos (protoporfiringeno oxidasa) mitocondria
Los porfiringenos son incoloros, presentan
resonancia dentro de los anillos pirrlicos pero no
entre ellos.
Son inestables, pueden oxidarse
espontneamente a porfirinas estables en
presencia de luz.
La nica oxidacin regulada enzimticamente es
la que cataliza la protoporfiringeno IX oxidasa
para formar la protoporfirina IX.
Las porfirinas son coloreadas, pueden absorber
luz UV-visible. Tambin son fluorescentes.
La absorcin de la luz por las porfirinas lleva a la
formacin de especies reactivas del oxgeno por
mecanismos fotoqumicos.
Ground state absorption spectra 3, 8-bis-
(aminoethyl)deutero porphyrin dimethyl
ester ammonia derivative
Esto puede tener
utilidad en terapia
fotodinmica.
Espectro de absorcin UV-Vis de una porfirina
Insercin de hierro en la protoporfirina IX
enzima ferroquelatasa
hierro (II)
en ausencia de hierro se incorpora zinc
(fluorescencia)
mitocondria
inhibible por plomo
Toxicidad por plomo (saturnismo)
Antiguamente presente en caeras de plomo, aditivo de vino, cosmticos,
pinturas, gasolina, contaminante industrial, industria de bateras.
El plomo no cumple ningn rol fisiolgico. Es txico porque interfiere con
metales divalentes importantes como calcio, hierro y zinc.
Sntomas: dificultades de aprendizaje, nuseas, clicos abdominales, anemia.
Tanto la ALA deshidratasa (PBG sintasa) como la ferroquelatasa son inhibibles
por plomo. Se ven aumentos en ALA y porfirina libre en orina. Anemia
microctica hipocrmica.
Nivel mnimo aceptado: 10 g/dL. Tratamiento con quelantes.
Intoxicados famosos: romanos, Beethoven, Goya, Handel.
La Teja, Montevideo, 2001. Primer caso, Matas, de 2 aos y
medio, tiene 47 g/dL. Se mide plomo en 284 nios y 224 de ellos
superan el lmite.
El Pas, 15-3-2001. Vecinos se someten a las pruebas para
detectar plomo. Yo vivo cerca de la zona peligrosa y mi nia an
gatea; est en contacto con la tierra y realmente tengo miedo que
se contamine", confes a El Pas una joven seora que haca
minutos haba hecho examinar a sus dos hijos, en .....
Sntesis de hemo
Regulacin de la biosntesis de hemo en hgado
hemo: enzimas detoxificadoras con citocromo P450
ALA sintasa inhibida por hemo (Fe
2+
) o hemina (Fe
3+
)
mediante:
inhibicin por retroalimentacin negativa
represin de la sntesis de la ALA sintasa
inhibicin del transporte de la protena desde
su sitio de sntesis (citosol) a la mitocondria
diferentes metabolitos y xenobiticos inducen la ALA
sintasa
la glucosa inhibe la sntesis de hemo
la ALA deshidratasa tambin es inhibida por hemo, pero
como esta enzima no es limitante, no afecta tanto
Regulacin de la biosntesis de hemo en clulas
eritroides de la mdula sea
hemo: sntesis de hemoglobina
la sntesis proteica termina al madurar la clula y
formarse el eritrocito
el hemo estimula la sntesis proteica (globina)
el hemo tambin estimula la sntesis de las enzimas de
biosntesis de hemo
el paso limitante de la velocidad no sera ALA sintasa,
habran varios puntos de control
se asegura que la sntesis de hemo y protena se d en
proporciones equivalentes
Porfirias
Desrdenes en enzimas de la biosntesis
de hemo.
Se acumulan porfirinas o precursores. Del
griego porphyra = prpura.
Pueden originarse de defectos hereditarios
o adquiridos.
Excepto la ALA sintasa, todas las enzimas
se han asociado a enfermedades.
Se clasifican en hepticas o eritroides.
Porfiria Defecto enzimtico Sntoma primario
Clase eritropoitica
Porfiria congnita eritropoitica
Uroporfiringeno III
sintasa
Fotosensibilidad
Protoporfiria eritropoitica Ferroquelatasa Fotosensibilidad
Clase heptica
Porfiria por deficiencia en ALA
dehidratasa
Porfobilingeno sintasa Neurovisceral
Porfiria aguda intermitente
Hidroximetilbilano
sintasa
Neurovisceral
Coproporfiria hereditaria
Coproporfiringeno
oxidase
Neurovisceral, cierta
fotosensibilidad
Porfira variegada
Protoporfiringeno
oxidasa
Neurovisceral, cierta
fotosensibilidad
Porfiria cutnea tarda
Uroporfiringeno
decarboxilasa
Fotosensibilidad
Porfiria hepatoeritropoitica
Uroporfiringeno
decarboxilasa
Neurovisceral y
fotosensibilidad
Porfiria congnita eritropoitica
deficiencia en uroporfiringeno III sintasa
gravedad de enfermedad correlaciona con actividad remanente
de la enzima
herencia recesiva
se acumula hidroximetilbilano y los ismeros no fisiolgicos de
uroporfiringeno I y coproporfiringeno I
la orina se vuelve roja
los dientes se colorean y fluorescen
anemia hemoltica
piel muy fotosensible
lesiones mutilantes en la piel
hipertricosis
se trata con inyecciones de hemo
Porfiria aguda intermitente
hgado
herencia dominante
deficiencias en porfobilingeno desaminasa
(hidroximetilbilano sintasa).
se acumula aminolevulinato (ALA) y porfobilingeno
orina color rojo oscuro
dolor abdominal
disfuncin neurolgica
se trata inhibiendo la sntesis de ALA (se administra
glucosa y hemina, se evitan frmacos inductores de
ALA sintasa como barbitricos)
George III de Inglaterra
(1760-1820)
perdi las colonias
americanas
se volvi loco
Catabolismo
del
hemo
El hemo est mayoritariamente (85%) en los
eritrocitos, cuya vida media es de 120 das.
La hemoglobina tiene un recambio de 6 g/da!
2 cuestiones:
1) el anillo porfirnico es insoluble y debe ser
solubilizado para ser excretado
2) el hierro debe ser conservado para
sintetizar nuevamente hemos
Los eritrocitos senescentes son captados por
clulas del sistema reticuloendotelial,
fundamentalmente macrfagos del bazo.
La globina se recicla o se degrada a
aminocidos.
El hemo es oxidado por la enzima del retculo
endoplsmico hemo oxigenasa.
hemo oxigenasa
biliverdina reductasa
biliverdina
bilirrubina
El catabolismo de
hemo a biliverdina y
bilirrubina se refleja en
los colores cambiantes
de los moretones, de
prpura, a verde, a
amarillo.
Hemo oxigenasa
La enzima utiliza oxgeno y NADPH. Forma el tetrapirrol
lineal biliverdina, liberando Fe
3+
y monxido de
carbono (CO).
La hemo oxigenasa utiliza al hemo como sustrato y
como cofactor, para activar al O
2
.
Un puente metenilo entre dos anillos pirrlicos B se
libera como CO.
El CO es un fuerte ligando de hemo! 1% de la Hb tiene
CO como ligando. El CO es un nuevo mensajero celular.
Hay dos variantes: la hemo oxigenasa 1 (inducible por
diferentes "estresores") y la 2 (constitutiva).
La biliverdina se transforma en
bilirrubina con la biliverdina
reductasa.
La bilirrubina es insoluble, se
traslada al hgado unida a la
albmina.
En el hgado, las cadenas
laterales propionilo de la
bilirrubina se conjugan con dos
equivalentes de cido
glucurnico con la enzima
UDP glucuronil transferasa.
Esto la vuelve soluble y facilita
su excrecin con la bilis.
conjugacin
bilirrubina diglucurnido
De la bilis, pasa al intestino. All, las bacterias
hidrolizan los glucurnicos y forman varios productos,
como los urobilingenos y las urobilinas.
Una parte de los urobilingenos se reabsorben y se
eliminan por la orina, dando a sta su color.
La mayor parte del urobilingeno se convierte en
estercobilina, que se elimina con las heces y confiere
el color caracterstico.
La bilirrubina y sus catabolitos se denominan
pigmentos biliares. (OJO no son sales ni cidos
biliares).
Degradacin
de hemo
Me sube la bilirrubina!
En individuos en los que est aumentada la lisis de los
eritrocitos, o existe dao heptico, o hay obstruccin del
ducto biliar, la bilirrubina se acumula en la circulacin. Esta
hiperbilirrubinemia causa la pigmentacin anormal
denominada ictericia.
Si la bilirrubina sin conjugar aumenta mucho, puede
acumularse en las membranas, llevando a encefalopata
por bilirrubina, o querncterus.
Los recin nacidos son particularmente susceptibles. Se
puede tratar con luz azul, que favorece la degradacin.
Existen desrdenes hereditarios en los que puede
predominar la acumulacin de bilirrubina conjugada o no
conjugada, segn a qu nivel se d la alteracin.
Y el hierro?
De dnde sale el hierro?
El hierro se obtiene de la dieta. Dosis recomendada: hombres
10 mg, mujeres 15 mg.
El hierro presente en la carne (hemo) se absorbe fcilmente,
no as el hierro no hmico de los vegetales, pues stos tienen
compuestos que lo quelan o precipitan como fitatos u oxalatos.
La absorcin de hierro es promovida por la vitamina c.
El hierro se absorbe a nivel intestinal como hierro (II).
Se transporta por la sangre como hierro (III) con la transferrina.
Se almacena en las clulas como hierro (III) en la ferritina.
Ingresa a las clulas que lo necesitan por endocitosis mediada
por receptor.
El hierro es un nutriente esencial, necesario para la sntesis
de varias protenas.
Su deficiencia es una de las ms comunes deficiencias
nutricionales. Se manifiesta inicialmente como anemia. Los
glbulos rojos son pequeos y plidos (anemia microctica
hipocrmica).
Sin embargo, el exceso de hierro puede ser txico, debido a
que, excepto que est en el entorno adecuado, el hierro
puede promover reacciones de radicales libres que daan
protenas, lpidos y cidos nucleicos.
Adems, el ion frrico forma complejos insolubles con
hidrxidos del agua.
El hierro no se excreta por las vas habituales, solo se
elimina a travs del sangrado y del recambio normal de
tejidos que no son reutilizados, como la epidermis y la
mucosa gastrointestinal.
Los organismos han desarrollado sistemas
para:
acumular hierro cuando hay abundancia
almacenarlo en forma segura
transportarlo en forma segura
Protenas clave:
Transferrina: protena que transporta el hierro en
tel plasma
Ferritina: protena de almacenamiento de hierro
que se encuentra fundamentalmente en el hgado
y el rin
Transferrina: transporte
glucoprotena sintetizada en el hgado
dos centros fijadores de hierro
mayor afinidad por ion frrico
K
asociacin
: 10
19
-10
31
M
-1
no toda la transferrina est saturada,
esto protege de las infecciones
la forma difrrica se une al receptor
de transferrina en las membranas
celulares
Ferritina: almacenamiento
las cadenas polipeptdicas se encuentran en el exterior
ncleo central de hidrxido frrico-fosfato
puede almacenar hasta 4500 tomos de hierro
Estructura de la ferritina
(A) 22 polipptidos de
ferritina forman una capa
esfrica. (B) En el centro se
almacena el hierro como
complejo xido-hidrxido
Estructura de la ferritina (A) 22 polipptidos de ferritina
forman una capa esfrica. (B) En el centro se almacena el
hierro como complejo xido-hidrxido
Regulacin de la utilizacin de hierro
Cmo hacemos un sensor de hierro?
IRP: protenas de respuesta a hierro
citoplasma
se unen a estructuras del mRNA denominadas
IRE (elementos de respuesta a hierro)
la protena IRP-1
tiene un centro
ferrosulfurado, similar
al de la aconitasa
IRP-1 tiene actividad
aconitasa, pero no
hay sustrato en el
citosol
en condiciones de bajo hierro, el centro
ferrosulfurado se disocia, y la apoprotena puede
unirse a determinados mRNA
mRNA de la transferrina (transporte)
El mRNA de la transferrina tiene 5 elementos de
respuesta a hierro (IREs) en la zona 3. La unin
de la protena IRP-1 en condiciones de bajo
hierro, estabiliza el mensajero para que se
sintetice ms transferrina.
El mRNA de la ferritina tiene un IRE (elemento de
respuesta a hierro) en la zona 5 que se une a la
protena IRP-1 en condiciones de bajo hierro. Al
unirse la protena, la traduccin se bloquea y se
sintetiza menos ferritina.
mRNA de la
ferritina
(almacena-
miento)
mRNAs que contiene IREs
bajo hierro IREs protena
3 transferrina
5 aconitasa mitocondrial
5 ALA sintasa eritrocitaria
5 ferritina