You are on page 1of 16

NORMA TCNICA NTC

COLOMBIANA 3630


2002-08-28




CALIDAD DEL AGUA.
DEMANDA BIOQUMICA DE OXGENO (DBO)











E: WATER QUALITY. BIOCHEMICAL OXYGEN DEMAND (BOD)


CORRESPONDENCIA: esta norma es idntica (IDT) a las
partes A y B de la Seccin 5210 del
STANDARD METHODS FOR THE
EXAMINATION OF WATER AND
WASTEWATER. 20
TH
Edition. 1998.

DESCRIPTORES: calidad del agua; demanda
bioqumica de oxgeno; anlisis de
agua; DBO.












I.C.S.: 13.060.50

Editada por el Instituto Colombiano de Normas Tcnicas y Certificacin (ICONTEC)
Apartado 14237 Bogot, D.C. - Tel. 6078888 - Fax 2221435


Prohibida su reproduccin Primera actualizacin
Editada 2002-09-16









PRLOGO



El Instituto Colombiano de Normas Tcnicas y Certificacin, ICONTEC, es el organismo
nacional de normalizacin, segn el Decreto 2269 de 1993.

ICONTEC es una entidad de carcter privado, sin nimo de lucro, cuya Misin es fundamental
para brindar soporte y desarrollo al productor y proteccin al consumidor. Colabora con el
sector gubernamental y apoya al sector privado del pas, para lograr ventajas competitivas en
los mercados interno y externo.

La representacin de todos los sectores involucrados en el proceso de Normalizacin Tcnica
est garantizada por los Comits Tcnicos y el perodo de Consulta Pblica, este ltimo
caracterizado por la participacin del pblico en general.

La NTC 3630 (Primera actualizacin) fue ratificada por el Consejo Directivo el 2002-08-28.

Esta norma est sujeta a ser actualizada permanentemente con el objeto de que responda en
todo momento a las necesidades y exigencias actuales.

A continuacin se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta norma a
travs de su participacin en el Comit Tcnico 000016 Agua.

ACODAL
AQUALAB LTDA.
BAVARIA S.A.
CONCESIONARIA TIBITOC
INSTITUTO NACIONAL DE SALUD
IVONNE BERNIER LABORATORIO LTDA.-
IBLAB
LAQMA LTDA.


Adems de las anteriores, en Consulta Pblica el Proyecto se puso a consideracin de las
siguientes empresas:

ACEITES Y GRASAS VEGETALES S.A.
ACIPET
AGUAS DE MANIZALES S.A. ESP
ALPINA PRODUCTOS ALIMENTICIOS
S.A.
AMBIENCOL INGENIEROS LTDA.
ANTEK S.A.
ASOCIACIN COLOMBIANA DE
INGENIEROS DE PETRLEOS
ASOCIACIN COLOMBIANA DE
INDUSTRIAS PLSTICAS
ASOCIACIN NACIONAL DE
INDUSTRIALES - ANDI
BAYER S.A.
CARVAJAL S.A.
CENTRAGAS
CEMENTOS BOYAC S.A.
CERVECERA LEONA S.A.
CERVECERA UNIN S.A.
COMPAA COLOMBIANA AUTOMOTRIZ
COMPAA NACIONAL DE VIDRIOS S.A.
CORNARE
DAMA
EMPRESA COLOMBIANA DE
PETRLEOS - ECOPETROL
EMAC LTDA.
EMPRESA DE ACUEDUCTO Y
ALCANTARILLADO DE BOGOT
EMPRESA DE ENERGA DE BOGOTA
EMPRESAS PBLICAS DE MEDELLN
ESCOBAR Y MARTNEZ
FRIGORFICO GUADALUPE
GASEOSAS LUX S.A.
GOBERNACIN DE CUNDINAMARCA
GRIFFITH COLOMBIA S.A.
GRUPO AMBIENTAL INPTECO
IDEAM
INCOLBESTOS S.A.







INGEOMINAS
INSTITUTO COLOMBIANO AGROPECUARIO
ICA
INTEGRAL S.A.
LARKIN LTDA.
MINIPAK LTDA.
MINISTERIO DEL MEDIO AMBIENTE
MINISTERIO DE DESARROLLO
MINISTERIO DE MINAS Y ENERGA
MINISTERIO DE TRANSPORTE
NESTL DE COLOMBIA S.A.
PANAMCO COLOMBIA S.A.
PELDAR LTDA.
POSTOBN S.A.
PROMIGAS S.A.
SIEMENS SOCIEDAD ANNIMA
SIKA ANDINA S.A.





SOCIEDAD COLOMBIANA DE TOXICOLOGA
SOCIEDAD DE ACUEDUCTO,
ALCANTARILLADO Y ASEO DE
BARRANQUILLA S.A. ESP
SUPERINTENDENCIA DE INDUSTRIA Y
COMERCIO
TEFCO LTDA.
UNILEVER ANDINA S.A.
UNIVERSIDAD CATLICA DE MANIZALES
UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
UNIVERSIDAD INCCA DE COLOMBIA
UNIVERSIDAD DE LA SALLE
UNIVERSIDAD JAVERIANA
UNIVERSIDAD JORGE TADEO LOZANO
UNIVERSIDAD LIBRE
UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA


ICONTEC cuenta con un Centro de Informacin que pone a disposicin de los interesados
normas internacionales, regionales y nacionales.

DIRECCIN DE NORMALIZACIN



NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC 3630 (Primera actualizacin)

1






CALIDAD DEL AGUA.
DEMANDA BIOQUMICA DE OXGENO (DBO)
*











OBJETO

Esta norma tiene por objeto establecer el mtodo de ensayo para determinar la demanda
bioqumica de oxgeno (DBO) a los 5 d en aguas contaminadas.


A. INTRODUCCIN

1. DISCUSIN GENERAL

La determinacin de la demanda bioqumica de oxgeno (DBO) es un ensayo emprico, en el
cual se usan procedimientos de laboratorio normalizados para determinar los requisitos de
oxgeno relativos de las aguas residuales, efluentes, y aguas contaminadas. La mayor
aplicacin de este ensayo es en la medicin de descargas de desechos a plantas de
tratamiento y en la evaluacin de la eficiencia de la remocin de la DBO en dichos sistemas de
tratamiento. El ensayo mide el oxgeno molecular utilizado durante un perodo de incubacin
especificado para la degradacin bioqumica de la materia orgnica (demanda de carbono), y el
oxgeno usado para oxidar la materia inorgnica como sulfuros y hierro ferroso. Tambin puede
medir la cantidad de oxgeno empleado para oxidar formas reducidas de nitrgeno (demanda
de nitrgeno), a menos que su oxidacin sea impedida por un inhibidor. Los procedimientos de
siembra y dilucin permiten evaluar la DBO en un intervalo de pH de 6,5 a 7,5.

En esta norma se describen las mediciones del oxgeno consumido en un ensayo de 5 d (DBO
a los 5 d o DBO
5
, numeral B). En la Seccin 5210, del Standard Methods, 20
th
Edition de 1998,
se describe la medicin del oxgeno consumido despus de 60 d a 90 d de incubacin (DBO
ltima o DBOU, numeral C), y el consumo continuo de oxgeno (mtodo respiromtrico, vase
el mtodo D). Existen muchas otras mediciones de variacin de la demanda de oxgeno,
incluyendo el uso de perodos de incubacin ms cortos o ms largos y pruebas para
determinar las velocidades de consumo de oxgeno. Se pueden seleccionar condiciones
alternativas de siembra, dilucin e incubacin para simular las condiciones del agua receptora,
de manera que se puedan estimar los efectos ambientales por las aguas residuales y efluentes.

La DBOU mide el oxgeno requerido para la degradacin total de la materia orgnica (demanda
de carbono ltima); o el oxgeno para oxidar los compuestos de nitrgeno reducido (demanda

*
Aprobado por Standard Methods Committee. 1997

NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC 3630 (Primera actualizacin)

2
de nitrgeno ltima), o ambas. Son necesarios valores de la DBOU y descripciones cinticas
apropiadas para los estudios de modelos de la calidad del agua, tales como las proporciones
de DBOU:DBO
5
para evaluar la capacidad asimilativa de la corriente para cumplir con las
exigencias reglamentarias; para la definicin de la cintica de desoxigenacin del ro, estuario,
o lago; y para los valores de la DBO de carbono ltima en la corriente para la calibracin del
modelo.


2. DBO DE CARBONO CONTRA DBO DE NITRGENO

La exactitud y precisin de las mediciones de la DBO pueden verse afectadas por varios
factores, por ejemplo, la materia orgnica soluble contra la particulada; los slidos
sedimentables y los slidos en suspensin; la oxidacin de compuestos reducidos de hierro y
azufre; o la falta de homogeneizacin. Actualmente, no existen los medios para incluir los
ajustes o correcciones que tengan en cuenta el efecto de estos factores.

En la oxidacin de formas reducidas de nitrgeno, como amonaco y nitrgeno orgnico,
pueden intervenir microorganismos y ejercer una demanda de nitrgeno. La demanda de
nitrgeno ha sido considerada histricamente como una interferencia en la determinacin de la
DBO, como lo evidencia claramente la inclusin de amonaco en el agua de dilucin. La
interferencia de la demanda de nitrgeno se evita ahora por medio de una sustancia
inhibidora
1
. Si no se emplea una sustancia inhibidora, la demanda de oxgeno medida es la
suma de las demandas de carbono y de nitrgeno.

Las mediciones que incluyen la demanda de nitrgeno, generalmente no son tiles para
aseverar la demanda de oxgeno asociada con la materia orgnica. La demanda de nitrgeno
puede estimarse directamente del nitrgeno amoniacal (Vase la NTC 4783); y la demanda de
carbono puede estimarse restando el equivalente terico de la oxidacin del nitrgeno reducido
a los resultados de la prueba no inhibida. Sin embargo, este mtodo es engorroso y est sujeto
a un error considerable. La inhibicin qumica de la demanda de nitrgeno brinda una medida
ms directa y confiable de la demanda de carbono.

El grado de oxidacin de los compuestos nitrogenados durante el perodo de incubacin de 5 d,
depende de la concentracin y del tipo de microorganismos capaces de llevar a cabo esta
oxidacin. Tales organismos usualmente no estn presentes en las aguas negras primarias en
crudo o sedimentadas, en nmero bastante para oxidar cantidades suficientes de formas
reducidas de nitrgeno en el ensayo de DBO a los 5 d. Muchos efluentes de plantas de
tratamiento biolgico contienen suficiente nmero de organismos nitrificantes para causar
nitrificacin en pruebas de DBO. Debido a que puede ocurrir la oxidacin de compuestos
nitrogenados en estas muestras, se recomienda la inhibicin de la nitrificacin, segn el
numeral B.4e6), para muestras de un efluente secundario, para muestras inoculadas con un
efluente secundario, y para muestras de aguas contaminadas.

Se reportan los resultados como demanda bioqumica de oxgeno de carbono (DBOC
5
) cuando
se inhibe la demanda de oxgeno de nitrgeno. Cuando no se inhibe la nitrificacin, se reportan
los resultados como DBO
5
.


3. REQUISITOS DE LA DILUCIN

La concentracin de DBO en la mayora de las aguas residuales excede la concentracin de
oxgeno disuelto (OD) disponible en una muestra saturada de aire. Por ello, es necesario diluir
la muestra antes de la incubacin para lograr un balance apropiado de demanda y suministro
de oxgeno. Puesto que el crecimiento bacterial requiere nutrientes como nitrgeno, fsforo y

NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC 3630 (Primera actualizacin)

3
metales traza, stos son adicionados al agua de dilucin, la cual es regulada para garantizar
que el pH de la muestra incubada permanezca en un intervalo adecuado para el crecimiento
bacterial. La estabilizacin total de una muestra puede requerir un perodo de incubacin
demasiado largo para fines prcticos, por eso, se ha aceptado 5 d como el perodo de
incubacin estndar.

Si el agua de dilucin es de baja calidad, la DBO del agua de dilucin debe aparecer como
DBO de la muestra. Este efecto ser amplificado por el factor de dilucin, lo cual resultar en
un sesgo positivo. Los mtodos B, a continuacin, y el C (vase en el Standard Methods, 20
th

Edition, 1998), contienen tanto una comprobacin del agua de dilucin como un blanco de
prueba del agua de dilucin. La calidad aceptable de las aguas de dilucin inoculadas, se
verifica adems midiendo el consumo de oxgeno de una mezcla orgnica conocida,
usualmente glucosa y cido glutmico.

La fuente de agua de dilucin debe ser agua tipo III (vase la norma ISO 3696), libre de
organismos biodegradables y de sustancias bioinhibidoras como cloro o metales pesados. El
agua destilada puede contener amonaco u organismos voltiles; las aguas desionizadas estn
frecuentemente contaminadas con materia orgnica lixiviada del lecho de la resina. El uso de
destiladores revestidos en cobre o accesorios de cobre en las lneas de agua destilada, puede
producir aguas con cantidades excesivas de cobre (Vase el Standard Methods, 20
TH
Edition,
1998, Section 3500-Cu).


4. REFERENCIA

YOUNG, J.C. 1973. Chemical methods for nitrification control. J. Water Pollut. Control Fed. 45:637.


5. BIBLIOGRAFA

THERIAULT, E.J., P.D. MCNAMEE & C.T. BUTTERFIELD. 1931. Selection of dilution water for
use in oxygen demand tests. Pub. Health Rep. 46:1084.

LEA, W.L. & M.S. NICHOLS. 1937. Influence of Phosphorus and Nitrogen on Biochemical
Oxygen Demand. Sewage Works J. 9:34.

RUCHHOFT, C.C. 1941. Report on the cooperative study of dilution waters made for the Standard
Methods Committee of the Federation of Sewage Works Associations. Sewage Works J. 13:669.

MOHLMAN, F.W., E. HURWITZ, G.R. BARNETT & H.K. RAMER. 1950. Experience with
modified methods for BOD. Sewage Ind. Wastes 22:31.



B. MTODO DE ENSAYO DE DBO A LOS 5 d


1. DISCUSIN GENERAL

a) Principio: El mtodo consiste en llenar con la muestra, hasta rebosar, una botella para
DBO con sello de agua de un tamao especfico, que se incuba a la temperatura
especificada durante 5 d. El oxgeno disuelto se mide inicialmente y despus de la
incubacin, y se calcula la DBO por diferencia entre el oxgeno disuelto (OD) inicial y
final. Puesto que el OD inicial se determina poco tiempo despus de hacerse la dilucin,

NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC 3630 (Primera actualizacin)

4
todo el consumo de oxgeno que ocurre despus de esta medicin queda incluido en el
clculo de la DBO.

b) Muestreo y almacenamiento: Las muestras para anlisis de DBO pueden degradarse
considerablemente durante el almacenamiento entre su recoleccin y anlisis, resultando
valores bajos de DBO. Se minimiza la reduccin de DBO analizando la muestra
inmediatamente o enfrindola hasta una temperatura cercana a la congelacin durante el
almacenamiento. No obstante, an a baja temperatura, se debe reducir al mnimo el tiempo
de almacenamiento. Se deja que las muestras alcancen una temperatura de 20 C 3 C
antes del anlisis.


1) Muestras puntuales. Si el anlisis se inicia dentro de las 2 h despus de la
recoleccin, no es necesario el almacenamiento en fro. Si no se comienza el
anlisis dentro de las 2 h de la recoleccin de la muestra, se mantiene la
muestra a 4 C o menos desde el momento de la recoleccin. Se debe comenzar
el anlisis dentro de las 6 horas despus de la recoleccin; cuando esto no sea
posible por estar el sitio de muestreo distante del laboratorio, se almacenan a
menos de 4 C y se registra la duracin y la temperatura de almacenamiento con
los resultados. En ningn caso se comienza el anlisis despus de las 24 h de
tomada la muestra puntual. Cuando se vayan a usar las muestras para fines
reglamentarios se debe hacer todo lo posible por entregarlas para su anlisis
dentro de las 6 h posteriores a su recoleccin.

2) Muestras compuestas. Se conservan las muestras a 4 C o menos durante la
composicin. Se limita el perodo de composicin a 24 h. Se usa el mismo
criterio de almacenamiento empleado con las muestras puntuales, comenzando
la medicin del tiempo de retencin al finalizar el perodo de composicin. Se
incluye el tiempo y las condiciones de almacenamiento en los resultados.


2. APARATOS Y EQUIPOS

a) Botellas de incubacin: Se usan botellas de vidrio de 60 ml o de mayor capacidad
(preferiblemente botellas de 300 ml con tapn de vidrio esmerilado y boca
acampanada). Se limpian las botellas con un detergente, se enjuagan completamente y
se escurren antes de usarse. Como precaucin para evitar recoger aire en la botella de
dilucin durante la incubacin, se usa un sello de agua. Se obtienen sellos de agua
apropiados invirtiendo la botella en un bao de agua o aadiendo agua en la boca
acampanada de botellas especiales para DBO. Se coloca una copa de papel o de
plstico o una tapa de hoja metlica fina, sobre la boca acampanada de la botella para
reducir la evaporacin del sello de agua durante la incubacin.

b) Incubadora de aire o bao de Mara, controladas por termostato a 20 C 1 C. Se
excluye toda la luz para evitar la posibilidad de produccin fotosinttica de OD.


3. REACTIVOS

Se preparan los reactivos con antelacin pero se descartan si hay algn signo de precipitacin
o crecimiento biolgico en las botellas de dilucin. Se pueden aceptar equivalentes comerciales
de estos reactivos y usar diferentes concentraciones de solucin de ensayo, siempre que se
ajusten las dosis proporcionalmente.

NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC 3630 (Primera actualizacin)

5
a) Solucin estabilizadora de fosfato: Se disuelven 8,5 g de KH
2
PO
4
, 21,75 g de
K
2
HPO
4
, 33,4 g de Na
2
HPO
4
7H
2
O, y 1,7 g de NH
4
Cl, en aproximadamente 500 ml
de agua destilada y se diluye todo a 1 L. El pH debe ser de 7,2 sin ajuste posterior.
Alternativamente, se disuelven 42,5 g de KH
2
PO
4
o 54,3 g de K
2
HPO
4
, en
unos 700 ml de agua destilada. Se ajusta el pH a 7,2 con solucin de NaOH
al 30 % y se diluye a 1 L.

b) Solucin de sulfato de magnesio: se disuelven 22,5 g de MgSO
4
7H
2
O en agua
destilada y se diluye a 1 L.

c) Solucin de cloruro de calcio: se disuelven 27,5 g de CaCl
2
en agua destilada y
se diluye a 1 L.

d) Solucin de cloruro frrico: se disuelven 0,25 g de FeCl
3
6H
2
O en agua destilada
y se diluye a 1 L.

e) Soluciones cida y alcalina, 1 N, para la neutralizacin de muestras residuales
custicas o cidas.

1) cido. Lentamente y mientras se revuelve, se adicionan 28 ml de cido
sulfrico concentrado en agua destilada. Se diluye a 1 L.

2) lcali. Se disuelven 40 g de hidrxido de sodio en agua destilada. Se
diluye a 1 L.


f) Solucin de sulfito de sodio: se disuelven 1,575 g de Na
2
SO
3
en 100 ml de agua
destilada. Esta solucin no es estable; se debe preparar diariamente.

g) Inhibidor de nitrificacin: 2-cloro-6-(triclorometil) piridina.*

h) Solucin de glucosa y cido glutmico: se secan la glucosa de grado reactivo y
el cido glutmico de grado reactivo a 103 C por una hora. Se adicionan 150 mg
de glucosa y 150 mg de cido glutmico en agua destilada y se diluye a 1 L. Se
prepara esta solucin inmediatamente antes de usarse.

i) Solucin de cloruro de amonio: se disuelven 1,15 g de NH
4
Cl en
aproximadamente 500 ml de agua destilada, se ajusta el pH a 7,2 con solucin
de NaOH, y se diluye a 1 L. La solucin contiene 0,3 mg de N/ml.

j) Agua de dilucin: Se usa agua tipo III para hacer las diluciones de la muestra.
(Vase el numeral 3 y la norma ISO 3696)

* Inhibidor de Nitrificacin, Frmula 2533, Hach Co., Loveland, Co, o equivalente.


4. PROCEDIMIENTO

a) Preparacin del agua de dilucin: se adiciona el volumen de agua deseado (vase el
numeral 3 j), en una botella apropiada, y se adiciona 1 ml de solucin de cada uno de
los siguientes compuestos: regulador de fosfato, soluciones de MgSO
4
, CaCl
2 y
FeCl
3
,
por litro de agua. Se siembra el agua de dilucin, si se desea, como se describe en el
numeral 4 d). Se ensaya el agua de dilucin tal como se describe en el numeral 4 h), de
forma que siempre se disponga de agua con la calidad requerida.

NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC 3630 (Primera actualizacin)

6
Antes de usarse, se lleva el agua de dilucin a una temperatura de 20 C 3 C. Se
satura con OD mediante agitacin en una botella parcialmente llena, o por aeracin con
aire filtrado, libre de materia orgnica. Alternativamente, se almacena en botellas
taponadas con algodn, el tiempo suficiente para que el agua se sature de OD. Se
protege la calidad del agua utilizando accesorios de vidrio, tubos y botellas limpios.

b) Almacenamiento del agua de dilucin: el agua de dilucin (vase el numeral 3 j)) puede
almacenarse antes del uso mientras la dilucin preparada cumpla los criterios de control
de calidad del blanco (vase el numeral 4 h)). Este almacenamiento puede mejorar la
calidad de algunas aguas de dilucin, pero puede permitir que el desarrollo biolgico
cause deterioro en otras. Preferiblemente, no almacenar el agua de dilucin preparada
por ms de 24 h despus de aadirle nutrientes, minerales, y reguladores de pH, a
menos que el blanco de agua de dilucin indique consistencia en el cumplimiento de los
lmites de control de calidad. Se descarta el agua de dilucin almacenada si el blanco
de prueba seala ms de 0,2 mg/L de agotamiento en 5 d.

c) Comprobacin con glucosa-cido glutmico: puesto que el ensayo de DBO es un
bioensayo, sus resultados pueden estar influidos considerablemente por la presencia de
txicos o por el uso de inculo de baja calidad. Las aguas destiladas frecuentemente
estn contaminadas con cobre; algunos inculos de aguas residuales son relativamente
inactivos. Con tales inculos y aguas se obtienen siempre resultados bajos. Se verifica
peridicamente la calidad del agua de dilucin, la efectividad del inculo, y la tcnica
analtica, realizando mediciones de la DBO en una mezcla de 150 mg de glucosa/L y
150 mg de cido glutmico/L como solucin de comprobacin estndar. La glucosa
tiene una velocidad de oxidacin excepcionalmente alta y variable pero cuando se
emplea con cido glutmico, la velocidad de oxidacin se estabiliza asemejndose a la
obtenida en muchas aguas residuales municipales. Alternativamente, si un agua
residual en particular contiene un componente principal identificable que contribuya a la
DBO, se usa un componente en lugar de glucosa-cido glutmico.

Se determina la DBO a 5 d y 20 C de una dilucin al 2 % de la solucin de comprobacin
estndar glucosa-cido glutmico, empleando las tcnicas de los numerales 4d-j. Se
ajustan las concentraciones de las mezclas comerciales para dar 3 mg/L de glucosa
y 3 mg/L de cido glutmico en cada botella de ensayo GAG. Se evalan los datos
como se describe en el numeral 6,sobre Precisin y Sesgo.

d) Siembra:

1) Origen del inculo. Es necesario tener presente una poblacin de
microorganismos capaces de oxidar la materia orgnica biodegradable en la
muestra. Las aguas residuales domsticas, los efluentes no clorados o no
desinfectados de plantas de tratamiento de residuos biolgicos, y las aguas
superficiales que reciben descargas de aguas residuales, contienen poblaciones
microbianas satisfactorias. Algunas muestras no contienen una poblacin
microbiana suficiente (por ejemplo, algunos residuos industriales no tratados,
residuos desinfectados, residuos a alta temperatura, o residuos con valores de
pH extremos). Para tales residuos se siembra el agua de dilucin o la muestra
aadiendo una poblacin de microorganismos. El inculo preferido es un
efluente o licor mezclado de un sistema de tratamiento biolgico que procese
residuos. Donde no sea posible conseguir este inculo, se usa un sobrenadante
de aguas residuales domsticas despus de dejarlo sedimentar a temperatura
ambiente durante al menos 1 h pero no ms de 36 h. Cuando se emplee el
efluente de un proceso de tratamiento biolgico, se recomienda inhibir la
nitrificacin.

NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC 3630 (Primera actualizacin)

7
Algunas muestras pueden contener materia no degradada a tasas normales por
los microorganismos en aguas residuales domsticas sedimentadas. Se
siembran dichas muestras con una poblacin microbiana adaptada, obtenida del
efluente no desinfectado del proceso de tratamiento biolgico de residuos. En
ausencia de dichas facilidades, se obtiene el inculo en las aguas receptoras
ms abajo (preferiblemente de 3 km a 8 km) del punto de descarga. Cuando
tampoco se dispone de tales fuentes de inculo, se desarrolla un inculo
adaptado en el laboratorio, por medio de aeracin continua de una muestra de
aguas negras domsticas sedimentadas, y aadiendo pequeos incrementos
diarios de residuos. Opcionalmente se utiliza una suspensin de suelo o lodo
activado, o un preparado de inculo comercial para obtener la poblacin
microbiana inicial. Se determina la existencia de una poblacin satisfactoria
probando el desempeo del inculo con ensayos de DBO sobre la muestra. Los
valores de DBO, que se incrementen con el tiempo de adaptacin hasta un valor
estable alto, indican una adaptacin exitosa del inculo.

2) Control del inculo. Se determina la DBO del material de siembra como para
cualquier otra muestra. Este es el control de inculo. Con el valor del control de
inculo y un conocimiento del factor de dilucin del material que se va a sembrar
(en el agua de dilucin), se determina el consumo de OD del inculo.
Idealmente, se hacen las diluciones de inculo de manera que la cantidad mayor
resulte con un agotamiento de OD de al menos un 50 %. Una grfica de
agotamiento de OD, en miligramos por litro, contra mililitros de inculo para
todas las botellas que tengan un agotamiento de 2 mg/L y 1,0 mg/L de OD
residual como mnimo, debe presentar una lnea recta cuya pendiente indica
agotamiento de OD por mililitro de inculo. El intercepto del eje OD es el
agotamiento de oxgeno causado por el agua de dilucin y debe ser menor que
0,1 mg/L (vase el numeral 4h)). Como alternativa, se puede dividir el
agotamiento de OD por el volumen de inculo en mililitros de toda botella de
control de inculo que tenga 2 mg/L de agotamiento y un OD residual de 1 mg/L.
Se promedian los resultados de todas las botellas que cumplan los criterios de
agotamiento mnimo y OD residual. El consumo de OD atribuible al inculo
agregado a cada botella debe estar entre 0,6 mg/L y 1,0 mg/L, pero la cantidad
de inculo adicionado debe ajustarse de este rango a los lmites requeridos, para
facilitar resultados de la comprobacin con glucosa-cido glutmico en el rango
de 198 mg/L 30,5 mg/L. Para determinar el consumo de OD de una botella de
ensayo, se resta el consumo de OD atribuible al inculo, del consumo total de
OD (vase el numeral 5).

Las tcnicas para adicionar el material de siembra al agua de dilucin son
descritas para dos mtodos de dilucin de muestra en el numeral 4f).

e) Tratamiento previo de la muestra: se verifica el pH de todas las muestras antes de su
ensayo a menos que la experiencia previa indique que el pH est dentro del intervalo
aceptable.


1) Muestras con alcalinidad custica (pH > 8,5) o acidez (pH < 6,0). Se neutralizan
las muestras a pH entre 6,5 y 7,5 con una solucin de cido sulfrico (H
2
SO
4
) o
se hidrxido de sodio (NaOH), de tal concentracin que la cantidad de reactivo
no diluya la muestra en ms del 0,5 %. El pH del agua de dilucin no debe
afectarse por la menor dilucin de muestra. Siempre se siembran muestras
cuyos pH han sido ajustados.


NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC 3630 (Primera actualizacin)

8
2) Muestras que contienen compuestos de cloro residual. Si es posible, se evitan
las muestras que contengan cloro residual tomando la muestra antes de los
procesos de cloracin. Si la muestra ha sido clorada pero no hay residuos
perceptibles de cloro presentes, se siembra el agua de dilucin. Si hay cloro
residual presente, se desclora la muestra y se siembra el agua de dilucin
(vase el numeral 4f). No se ensayan muestras cloradas/descloradas sin
sembrar el agua de dilucin. En algunas muestras el cloro se disipar dentro de
1 h a 2 h de exposicin a la luz. Esto ocurre con frecuencia durante la
transportacin y manipulacin de la muestra. En las muestras que el cloro
residual no se disipe en un tiempo razonablemente corto, se destruyen los
residuos de cloro agregando solucin de Na
2
SO
3
. Se determina el volumen
requerido de solucin de Na
2
SO
3
en una porcin de 100 ml a 1 000 ml de
muestra neutralizada, aadiendo 10 ml de 1:1 de cido actico o 1:50 de H
2
SO
4
,
titulando con 10 ml de solucin de yoduro de potasio (KI) por porcin de 1 000 ml
(10 g/100 ml), y disolviendo con solucin de Na
2
SO
3
hasta el punto final de almidn
yodado para el residual. Se adiciona a la muestra neutralizada el volumen relativo
de solucin de Na
2
SO
3
determinado por el ensayo anterior, se mezcla, y
despus de 10 min a 20 min se verifica el cloro remanente en la muestra.
(Nota. El exceso de Na
2
SO
3
ejerce una demanda de oxgeno y reacciona
lentamente con ciertos compuestos de cloramina orgnica que pueden estar
presentes en muestras cloradas).

3) Muestras que contienen otras sustancias txicas. Algunos desechos industriales,
por ejemplo, los desechos de niquelado, contienen metales txicos. Tales
muestras requieren con frecuencia estudio y tratamiento especiales.

4) Muestras sobresaturadas de OD. Las muestras con contenido de ms de 9 mg
de OD/ L a 20 C pueden encontrarse en aguas fras o en aguas donde ocurra
fotosntesis. Para evitar la prdida de oxgeno durante la incubacin de dichas
muestras, se reduce el OD a la saturacin a 20 C llevando la muestra hasta
aproximadamente 20 C en botella parcialmente llena, mientras se agita con
sacudidas vigorosas o por aeracin con aire comprimido filtrado y limpio.

5) Se ajusta la temperatura de la muestra. Se lleva la muestra a 20 C 1 C antes
de hacer las disoluciones.

6) Inhibicin de nitrificacin. Si desea inhibir la nitrificacin, se adicionan 3 mg de 2-
cloro-6- (triclorometil) piridina (TCMP) a cada botella de 300 ml, antes de taparla,
o se adicionan cantidades suficientes al agua de dilucin para lograr una
concentracin final de 10 mg/L. (NOTA: La TCMP pura puede disolverse
lentamente y flotar en la superficie de la muestra. Algunos preparados
comerciales se disuelven con ms facilidad pero no son TCMP al 100 %; se
ajusta la dosis convenientemente). Las muestras que puedan requerir inhibicin
de nitrificacin incluyen, sin limitarse a efluentes tratados biolgicamente, las
muestras inoculadas con efluentes tratados biolgicamente, y agua de ros. Se
registra el uso de inhibicin de nitrificacin en el informe de resultados.

f) Tcnica de dilucin: se hacen varias diluciones de la muestra que den un OD residual
de al menos 1 mg/L y una ingestin de OD de 2 mg/L como mnimo despus de 5 d de
incubacin. Se recomiendan 5 diluciones, excepto que la experiencia con una muestra
en particular muestre que el uso de un nmero inferior de disoluciones produce al
menos dos botellas que den mnimos aceptables de agotamiento de OD y lmites
residuales. Un anlisis ms rpido, como la DQO, puede correlacionarse
aproximadamente con la DBO y servir de gua para seleccionar las diluciones. A falta de

NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC 3630 (Primera actualizacin)

9
conocimiento previo, se usan las soluciones siguientes: 0,0 % a 1,0% para residuos
industriales fuertes de 1 % a 5% para aguas residuales crudas o sedimentadas de 5 %
a 25 % para un efluente tratado biolgicamente, y de 25 % a 100% para aguas de ro
contaminadas.

Se preparan las diluciones ya sea en probetas graduadas o en frascos volumtricos de
vidrio, y se transfieren luego a botellas de DBO, o se preparan directamente en botellas
de DBO. Cualquiera de los mtodos de dilucin puede combinarse con cualquier tcnica
de medicin de OD. El nmero de botellas por preparar para cada dilucin depende de
la tcnica de OD y del nmero de rplicas deseado.

Cuando se utilicen probetas o frascos volumtricos para preparar las soluciones, y
cuando se requiera la siembra, se adiciona el inculo ya sea directamente al agua de
dilucin o a las probetas o frascos individuales antes de la dilucin. La siembra de
probetas o frascos individuales evita una proporcin descendente de inculo con
relacin a la muestra cuando se hacen diluciones crecientes. Cuando las diluciones se
preparan directamente en botellas de DBO y cuando se necesita sembrar, se aade el
inculo directamente al agua de dilucin o directamente a las botellas de DBO. Cuando
una botella contiene ms del 67 % de la muestra despus de la dilucin, se pueden
limitar los nutrientes en la muestra diluida y posteriormente reducir la actividad biolgica.
En tales muestras, se aaden los nutrientes, minerales y las soluciones reguladoras del
pH (vanse los numerales del 3a) al 3e) directamente a botellas de DBO individuales en
una proporcin de 1 ml/L (0,33 ml/botella de 300 ml) o se usan soluciones de
preparados comerciales dosificadas para el tamao de botella apropiado.

1) Disoluciones preparadas en probetas graduadas o frascos volumtricos. Si se
emplea la modificacin de zida del mtodo por titulacin yodomtrica (Vase el
Standard Method, 20 TH Edition, Section 4500-O.C), se extrae por sifonamiento
el agua de dilucin, inoculada si es necesario, a un frasco o probeta de 1 L a 2 L
de capacidad. Se llena hasta la mitad sin permitir el arrastre del aire. Se aade la
cantidad deseada de muestra cuidadosamente mezclada y se diluye al nivel
apropiado con agua de dilucin. Se mezcla bien con una jeringa mezcladora; se
evita el arrastre de aire. Se sifonea la dilucin mezclada en dos botellas de DBO.
Se determina el OD inicial en una de estas botellas. Se tapona hermticamente
la segunda botella, se sella con agua, y se incuba durante 5 d a 20 C. Si se
emplea el mtodo de electrodo con membrana para medir el OD, se sifonea la
mezcla de dilucin a una botella de DBO. Se determina el OD inicial en esta
botella y se reemplaza cualquier prdida de contenido con dilucin de muestra
hasta llenar la botella. Se tapona ajustadamente, se sella con agua, y se incuba
durante 5 d a 20 C.

2) Disoluciones preparadas directamente en botellas de DBO. Se emplea una
pipeta volumtrica de boquilla ancha con la que se adiciona el volumen de
muestra deseado, en botellas de DBO individuales de capacidad conocida. Se
aaden cantidades apropiadas de material de siembra, ya sea a las botellas
individuales o al agua de dilucin. Se llenan las botellas con suficiente agua de
dilucin, se siembra si es necesario, de manera que la insercin del tapn
desplace todo el aire sin dejar burbujas. Para diluciones mayores que 1:100 se
hace una dilucin primaria en una probeta antes de realizar la dilucin final en la
botella. Cuando se usen mtodos de titulacin yodomtrica para la medicin del
OD, se preparan dos botellas por cada dilucin. Se determina el OD inicial en
una botella. Se tapona la segunda botella, se sella con agua, y se incuba por 5 d
a 20 C. Si se emplea el mtodo de electrodo de membrana para medir el OD, se
prepara slo una botella de DBO por cada dilucin. Se determina el OD inicial en

NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC 3630 (Primera actualizacin)

10
esta botella y se reemplaza cualquier contenido desplazado con agua de dilucin
hasta llenar la botella. Se ajusta el tapn, se sella con agua, y se incuba durante
5 d a 20 C. Se enjuaga el electrodo de OD entre cada medicin para evitar la
contaminacin cruzada.

Se usa la modificacin de azida del mtodo yodomtrico (Vase la NTC 4705
(Standard Methods, 20 TH Edition, Section 4500-O.C)), o el mtodo de electrodo
con membrana (Vase la NTC 4705 (Standard Methods, 20 TH Edition,
Section 4500 - O.G)) para determinar el OD inicial en todas las diluciones de
la muestra, diluciones de blancos, y cuando sea conveniente, en los controles
del inculo.

Si se emplea el mtodo de electrodo de membrana, se recomienda la
modificacin de zida del mtodo yodomtrico (Vase la NTC 4705, Standard
Methods, 20 TH Edition, Section 4500 O.C) para calibrar el medidor de OD.

g) Determinacin del OD inicial: si la muestra contiene materia que reacciona rpidamente
con el OD, se determina el OD inicial inmediatamente despus de llenar la botella de
DBO con la muestra diluida. Si el consumo rpido de OD inicial es insignificante, el
perodo de tiempo entre la preparacin de la dilucin y la medicin del OD inicial no es
crtico, pero no debe exceder los 30 min.

h) Blanco de agua de dilucin: se usa un blanco de la dilucin como verificacin preliminar
de la calidad del agua de dilucin sin sembrar y de la limpieza de las botellas de
incubacin. Junto con cada lote de muestras se incuba una botella de agua de dilucin
sin sembrar. Se determina el OD inicial y el OD final como en los numerales 4g y 4j. El
consumo de OD no debe ser mayor de 0,2 mg/L y preferiblemente no debe ser superior
a 0,1 mg/L. Se descarta toda el agua de dilucin con ingestin de OD mayor que 0,2 mg/L,
y se elimina la fuente de contaminacin o se selecciona otra fuente de agua de dilucin.

i) Incubacin: se incuban las botellas de DBO con las diluciones a 20 C 1 C, los
controles de los inculos, los blancos de agua de dilucin, y las pruebas de verificacin
de glucosa-cido glutmico deseadas. Se sellan a prueba de agua las botellas, segn
se describe en el numeral 4 f).

j) Determinacin del OD final: despus de 5 d de incubacin, se determina el OD en las
diluciones de muestra, en los blancos, y en las pruebas de verificacin, como en el
numeral 4 g).


5. CLCULO

Para cada botella de ensayo que cumpla los 2,0 mg/L de agotamiento mnimo de OD y 1,0 mg/L de
OD residual, se calcula la DBO
5
como sigue:

Cuando el agua de dilucin no est inoculada:


P
D D
L / mg , DBO
2 1
5

=


NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC 3630 (Primera actualizacin)

11
Cuando el agua de dilucin est inoculada:

( ) ( )
P
f B B D D
L / mg , DBO
2 1
2
1
5

=

de donde

D
1
= OD de la muestra diluida inmediatamente despus de la preparacin,
mg/L,

D
2
= OD de la muestra diluida despus de 5 d de incubacin a 20 C, mg/L,

P = fraccin volumtrica decimal de la muestra usada,

B
1
= OD del control de inculo antes de la incubacin, mg/L (Vase el numeral
4 d),

B
2
= OD del control de inculo despus de la incubacin, mg/L (Vase el
numeral 4 d), y

f = relacin del inculo en la muestra diluida al inculo en el control del
inculo = (% inculo en la muestra diluida)/(volumen del inculo en el
control del inculo).

Si el inculo se aade directamente a la muestra o a las botellas de
control del inculo:

f = (volumen de inculo en la muestra diluida)/(volumen de inculo en el
control del inculo).


Se reportan los resultados como DBOC
5
, si se inhibe la nitrificacin.

Si ms de una dilucin de muestra cumple los criterios de un OD residual de al menos 1 mg/L y
un agotamiento de OD de al menos 2 mg/L, y no existe evidencia de toxicidad a
concentraciones mayores de muestra o presencia de alguna anomala obvia, se promedian los
resultados en el intervalo aceptable.

En estos clculos, no se deben hacer correcciones de consumo de OD por el blanco durante la
incubacin. Esta correccin es innecesaria si el agua de dilucin cumple los criterios de blanco
estipulados anteriormente. Si el agua de dilucin no cumple estos criterios, se hace difcil una
correccin adecuada; no se registran los resultados, o como mnimo, se indica que no cumplen
los criterios de control de calidad.


6. PRECISIN Y SESGO

No existe una medida para establecer el sesgo del procedimiento de la DBO. La prueba de
glucosa-cido glutmico prescrita en el numeral 4 c), pretende ser un punto de referencia para
la evaluacin de la calidad del agua de dilucin, la eficiencia del inculo, y la tcnica analtica.
Ensayos de laboratorios individuales, usando una solucin mezclada de glucosa-cido
glutmico de 300 mg/L, arrojaron los resultados siguientes:


Nmero de meses: 14

NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC 3630 (Primera actualizacin)

12
Nmero de triplicados: 421

Recuperacin promedio mensual: 204 mg/L

Desviacin estndar promedio mensual: 10,4 mg/l

En una serie de estudios interlaboratorios
1
, que involucraron de 2 a 112 laboratorios cada uno
(e igual nmero de analistas y fuentes de inculo), se hicieron mediciones de DBO a los 5 d en
muestras de agua sintticas con una mezcla 1:1 de glucosa y cido glutmico en el rango total
de concentracin de 3,3 mg/L a 231 mg/L. Las ecuaciones de regresin para el valor medio,
__
X , y desviacin estndar, S, de dichos estudios fueron:


__
X = 0,658 (nivel agregado, mg/L) + 0,280 mg/L

S = 0,100 (nivel agregado, mg/L) + 0,547 mg/L


Para la prueba estndar primaria mezclada de 300 mg/L, la DBO promedio a los 5 d sera de 198
mg/L con una desviacin estndar de 30,5 mg/L. Cuando se usan inhibidores de nitrificacin los
ensayos de GAG que caigan fuera del lmite de control de 198 30,5 indican con bastante
frecuencia el uso de cantidades de inculo incorrectas. Se ajusta la cantidad de inculo agregada al
ensayo GAG para lograr que los resultados caigan dentro de este rango.


a) Lmites de control: Debido a los numerosos factores que afectan los ensayos de
DBO en estudios multi-laboratorios y la consiguiente variabilidad extrema en los
resultados de los ensayos, se recomienda una desviacin estndar, determinada
segn los ensayos inter-laboratorios, como lmite de control para laboratorios
individuales. Como alternativa, para cada laboratorio, se establecen sus lmites
de control efectuando un mnimo de 25 pruebas de glucosa-cido glutmico
(vase el numeral 4 c) por un perodo de varias semanas o meses, y calculando
la media y la desviacin estndar. Se usa el promedio 3 desviaciones estndar
como el lmite de control para futuras comprobaciones con glucosa-cido
glutmico. Se comparan los lmites de control calculados con los ensayos de un
laboratorio individual y con los resultados inter-laboratorios presentados
anteriormente. Si los lmites de control estn fuera del rango de 198 30,5, se
evalan nuevamente los lmites de control y se investiga la fuente del problema.
Si la DBO medida por una prueba de glucosa-cido glutmico est fuera del
rango del lmite de control aceptado, se rechazan los ensayos hechos con ese
inculo y esa agua de dilucin.

b) Rango de trabajo y lmite de deteccin: El rango de trabajo es igual a la
diferencia entre el mximo OD inicial (7 mg/L a 9 mg/L) y mnimo OD residual de
1 mg/L multiplicado por el factor de dilucin. Los requisitos establecen un lmite
inferior de deteccin de 2 mg/L para un agotamiento de OD mnimo de 2 mg/L.


7. REFERENCIA

1
U.S. ENVIRONMENTAL PROTECTION AGENCY, OFFICE OF RESEARCH AND
DEVELOPMENT. 1986. Method-by-Method Statistics from Water Pollution (WP) Laboratory
Performance Evaluation Studies. Quality Assurance Branch, Environmental Monitoring and
Support Lab., Cincinnati, Ohio.

NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC 3630 (Primera actualizacin)

13
8. BIBLIOGRAFA

YOUNG, J.C., G.N. MCDERMOTT & D. JENKINS. 1981. Alterations in the BOD Procedure for
the 15
th
Edition of Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. J. Water
Pollut. Control. Fed. 53:1253.


DOCUMENTO DE REFERENCIA

AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION; AMERICAN WATER WORKS ASSOCIATION;
WATER ENVIRONMENT FEDERATION. Standard Methods For The Examination of Water and
Wastewater, 20 TH Edition. 1998. Washington. Biochemical Oxygen Demand (BOD).Section 5210
A, B. 6 p.

You might also like