PROTOCOLO PARA LA DETERMINACION DE GRASAS Y ACEITES

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COD. GL PL 13




3
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1
0 Documento inicial
Martha
Garca
Ing. Qumica
Carlos Doria
Coordinador lab. de
Calidad Ambiental
Leanis Pitre
Dir.SILAB
17-06-2013
REV. No. DESCRIPCION ELABOR REVIS APROB FECHA




APROBADO: _______________________





PROTOCOLO PARA LA DETERMINACION DE GRASAS Y ACEITES




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CONTENIDO


1. OBJETO ............................................................................................................ 3
2. APLICACIN ..................................................................................................... 3
3. DEFINICIONES ................................................................................................. 3
4. FUNDAMENTO DEL MTODO ........................................................................ 3
5. INTERFERENCIAS Y LIMITACIONES ............................................................. 4
6. TOMA DE MUESTRA, ALMACENAMIENTO Y PRESERVACIN ................... 5
7. MATERIALES Y EQUIPOS ............................................................................... 6
8. REACTIVOS Y SOLUCIONES .......................................................................... 6
9. PROCEDIMIENTO ............................................................................................ 7
10. CLCULOS .................................................................................................... 8
11. AUTORIDAD .................................................................................................. 8
12. FORMATOS ................................................................................................... 9
13. REFERENCIAS .............................................................................................. 9




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1. OBJETO

Describir la metodologa a seguir para determinar la concentracin de grasas y
aceites en muestras de agua


2. APLICACIN

Este mtodo es aplicable para muestras lquidas, aguas continentales
superficiales y marinas. Tambin es adecuado para la mayora de aguas
residuales industriales o efluentes tratados, aunque la complejidad de la muestra
puede arrojar resultados bajos o altos debido a la falta de especificidad analtica.
El mtodo no es aplicable a fracciones de bajo punto de ebullicin que volaticen
por debajo de 85C.


3. DEFINICIONES

Emulsin: Es una mezcla de lquidos inmiscibles de manera ms o menos
homognea. Un lquido (la fase dispersa) es dispersado en otro (la fase continua o
fase dispersante)

Extracto: Sustancia que en forma concentrada se extraer de otra de la cual
conservar sus propiedades esenciales y constitutivas.

Grasas y Aceites: Son estres (compuestos orgnicos) formados por la unin de
cidos grasos y gricerol. Su estado fsico es slido o lquido. Son solubles en
solventes no polares y prcticamente insolubles en agua
Solvente: Nombre genrico de un lquido capaz de disolver o dispersar otras
sustancias. Sustancias orgnicas en estado lquido, utilizadas para disolver
slidos, gases u otros lquidos. La mayora de ellos son derivados del petrleo o
sintticos.


4. FUNDAMENTO DEL MTODO

Se define como aceites y grasas a cualquier material recuperado como sustancia
soluble en un solvente. Incluye otros materiales extrados por el solvente de

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muestras acidificadas (tales como compuestos azufrados, ciertos pigmentos
orgnicos, y clorofila) y no volatilizados durante la prueba. Algunas sustancias
extrables, como los cidos grasos y grasas insaturadas, se oxidan rpidamente,
de ah, se incluyen precauciones especiales para minimizar este efecto.

Se utiliza el mtodo de particin gravimtrica liquido/liquido, basado en la tcnica
del Standard Methods 5520B, para determinar la concentracin de aceites y
grasas en muestras liquidas. Los aceites y grasas disueltas o emulsificados son
extrados del agua por contacto ntimo con un solvente extractor. El solvente es n-
hexano al 85% o una mezcla de solventes (80% n-hexano y 20% metil-terbutil
ter) para el mtodo gravimtrico. Se determina el contenido de aceites y grasas
en la muestra inicial por diferencia gravimtrica.

Los solventes orgnicos agitados con algunas muestras pueden formar una
emulsin difcil de romper. Este mtodo incluye una forma de manejar esas
emulsiones. Se recomienda en lo posible reciclar el solvente, ya que la
recuperacin de este reduce la emisin de vapores a la atmsfera y los costos de
suministro de solvente.


5. INTERFERENCIAS Y LIMITACIONES


a. Los solventes orgnicos pueden disolver no solo el aceite y la grasa sino
tambin otras sustancias orgnicas. Cualquier sustancia filtrable soluble en
el solvente (azufre elemental, aromticos complejos, derivados de
hidrocarburos con cloro, azufre y nitrgeno, y ciertos pigmentos orgnicos)
son extrados y recuperados como aceite y grasa. No existe un solvente
que disuelva selectivamente solo aceites y grasas.

b. Para todos los mtodos excepto el de particin infrarrojo, la remocin de
solvente causa la prdida de los hidrocarburos de cadena corta y
aromticos simples por volatilizacin. Seguir los tiempos de secado
estrictamente, para estandarizar la prdida gradual de peso. Para esos
mtodos, durante el enfriamiento del frasco de destilacin y del material
extrado, puede observarse un ligero aumento de peso, posiblemente por
la absorcin de agua si no usa un desecador. Para el mtodo infrarrojo, el
uso del detector puede obviar algunas interferencias coextradas. Para el
mtodo Soxhlet respetar los tiempos de extraccin por la solubilidad
variable de las grasas. Para el mtodo de hidrocarburos, los hidrocarburos

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ms polares, como aromticos complejos y derivados con cloro, nitrgeno
y azufre, pueden ser adsorbidos en la slica gel. La materia grasa tambin
puede interferir.

c. Si se forman emulsiones difciles de romper por centrifugacin, usar otros
mtodos. Esas muestras pueden ser efluentes de proceso de papel, y
manufacturas de zeolita. Determinar el mtodo a usar en cada caso.

d. Algunas matrices pueden elevar la cantidad de agua distribuida en el fluido
orgnico de extraccin. Cuando se seca el solvente con sulfato de sodio,
puede excederse la capacidad secante del sulfato de sodio, disolvindose
y pasando al frasco tarado. Luego del secado los cristales de sulfato se
hacen visibles. Esta es una interferencia positiva en mtodos
gravimtricos. Si esto sucede, redisolver el aceite y grasa con 30 mL de
solvente de extraccin, luego drenar el solvente a travs de un embudo
con papel filtro lavado con solvente, a otro frasco tarado. Lavar el primer
frasco dos veces mas, combinando todo el solvente en el frasco nuevo, y
luego tratarlo como una muestra extrada.


6. TOMA DE MUESTRA, ALMACENAMIENTO Y PRESERVACIN

Tomar una muestra en una botella de vidrio mbar de 1L o ms (o frasco de vidrio
de boca ancha con tapa de PTFE), lavada previamente con jabn (Tipo extrn),
enjuagado con agua, y con acetona u otro solvente para remover cualquier residuo
que pueda interferir con el anlisis. No rebosar el frasco, y no subdividir la muestra
en el laboratorio. Recoger adems una rplica de la muestra, estas deben ser
colectadas en paralelo.Si el anlisis se va a realizar despus de pasadas 2 horas,
acidificar a pH 2 o menos con HCl o H
2
SO
4
concentrado y refrigerar, para
garantizar la preservacin de la muestra. Cuando se requiera la concentracin
promedio en un periodo extendido, examinar porciones individuales recogidas a
intervalos prescritos para eliminar las prdidas de grasa en el equipo de muestreo
durante la recoleccin de una muestra compuesta.

Al recolectar lodos, procurar obtener muestras representativas. Cuando no se
pueda analizar dentro de las 2 h siguientes, preservar con 1 mL HCl
concentrado/80 g muestra y refrigerar. Nunca preservar muestras con cloroformo
(CHCl
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) o benzoato de sodio.



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7. MATERIALES Y EQUIPOS

- Botella de vidrio mbar de 500 ml o 1L
- Balanza analtica de precisin 0,0001g
- Pipetas de 5, 10 mL
- Embudos de separacin de capacidad mayor o igual a 1L, con llave de
tefln (o equivalente).
- Recipientes de vidrio igual o mayor a 100 mL para recibir el extracto
- Probeta igual o mayor a 1L
- Soporte universal metlico
- Desecador
- Receptculo para solvente recuperado (beaker pequeo, viales de 10
mL)
- Bomba de vaco u otra fuente de vaco


8. REACTIVOS Y SOLUCIONES

- cido clorhdrico, o cido sulfrico concentrado

- n- hexano, mnimo 85% de pureza, punto de ebullicin 69C. No use
mangueras para transferir solvente entre contenedores.

- Metil- tert-butil ter, punto de ebullicin 55 a 56C. No use mangueras
para transferir solvente entre contenedores

- Sulfato de sodio anhidro , Na
2
SO
4


- Mezcla de solvente 80% n-hexano; 20% v/v metil-tert-butil ter .

- Solucin estndar de calibracin: Prepare una solucin de acetona que
contenga una cantidad conocida de vaselina (grado analtico):
Disuelva unos 0,500 gramos de vaselina en 50 mL de Acetona. La
solucin preparada tiene una concentracin de 10 mg/mL de solucin.
Prepare una muestra sinttica de 5mg/L adicionando 500 L (0,5 mL)
de la solucin anterior en 1L de agua desionizada. Utilice este como
material de referencia.



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9. PROCEDIMIENTO

- Si previamente la muestra no ha sido acidificada baje el pH <2 con H
2
SO
4
o HCl.

- Marque el nivel de la botella hasta donde se encuentra el menisco de agua (si
no se encuentra llena), para medir posteriormente el volumen.

- Transfiera toda la muestra de la botella al embudo de separacin.
- Agregue 30 mL o ms de hexano a la botella vaca. Tape y agite vigorosamente
por algunos segundos. Transfiera el hexano al embudo de separacin.

-Tape el embudo y agite por unos segundos y afloje la llave para que salgan los
vapores. Agite nuevamente por 5 minutos ms.

-Coloque el embudo en el soporte universal y deje separar las fases.

-Recoja la fase acuosa en la misma botella de la muestra y transfiera el extracto
hexnico que contiene los aceites y las grasas a un recipiente de vidrio.

- Repita el proceso dos veces ms agregando a la muestra 30 mL de hexano.
Mezcle las fases hexnicas con el primer extracto contenido en el recipiente de
vidrio.

- Para determinar el volumen inicial de la muestra, llenar la botella con agua(del
grifo) hasta la marca realizada y trasferir a una probeta.

- Para remover el exceso de agua en el extracto de hexano, agregar
aproximadamente 10 g de Sulfato de Sodio anhidro (Na
2
SO
4
). Tape y almacene.

-Deposite el extracto en vial o beaker pequeo previamente pesado, usando una
pipeta pasteur, evitando el paso de sulfato de sodio al recipiente.

- Deje secar los viales a temperatura ambiente y registre su peso final. Para
acelerar el secado del extracto use la bomba de vaco soplando aire con la
manguera.(Se recomienda usar una corriente de nitrgeno o gas inerte seco).
- Para verificar peso constante dejar por 2 horas y anotar peso final. Si es diferente
al anotado anteriormente, dejar 2 horas ms, hasta obtener peso constante.


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NOTA: El principal residuo de este mtodo es el solvente empleado, el cual debe
recolectarse de un sistema de secado (rotovapor) y almacenar apropiadamente en
contenedores rotulados. La muestra extrada puede desecharse, sin embargo, se
debe tener la precaucin de ajustarle a un valor de pH entre 6 y 8 unidades (si lo
requiere) antes de ser descargadas al vertedero.
10. CLCULOS

Por diferencia de pesos del vial donde se recolecta el extracto, se calcula la
concentracin de aceites y grasas, en mg/L, as:

Wf - Wi
[AyG] (mg/L) = ---------------- x 1000000
Vm

Wf = Peso final del vial luego de evaporar el solvente (g)
Wi = Peso inicial del vial (g)
Vm = Volumen de muestra sometida a anlisis (mL)

El mtodo de particin gravimtrica liquido/liquido fue probada en un estudio de
validacin de mtodos en un nico laboratorio y entre laboratorios. Los datos
combinados de estos estudios arrojaron una Recuperacin del 93% y una
precisin (como desviacin relativa estndar) del 8,7%.


11. AUTORIDAD

Director tcnico: Posee autoridad para decidir acerca del uso de equipos y la
realizacin, suspensin, reanudacin o reprogramacin de una prueba.

Responsable de calidad: Decide sobre la repeticin de una prueba.

Tcnico Analista titular o suplente y/o Auxiliares: Autoridad para decidir el
encendido de equipos, si se requiere, tomar las muestras, realizar las lecturas
pertinentes y repetir las pruebas cuando sea necesario.


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12. FORMATOS

Datos para Anlisis Gravimtricos Cdigo: GL-F-19


13. REFERENCIAS

Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. Method
5520 B. American Public Health Association, American Water Works Association,
Water Pollution Control Federation. 21st. ed., New York, 2005. pp 5-37.